Introduccin

En este tema estudiamos el metabolismo de los cidos nucleicos y la sntesis de

protenas, explicaremos como la informacin gentica se transmite de una
generacin a otra con absoluta fidelidad, pero a la vez que permite pequeos
cambios en el material gentico para que tenga lugar la evolucin.

Y descubrimos como esta informacin gentica se transcribe a ARNm y se

expresa en ltimo lugar en la secuencia de aminocidos de una asombrosa
variedad de molculas proteicas. Mientras que en las reacciones del metabolismo
intermediario solo la estructura tridimensional de la enzima condiciona la reaccin,
los substratos o inhibidores que actuarn. Las reacciones que encontramos en el
metabolismo de la informacin gentica, se caracterizan por la necesidad de un
molde que acta junto a la enzima, para especificar la reaccin catalizada.

El ADN como portador de la informacin gentica

Ya en el Siglo XIX se conoca que en el ncleo celular haba una sustancia, la
nucleina, formada por una parte cida (hoy ADN) y una parte bsica (hoy
protena). Pero fue entre 1944 y 1952, cuando una serie de experimentos cruciales
apuntaron claramente al DNA como el material gentico.

Antes de esta fecha cidos nucleicos se consideraban demasiado simples,

estaban formados simplemente por 4 clases de monmeros y se consideraron
simplemente como una sustancia estructural del ncleo celular. Se consideraba
ms probable que los genes estuvieran formados por protenas, que eran
molculas mucho ms complejas.

En 1944 Avery y sus colaboradores descubrieron que el ADN extrado de cepas

patgenas de la bacteria Streptococcus Pneumoniae poda transferirse a cepas no
patgenas, transformndolas en patgenas. Este experimento consista en
inocular ratones con clulas de pneumococcus (S) patgenas que moran y
clulas (R) no patgenas que permitan que el ratn permaneciera vivo.

Si las bacterias patgenas (S) se sometan a calentamiento perdan su virulencia.

Si se incubaban las bacterias no patgenas (R) con ADN extrado de las bacterias
patgenas, y se inoculaban los ratones con estas bacterias, los ratones moran.

Parece como si la cepa no virulenta recibiera algo de las bacterias patgenas.

Avery y sus colegas concluyeron que el DNA extrado de la estirpe virulena
portaba el mensaje hereditario de la virulencia. Algunos cientficos mantenan que
las protenas presentes en el DNA como impurezas podran ser responsables de
este cambio gentico. Esta posibilidad fue eliminada al encontrar que el
tratamiento del DNA con enzimas proteolticas no destrua las propiedades
transformadoras del ADN, mientras que el tratamiento con nucleasas si lo haca.

Un segundo experimento independiente proporcion la evidencia definitiva. Hersey

and Chase (1952) demostraron, mediante el experimento de la batidora, el papel
del ADN. Para esto usaron en fago T2, que solo tiene ADN y las protenas de la
cpsida. Marcaron radioactivamente dos muestras de fago T2. En el primer caso
las protenas del fago T2 con S35 y en segundo el ADN con P32 (las protenas no
tienen P y los nucleicos no tienen S).

Estas muestras se usaron para infectar muestras separadas de bacterias. Las

suspensiones bacterianas se agitaron con una batidora y las capsidas se
separaron de las bacterias por centrifugacin. Solo las bacterias infectadas con
virus marcados con P32 tenan radiactividad, indicando que era el ADN el agente
infectante. En el otro caso la radiactividad quedaba en el sobrenadante donde
estaban las cpsidas marcadas con S35.
 Herencia y replicacin del ADN
El ADN posee la informacin necesaria para
transmitir los caracteres de una especie de
generacin en generacin y conseguir la
supervivencia de la especie. Por lo tanto la
molcula de ADN constituye la base qumica de
la herencia. La mayora de las molculas de ADN
se encuentran en los cromosomas del ncleo de
las clulas.

El nmero de cromosomas depende de la

especie, as por ejemplo, las bacterias poseen un
nico cromosoma, mientras que las clulas
humanas poseen 46 (23 de cada progenitor). La informacin gentica en forma de
ADN se organiza estructuralmente dentro del cromosoma arrollndose alrededor
de ciertas protenas (histonas) constituyendo asociaciones ADN-protena
denominadas nucleosomas.

