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Determinacin de Erhlichiosis Monoctica Canina en fase crnica, mediante Biometra Hemtica, ensayo de
inmunocromatogrfico y Frotis Sanguneo.
Programa de maestra: Fecha de recepcin:
Maestra en Medicina Canina y Felina.
Estudiante:
Dr. Gustavo Morales Romo-Leroux
Director: Co-director (si aplica):
Dr. Ronald Ron Castro, Msc.
Lector 1 (consultor): Lector 2 (auditor, designado por el comit acadmico):
Lnea de investigacin a la que contribuye el proyecto (marque con una X la que corresponda)
La medicina y el ambiente en las causas de
enfermedad en perros y gatos
Efectos de la alimentacin en el bienestar de
perros y gatos.
Cirugas no invasivas (laparoscopa,
artroscopa).
Tcnicas de diagnstico no invasivo X
(Laboratorio clnico).
Medicina alternativa en mascotas
(acupuntura, bioenergtica, omniopata)
Tcnicas anatomopatolgicas de laboratorio
Enfermedades neoplsicas en perros y gatos
Tratamientos odontolgicos y prtesis en
perros y gatos
Oftalmologia
Monto estimado de financiamiento: Fuente de financiamiento (marque Tiempo de ejecucin estimado (en
con una X la que corresponda): meses):
dlares Universidad de ( ) 8 meses
Cuenca: ( )
Externo: (X)
Mixta:
Instituciones externas participantes (si aplica):
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2. RESUMEN DEL PROYECTO. (Extensin mxima: 300 palabras)
El problema crtico se bas en las infecciones de carcter crnico, sus causas: presencia de
garrapatas, habitad del acaro, deficiente profilaxis por parte de los propietarios; sus efectos:
alteraciones hematolgicas, como: leucopenia, anemia y trombocitopenia que conducen a
enfermedades y mortalidades. Se determinar la presencia de ehrlichiosis monoctica canina,
mediante hemograma, ensayo inmunocromatogfico y el frotis sanguneo, para correlacionar con
la panctopenia canina en fase crnica. Se ejecutar la investigacin en ocho meses, y el trabajo
prctico se realizar en la ciudad de Guayaquil, durante tres meses. Tipo de estudio:
epidemiolgico experimental y corresponder al ensayo clnico terapetico, la poblacin el total de
canes infectados con EMC atendidos en el consultorio veterinario MI FINQUITA desde
diciembre 2017 hasta marzo 2018, se usar un muestreo no probabilstico de conveniencia, porque
las mascotas que entrarn en el estudio tienen que presentar los signos que coincidan con la
enfermedad en fase crnica y posteriormente hallar las alteraciones hematolgicas propias de la
pancitopenia. Variables dependientes sern Erhlichia canis, ehrlichiosis monoctica canina y
pancitopenia. Variables independientes: peso, edad y lugar de origen. Se proceder a la obtencin
de sangre, se trasladar al laboratorio para el anlisis. Se levantar la historia clnica, anamnesis,
diagnstico de laboratorio e interpretacin de resultados. El proceso investigativo prctico ser:
conservacin, empaque, envo, transporte y recepcin en el laboratorio de la muestra de sangre con
anticoagulante, biometra hemtica, test inmunocromatogrfico, frotis sanguneo. El anlisis
estadstico para los resultados, ser: correlacin de Spearman para correlacionar los ensayos de
biometra hemtica, inmunocromatografa y frotis sanguneo. Odds ratio y test exacto de Fisher
para analizar la Ehrlichiosis como una de las causantes de la pancitopenia. Asociacin entre las
clnicas veterinarias y la presencia de la pancitopenia, mediante el chi cuadrado de la estadstica no
paramtrica, con un nivel de significancia de 0,05. Se estimar la relacin entre peso, edad y lugar.
Las pruebas sern analizadas con el software SPSS 24.
Problema
En la ciudad de Guayaquil, varios son los problemas que aquejan a la salud de los caninos y dentro
de las enfermedades estn las relacionadas con la Erhlichiosis Monoctica Canina. Con la finalidad
de presentar el anteproyecto de tesis, previo a la obtencin del Ttulo de Magster en Medicina
Canina y Felina, se seleccion el problema ms crtico, que se centr en la infeccin crnica
causada por esta enfermedad en caninos residentes en el casco urbano de la ciudad de Guayaquil.
