UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA PETROLEO GAS NATURAL Y PETROQUIMICA

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE

Autor:
PAREDES TOCAS, Jean Pierre

Profesor:
Lic. MINAYA AMES, Carlos Enrique

Fecha de entrega:
13 DE JULIO DEL 2017

LIMA, PER
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Petroqumica UV - VISIBLE

INTRODUCCIN
Dentro de los mtodos espectromtricos o espectrofotomtricos de anlisis para
identificar y cuantificar elementos presentes en distintos medios se encuentra la
espectrofotometra ultravioleta visible (UV-Vis).
La espectroscopa describe la interaccin entre la radiacin, principalmente la
electromagntica, y la materia. Toda radiacin electromagntica viene caracterizada
por una longitud de onda (), una frecuencia () o una energa (E); la relacin
existente entre ellas est dada por la ecuacin de Planck:

= = h

dnde:
E= energa transportada por cuanto de radiacin o fotn [J.fotn-1]
h= constante de Planck (6,6256 10-34J s fotn-1)
c= velocidad de la luz (2,9979 108m s-1)
= longitud de onda [m]
= frecuencia de la radiacin [s-1]

Los valores de frecuencia y longitud de onda de las distintas regiones del espectro
electromagntico son:
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La radiacin electromagntica ocasiona distintos efectos sobre la materia, tal como se

indica a continuacin:

Radiacin Efecto
Rayos X y
csmicos Ionizaciones de las molculas.
Transiciones electrnicas entre los orbtales atmicos
UV-Visible y moleculares.

Infrarrojo Deformacin de los enlaces qumicos.

Microondas Rotaciones de los enlaces qumicos.

Transiciones de espn electrnico o nuclear en los
Radiofrecuencias tomos de la
Molcula.

Cuando la radiacin incide sobre una sustancia, slo un tomo o conjunto de tomos
son capaces de absorber la radiacin; estos grupos se denominan cromforos y
sern distintos dentro de una misma molcula para cada tcnica espectroscpica.

Los efectos de la radiacin sobre la materia pueden usarse para obtener informacin
sobre la estructura de la misma, y as surgen distintas tcnicas espectroscpicas, tales
como:

Tcnica
espectroscpica Informacin obtenida
Estructura total de la molcula incluida la
Rayos X estereoqumica.

Existencia de cromforos y/o conjugacin en la

Ultravioleta-Visible molcula.

Grupos funcionales a partir de las absorciones

Infrarrojo observadas.
Espectrometra de Formula molecular y subestructuras a partir de los
masas iones observados.
Resonancia Grupos funcionales, subestructuras,
magntica conectividades, estereoqumica, etc.
nuclear
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FUNDAMENTO TERICO

Espectroscopa ultravioleta visible (UV-Vis)

La espectroscopa UV-Vis utiliza la radiacin del espectro electromagntico, cuya longitud

de onda est comprendida entre los 100 y los 800 nm (energa comprendida entre las 286 y
36 kcal mol-1), y su efecto sobre la materia es producir transiciones electrnicas entre los
orbitales atmicos y/o moleculares de la sustancia. En algunos casos, los efectos y la
deteccin pueden llegar al IR cercano (800-900 nm).

En la espectroscopa UV-Vis, una especie qumica (en general una molcula, aunque puede
tratarse de una especie monoatmica, un ion o un complejo) absorbe UV-Vis, y la energa
adquirida por el sistema causa la transicin de un electrn de un estado basal o
fundamental (EF) a uno excitado (EE). La energa de la transicin est relacionada con la
longitud de onda de la radiacin a travs de la ecuacin de Planck. Un grfico o
representacin de la respuesta del sistema en funcin de la longitud de onda o frecuencia se
denomina espectro.

En general, en los espectros UV-Vis, se observa una seal debida a cada transicin
electrnica del EF al EE. Los tomos dan lneas agudas, mientras que las molculas
poliatmicas dan seales en forma de bandas puesto que la absorcin de luz involucra
tambin energa suficiente para causar cambios en energa vibracional y rotacional de cada
uno de sus estados electrnicos en el EE, tal como ocurre cuando se irradia al EF con luz
infrarroja. En este caso, se originan lneas de absorcin de diferentes intensidades que no
se resuelven, con la aparicin de un continuo o banda. Para una sustancia determinada, la
longitud de onda a la cual se produce el mximo de absorbancia en el espectro se conoce
como mx.

