Artikel

Ditingkatkan antimikroba dan antikanker Kegiatan

Silver dan Gold Nanopartikel Sintesis Menggunakan
Sargassum incisifolium encer Ekstrak
Mokone Mmola 1,2, Marilize Le Roes-Hill 3, Kim Durrell 3, John J. Bolton 4, Nicole Sibuyi 2,
Mervin E. Meyer 2, Denzil R. Beukes 1, * dan Edith Antunes 5
1 Sekolah Farmasi, Universitas Western Cape, Bellville 7535, Afrika Selatan; mcozeemm@gmail.com
2 Departemen Bioteknologi, University of Western Cape, Bellville 7535, Afrika Selatan;
nsibuyi@uwc.ac.za (N.S.); memeyer@uwc.ac.za (M.E.M.)
3 Biocatalysis dan Biologi Technical Research Group, Institut Biomedis dan Mikroba Bioteknologi,
Cape Peninsula University of Technology, Bellville 7535, Afrika Selatan; LeRoesM@cput.ac.za
(M.L.R.-H.);
DurrellKa@gmail.com (K.D.)
4 Department of Biological Sciences, University of Cape Town, Rondebosch 7701, Afrika Selatan;
john.bolton@uct.ac.za
5 Departemen Kimia, University of Western Cape, Bellville 7535, Afrika Selatan; Ebeukes@uwc.ac.za
* Korespondensi: dbeukes@uwc.ac.za; Tel .: + 27-21-959-2352; Fax: + 27-21-959-3407
Editor Akademik: Kadir Aslan
Menerima: 26 Oktober 2016; Diterima: 23 November 2016; Diterbitkan: 2 Desember 2016
Abstrak: Sebuah rinci, pendekatan metodis digunakan untuk mensintesis perak dan emas
nanopartikel menggunakan
dua ekstrak air berbeda disiapkan dari cokelat alga Sargassum incisifolium. efisiensi
ekstrak dalam memproduksi nanopartikel dibandingkan dengan tersedia secara komersial alga coklat
fucoidans, konstituen utama dari ekstrak air alga coklat. Nanopartikel yang ditandai
menggunakan TEM, XRD dan UV / Vis spektroskopi dan pengukuran potensial zeta. Tingkat
nanopartikel
Pembentukan dinilai menggunakan UV / Vis spektroskopi dan berkaitan dengan ukuran, bentuk dan
morfologi
nanopartikel seperti diungkapkan oleh TEM. Antioksidan, mengurangi daya dan jumlah polifenol
Isi dari ekstrak air dan fucoidans ditentukan, mengungkapkan bahwa ekstrak air
dengan isi tertinggi dihasilkan lebih kecil, bulat, nanopartikel lebih monodisperse pada lebih cepat
menilai. Nanopartikel dinilai terhadap dua bakteri gram negatif, dua bakteri gram positif
dan satu ragi ketegangan. Berbeda dengan literatur, nanopartikel perak diproduksi menggunakan air
yang
ekstrak yang sangat beracun terhadap bakteri Gram-negatif, sedangkan nanopartikel emas tidak
memiliki aktivitas.
Aktivitas sitotoksik nanopartikel juga dievaluasi terhadap kanker (HT-29, MCF-7) dan
non-kanker (MCF-12a) baris sel. Nanopartikel perak ditampilkan selektivitas, sejak MCF-12a
garis sel ditemukan resisten terhadap nanopartikel, sedangkan kanker HT-29 garis sel ditemukan
menjadi sensitif (10% viabilitas). Nanopartikel emas ditampilkan toksisitas diabaikan.