El problema crtico es pertinente con el tema del anteproyecto y tambin la Erhlichiosis
Monoctica Canina es relevante desde el punto de vista infeccioso, porque los microorganismos
implicados constituyen un problema de salud pblica y muchos de ellos tienen antecedentes y
consecuencias en las zoonosis.
Entre las causas tenemos: Falta de profilaxis o chequeos permanentes por parte del propietario de
la mascota; el hbitat que es propicio para el ciclo biolgico de la garrapata Riphycephalus
sanguneus, que es un clima tropical, muchas veces no existe informacin sobre el tema, producto
del mal diagnstico o por la aplicacin de tratamientos caseros por parte de los propietarios, hacen
que esta patologa se vuelva crnica, complicando el tratamiento y la recuperacin del paciente.
A partir de las causas del problema crtico, se obtuvo los siguientes efectos: alteraciones
hematolgicas, llegando a la pancitopenia, que es cuando todos los elementos configurados de la
sangre bajan en su nmero y forma: panleucopenia, anemia y trombocitopenia, agravamiento de
la enfermedad, lo que conlleva al efecto final de alta morbilidad y alta mortalidad, porque la
rickettsia es una bacteria Gram negativa, cocoide, intracelular obligada que provoca una
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inmunosupresin, debido a la hipoplasia de la mdula sea.
Estudios microbiolgicos demuestran que la Erhlichiosis Monoctica Canina, es comnmente
conocida como: pancitopenia tropical canina; ricketsiosis canina; fiebre hemorrgica canina;
enfermedad del perro rastreador. (Cicutin, 2016),
Esta situacin ha hecho que, en un anteproyecto de tesis se concrete la preocupacin del problema
crtico en los canes del casco urbano de la ciudad de Guayaquil, porque hay mucho descuido por
parte de los propietarios con relacin a la salud de los caninos. De continuar esta situacin, se
tendr la oportunidad de analizar de una forma ms adecuada la identificacin de la Rickettsia
erhlichia canis, as como tambin la susceptibilidad en la fase crnica, con pancitopenia al
indicado microorganismo, con el fin de determinar las alteraciones hematolgicas.
Finalmente es importante y prioritario que, en los espacios acadmicos de la Facultad de Ciencias
Agropecuarias de la Universidad de Cuenca, los postulantes al ttulo profesional, tengan la
oportunidad para involucrarse mediante pasantas, en la actualizacin de conocimientos y
habilidades en herramientas cientficas y tecnolgicas de las reas de la salud y bienestar, con el
fin de poderlas aplicar sin ninguna dificultad en la tesis de grado.
Justificativos:
Autores citados por Quijada (2012) afirman que la E. canis est distribuido mundialmente y se
considera el patgeno ms comn en perros domsticos, esto debido a que son ellos los
hospedadores definitivos de la garrapata marrn de perro, este artrpodo habita en zonas tropicales
y subtropicales pues poseen climas clidos y hmedos. La ciudad de Guayaquil, de acuerdo a la
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M.I. MUNICIPALIDAD DE GUAYAQUIL (2017) posee temperaturas que van desde los 19C
hasta los 33C, convirtindose as en un hbitat ideal para la proliferacin de estos arcnidos.
Quijada et, al (2012) realiza un trabajo investigativo sobre Rickettsias y parsitos hemotrpicos
en pacientes caninos de clnicas veterinarias de cuatro estados de Venezuela, para el estudio
participaron pacientes caninos de ocho clnicas ubicadas en la costa Distrito Capital, Miranda,
Aragua y Carabobo se determin una prevalencia de Ehrlichia canis (34,78%) .
Cicutin et, al (2014) prestan un estudio realizado en Baha Blanca, Argentina cuyo objetivo general
fue estudiar la presencia de Rickettsias, Ehrlichias y Anaplasmas en garrapatas y caninos
domsticos procedentes del rea urbana. De una muestra de 56 caninos el 100% de los casos
resultaron positivos para E. canis. En los inicios de su descubrimiento fue considera como una
bacteria parasita exclusiva en perros, no obstante en la actualidad se ha detectado evidencia
serolgica de infeccin en seres humanos de pases como Venezuela, Brasil y Argentina.