La seal espectral permite, por un lado, identificar algunos grupos funcionales presentes en
las molculas y, por el otro, estimar la concentracin de una sustancia. La espectrometra
es la tcnica espectroscpica usada para evaluar la concentracin de una especie y utiliza
un instrumento llamado espectrmetro. En el caso de la espectrometra que utiliza fotones
(UV-Vis, IR), se suele hablar de espectrofotometra. Para la medicin de la intensidad de
absorcin se usan espectrofotmetros en los cuales se puede medir la absorbancia o la
transmitancia.

Modos de excitacin electrnica

Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide sobre una especie absorbente, un
electrn es promovido desde el EF al EE. El acto primario de excitacin por la luz
involucra tres etapas: 1) interaccin de la molcula con fotn (UV, visible), 2)
fotoexcitacin, 3) produccin del EE o transicin electrnica. La absorcin depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Hemos dicho
que slo absorben en el UV-Vis aquellas sustancias que presentan un cromforo, en el cual
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se localiza, aproximadamente, la transicin electrnica responsable de una determinada

banda espectral y que absorbe la luz. Bajo irradiacin UV-Vis pueden ocurrir distintas
transiciones electrnicas:
Transiciones *: ocurren a < 50 nm. Este tipo de transiciones se dan sobre todo en
hidrocarburos que nicamente poseen enlaces C-H o C-C. La energa requerida para
que tenga lugar esta transicin es relativamente grande, y pertenece a la regin espectral
denominada ultravioleta de vaco (UVV):

Transiciones n*: ocurren a entre 150-200 nm. Corresponden a compuestos que

poseen tomos con pares de electrones no compartidos (electrones de no enlace, como
en el caso de O, N, Cl). La energa necesaria para que se produzca esta transicin sigue
siendo alta (aunque menor que en las *), perteneciendo stas a la regin espectral
UV lejano:

Transiciones n* y transiciones *: ocurren a entre 200-700 nm. La mayora de

las aplicaciones de la espectroscopa UV-Vis estn basadas en transiciones que ocurren en
esta zona. Se requiere que las especies participantes aporten un sistema de electrones
(grupos cromforos: compuestos con insaturaciones, sistemas aromticos multicclicos,
etc.). Las energas de excitacin en las transiciones * son medianamente altas,
correspondiendo a las regiones UV lejano y cercano, mientras que las n* son algo
menores:
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Las energas de las distintas transiciones electrnicas se comparan de la siguiente forma:

En las molculas existen tambin tomos o grupos de tomos que no absorben radiacin,
pero hacen que se modifique alguna de las caractersticas de la absorcin del cromforo.
La naturaleza del solvente, el pH de la solucin, la temperatura, la concentracin de
electrolitos o la presencia de sustancias interferentes pueden provocar tambin
desplazamientos de las bandas en el espectro UV-Vis. Los efectos son los siguientes:

Efecto hipsocrmico: corrimiento a menores (desplazamiento al azul) por

sustitucin o cambio en el medio, por ej. el solvente.
Efecto batocrmico: corrimiento a mayores (desplazamiento al rojo).
Efecto hipercrmico: aumento de la intensidad de una banda espectral por
sustituyentes o interacciones con el entorno molecular.
Efecto hipocrmico: opuesto a hipercrmico.
Auxocromo: tomo o grupo de un cromforo que, generalmente por conjugacin con
un cromforo, ocasiona un desplazamiento batocrmico y/o un efecto hipercrmico
en una banda determinada del mismo, generalmente en la de menor frecuencia.