Kata kunci: nanopartikel perak; nanopartikel emas; sintesis hijau; fucoidans; incisifolium Sargassum;
aktivitas antibakteri; sitotoksisitas; Total konten fenolik
1. Perkenalan
Karakteristik Novel Nanomaterials dibandingkan dengan bahan massal mereka telah
menyebabkan intensif
penelitian di bidang nanosains untuk aplikasi di berbagai sektor termasuk katalisis,
pemberian obat,
diagnostik, transportasi, energi, kosmetik dan pengembangan obat baru [1,2]. Peningkatan
luas permukaan sebagai ukuran bahan berkurang, bersama-sama dengan efek kurungan
kuantum yang
mendominasi pada tingkat-nano, mengakibatkan luar biasa mekanik, listrik, konduktivitas,
magnetik dan
sifat optik [3,4].
Munculnya beberapa mikroorganisme yang resistan terhadap obat adalah beban bagi
ekonomi dan
sektor kesehatan publik di seluruh dunia [5]. Penggunaan antibiotik yang tidak tepat,
misalnya, telah memungkinkan
mikroorganisme untuk mengembangkan mutasi yang mengarah ke peningkatan resistensi
terhadap antibiotik, sehingga mahal,
jangka waktu rawat inap dan peningkatan tingkat kematian [6-8]. Sebuah hemat biaya, luas
antibiotik spektrum demikian dicari dan penggunaan Nanomaterials dalam pengembangan
efektif
pengobatan terhadap bakteri resisten obat menawarkan insentif yang sangat menarik [9].
Perak, di nya
bentuk curah, telah lama dikenal untuk membunuh sebagian mikroorganisme efektif [10].
Untuk alasan ini, perak
nanopartikel (AgNPs), dengan mereka yang menarik fisikokimia sifat, ukuran dan permukaan
plasmon
resonansi (SPR) perilaku, telah menarik perhatian banyak peneliti yang mengarah ke intensif
penelitian ke berbagai aplikasi termasuk kimia, biologi dan sektor fisik [11].
AgNPs telah ditemukan memiliki anti-jamur, kegiatan anti-bakteri dan anti-inflamasi [4] dan
mereka secara luas digunakan dalam kosmetik, pembalut luka, implan medis, kemasan
makanan, air
disinfeksi, serta dengan peralatan rumah sakit untuk menghindari infeksi [12,13].
Meningkatnya minat dalam penerapan nanopartikel ini bersama-sama dengan
meningkatnya
kepedulian terhadap lingkungan, telah mengharuskan kebutuhan untuk mengembangkan
ringan, hemat energi dan
metode sintetis yang ramah lingkungan untuk produksi nanopartikel. Dengan demikian, di
baru-baru ini
tahun penggunaan ekstrak tumbuhan dan produk alami untuk sintesis nanopartikel telah
menerima
banyak perhatian [14-18]. Aloe vera ekstrak yang digunakan oleh Chadran et al. untuk
mensintesis AgNPs [19],
sementara Leela dan Vivekanandan dibandingkan kemampuan ekstrak yang berbeda dari
Helianthus annus
(Bunga matahari) yang dipamerkan kapasitas yang luar biasa untuk mempengaruhi
pengurangan Ag + untuk Ag (0) [20].
Selanjutnya, Gnanojobitha et al. ekstrak digunakan dari buah Vitis vinifera untuk mensintesis
AgNPs dan
dievaluasi efikasi antimikroba melawan Bacillus subtilis dan Klebsiella planticola (Gram-
positif dan
bakteri gram negatif, masing-masing) [21]. The AgNPs yang ditemukan aktif terhadap Gram-
positif
mikroorganisme untuk tingkat yang lebih besar daripada bakteri Gram-negatif. Meskipun
beberapa penelitian memiliki
dilaporkan pada sintesis AgNPs menggunakan ekstrak tanaman, ini telah berfokus hanya
pada nanopartikel
pembentukan dan rincian eksperimental untuk kondisi yang digunakan dalam sintesis tidak
jelas. Beberapa
penelitian yang melibatkan biosintesis nanopartikel logam menggunakan ganggang laut juga
telah dilaporkan.
Beberapa contoh termasuk AgNPs yang telah disintesis menggunakan rumput laut hijau,
Codium capitatum
(Chlorophyta) [14] dan rumput laut merah, Gelidiella acerosa (Rhodophyta) [22]. The AgNPs
di kedua
studi dievaluasi untuk aktivitas antijamur dan aktivitas terbesar diamati terhadap Mucor
indicus dan Trichoderma reesei, sementara aktivitas moderat tercatat ketika AgNPs diuji
terhadap Fusarium dimerum dan insolens Humicola [22].
nanopartikel emas telah ditemukan digunakan dalam katalisis, optik nonlinier,
nanoelectronics, ekspresi gen,
dan diagnosis penyakit [23]. Karena biokompatibilitas mereka, aplikasi medis untuk AuNPs
termasuk
pemberian obat, jaringan / pencitraan tumor, terapi photothermal dan
immunochromatographic yang
identifikasi patogen dalam spesimen klinis [24]. Studi juga telah dilakukan pada penggunaan
dari ekstrak tanaman untuk mensintesis nanopartikel emas, termasuk studi oleh Tripathy et
al. [25] yang digunakan
ekstrak daun Ficus benghalensis (pohon beringin) dan Sathishkumar et al. [26] yang
disintesis
AuNPs dari Couroupita guianensis-juga dikenal sebagai pohon cannonball (Aubl.). Beberapa
penelitian telah
dilaporkan pada penggunaan ganggang laut untuk mensintesis AuNPs seperti Sargassum
wightii [27] dan
Stoechospermum marginatum (Ktzing) [24], di mana NP disintesis diuji untuk antibakteri
aktivitas terhadap panel mikroorganisme menular. Dalam studi terakhir, Rajathi et al.
ditunjukkan
bahwa AuNPs yang aktif terhadap bakteri Gram-negatif daripada bakteri Gram-positif [24].
Rumput laut dikenal karena kapasitas penyerapan logam tinggi, ketersediaan siap dan
mereka
struktur makroskopik; ukurannya yang besar membuat biomassa tersedia [14]. Rumput laut
memiliki
lama digunakan untuk sifat obat mereka (termasuk kegiatan anti-bakteri dan anti-jamur) dan
mereka mengandung anti-oksidan yang dapat bertindak terhadap penyakit degeneratif [28].
ganggang coklat laut
mengandung polisakarida yang belum ditemukan pada tanaman darat; ini disebut
"fucoidans"
menurut aturan IUPAC [29]. Fucoidans berpikir untuk memainkan peran dalam sintesis NP
karena
mereka rantai sulfonasi sisi [30] dan beberapa fucoidans tersedia secara komersial dengan
demikian digunakan sebagai kontrol dalam penelitian ini. Selain fucose dan sulfat gugus,
fucoidans dapat terdiri
monosakarida lainnya (mannose, galaktosa, glukosa, dan xylose), asam uronic, kelompok
asetil dan
protein [31]. Beberapa phlorotannins kompleks menampilkan kegiatan antioksidan kuat [32]
juga telah
diisolasi dari ganggang coklat, yang mungkin sangat berguna dalam pengurangan garam
logam yang digunakan
untuk membentuk nanopartikel. spesies oksigen reaktif (ROS) seperti superoksida (O2
), hidroksil (OH),
peroxyl (ROO) dan radikal oksida nitrat (NO) menyebabkan stres oksidatif pada sel-sel dan
antioksidan yang
dikenal memainkan peran penting dalam melindungi sel-sel ini. Aktivitas antioksidan yang
ditunjukkan oleh tanaman
dan ganggang laut telah dievaluasi dalam berbagai laporan [33-36]. Polisakarida dari rumput
laut
seperti Ulva lactuca (rumput laut hijau), Sargassum crassifolium dan Turbinaria ornata
(rumput laut coklat)
dan Digenea simplex (rumput laut merah) dievaluasi oleh beberapa peneliti, dan aktivitas
tertinggi
diamati untuk polisakarida terisolasi dari rumput laut coklat [37,38]. Untuk yang terbaik dari
kami
pengetahuan, aktivitas antioksidan dari Sargassum incisifolium belum diteliti sebelumnya.
Dalam studi ini, kita fokus perhatian kita pada penggunaan ekstrak air dari Sargassum
rumput laut
incisifolium, pribumi spesies Afrika Selatan [39,40], dalam sintesis hijau perak dan emas
nanopartikel. Ekstrak rumput laut berair dan tersedia secara komersial fucoidans murni dari
alga coklat lainnya dievaluasi untuk antioksidan, antimikroba dan aktivitas sitotoksik. Itu
AgNPs dan AuNPs disintesis yang kemudian dinilai untuk potensi mereka sebagai
antimikroba dan
agen sitotoksik 2. Hasil dan Pembahasan
2.1. Karakterisasi dari incisifolium Sargassum encer Ekstrak dan Fucoidans Digunakan Sintesis
yang
dari NP
2.1.1. Persiapan sampel
Ekstrak air (AE) disusun menggunakan dua metode dan ekstrak disebut
sebagai AC dan AR ekstrak (di mana AC adalah ekstrak air diperoleh setelah ekstraksi organik
dan AR
adalah ekstrak air diperoleh seperti dari rumput laut). Kedua ekstrak cokelat dalam warna
yang
dapat dikaitkan dengan kehadiran polifenol yang sebelumnya telah diisolasi dari coklat
ganggang [41], berbeda dengan solusi fucoidan yang berwarna (Gambar S1). ekstrak
tersebut adalah
lebih lanjut ditandai dengan UV / Vis (Gambar S2), 2D NMR dan FT-IR spektroskopi (Angka
S3-S7) dan
dibahas dalam Informasi Tambahan.
2.1.2. Penentuan Aktivitas Antioksidan, polifenol Konten dan Total Mengurangi Kekuatan
yang berair Ekstrak S. incisifolium dan Fucoidans
Kami berhipotesis bahwa senyawa antioksidan dalam ekstrak air S. incisifolium akan
mampu mengurangi Ag + dan Au3 + untuk Ag (0) dan Au (0). Oleh karena itu bagian dari
studi itu dilakukan
keluar untuk memberikan wawasan (a) isi polifenol dari reagen yang digunakan dan
kekuasaan mengurangi mereka
(Dan karena itu kemampuan mereka untuk membentuk nanopartikel) dan (b) aktivitas
antioksidan mereka. polifenol yang
konten, total daya mengurangi dan aktivitas antioksidan dari dua ekstrak air S. incisifolium
dan fucoidans murni (Fv, Mp, Up) dievaluasi menurut Topiwala et al. [36] dan hasilnya
disajikan pada Tabel 1.
Isi fenolik total sampel dicatat sebagai setara asam galat (GAE)
di? g / mg rumput laut kering. ekstraksi sebelumnya dari rumput laut dengan pelarut organik
diberikan AC
ekstrak (yang merupakan coklat berwarna lebih gelap) kandungan phenolic lebih tinggi dan
daya mengurangi dibandingkan dengan
ekstrak AR. The fucoidans murni dimiliki isi fenolik secara signifikan lebih rendah dari air
yang
ekstrak dengan Fv, pada 1? g / mg GAE, memiliki kandungan terendah (Tabel 1). Kandungan
fenol total adalah
diamati dalam urutan sebagai berikut: AC> AR> Mp> Up> Fv (dengan p <0,05).
Tabel 1. Jumlah konten polifenol dan mengurangi tenaga dari ekstrak air S. incisifolium, dan
fucoidans dari F. vesiculosus (Fv), M. pyrifera (Mp) dan U. pinnatifida (Up).
Ekstrak Jumlah polifenol Content (GAE di
? G / mg Dried Seaweed / Fucoidan) *
Total Mengurangi Daya (AAE, di? G / mg
Rumput Laut Kering / Fucoidan) *
AC 235? 0.013 95? 0,008
AR 150? 0.019 75? 0.003
Fv 1? 0,0007 10? 0,001
Mp 10? 0.007 15? 0,001
Naik 10? 0.048 15? 0.003
* P <0,05.
Total mengurangi daya sampel ini juga dinilai dan kecenderungan yang sama diamati. Di
dalam
assay, kekuatan mengurangi total sampel tergantung pada kemampuan antioksidan dalam
sampel untuk mengurangi Fe3 + (dan memberikan indikasi kemampuan sampel untuk
mengurangi Ag dan Au
garam untuk membentuk nanopartikel). Hasil yang diperoleh (Tabel 1) disajikan sebagai
setara asam askorbat
(AAE) di? G / mg rumput laut kering dan fucoidans murni. Ekstrak AC membual total lebih
tinggi mengurangi
konten daya (pada 95? g / mg AAE rumput laut kering) dibandingkan dengan sampel AR dan
fucoidans murni
(Tabel 1). The fucoidans murni menunjukkan nilai yang jauh lebih rendah, dengan nilai
terendah tercatat untuk
Fv fucoidan (pada 10? G / mg AAE). Urutan sebagai berikut diamati untuk total daya
mengurangi:
AC> AR> Mp> Up> Fv.
Tren yang diamati di atas bergema di tes pembersih radikal dilakukan. DPPH
Metode pembilasan tergantung pada pengurangan DPPH untuk bentuk yang lebih stabil
(DPPH-H) oleh
antioksidan [42]. Ekstrak AC sekali lagi dipamerkan kekuatan radikal yang lebih tinggi (60%
DPPH
pemulungan) dibandingkan dengan ekstrak AR (28% DPPH scavenging, Gambar 1). The%
radikal
kemampuan fucoidans itu lagi ditemukan rendah, dengan nilai terendah tercatat untuk
fucoidan Mp.
Urutan sebagai berikut diamati dengan kemampuan radikal pemulungan: AC> AR> Up> Fv>
Mp.
Molekul 2016, 21, 1633 4 dari 21
Isi fenolik total sampel dicatat sebagai setara asam galat (GAE) di ug / mg
dari rumput laut kering. ekstraksi sebelumnya dari rumput laut dengan pelarut organik
diberikan ekstrak AC (yang
adalah coklat gelap dalam warna) kandungan phenolic lebih tinggi dan daya mengurangi
dibandingkan dengan AR
ekstrak. The fucoidans murni dimiliki isi fenolik secara signifikan lebih rendah dari ekstrak air

