Fosfatasa cida

Contenido

Antecedentes .......................................................................................................... 1

Metodologa............................................................................................................. 2

Preparacin .......................................................................................................... 3

Procedimiento ...................................................................................................... 3

Cuestionario ............................................................................................................ 3

Referencias ............................................................................................................. 4

Antecedentes
La fosfatasa cida (FAC, EC 3.1.3.2) es un grupo de fosfatasas que tiene actividad
mxima a pH inferior a 7.0. Se encuentra en el lisosoma celular de diferentes tejidos
(hgado, bazo, plaquetas, eritrocitos y medula sea). En hombres el 50% de FAC
total se encuentra en la glndula prosttica. La fosfatasa cida Total y Prosttica
(fraccin de tartrato lbil) se utilizan para el diagnstico de carcinoma prosttico
(Lothar, 2006).

Las distintas isoenzimas se diferencian entre s por su pH ptimo, peso molecular,

y requerimientos de activadores e inhibidores. La fosfatasa cida prosttica (PAP)
constituye un valioso auxiliar en el diagnstico precoz de cncer prosttico, una de
las formas neoplsicas de mayor morbilidad (Fersht, 2000).

La determinacin de la actividad enzimtica de PAP usando -naftil fosfato como

sustrato ha mostrado sensibilidad y especificidad adecuadas para su utilizacin en
el diagnstico de esta enfermedad. Se encuentran actividades elevadas de
Fosfatasa cida total (ACP) en algunas enfermedades hematolgicas (leucemia
mieloctica, trombocitopenia idioptica) y seas (enfermedad de Paget, carcinoma
seo), as como en algunos tipos de cncer, enfermedades hepticas (hepatitis,
ictericia obstructiva), etc (Lothar, 2006).

La fosfatasa cida hidroliza el -naftil fosfato a pH 5,2 con liberacin de fosfato y -

naftol. El naftol reacciona a su vez con un diazorreactivo presente en el sistema
(Fast Red TR) produciendo un pigmento amarillo, de modo que el aumento de la
absorbancia, ledo a 405 nm, es proporcional a la actividad de fosfatasa cida total
(ACP) de la muestra (Fersht, 2000).

Cuando se mide la actividad en presencia de tartrato, se inhibe la actividad de la

isoenzima prosttica. La diferencia entre las actividades de fosfatasa cida total
(ACP) y de la resistente al tartrato (Fosfatasa Acida no Prosttica/ ACP-NP)
corresponde a la fraccin prosttica (PAP) (Arauco, 2001).

Metodologa
El procesamiento de las muestras se llev acabo segn el inserto de SPINREACT.
El contenido de cada reactivo se presenta en la siguiente tabla.

R1 Citrato sdico pH 5,2 50 mmol/L

Tampn
R2 -Naftil fosfato 10 mmol/L
Substrato Fast Red TR 6
mmol/L
R3 Tartrato sdico 2 mmol/L
Tartrato Hidrxido de sodio 1800 mmol/L
R4 cido actico 0,5 mol/L
Preparacin

- Reactivo de trabajo (RT): Ref: 1001121 Disolver ( ) un comprimido de R2

Sustrato en un vial de R1. Ref.: 1001122

Disolver ( ) un comprimido de R2 Sustrato en 15 mL de R1. Tapar y mezclar

suavemente hasta disolver su contenido.

Estabilidad: 2 das a 2-8C o 6 horas a temperatura ambiente. - R 3 y R 4: Listo para

su uso. (R4 Incluido en Ref:1001121).

Procedimiento

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz

Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30C / 37C

2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

FAC total (T) FAC No Prosttico (No P)

RT (mL) 1.0 1.0
R3 (L) --- 10
Muestra (L) 100 100

4. Mezclar, incubar 5 minutos.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro

y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

Cuestionario
1.- Cuntas isoenzimas presenta la fosfatasa cida y cules son?
R= Presenta dos isoenzimas: FAC total y FAC no prosttico (Fersht, 2000)

2.- Para qu nos sirve cuantificar la fosfatasa cida?

R= valioso auxiliar en el diagnstico precoz de cncer prosttico, una de las formas

neoplsicas de mayor morbilidad (Arauco, 2001).

3.- Qu importancia presenta el tartrato sdico en la cuantificacin de la fosfatas

cida?

R= Cuando se mide la actividad en presencia de tartrato, se inhibe la actividad de

la isoenzima prosttica. La diferencia entre las actividades de fosfatasa cida total
(ACP) y de la resistente al tartrato (Fosfatasa Acida no Prosttica/ ACP-NP)
corresponde a la fraccin prosttica (PAP) (Arauco, 2001).

Referencias
2. Arauco, F. (2001). Fosfatasa cida de bajo peso molecular de hgado de
alpaca. Purificacin y caracterizacin. Lima-Per: Universidad Nacional
Mayor de San Marcos.

3. Fersht, A. (2000). Estructura y mecanismo de los enzimas. Barcelona: Ed.

Revert SA.

4. Lothar, T. (2006). Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of

clinical laboratory results. USA: Saunders Compan.