Las cadenas de ADN de cada especie difieren en longitud y en la secuencia de las

bases nitrogenadas, de tal manera que esta secuencia contiene la informacin
gentica caracterstica de cada especie. La informacin gentica debe
reproducirse exactamente cada vez que la clula se divide. El proceso por el que
las molculas de ADN se copian a si mismas en el ncleo de las clulas recibe el
nombre de replicacin del ADN. La replicacin pretende a partir de una cadena de
ADN obtener dos iguales.
Principales caractersticas de la replicacin
Las caractersticas principales del proceso son: su carcter semiconservador, la
realizacin simultnea en ambas hebras, de forma secuencial y con carcter
bidireccional y origen monfocal (procariotas) o multifocal (eucariotas).
Semiconservador.

Es decir cada hebra sirve como molde para la sntesis de una nueva cadena,
produciendo dos nuevas molculas de ADN, cada una con una de las hebras
viejas y una nueva hebra hija. Esta hiptesis fue propuesta por Watson and Crick
poco despus de la publicacin del modelo de la doble hlice, y fue probado
definitivamente por los ingeniosos experimentos diseados por Meselson and
Stahl en 1957.

Solo caben tres posibles hiptesis para explicar el mecanismo de la replicacin:

Conservadora (las dos hebras se copiaran para dar una nueva molcula, de
forma que el ADN progenitor permanece intacto y el ADN hijo tendra dos
hebras nueva).
Dispersante (el ADN progenitor se rompera antes de que se sintetizaran
los nuevos fragmentos de ADN, estos luego se uniran a los fragmentos
originales para dar ADN hijos con fragmentos tanto nuevos como de las dos
hebras del progenitor).
Semiconservadora (Las dos nuevas molculas de ADN formadas tienen
cada una hebra vieja y una hebra nueva).

Meselson and Stahl cultivaron clulas de E.coli en medio con N15 (istopo pesado
de N14) durante muchas generaciones, hasta que todo el ADN de E. coli estuviera
marcado con N15. El ADN aislado de estas clulas tena una densidad un 1%
mayor que el ADN normal con N14. Esta pequea diferencia puede apreciarse en
una centrifugacin en gradiente de densidad CsCl.

Las clulas de E. coli cultivadas con N15 se transfirieron a medio fresco con N14,
y se dejaron crecer durante el tiempo suficiente para que la poblacin se duplicara.
El ADN aislado de estas clulas formaba una sola banda en la centrifugacin en
gradiente. Esto eliminaba al hiptesis de la replicacin conservadora. Si las clulas
de E. coli se dejaban en el medio fresco con N14 durante dos generaciones se
observaban en la centrifugacin en gradiente dos bandas.

Una con la densidad correspondiente al ADN ligero y otra con la densidad del ADN
mixto obtenido en la primera generacin. Esto descartaba tambin la hiptesis
dispersante y confirmaba la replicacin semiconservativa como la nica hiptesis
posible. Bidireccional. La separacin de las hebras progenitoras que comienza en
cada origen de replicacin progresa en ambas direcciones.

Los puntos de transicin entre la doble hebra y las hebras sencillas se llaman
horquillas de replicacin y van alejndose entre s. Estos datos se obtuvieron
utilizando el marcaje isotpico del ADN con Titrio H3. El ADN marcado, aislado y
expuesto a una emulsin fotogrfica durante semanas poda fotografiarse. Si el
titrio se aada durante un corto perodo de tiempo y la reaccin se paraba
observando los autoradiogramas poda observarse que el ADN marcada apareca
a ambos lados de la horquilla de replicacin.

El inicio de la replicacin en procariotas es monofocal, comienza siempre en un

punto determinado del cromosoma circular denominado origen (ORI). La
replicacin progresa formando dos horquillas de replicacin. Por el contrario en
eucariotas la replicacin es multifocal, pues en cada cromosoma existen mltiples
orgenes de replicacin (cientos o miles) que dan lugar a un nmero doble de
horquillas de replicacin. Esto permite completar la replicacin de los cromosomas
en un tiempo razonable.

Esto puede visualizarse mediante microscopia electrnica. Vemos como la

replicacin de un cromosoma circular se inicia un punto en concreto y es
simultanea (las dos hebras se replican a la vez). Semidiscontinuo. Como veremos
ms adelante la sntesis de la nueva cadena tiene siempre lugar en el sentido 5`-
3`, siendo el grupo 3`OH el punto por el cual el ADN es elongado. Esto es vlido
para todas las polimerasas tanto la ADN como las ARN polimerasas. Si las dos
hebras son antiparalelas, como pueden las dos hebras ser sintetizadas de manera
continua mientras progresa la horquilla de replicacin.