De acuerdo con los anteriores modos de excitacin, se pueden encontrar los siguientes
cromforos simples en la espectroscopa UV-Vis:

Electrones
implicados Enlace Trans. max (nm)
Electrones C-C, C-H * 150
-O- n* 185
-N- n* 195
Electrones n -S- n* 195
C=O n* 290
C=O n* 190
Electrones C=C * 190
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Algunos ejemplos de longitud de onda mxima de absorcin son:

Ley de Lambert Beer

La base de la espectrofotometra de absorcin UV-Vis y su uso en el anlisis cuantitativo

estn dados por la relacin conocida como ley de Lambert Beer, que establece que la
absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin del analito en
esa solucin. Por lo tanto, puede emplearse para determinar la concentracin de un
compuesto en una solucin. La longitud de onda de absorcin de la luz es especfica de
cada cromforo.
Cuando un haz de radiacin UV-Vis atraviesa una solucin que contiene un analito
absorbente, la intensidad (I)* que atraviesa la muestra es menor que la del haz incidente
(Io). La fraccin de radiacin que ha traspasado la muestra se denomina transmitancia (T =
I/Io). La transmitancia T est relacionada con la absorbancia (A) de acuerdo a la siguiente
expresin:

= log() = log( )
0
Por aspectos prcticos, para las mediciones se usa la absorbancia (A) en lugar de la
transmitancia (T), debido a que, de acuerdo a la ley Lambert Beer, A est linealmente
relacionada con la concentracin del analito absorbente a una determinada longitud de
onda:

= ( ) = cl
0
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dnde:
A: absorbancia medida
I: intensidad de la luz transmitida
Io: intensidad de la luz incidente
: coeficiente de absorcin molar*, caracterstico de cada sustancia absorbente a cada
longitud de onda
l: longitud del camino ptico (distancia que atraviesa la luz dentro de la muestra)
c: concentracin de la sustancia absorbente (mol L-1).

La ley de Lambert-Beer se cumple para valores pequeos del producto cl (0,01 a

0,1).

Para cada analito absorbente y longitud de onda , es una constante y es una propiedad
molecular fundamental asociada a un solvente dado, a una temperatura y presin
particular.

La absorbancia A y el coeficiente de absorcin son a veces definidos en trminos del

logaritmo natural en lugar del logaritmo de base 10. es una constante relacionada con
el rea de incidencia del cromforo y la probabilidad de que se produzca la absorcin.
El espectrofotmetro UV-Vis registra las longitudes de onda a las cuales se cuantifica y
registra la absorcin. El espectro se registra como absorbancia (A) vs. longitud de onda
().

APLICACIN DE LA ESPECTROMETRA UV-VIS PARA LA

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE ESPECIES QUMICAS

Para las determinaciones analticas es solamente necesario disponer de un

espectrofotmetro UV-Vis, un equipo accesible y econmico para la mayora de los
laboratorios, y con este equipo medir el cambio de la absorbancia de un compuesto a
diferentes concentraciones de analito por un mtodo estandarizado para la especie en
cuestin. Generalmente, se realiza una curva de calibracin de la cual se puede obtener el
coeficiente de absorcin molar.

La espectrometra UV-Vis se emplea generalmente en la determinacin cuantitativa de la

concentracin en solucin de especies qumicas como iones metlicos de transicin y
compuestos orgnicos muy conjugados. Muchas de las determinaciones incluyen un paso
de reaccin entre la especie y un compuesto que origine un derivado coloreado o
absorbente en el UV-Vis.

En particular, las soluciones de iones metlicos de transicin son generalmente coloreadas

pues absorben la luz visible debido a la excitacin desde un estado electrnico a otro de los
electrones de los tomos del metal. El color de las soluciones de iones metlicos puede ser
afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Como se
mencion antes, los compuestos orgnicos, especialmente aqullos con un alto grado de
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conjugacin, tambin absorben luz en las regiones visible o ultravioleta del espectro
electromagntico, con coeficientes de absorcin bastante elevados.

Por lo general, se usa el agua como disolvente para compuestos inorgnicos y etanol
para compuestos orgnicos porque este alcohol absorbe muy dbilmente a la mayora de
las longitudes de onda. Como ya se ha dicho, la polaridad y el pH pueden afectar tambin
la absorcin de un compuesto.