Total mengurangi daya sampel ini juga dinilai dan kecenderungan yang sama diamati. Di
dalam
assay, kekuatan mengurangi total sampel tergantung pada kemampuan antioksidan dalam
sampel untuk mengurangi Fe3 + (dan memberikan indikasi kemampuan sampel untuk
mengurangi Ag dan Au
garam untuk membentuk nanopartikel). Hasil yang diperoleh (Tabel 1) disajikan sebagai
setara asam askorbat
(AAE) di? G / mg rumput laut kering dan fucoidans murni. Ekstrak AC membual total lebih
tinggi mengurangi
konten daya (pada 95? g / mg AAE rumput laut kering) dibandingkan dengan sampel AR dan
fucoidans murni
(Tabel 1). The fucoidans murni menunjukkan nilai yang jauh lebih rendah, dengan nilai
terendah tercatat untuk
Fv fucoidan (pada 10? G / mg AAE). Urutan sebagai berikut diamati untuk total daya
mengurangi:
AC> AR> Mp> Up> Fv.
Tren yang diamati di atas bergema di tes pembersih radikal dilakukan. DPPH
Metode pembilasan tergantung pada pengurangan DPPH untuk bentuk yang lebih stabil
(DPPH-H) oleh
antioksidan [42]. Ekstrak AC sekali lagi dipamerkan kekuatan radikal yang lebih tinggi (60%
DPPH
pemulungan) dibandingkan dengan ekstrak AR (28% DPPH scavenging, Gambar 1). The%
radikal
kemampuan fucoidans itu lagi ditemukan rendah, dengan nilai terendah tercatat untuk
fucoidan Mp.
Urutan sebagai berikut diamati dengan kemampuan radikal pemulungan: AC> AR> Up> Fv>
Mp.