La solucin que la clula adopta ante este problema fue descubierta por Okazaki.
Que descubri que una de las hebras era sintetizada en pequeos fragmentos
llamados fragmentos de okazaki. Por lo tanto una de las hebras es sintetizada de
forma continua, y la otra de forma discontinua. La longitud de los fragmentos de
okazaki puede variar desde unos cientos de nucletidos hasta unos miles, segn
el tipo de clula.
Pasos de la replicacin del ADN en eucariotas
La replicacin se lleva a cabo gracias a la ADN polimerasa III, esta enzima cataliza
la unin de los desoxinucletidos trifosfato que son abundantes en el fluido del
ncleo celular. Estos desoxinucletidos trifosfato se desplazan hacia la parte
desenrollada de la molcula de ADN y se colocan por complementariedad enfrente
de la base que les corresponde (A=T; C=G) de la cadena que acta como molde,
y una vez que estn en el sitio adecuado se unen entre s por accin de la
polimerasa III.

La adicin de dos unidades nucletidicas consecutivas tiene lugar mediante la

unin del grupo hidroxilo del carbono 3`de un nucletido con el grupo fosfato del
extremo 5`del siguiente. El mecanismo por el que se produce esta unin es un
ataque nucleoflico del grupo 3`-OH de un nucletido al 5`-trifosfato del nucletido
adyacente, eliminndose el pirofosfato y formndose un enlace fosfodister.

La polimerasa lee la hebra que hace de molde en el sentido 3` 5` y sintetiza la

nueva hebra en el sentido 5` 3`. Esta enzima necesita para iniciar la sntesis un
pequeo fragmento de nucletidos que denominamos cebador. En la sntesis del
cebador interviene un tipo de ARN polimerasa denominado primasa. Durante el
proceso de replicacin, una de las cadenas madre se lee bien (en sentido 3`
5`) y, por lo tanto, la nueva cadena se sintetiza de corrido (hebra conductora), pero
la otra est dispuesta en sentido contrario al que la polimerasa puede leer (hebra
retardada).

La solucin a este problema es sintetizar la cadena en pequeos fragmentos en el

sentido 5` 3`. Los cebadores son luego eliminados por la accin exonucleasa de
la ADN polimerasa tipo I y los nuevos fragmentos resultantes son unidos por la
accin de la ligasa, que elimina las mellas que quedan entre fragmentos. La
secuencia de pasos implicados la replicacin del ADN puede resumirse como
sigue:
 Apertura de la doble hlice del ADN por accin de las helicasas.
Sntesis de los cebadores para que la ADN polimerasa pueda actuar. Las
enzimas implicadas denominan primasas.
Se inicia la polimerizacin por accin de la ADN polimerasa III
Cuando se alcanza el cebador del fragmento sintetizado anteriormente la
Polimerasa I sustituye a la Pol III y, haciendo uso simultneo de sus
actividades exonucleasa (degradadora de nucletidos) y polimerasa, va
sustituyendo los cebadores por el ADN correspondiente.
Las ligasas cierran las mellas que hay entre cada dos fragmentos.
 Transcripcin y ARN
La transcripcin consiste en la formacin de una molcula de ARN a partir de la
informacin gentica contenida en un segmento de ADN. Es decir da lugar a una
copia de ARN con secuencia complementaria y antiparalela, a partir de una
secuencia molde en una de las hebras del ADN. Mientras que en la replicacin se
copia el cromosoma entero, la transcripcin es ms selectiva.

En un momento dado solo son transcritos ciertos genes o grupos de genes. La

clula restringe la expresin de la informacin gentica a la formacin de los
productos gnicos necesarios en cada momento, en un proceso finamente
regulado por secuencias reguladoras especficas que indican el principio y el fin de
los segmentos que deben ser trascritos. Estos procesos regulatorios sern
estudiados con detalle en el tema siguiente.

Existen tres clases principales de ARN.

- El mensajero que codifica la secuencia de aminocidos de uno o ms

polipptidos especificados por un gen.
- El ARN transferente que lee la informacin codificada en el ARNm y
transfiere el aminocido adecuado a la cadena polipptidica en crecimiento
durante la sntesis proteica.
- El ARN ribosmico que forma parte de los ribosomas, las complejas
maquinarias celulares donde se sintetizan las protenas.

El proceso empieza cuando la ARN polimerasa se une a unas secuencias

especficas llamadas promotores. La doble hlice del ADN se desenrolla formado
el bucle de transcripcin (unos 17 nucletidos) para servir de molde para la
sntesis del ARN, de tal manera que solamente una de las dos cadenas es la que
transcribe la informacin al ARN.