EL ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE
El instrumento usado en la espectrofotometra ultravioleta-visible se denomina
espectrofotmetro UV-Visible, y permite comparar la radiacin absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto con una que contiene
una cantidad conocida de la misma sustancia. Se mide la transmitancia de la muestra que
se expresa habitualmente como porcentaje (%T), o bien la absorbancia (A).

Partes de un espectrofotmetro:
El equipo se compone generalmente de una fuente de luz (por lo general una lmpara
incandescente (de tungsteno) para las longitudes de onda en el rango visible, o una lmpara
de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra, una red de difraccin o
monocromador para separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector.

El detector suele ser un fotodiodo o un CCD*. Los fotodiodos se usan con

monocromadores que filtran la luz, de modo que una sola longitud de onda alcanza el
detector. Las redes de difraccin se utilizan en conjunto con CCDs, que recogen radiacin
electromagntica de diferentes longitudes de onda en pxeles.

Un espectrofotmetro puede ser de haz simple o de doble haz. En un instrumento de un

solo haz, toda la luz pasa a travs de la celda de la muestra. La intensidad incidente Io se
mide anlogamente en ausencia de la muestra. En un instrumento de doble haz, la luz se
divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un haz se usa como referencia, y el otro
pasa a travs de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores
(fotodiodos) y se puede medir simultneamente tanto el haz de referencia como el de la
muestra.

En otros instrumentos, los dos haces pasan a travs de un bloqueador que impide el paso de
uno de los haces. El detector alterna entre la medida del haz de muestra y la del haz de
referencia. Las muestras se colocan en una celda transparente (cubeta), que suelen ser
rectangulares con un ancho interior de 1 cm (l = 1 en la ecuacin de la ley de Lambert
Beer). Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes
las de vidrio o plstico. El cristal, el vidrio y la mayora de los plsticos absorben en el UV,
lo que limita su utilidad a las longitudes de onda en el visible.
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Espectrofotmetro convencional
Un espectrofotmetro convencional enfoca la luz policromtica de la fuente en un
monocromador. ste tiene como componentes principales una ranura de entrada, un
elemento que dispersa la luz en sus longitudes de onda componentes (en general una red de
difraccin), y una ranura de salida que permite seleccionar la longitud de onda deseada.
Esa luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al detector. Las mediciones
fotomtricas se hacen en base a la relacin entre la intensidad de la luz que alcanza al
detector cuando est interpuesta la muestra (I) y cuando no lo est (Io) o cuando est
interpuesto un blanco.

En realidad, el monocromador no selecciona una nica longitud de onda, sino un rango,

cuya amplitud depende de la calidad (resolucin) del mismo. Esta resolucin depende
fundamentalmente del diseo (montaje) del monocromador, de su distancia focal, y de las
dimensiones y densidad de lneas en la red de difraccin.

Para cambiar la longitud de onda de medicin, o para hacer un barrido espectral, se mueve
el elemento dispersor o algn espejo por medio de un motor por pasos.

Espectrofotmetro de arreglo de diodos

El espectrofotmetro de arreglo de diodos (diode array) fue introducido a mediados de los
aos 1970. Utiliza una ptica invertida respecto del convencional: toda la luz de la fuente
atraviesa la muestra, y luego es dispersada en un monocromador que, en lugar de una
ranura de salida, tiene en el plano focal un dispositivo que integra en un pequeo circuito
varios cientos de detectores tipo fotodiodo de silicio.

El nmero de elementos vara actualmente entre 64 y 4096, siendo los ms comunes de

512 y 1024 elementos. Cada elemento del arreglo recibe luz de un rango particular de
longitudes de onda, y una computadora procesa los datos recibidos. Las principales
ventajas del espectrofotmetro de arreglo de fotodiodos son que para obtener un espectro
no se necesita mover ningn elemento, y los espectros se obtienen en forma casi
instantnea.
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Finalmente un esquema simple de las partes constituyentes de un espectrofotmetro UV-

Vis con detector de arreglo de diodos y una fotografa de un modelo de equipo usado con
frecuencia: