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Unidad: IV
Introduccin
Contenido
1.-) Aspectos generales sobre la inmovilizacin de enzimas.
2.-) Ventajas e inconvenientes.
3.-) Mtodos de inmovilizacin.
4.-) Soportes de inmovilizacin.
5.-) Adsorcin.
5.1.-) adsorcin por interaccin hidrofbicas.
5.2.-) adsorcin por interacciones inicas.
5.3.-) adsorcin por afinidad.
5.4.-) adsorcin por coordinacin a un metal.
6.-) Atrapamiento.
7.-) Unin covalente.
7.1.-) Formacin de enlaces diazo.
7.2.-) Formacin de enlaces tipo peptdico.
7.3.-) Formacin de enlaces de Schiff.
7.4.-) mtodo de alquilacin o arilacin.
7.5.-) Reacciones de intercambio tio-disulfuro.
8.-) Entrecruzamiento o Reticulado.
9.-) Comparacin entre los mtodos de inmovilizacin.
10.-) Eleccin del mtodo.
11.-) Propiedades de las enzimas inmovilizadas.
12.-) Actividad cataltica.
13.-) Especificidad por el sustrato.
14.-) Constantes cinticas.
14.1.-) Constante de Michaelis (Km).
14.2.-) Velocidad mxima (Vmax).
15.-) Temperatura y pH.
16.-) Estabilidad.
17.-) Aplicacin de las enzimas inmovilizadas.
Referencias
Introduccin En 1985 se llev a cabo la
inmovilizacin de mltiples
Las enzimas son biomolculas enzimas para su uso, por ejemplo
especializadas en la catlisis de las en la produccin de L-aminocidos
reacciones quimias que tiene lugar a partir de ceto-cidos a partir de
la clula. Son muy eficaces como reactores de membrana.
catalizadores ya que son capaces
Los componentes principales de un
de aumentar la velocidad de las
sistema de inmovilizacin
reacciones qumicas mucho ms
enzimtico son la enzima, la
que cualquier catalizador artificial
matriz o soporte y el mtodo
conocido, y adems son altamente
de fijacin. Alguna de sus
especficos ya que cada uno de
propiedades como la actividad
ellos induce la transformacin de
cataltica o la estabilidad trmica
un solo tipo de sustancia y no de
llegan a ser alteradas, sin
otras que se pueden encontrar en
embargo puede conservar su
el medio de reaccin.
funcionalidad durante varios ciclos.
La estabilidad estructural de las
enzimas durante las reacciones
bioqumicas son algunos de los
desafo principales en el estudio de
los biocatalizadores. Se han
desarrollado diferentes tcnicas
con el fin de inmovilizar las
enzimas que contengan un
Figura 1. Componentes de un sistema de
eficiencia funcional y mayor
inmovilizacin: enzima, soporte y tcnica de
reproducibilidad.
inmovilizacin.
De esta manera la inmovilizacin
de enzimas se refiere al hecho de Debe tener en cuenta el
limitar o retardar el movimiento. conocimiento de las propiedades
La enzima inmovilizada es aquella de los materiales del soporte y los
que esta confinada en un espacio procesos de inmovilizacin.
definido, que retiene su actividad
1.-) Aspectos generales sobre
cataltica y puede ser reutilizada
la inmovilizacin de enzimas.
de forma continua.
Segn IUPAC la inmovilizacin es
La inmovilizacin se remonta al
una tcnica utilizadas para
estudio de las biopelculas, las
conseguir la fijacin fsica o
cuales son una superficie de
qumica de clulas, orgnulos,
conexiones de comunidades
enzimas u otras protenas en un
microbianas que consisten en
soporte slido, una matriz solida o
mltiples capas de clula
mediante retencin de una
incrustada en matrices hidratadas.
membrana, con el fin de aumentar
su estabilidad y hacer posible su
uso repetido o continuado
Concretamente las enzimas El biocatalizador es ms
inmovilizadas pueden ser definidas caro que la enzima nativa.
como enzimas fsicamente
confinadas o localizadas en una
cierta regin definida del espacio
con retencin de su actividad
cataltica y que puede ser usadas
repetidamente y de modo
continuo (Chibata, 1978)
El aumento de la estabilidad
de la enzima.