Generalidades
El agente de esta infeccin es la bacteria Ehrlichia canis (Potkonjak, et, al. 2013) estas son
microorganismos Gram negativo pleomorfos de forma cocoidal, son parsitos obligatorios,
infectan linfocitos y monocitos formando en ellos mrulas conocidas tambin como micro
colonias, pueden ser visibles al microscopio empleando la tcnica especfica. Se la conoce adems
con los nombres de "enfermedad del perro rastreador", "pancitopenia canina tropical", "fiebre
canina hemorrgica, y "tifus canina". En cuanto a su clasificacin taxonmica segn Carrillo (et,
al. 2012) pertenece a la familia Rickettsiae, del orden Rickettsiales, incluidas en el gnero
Rickettsia, sub-gneros Ehrlichia
Modos de transmisin
La infeccin es transmitida por la Garrapata Marrn del Perro cuyo nombre cientfico es
Rhipicephalus sanguneus, a travs de su picadura, sta se alimenta exclusivamente de sangre de
forma temporal, pasando de unos das a varias semanas prendidas en el hospedador, (ESCCAP,
2012) es all donde inyecta las secreciones de las glndulas salivares de la garrapata con la
bacteria.
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posibilidad de infectar al can mediante transfusin sangunea.
Signos clnicos
La ehrlichiosis presenta varias fases que cursan clnicamente con desrdenes hemticos, linfticos,
gastrointestinales, musculo-esquelticos, nerviosos, oftlmicos y renales inespecficos (Cartagena,
et, al. 2014). Se cursa en la enfermedad como redacta Lpez et, al (2012) tres fases aguda,
subaguda y crnica cada una de ellas con sntomas especficos.
Las manifestaciones sintomatolgicas que se presentan en la fase aguda son depresin, fiebre,
anorexia y prdida de peso, en el laboratorio se puede encontrar trombocitopenia, leucopenia,
anemia ligera e hipergamaglobulinemia (Dolz, et. al 2013). Presenta una duracin entre una a tres
semanas.
En la etapa crnica, las clulas pares se reducen debido a daos en la medula y a que E.canis se
encuentra en el tejido (zata, et, al 2014) si el can llega a esta fase su pronstico es negativo.
Otros sntomas pueden ser -hemorragia, epistaxis y edema
Mtodos de diagnostico
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el ADN de Ehrlichia spp. 4, 13, 24, 37. Esta prueba puede detectar Ehrlichia spp. Tempranamente,
de cuatro a diez das post-inoculacin, en pacientes infectados experimentalmente (Carrillo, 2012).
La tcnica comercial Elisa SNAP R3DxR (or 4DxR) (IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME,
Estados Unidos), que presenta una especificidad cercana al 100 % y sensibilidad de 98,9 %,
(Cartagena, 2014), este es una de las pruebas de mayor frecuencia en los laboratorios, nos obstante
suele arrojar resultados falsos en las fases sub clnica y crnica.
1. Objetivo general
2. Objetivos especficos
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Los caninos objeto de estudio sern pacientes del consultorio veteniranio MI FINQUITA que
presenten signos clnicos de EMC durante los meses de diciembre 2017 a marzo 2018.
La sangre total se tomar de un can vivo empleando venopuncin de la vena ceflica,
posteriormente de forma cuidadosa se dispensar a dos tubos de ensayo rotulados con el nmero
de muestra uno de ellos con anticoagulante, accin que se realizar con los cuidados necesario
para evitar la hemlisis de las clulas hematolgicas, sacar la muestra con aguja de dimetro
apropiado conforme la raza, tamao y edad del perro, y retirndola de la jeringuilla al momento
del trasvase al tubo de ensayo.
El suero sanguneo por otro lado se conseguir de la centrifugacin por tres minutos de sangre
total, misma que luego de ser tomada se colocara en un tubo de ensayo sin anticoagulante, con
ello se logra que se separen los elementos formes del plasma sanguneo, este ltimo se recoge
mediante pipeta. Las muestras obtenidas se conservarn evitando extremos temperatura para su
traslado al laboratorio.
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Por su parte la manera de usar el test de inmunocromatografa es recolectando suero o plasma, se
introducen 4 gotas en el tubo de muestra que contiene 300 ul de diluyente de ensayo; mezclar las
muestras con diluyente de ensayo; retirar el kit de prueba de la bolsa de aluminio y colocarlo en
una superficie plana y seca; Agregar 4 gotas de esta mezcla en el orificio del cassette; se ver un
movimiento prpura a travs de la ventana de resultados, se interpretan los resultados de las
pruebas entre 5 10 min. La presencia de una sola banda dentro de la ventana de resultados
indica negativo, en cambio la presencia de dos bandas es resultado positivo. El resultado es
invlido cuando el, color prpura no es visible o no se han seguido las instrucciones
correctamente.