Gambar 1. DPPH radikal daya scavenging dari S. ekstrak air incisifolium (AC dan AR),
dan fucoidans dari F. vesiculosus (Fv), M. pyrifera (Mp) dan U. pinnatifida (Up). * P <0,05.
AC: encer
ekstrak mengalami partisi pelarut organik. AR: ekstraksi air sederhana.
Sampel ekstrak air yang telah dipersiapkan akan berisi fucoidan kuantitatif kurang dari
sampel fucoidan komersial, dan data ini karena menunjukkan bahwa fucoidans merupakan
antioksidan yang buruk
dan itu kemungkinan besar phlorotannins (dalam ekstrak air) yang akan menjadi penting
dalam mengurangi
garam logam.
2.2. Sintesis dan Karakterisasi dari AgNPs dan AuNPs
2.2.1. Persiapan AgNPs Menggunakan Sodium borohidrida dan S. incisifolium encer Ekstrak
Sintesis AgNPs menggunakan natrium borohidrida (SB-AgNPs) digunakan sebagai reaksi
kontrol
karena biasanya dilaporkan dalam literatur dan digunakan sebagai perbandingan dengan
kemampuan fucoidans
dan ekstrak air untuk menghasilkan AgNPs. NP dibentuk dengan mudah dengan NaBH4
(Gambar S8) dan
ekstrak air (Gambar 2 dan 3), dengan UV / Vis penyerapan spektrum mengungkapkan
karakteristik SPR
band [17] untuk AgNPs di 397 nm dan ~ 425 nm untuk NaBH4 dan ekstrak air, masing-
masing.
 0
20
40
60
80
100
AC AR Fv Mp Up
DPPH Scavenging (%)
*
*
***
Gambar 1. DPPH radikal daya scavenging dari S. ekstrak air incisifolium (AC dan AR), dan
fucoidans dari F. vesiculosus (Fv), M. pyrifera (Mp) dan U. pinnatifida (Up). * P <0,05. AC:
encer
ekstrak mengalami partisi pelarut organik. AR: ekstraksi air sederhana.
Sampel ekstrak air yang telah dipersiapkan akan berisi fucoidan kuantitatif kurang dari
sampel fucoidan komersial, dan data ini karena menunjukkan bahwa fucoidans merupakan
antioksidan yang buruk
dan itu kemungkinan besar phlorotannins (dalam ekstrak air) yang akan menjadi penting
dalam mengurangi garam logam.
2.2. Sintesis dan Karakterisasi dari AgNPs dan AuNPs
2.2.1. Persiapan AgNPs Menggunakan Sodium borohidrida dan S. incisifolium encer Ekstrak
Sintesis AgNPs menggunakan natrium borohidrida (SB-AgNPs) digunakan sebagai reaksi
kontrol
karena biasanya dilaporkan dalam literatur dan digunakan sebagai perbandingan dengan
kemampuan fucoidans
dan ekstrak air untuk menghasilkan AgNPs. NP dibentuk dengan mudah dengan NaBH4
(Gambar S8) dan
ekstrak air (Gambar 2 dan 3), dengan UV / Vis penyerapan spektrum mengungkapkan
karakteristik SPR
band [17] Molekul 2016f, o 2r1, t h16e33A GNPs di 397 nm dan ~ 425 nm untuk NaBH4 dan
ekstrak air, respectiv5e olfy 2. 1

Figure 2. UV-Vis absorption spectra of (a) the AC-AgNPs and (b) the AR-AgNPs from time 0 to 18 h.
Inset: Photograph of the colour of the solution after 18 h (in water). AC: Aqueous extract subjected
to
organic solvent partitioning. AR: simple aqueous extraction.
Gambar 2. UV-Vis penyerapan spektrum (a) AC-AgNPs dan (b) AR-AgNPs dari waktu 0-18
jam.
Inset: Foto dari warna larutan setelah 18 jam (dalam air). AC: Ekstrak air mengalami
pelarut partisi organik. AR: ekstraksi air sederhana
Figure 3. Change in absorbance with time during AC-AgNP and AR-AgNP formation as observed
at the _max at 413 nm and 433 nm, respectively (in water). AC: Aqueous extract subjected to organic
solvent partitioning. AR: simple aqueous extraction.
Gambar 3. Perubahan absorbansi dengan waktu selama AC-AgNP dan pembentukan AR-
AgNP seperti yang diamati
di? max di 413 nm dan 433 nm, masing-masing (dalam air). AC: Ekstrak air mengalami
organik
partisi pelarut. AR: ekstraksi air sederhana.