La cadena de ADN que sirve de molde se denomina cadena molde, mientras que
la complementaria se llama cadena codificante, idntica en secuencia de bases
al ARN transcrito excepto que la timina es sustituida por uracilo. Los
ribonucletidos trifosfato existentes en el fluido celular (ATP, GTP, CTP y UTP) se
desplazan hacia la parte desenrollada de la doble hlice del ADN y se sitan
complementando la cadena (T=A; A=U; C=G).

Cuando estos nucletidos se encuentran adecuadamente situados se unen entre

si por accin de la enzima ARNpolimerasa (en el sentido 5` 3`). Finalmente, el
ARN se separa y el ADN recupera la estructura de doble hlice. El ARNm as
formado sufre pocas modificaciones en el caso de los procariotas, pero sufre
importantes modificaciones postranscripcionales en el caso de los eucariotas,
eliminndose los intrones (secuencias del genoma que no codifican nada),
formando as el ARNm maduro que se traducir en protenas. El ADN se utiliza
tambin como molde para la sntesis de los otros dos tipos de ARN, el transferente
y el ribosmico. Las principales diferencias entre el proceso de transcripcin en
procariotas y eucariotas pueden resumirse como sigue:

- En procariotas no hay separacin fsica entre transcripcin y traduccin,

mientras que en los eucariotas la transcripcin tiene lugar en el ncleo,
donde est el ADN, y la traduccin en el citoplasma donde estn los
ribosomas.
- En procariotas los ARNm son policistrnicos (llevan varios genes) y en
eucariotas por lo general son monocistrnicos.
- En procariotas hay un solo tipo de ARN polimerasa, mientras que en
eucariotas hay al menos 3 tipos de ARN polmeras distintas (una para cada
tipo de ARN). 113 Tema 10. Replicacin, transcripcin y traduccin
Bioqumica.
- En procariotas los ARNm sufren pocas modificaciones postranscripcionales,
mientras que en eucariotas sufren muchas, entre ellas la eliminacin de
intrones.

.
La ARN polimerasa necesita al igual que la ADN polimerasa los cuatro nucletidos
trifosfato (ATP, GTP, CTP, UTP), Mg2+ y la cadena patrn de ADN cuya
secuencia determinar la del ARN, pero a diferencia de la ADN polimerasa no
necesita cebador para iniciar la sntesis de la cadena. La ARN polimerasa al igual
que la ADN polimerasa slo lee en el sentido 3` 5` y sintetiza la nueva hebra en
el sentido 5` 3`.

La primera etapa del proceso de transcripcin es la unin de la ARN polimerasa a

la molcula de ADN; esta unin se produce por unas zonas especficas del ADN
denominadas promotores, que indican a la enzima que tiene que empezar a
transcribir.

El reconocimiento del promotor es un paso crucial de la transcripcin, tanto en lo

que se refiere al mecanismo como para la regulacin de la transcripcin, como
veremos en el prximo tema. Tambin la terminacin obedece a ciertas
secuencias especficas denominadas secuencias de terminacin. Los promotores
son zonas especficas del ADN donde se une la ARN polimerasa para empezar la
transcripcin, y dirigen la transcripcin de los genes adyacentes.

Las secuencias de los promotores no son idnticas pero se han encontrado en

muchas bacterias ciertas secuencias que son particularmente comunes en ciertas
posiciones (secuencia consenso). Se sitan unos 10 y 35 nucletidos a la
izquierda 114 Tema 10. Replicacin, transcripcin y traduccin Bioqumica de
donde se inicia la transcripcin y se llaman secuencia 35 o caja de entrada y
secuencia 10 o caja TATA.
 Cdigo gentico y traduccin. Sntesis de protenas
La traduccin es un proceso muy complejo con un elevado coste energtico
(consume el 90% de la energa de la biosntesis) y con necesidad de una estrecha
de regulacin. Es sin duda el proceso de sntesis en que participa mayor nmero
de macromolculas diferentes. Las principales son:

- Al menos 32 tipos de ARNt portadores de aminocidos.

- Ribosomas (formados por unas 70 protenas y 5 ARNr diferentes).
- Un ARNm molde.

Ms de una docena de enzimas y factores proteicos adicionales para asistir al

inicio, elongacin y terminacin. Unas 100 protenas adicionales para la
modificacin de las distintas protenas. En total ms de 300 macromolculas
diferentes Como hemos visto antes, el ADN es el molde mediante el cual la
informacin gentica necesaria para la sntesis de protenas se transcribe al
ARNm. Una vez formado, el ARNm sale del ncleo y se dirige a los ribosomas
donde tendr lugar la sntesis proteica. La traduccin se realiza utilizando una
secuencia especfica de tres bases del ARNm llamada triplete de bases o codn.
Cada aminocido est codificado por, al menos un triplete, que constituyen en
cdigo gentico y que se recogen en la Figura 5.