La posible reutilizacin del
derivado, por lo que
disminuye los costes del
proceso.
La posibilidad de disear un
reactor enzimtico de fcil
manejo y control, adaptado
a la aplicacin de la enzima
inmovilizada.
La alteracin de la
conformacin de la enzima
respecto de su estado
nativo.
La gran heterogeneidad del
sistema enzima-soporte
donde pueden existir
distintas fracciones de
protenas inmovilizadas con
un diferente nmero de Tabla 1. Ventajas e inconvenientes del
uniones. sistema de inmovilizacin de enzimas.
Siempre suele haber una
prdida de inactividad de la
enzima durante la
inmovilizacin.
3.-) Mtodos de inmovilizacin.
Atrapamiento
Dimetro de partcula
Resistencia mecnica.
Compresin.
Posteriormente, la enzima se
enlasa por medio de sus grupos
tiol y ocurre la liberacin de 2-
tiopiridona. La caracterstica
principal de este enlace es su
reversibilidad, pues a pesar de Figura 9. Inmovilizacin enzimtica mediante
su carcter covalente, existen reacciones de intercambio tiol-disulfuro. (E=
reactivos como ditiotreitol enzima)
(DTT) que en condiciones 8.-) Entrecruzamiento o
suaves pueden romper esos Reticulado.
puentes disulfuro establecidos
La inmovilizacin por
entre la enzima y el soporte
entrecruzamiento o reticulado
(Brena y Batista-Viera, 2006).
ocurre en ausencia de un
En este mtodo aporta la soporte slido y consiste en la
ventaja como la posibilidad de formacin de enlaces
reutilizar el soporte, una vez intermoleculares entre
que la actividad enzimtica diferentes molculas de enzima
haya cado, eliminando la por medio de reactivos bi-o
enzima agotada y multifuncionales. Estos
sustituyndola por enzima reactivos pueden ser
nueva. glutaraldheido,
bisdiazobenzidina, entre otros
Como soportes de
que dan lugar a
inmovilizacin ha sido
entrecruzamiento mediante
empleados la agarosa-
formacin de bases de Schiff,
glutation-2-piridil disulfuro
acoplamientos diazo, alquilacin
(llamada sefarosa tol-
o enlaces peptdicos
activada), agaraso-
respectivamente. De todos ellos
el ms usado es el deber realizarse en base a la
entrecruzamiento mediante enzima concreta a inmovilizar
glutaraldhedo. y a la aplicacin posterior que
se le va a dar a la preparacin
Entre las ventajas de este
final obtenida.
mtodo se encuentran su
simplicidad, y la disponibilidad Otros factores como la
de controlar el tamao de naturaleza del sustrato,
partcula y las propiedades del producto o tipo de reactor a
producto final. Como emplear tambin son
inconvenientes podemos citar determinantes en la eleccin
que las reacciones se realizan del mtodo de inmovilizacion.
en condiciones relativamente
En la siguiente tabla se muestra
severas, con lo que la
un resumen de las
conformacin del centro activo
caractersticas generales de
de la enzima puede verse
cada mtodo de inmovilizacin
afectada, provocando una
(fortaleza del enlace, dificultad,
importante prdida de
regeneracin del soporte,
actividad.
validez del mtodo y coste del
proceso), as como de las
propiedades generales de las
enzimas inmovilizadas por
dicho mtodo (actividad
enzimtica y estabilidad).
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a=t&rct=j&q=&esrc=s&source=we
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ved=0CBwQFjAA&url=http%3A%2
F%2Fwww.researchgate.net%2Fpr
ofile%2FMiguel_Arroyo%2Fpublica
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_de_enzimas._Fundamentos_mtod
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