Otro mtodo que se empleara es el frotis sanguineo que ser realizado de la siguiente manera:
Primero se realiza un extendido de la muestra sangunea, para luego ser fijada con metanol y
tras 2 minutos, teido con una solucin de Giemsa al 10%, durante 20 minutos, posteriormente
se procede a la observacin microscpica con objetivo de inmersin (100X), para as confirmar
los hallazgos microbiolgicos (Tkach, 2012).
Tras la observacin microscpica con objetivo de inmersin (100X), y a los efectos de confirmar
los hallazgos microbiolgicos
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cuantitativas sern Peso, Edad, Lugar de origen (ver anexo operacionalizacin de las variables).
Las tcnicas de laboratorio que determinarn el valor final son Biometra hemtica y test de
inmunocromatografa usndose para cada una de ellas sangre total y suero sanguneo de perros
respectivamente.
-
La expectativa del primer objetivo especfico es identificar pacientes caninos con sntomas
compatibles con Ehrlichiosis Monoctica canina, fase crnica para ello se realizaran las
respectivas a anamnesis y examen de exploracin clnica.
Al cumplir el periodo antes mencionado se proceder a definir los valores de biometra
hemtica, inmunocromatografa y frotis sanguneo en los pacientes afectados en fase crnica por
Ehrlichiosis monoctica canina, para determinar los resultados que nos ayude a cumplir nuestro
objetivo general.
Cumpliendo con el objetivo anterior se proceder a describir los datos contrastantes entre las
variaciones halladas mediante biometra hemtica, frotis sanguneo y ensayo
inmunocromatogrfico, para de esta manera establecer puntos convergentes que permitan
posicionar a la biometra hemtica como forma oportuna de diagnstico.
La aprobacin del anteproyecto se llevar a cabo la primera semana del mes de mes 1. Durante la
tercera semana de mencionado mes se tiene previsto realizar los trmites para la implementacin.
En los meses segundo, tercero, cuarto y quinto, respectivamente de cumplir con la fase
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denominada ejecucin, donde se ha previsto para cada una de sus partes las semanas a
continuacin descritas:
Los reajustes se efectuarn en la primera semana del segundo mes. Por otro lado elaboracin de
la revisin de literatura, la toma de muestras, la ejecucin de mtodos y tcnicas de campo y
laboratorio, se deben cumplir desde la primera semana de octubre hasta la cuarta semana de
diciembre, pues para ello se requiere encontrar conceptos y estudios que sustenten la investigacin
adems de la importancia de tener una muestra representativa de pacientes que permitan confirmar
la hiptesis y alcanzar los objetivos trazados.
Lo anterior mencionado nos conducir ya para la primera y segunda semana del mes quinto a
logar satisfactoriamente el anlisis e interpretacin de resultados, es all donde se exponen los
hallazgos y estadsticas cuyo propsito radica en validar la propuesta presentada.
Durante las cuatro semanas del mes cinco se proceder con la redaccin de la tesis y revisin por
parte del director.
En el sexto mes del cronograma se implementarn la quinta y sexta fase del proyecto, esto es
presentacin de la tesis ante la institucin a efectuarse en la primera semana y trmites para la
defensa en la tercera semana.
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12. BIBLIOGRAFA
Barrios L., L O., Surez F., Manchego A., Hoyos L. 2013. Evidencia hematolgica y
serolgica de Ehrlichia SPP en propietarios de caninos domsticos con antecedentes de
ehrlichiosis en Lima metropolitana. Rev. investig. vet. Per v.24 n.1 Lima 2013.
Carrillo Bonilla L. M., Betancur Cardona S., Roldn Cardona D., Prez Jaramillo J. E., Galeano
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ISSN: 0122-0268.
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Bertheau Andrea Mara, Gallardo Daz Juan, Milin Samper Yoslaine. 2013 Mtodos
inmunolgicos utilizados en la identificacin rpida de bacterias y protozoarios en aguas.