Este cdigo es universal (vlido para todas las especies) y redundante (un
aminocido puede estar codificado por varios codones), pero no es ambiguo (un
codn codifica uno y slo un aminocido). La traduccin del ARNm tiene lugar en
los ribosomas y sigue los mismos pasos en procariotas y eucariotas. Cada triplete
de nucletidos o codn del ARNm determina un aminocido especfico. Cada
molcula de ARNt porta el aminocido correspondiente a un codn.

El reconocimiento entre el ARNt y el codn tiene lugar gracias al anticodn. Entre

los dos aminocidos consecutivos debe formarse el enlace peptdico, este paso
est catalizado por la enzima peptidil transferasa. Luego el ribosoma se transloca,
desplazandose a lo largo de la cadena peptdica que se est formando y dejando
un sitio vacante para un nuevo ARNt-aminocido. La traduccin contina hasta
que aparece un codn de terminacin.

El desciframiento del cdigo gentico fue un trabajo complejo y se ha considerado

el mayor descubrimiento cientfico del SXX. Fundamentalmente se bas en la
sntesis in vitro de moldes de ARNm artificiales que incubados con extractos
celulares, GTP, ATP y los 20 aa en 20 tubos (cada uno con un aa marcado
radioactivamente con 14C) permitan obtener polipptidos de cuya secuencia se
establecieron las claves del cdigo gentico. Se comenz con ARN muy sencillos
(homopolmeros)
Que luego se fueron completando. En 1963 se descifr el cdigo gentico
completo. Los codones escritos en el sentido 5`-3`. Todos los aa excepto la Met y
el trip tienen 116 Tema 10. Replicacin, transcripcin y traduccin Bioqumica ms
de un codn, que normalmente se diferencian en la tercera base. Adems el
codn AUG es tambin el codn de iniciacin y hay tres codones de parada. El
codigo gentico es: . Redundante: porque un aa puede ser codificado por ms de
un codn . No ambiguo. Pero cada codn especifica un solo aa.

Universal o casi universal (salvo pequeas variaciones en las mitocondrias, en

algunas bacterias y algunos eucariotas unicelulares) El ser humano, E.coli, las
plantas o virus. Indicando que todas las formas de vida provienen de un ancestro
comn cuyo cdigo gentico se ha preservado a lo largo de la evolucin.
En este proceso el reconocimiento del
aminocido por su correspondiente RNAt es
fundamental. Este reconocimiento se debe a
una enzima la aminoacil-ARNt sintetasa que
tiene dos sitios especficos, uno presenta
afinidad por el aminocido y otro por el ARNt.
De forma, que gracias a la especificidad de
esta enzima es posible la especificidad de un
ARNt por su aminocido.

En esta fase se forma el complejo de

iniciacin, formado por un ribosoma unido al
ARNm y aun ARNt iniciador cargado. Primero
se unen el ARNm y el ARNt indicador cargado
a la subunidad pequea, luego se unir la
grande. El proceso requiere la intervencin de
varios factores de iniciacin. La traduccin
siempre comienza en un codn AUG.

El crecimiento de la cadena polipeptdica en el

ribosoma se produce por un proceso cclico
que se repite tantas veces como aa haya en la cadena.

Intervienen tres sitios del ribosoma donde puede unirse el ARNt.

El sitio P(peptidil), A (aminoacil) y E (de salida).

- Al comienzo cada ciclo la cadena naciente est enganchada a un ARNt del

sitio P y los lugares A y E vacos.
- Cuando el segundo ARNt cargado con el aa adecuado se une al sitio A.
- Se produce un ataque nuclefilo del grupo amino del aa-ARNt entrante que
est en el sitio A, sobre el carboxilo del pptido en crecimiento del sito P
con lo que se forma un enlace peptdico entre el nuevo aminocido y el
pptido en crecimiento y el bloque del pptido en crecimiento se transfiere
del sito P al sitio A.

Esta reaccin la cataliza una actividad peptidiltransferesa localizada en el ARNr

23s (28s en eucariotas) componente de la subunidad grande (se trata pues de una
ribosoma aunque varias protenas ribosmicas parecen contribuir a que se activa).
En este ltimo paso de la elongacin el ribosoma se desplaza un codn en el
sentido 5`-- 3.. Con este desplazamiento conseguimos que ARNt (ya descargado)
que estaba en el sitio P pase al sito E, mientras que el peptidil-ARNt del sito A
pasa al P. El nuevo codn queda enfrentado al sito A que ahora est vaco.