Kebanyakan penelitian menggambarkan penggunaan ekstrak cair dari tanaman atau rumput
laut untuk mensintesis nanopartikel
tanpa menentukan konsentrasi ekstrak yang diperlukan untuk sintesis. Dalam studi ini, beku-
kering
ekstrak digunakan untuk mensintesis nanopartikel untuk membakukan prosedur. Sintesis
AgNPs menggunakan S. incisifolium ekstrak air (baik AC dan AR) ditemukan untuk
melanjutkan dengan mudah di
suhu kamar dan tekanan kondisi (yaitu, menggunakan energi metode yang aman dan
efisien). Konfirmasi
kehadiran AgNPs dalam larutan diperoleh dengan mengamati kehadiran band SPR
di kisaran 410-440 nm (Gambar 2) dalam spektrum UV-Vis. Menariknya, band SPR dari NP
diproduksi dengan ekstrak AR (di 433 nm) mengungkapkan pergeseran merah dari 20 nm
dibandingkan dengan yang dihasilkan
dengan ekstrak AC (di 413 nm). Pembentukan nanopartikel ditemukan terjadi dalam waktu
30 menit,
meskipun kecepatan reaksi muncul untuk memperlambat setelah 120 menit untuk kedua
ekstrak (Gambar 3).
Reaksi dibiarkan berlangsung untuk 18 jam lebih lanjut untuk memastikan penyelesaian
(yang dibuktikan dengan
dataran tinggi di penyerapan? max diamati pada Gambar 3).
2.2.2. Persiapan AgNPs Menggunakan Dijual Lagi Fucoidans
AgNPs disintesis dalam penelitian ini menggunakan fucoidans tersedia secara komersial dari
coklat
rumput laut yaitu. F. vesiculosus (Fv), M. pyrifera (Mp) dan U. pinnatifida (Up), untuk menilai
apakah
polisakarida dapat mengurangi garam Ag untuk membentuk NP (selain capping NP). UV-Vis
yang
spektrum yang diperoleh untuk NP ditunjukkan pada Gambar 4 dan Gambar S9. Seperti
ditunjukkan dalam spektrum, AgNP
Pembentukan tidak terjadi pada suhu kamar, menunjukkan bahwa fucoidans murni tidak
semata-mata
bertanggung jawab untuk pengurangan perak ion pada suhu kamar untuk membentuk
AgNPs. meningkatkan
suhu reaksi 100? C mengakibatkan pembentukan AgNPs sampai batas tertentu, dengan
reaksi
kali bervariasi dari 15 menit sampai 1 jam.
Molekul 2016, 21, 1633 6 dari 21
reaksi dibiarkan melanjutkan untuk 18 jam lebih lanjut untuk memastikan penyelesaian
(yang dibuktikan dengan dataran tinggi
di max penyerapan diamati pada Gambar 3).
2.2.2. Persiapan AgNPs Menggunakan Dijual Lagi Fucoidans
AgNPs disintesis dalam penelitian ini menggunakan fucoidans tersedia secara komersial dari
coklat
rumput laut yaitu. F. vesiculosus (Fv), M. pyrifera (Mp) dan U. pinnatifida (Up), untuk menilai
apakah
polisakarida dapat mengurangi garam Ag untuk membentuk NP (selain capping NP). UV-Vis
yang
spektrum yang diperoleh untuk NP ditunjukkan pada Gambar 4 dan Gambar S9. Seperti
ditunjukkan dalam spektrum, AgNP
Pembentukan tidak terjadi pada suhu kamar, menunjukkan bahwa fucoidans murni tidak
semata-mata
bertanggung jawab untuk pengurangan perak ion pada suhu kamar untuk membentuk
AgNPs. meningkatkan
suhu reaksi 100 C mengakibatkan pembentukan AgNPs sampai batas tertentu, dengan
reaksi
kali bervariasi dari 15 menit sampai 1 jam.
Gambar 4. UV-Vis penyerapan spektrum (dalam air) untuk Fv-AgNPs setelah 18 jam pada
suhu kamar (di
air), dan setelah 15 menit pada 100 C. Inset: Foto dari warna larutan setelah 15 menit
(dalam air).
The Fv fucoidans menunjukkan potensi terbesar untuk pembentukan AgNP dengan fucoidan
Up
paling sedikit. Namun demikian, hasil ini tidak menghalangi fucoidans dari bertindak agen
capping baik,
memastikan biokompatibilitas NP diproduksi. Dengan demikian jelas bahwa fucoidans hanya
bisa
menghasilkan NP pada temperatur tinggi, sedangkan ekstrak air S. incisifolium bisa
menghasilkan
NP mudah. Oleh karena itu jelas bahwa metabolit sekunder lainnya (seperti phlorotannins
yang memiliki
juga telah diisolasi dari ganggang coklat) bertanggung jawab untuk mengurangi ion Ag untuk
membentuk NP. Itu
Hasil yang diperoleh dari total isi fenolik untuk masing-masing ekstrak air pasti menunjuk ke
kemungkinan keterlibatan phlorotannins. Hal ini juga kemungkinan bahwa peningkatan suhu
mungkin memecah fucoidans menjadi gula yang dapat mengurangi garam logam untuk
menghasilkan AgNPs.
2.2.3. Persiapan AuNPs Menggunakan Natrium Sitrat dan S. incisifolium encer Ekstrak
Emas nanopartikel (AuNPs) juga disintesis dalam penelitian ini sebagai SPR merah muda
karakteristik
 band AuNPs (di ~ 530 nm) jauh lebih mudah untuk memvisualisasikan dari band AgNP SPR.
AuNPs ini juga
digunakan sebagai kontrol dalam penelitian antimikroba karena AuNPs tidak diharapkan
memiliki antimikroba
sifat, tidak seperti AgNPs. Selanjutnya, NP ini juga cenderung menunjukkan apakah NP yang
beracun untuk baris sel yang normal yaitu, mereka mungkin memberikan beberapa indikasi
keamanan dan kemanjuran dari NP ini
untuk digunakan pada manusia.
Sintesis natrium sitrat capped AuNPs (berlabel SC-AuNPs) telah dicapai dengan
menggunakan

Figure 4. UV-Vis absorption spectra (in water) for the Fv-AgNPs after 18 h at room temperature
(in water), and after 15 min at 100 _C. Inset: Photograph of the colour of the solution after 15 min
(in water).
Gambar 4. UV-Vis penyerapan spektrum (dalam air) untuk Fv-AgNPs setelah 18 jam pada
suhu kamar
(Dalam air), dan setelah 15 menit pada 100? C. Inset: Foto dari warna larutan setelah 15
menit
(Dalam air)