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Hallazgos ms comunes y su interpretacin, Anlisis y estudio del frotis sanguneo. Disponible
en: http://argos.portalveterinaria.com/noticia/7130/articulos-archivo/analisis-y-estudio-del-
frotis-sanguineo.html
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ANEXO 1: CRONOGRAMA: diagrama de Grantt
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Anexo 2: Variables
EJES
VARIABLES
VARIABLES
TIPOS DE
LAS VARIABLES
MEDICIN DE
ESCALA DE
VARIABLES
ZACIN DE LAS
OPERACIONALI
DEFINICIN DE
DIMENSIONES
INDICADORES
VALOR FINAL
S
INSTRUMENTO
TCNICAS E
FUENTE
Y1 Ehrlichia canis Cualitativa Ordinal Perteneces a las Anlisis de afectados Negativo Tcnicas Sangre de
politnica Rickettsia, laboratorio Positivo Test perro
intracelular inmunocromatogrfico
obligatoria, Biometra Hemtica
cocoides. Instrumento
Produce Hoja de laboratorio
alteraciones
hematolgicas
Y2 Ehrlichiosis Cualitativa Ordinal Llamada Signos Depresin Infecciones: Tcnica: Perro
monoctica politnica pancitopenia Letargia Agudas Observacin
canina tropical, es una Prdida de peso Subagudas
enfermedad Anorexia Crnicas Instrumento:
infecciosa, de Fiebre Hoja clnica y de
baja incidencia Esplenomegalia laboratorio
zoonotica Linfadenopata
Hemorragia
Lesiones oculares
Otros
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fuerza Hembras y Medio Observacin
gravitatoria machos Bajo Instrumento:
adultos Balanza
Hoja de campo
X2 Edad Cuantitativa Razn Periodo que Jvenes y < 1ao Afectados Tcnica: Propietario
transcurre adultos 1-5 aos Entrevista
desde el geritricos > 5 aos Instrumento:
nacimiento Hoja de campo
X3 Lugar de Cuantitativa Nominal rea para toma Barrio Urbano Afectados Tcnica: Propietario
origen de muestras Entrevista
Instrumento:
Hoja de campo
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Anexo 3
HOJA DE LABORATORIO: BIOMETRA HEMTICA
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Anexo 4
HOJA DE LABORATORIO: PRUEBA DE INMUNOENSAYO CROMATOGRFICO PARA LA
DETECCIN DEL ANTGENO ERHLICHIA CANIS.
Diagnstico y prevencin
De
Enfermedades
Paciente Especie
Propietario Sexo
Medico Raza
Muestra Edad
PRUEBA DE INMUNOENSAYO
CROMATOGRFICO PARA LA DETECCIN
DEL ANTGENO ERHLICHIA CANIS.
Anexo 5.-
Hoja de campo: Historio Clnica
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CONSULTORIO VETERINARIO
MI FINQUITA
HISTORIA CLNICA
DATOS DEL PROPIETARIO
PROPIETARIO:
DIRECCIN:
TELFONO:
EMAIL:
DATOS DEL PACIENTE
NOMBRE: SEXO: DESPARASITACIN:
ESPECIE: PESO: PRODUCTO:
RAZA: EDAD: ALIMENTACIN:
MOTIVO DE CONSULTA:
ANAMNESIS:
ENFERMEDADES ANTERIORES:
RABIA RABIA :
CHEQUEO
%DESHIDRATACIN REFLEJO PUPILAR
ESTADO NUTRICIONAL ECTOPARSITOS
AP. RESPIRATORIO
AP. CIRCULATORIO
AP. URINARIO
AP. DIGESTIVO
AP. REPRODUCTOR
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PIEL
GANGLIOS
MEDIOS DE
DIAGNOSTICO:
MEDICINA APLICADA
PRODUCTO VOLUMEN VA DE ADMINISTRACIN JERINGAS
1 ml 3ml 5ml 10ml 20ml
SUEROTERAPIA
TIPO VOLUMEN MEDICINA JERINGAS
COMPLEMENTARIA
1 ml 3ml 5ml 10ml 20ml
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DIAGNOSTICO
RESULTADO DE MEDIOS DE DIAGNSTICOS:
TRATAMIENTO:
PRESCRIPCIN:
PRXIMA CITA:
OBSERVACIONES:
PROPIETARIO DOCTOR
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Estudiante Director de tesis
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