The Fv fucoidans menunjukkan potensi terbesar untuk pembentukan AgNP dengan fucoidan
Up
paling sedikit. Namun demikian, hasil ini tidak menghalangi fucoidans dari bertindak agen
capping baik,
memastikan biokompatibilitas NP diproduksi. Dengan demikian jelas bahwa fucoidans hanya
bisa
menghasilkan NP pada temperatur tinggi, sedangkan ekstrak air S. incisifolium bisa
menghasilkan
NP mudah. Oleh karena itu jelas bahwa metabolit sekunder lainnya (seperti phlorotannins
yang memiliki
juga telah diisolasi dari ganggang coklat) bertanggung jawab untuk mengurangi ion Ag untuk
membentuk NP. Itu
Hasil yang diperoleh dari total isi fenolik untuk masing-masing ekstrak air pasti menunjuk ke
kemungkinan keterlibatan phlorotannins. Hal ini juga kemungkinan bahwa peningkatan suhu
mungkin memecah fucoidans menjadi gula yang dapat mengurangi garam logam untuk
menghasilkan AgNPs.
2.2.3. Persiapan AuNPs Menggunakan Natrium Sitrat dan S. incisifolium encer Ekstrak
Emas nanopartikel (AuNPs) juga disintesis dalam penelitian ini sebagai SPR merah muda
karakteristik
band AuNPs (di ~ 530 nm) jauh lebih mudah untuk memvisualisasikan dari band AgNP SPR.
AuNPs ini juga
digunakan sebagai kontrol dalam penelitian antimikroba karena AuNPs tidak diharapkan
memiliki antimikroba
sifat, tidak seperti AgNPs. Selanjutnya, NP ini juga cenderung menunjukkan apakah NP
 beracun
untuk baris sel yang normal yaitu, mereka mungkin memberikan beberapa indikasi
keamanan dan kemanjuran dari NP ini untuk digunakan
pada manusia.
Sintesis natrium sitrat capped AuNPs (berlabel SC-AuNPs) telah dicapai dengan
menggunakan
metode literatur mapan [43]. NP diproduksi menggunakan sodium sitrat hanya berhasil
disintesis pada suhu yang lebih tinggi (yaitu, 90? C), dengan pembentukan nanopartikel jelas
setelah
5 menit (Gambar S10).
Demikian pula, AuNPs juga disintesis menggunakan ekstrak AC dan AR (Gambar 5). Formasi
dari AuNPs mudah diamati oleh perubahan warna larutan dari kuning ke ungu gelap
M (inolseceutleFs i2g0u16r, e 251,) 0,1633

AC-Aunp
Gambar 5. UV-Vis spektrum penyerapan (a) AC-AuNPs dan (b) AR-AuNPs dibentuk setelah 5
jam pada ruang
suhu (dalam air). Inset: Foto dari warna larutan setelah 5 jam. Ekstrak air: AC
mengalami partisi pelarut organik. AR: ekstraksi air sederhana.
Menariknya, perbedaan dalam laju reaksi diamati untuk ekstrak, dengan formasi NP
muncul untuk memperlambat setelah 50 menit untuk ekstrak AC, dan setelah 95 menit
dengan ekstrak AR (Gambar 6).
Tingkat pembentukan NP karena itu lebih lambat untuk ekstrak AR, dan perbedaan ini
mungkin sekali lagi menjadi
dikaitkan dengan perbedaan dalam konten polifenol, mengurangi daya dan potensi
antioksidan dari
dua ekstrak air.

Figure 6. Change in absorbance with time during the syntheses of both the AC-AuNPs and AR-AuNPs at
the max 545 and 544 nm respectively (in water). AC: Aqueous extract subjected to organic solvent
partitioning. AR: simple aqueous extraction.
Gambar 6. Perubahan absorbansi dengan waktu selama sintesis dari kedua AC-AuNPs dan
AR-AuNPs di
yang max 545 dan 544 nm (dalam air). AC: Ekstrak air mengalami pelarut organik
partisi. AR: ekstraksi air sederhana.

Sebuah usaha untuk menghasilkan AuNPs dengan fucoidans komersial tidak berhasil di
kedua kamar
dan temperatur tinggi (Gambar S11). Dengan demikian jelas bahwa fucoidans tidak berperan
dalam
pengurangan ion logam untuk membentuk NP. Hasil ini kontras dengan hasil yang diperoleh
oleh
Soisuwan et al. [44] yang bisa mensintesis AuNPs menggunakan fucoidans murni dari
rumput laut coklat
Cladosiphon okamuranus dan Kjellmaniella crassifolia pada suhu kamar serta pada 80? C.
Yang terakhir
dapat dikaitkan dengan fakta bahwa Kjellmaniella crassifolia adalah spesies yang sangat
berbeda dari ganggang coklat
dibandingkan dengan S. incisifolium digunakan dalam penelitian ini, meskipun polisakarida
sulfat juga telah
diisolasi dari rumput laut ini [45]. Namun, ini akan tergantung pada kemurnian sampel
fucoidan
dan apakah mereka mengandung kotoran polifenol.
2.3. Karakterisasi Sintesis Nanopartikel
2.3.1. Transmisi Electron Microscopy (TEM) dan Energi dispersif X-ray (EDX) Analisis
Hasil TEM diperoleh untuk Ag dan Au NP disintesis ditunjukkan pada Gambar 7 dan 8
(Dan Gambar S12 dan S14). The AgNPs sebagian besar bola yang baik tersebar dan memiliki
ukuran rata-rata
dari 20 nm (Tabel 2), meskipun berbagai ukuran besar diperoleh untuk AgNPs diproduksi
dengan NaBH4
(Gambar S11). Gambar TEM untuk NP disintesis menggunakan AC dan ekstrak AR (Gambar 7)
menunjukkan
ukuran seragam kisaran untuk AR-AgNPs, meskipun NP tidak serta tersebar sebagai yang
diperoleh
dengan AC ekstrak (Gambar 7a). The Fv dan Mp fucoidans diproduksi NP yang bulat dan
juga tersebar, namun, berbagai ukuran besar diperoleh. The Fv-AgNPs ditemukan untuk
menjadi yang terkecil
8,7 nm (Gambar 7c). Jika struktur fucoidan sangat bercabang, mereka berpikir untuk
mengikat beberapa
NP secara bersamaan, terutama jika ada sulfonasi kelompok fungsional pada rantai samping
yang dihasilkan
di lebih besar, NP agglomerated [44]. Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, fucoidans
dari S. incisifolium belum
ditandai dan strukturnya tetap tidak diketahui.
Berbentuk sebuah bola berbentuk AuNPs dengan ukuran rata-rata 12,38 nm (Tabel 3)
seperti yang diungkapkan oleh TEM yang
diperoleh untuk NP natrium sitrat capped (Gambar S13). Gambar TEM diperoleh untuk NP
diproduksi dengan ekstrak air, mengungkapkan NP baik tersebar dengan berbagai bentuk,
termasuk
segitiga, bola dan segi enam yang diperoleh untuk AR-AuNPs yang ditemukan jauh lebih
besar
dalam ukuran (sampai 200 nm, Gambar 8b). Gambar untuk NP AC terungkap hanya NP bola
yang
rata-rata 5 nm dalam ukuran (Gambar 8a). Menariknya, laju pembentukan NP lebih cepat
dengan ekstrak AC,
dan lebih kecil, NP monodisperse diproduksi dibandingkan dengan NP diproduksi dengan
ekstrak AR.
Figure 7. TEM images and NP size distributions obtained for (a) AC-AgNPs; (b) AR-AgNPs
and (c) Fv-AgNPs. AC: Aqueous extract subjected to organic solvent partitioning. AR: simple
aqueous extraction.
Table 2. Ag NP data obtained including mean AuNP sizes as determined by TEM, XRD and DLS,
as well as Zeta potential measurements and supernatant metal salt percentages.

Gambar 7. gambar TEM dan NP distribusi ukuran diperoleh untuk (a) AC-AgNPs; (B) AR-
AgNPs
dan (c) Fv-AgNPs. AC: Ekstrak air mengalami partisi pelarut organik. AR: simple
ekstraksi air.
Tabel 2. Data Ag NP diperoleh termasuk rata-rata ukuran Aunp sebagaimana ditentukan oleh
TEM, XRD dan DLS,
serta potensi pengukuran Zeta dan persentase supernatan garam logam.
Ukuran Sampel TEM (nm) Ukuran XRD
(Nm)
DLS Ukuran (nm) Potensi Zeta
(MV) $
% Logam
Garam #
Berarti Ukuran Rentang dH PDI
SB-AgNP 13.90? 9,56 2,04-29,72 25,71 83,65 0.320 26.4? 17,8 0,02
AC-AgNP 22.44? 11,85 6.67-53.08 7,29 82,56 0,264 35.0? 4,95 38,2
AR-AgNP 22,94? 8.41 3,36-50,99 9,54 76,29 0.568 40.0? 7.62 31.3
Mp-AgNP 20,03? 10,97 1.65-46.31 15,28 316,3 0,515 32.9? 3,95 32,1
Fv-AgNP 8.69? 3,85 2,35-20,44 - * 126.6 0.326 44.1? 11,0 38,8
* Jumlah sampel yang diperoleh terlalu kecil untuk XRD analisis; $ Data dalam rangkap tiga?
deviasi standar;
# Di supernatan.

ekstrak air mengalami partisi pelarut organik. AR: ekstraksi air sederhana.
Tabel 2. Data Ag NP diperoleh termasuk rata-rata ukuran Aunp sebagaimana ditentukan oleh
TEM, XRD dan DLS, sebagai
serta potensi pengukuran Zeta dan supernatan persentase garam logam.
Mencicipi
TEM Ukuran (nm) Ukuran XRD
(Nm)
DLS Ukuran (nm) Potensi Zeta
(MV) $
% Logam
Berarti Ukuran Rentang dH PDI Salt #
SB-AgNP 13.90 9.56 2,04-29,72 25,71 83,65 0.320 -26,4 17,8 0,02
AC-AgNP 22,44 11,85 6.67-53.08 7,29 82,56 0,264 -35,0 4,95 38,2
AR-AgNP 22,94 8,41 3,36-50,99 9,54 76,29 0,568 -40,0 7,62 31,3
Mp-AgNP 20,03 10,97 1.65-46.31 15,28 316,3 0,515 -32,9 3,95 32,1
Fv-AgNP 8.69 3.85 2,35-20,44 - * 126.6 0,326 -44,1 11,0 38,8
* Jumlah sampel yang diperoleh terlalu kecil untuk XRD analisis; $ Data dalam rangkap tiga
standar deviasi;
# Di supernatan.
0 5 10 15 20 25 Lebih
distribusi ukuran (nm)
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 5 10 15 20 Lebih
Frekuensi
distribusi ukuran (nm)
0
1
2
3
4
5
6
7
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
220
240
260
Lebih
Frekuensi
distribusi ukuran (nm)
50 nm
200 nm
Gambar 8. gambar TEM dan distribusi ukuran NP diperoleh untuk (a) AC-AuNPs dan (b) AR-
AuNPs.
AC: Ekstrak air mengalami partisi pelarut organik. AR: ekstraksi air sederhana.
Tabel 3. Aunp data yang diperoleh termasuk rata-rata ukuran Aunp sebagaimana ditentukan
oleh TEM, XRD dan DLS, sebagai
serta potensi pengukuran Zeta dan supernatan persentase garam logam.
Ukuran Sampel TEM (nm) Ukuran XRD
(Nm)
DLS Ukuran (nm) Potensi Zeta
(MV) $
% Logam
Garam #
Berarti Ukuran Rentang dH PDI
SC-Aunp 12,38? 0,94 3.00-21.38 10,96 37,46 0,158 56.3? 13,9 0,12
AC-Aunp 5.35? 3,13 2.17-16.38 22,39 89,62 0,551 39.3? 13,5 14,0
AR-Aunp 66,13? 58,30 7.91-268.67 40,12 92,85 0,512 39.3? 14,8 13,6
$ Data dalam rangkap tiga? deviasi standar; # Di supernatan.
analisis unsur dari nanopartikel dicapai dengan menggunakan Energi dispersif X-ray (EDX)
Spektroskopi, yang kemudian diakuisisi dengan gambar TEM. Elemental Ag dan Au yang
terdeteksi dalam semua sampel seperti yang diharapkan (Angka S13 dan S15).

2.3.2. Karakterisasi Sintesis Nanopartikel Menggunakan Dynamic Light Hamburan (DLS) dan
Zeta Potensi Pengukuran
Menggunakan Zetasizer, ukuran nanopartikel juga ditentukan dengan menggunakan DLS dan
data
mengakuisisi diberikan dalam Tabel 2 dan 3. Ukuran dari NP yang ditentukan oleh TEM jauh
lebih kecil
dibandingkan dengan pengukuran DLS, yang diharapkan sebagai DLS mengukur
hidrodinamik (dH)
radius nanopartikel tersuspensi dalam air bersama dengan bahan pelapis pada permukaan
nanopartikel [46,47]. Perbedaan ukuran untuk data TEM dan DLS karena itu dapat
diasumsikan
disebabkan oleh agen hadir capping pada permukaan NP, yaitu, fucoidans dan / atau
phlorotannins
diperkirakan akan hadir dalam ekstrak.

The polidispersitas Indeks (PDI) dari NP juga dapat ditentukan dengan menggunakan
Zetasizer dan
Data yang tercantum dalam Tabel 2 dan 3. Indeks A PDI kurang dari 0,1 mewakili NP
monodispersed, sementara
indeks antara 0,1? 0,2 menunjukkan distribusi ukuran yang sempit, sementara indeks antara
0,2? 0,5
menunjukkan distribusi ukuran luas untuk sampel [48]. Dari hasil yang diperoleh, NP semua
menunjukkan
distribusi ukuran luas, karena indeks PDI berkisar 0,264-0,568, kecuali untuk SC-AuNPs yang
memiliki distribusi ukuran yang sempit (0,158), seperti yang ditunjukkan oleh data TEM.
Zeta potensial pengukuran diperoleh untuk NP yang tercantum dalam Tabel 2 dan 3 untuk
kedua
yang AgNPs dan AuNPs. Dari data tersebut, NP semua memiliki potensi muatan permukaan
negatif
diharapkan diberikan struktur fucoidans. AR-AgNPs dimiliki muatan negatif terbesar
(Di 40.0 mV) untuk sampel disintesis menggunakan ekstrak air, sedangkan NP disintesis
menggunakan
yang fucoidans menunjukkan bahwa sampel Fv-AgNP dipamerkan muatan negatif terbesar
di 44.1 mV.
The AuNPs natrium sitrat tertutup, namun, ditampilkan muatan negatif terbesar dari semua,
menyiratkan
bahwa NP ini adalah yang paling stabil [49], sedangkan AgNP disintesis menggunakan NaBH4
memiliki terendah
potensi negatif (Tabel 2 dan 3). Semua nanopartikel disintesis dipamerkan potensi zeta
dalam
kisaran cut-off, yaitu, NP dengan nilai-nilai potensial zeta lebih besar dari 30 mV atau kurang
dari 30 mV adalah
terkait dengan stabilitas yang melekat [49].
2.3.3. Karakterisasi Sintesis Nanopartikel Menggunakan induktif Ditambah Plasma-Atomic
Emisi Spektroskopi (ICP-AES)
ICP-AES digunakan untuk menentukan tingkat penyelesaian reaksi di pembentukan NP. Itu
Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2 dan 3. Sampel sasaran sentrifugasi dan konsentrasi
ion logam (dalam ppm) yang tersisa di supernatan diambil sebagai indikasi dari jumlah
garam logam yang tidak bereaksi.
Persentase ion Ag dalam supernatan dari larutan reaksi AgNPs ditemukan
menjadi 30% -39%, dengan Fv-AgNPs dan AC-AgNPs mengandung persentase tertinggi
(Tabel 2), menunjukkan
bahwa reaksi itu masih belum selesai setelah 18 jam untuk AgNPs disintesis dengan ekstrak
AC di
suhu kamar dan setelah 15 menit untuk Fv-AgNPs pada 100? C. Sintesis dari AuNPs di sisi lain
lebih sukses dengan hanya 14% kandungan logam hadir dalam supernatan (Tabel 3).
2.3.4. Karakterisasi Sintesis Nanopartikel Menggunakan Powder X-ray Diffraction (XRD)
NP yang disintesis dikarakterisasi menggunakan bedak XRD dan pola diperlihatkan
Gambar 9. Refleksi XRD diperoleh untuk AgNPs (Gambar 9a) diamati pada 2? = 38,1 ?, 44,2 ?,
64,3?
dan 77,6? dapat dikaitkan dengan (111), (200), (220), dan (311) pesawat kristal dari wajah
berpusat kubik
(Fcc) struktur kristal logam perak, masing-masing (sesuai JCPDS mengajukan ada. 00-004-
0783). spektrum
mengungkapkan bahwa AgNPs bukan satu-satunya komponen hadir sejak refleksi tambahan
dapat dilihat,
terutama pada Gambar 9a (iv), pada 2? = 46 ?, 55 ?, 57,5 ?, 67,7? dan 77,5? yang mungkin
dikaitkan dengan
Kehadiran bereaksi AgCl masih hadir dalam sampel Mp-AgNP. Hal ini kemudian dikonfirmasi
menggunakan
ICP-AES analisis (Tabel 2). Hal ini juga jelas bahwa pembentukan Fv-AgNP (Gambar 9a (v))
tidak berhasil,
meskipun UV-Vis spektrum mengungkapkan band SPR dan NP yang diamati pada gambar
TEM.
The AuNPs disintesis juga ditandai dengan bubuk XRD dan ditunjukkan pada Gambar 9b. Itu
pola diperoleh untuk AuNPs mengungkapkan refleksi yang luas, yang mengindikasikan
keberadaan NP. jelas
refleksi tersirat bahwa sintesis dari NP ini lebih sukses dari itu untuk AgNPs.
Tersebut diindeks ke 2? = 38,2 ?, 44,4 ?, 64,6 ?, 77,6? dan 81,7? dan dikaitkan dengan (111),
(200), (220),
(311) dan (222) pesawat kristal dari (fcc) struktur kristal face-centered-kubik emas metalik
(seperti
per JCPDS mengajukan ada. 00-004-0784), masing-masing.

Dari pola XRD ini yang (111) aspek mendominasi pola XRD nanopartikel disintesis.
Bila memungkinkan, puncak ini digunakan untuk menghitung baik ukuran Ag dan Au-NP
menggunakan
persamaan Debye-Scherrer (Persamaan (1)). Hasil yang diperoleh tercantum dalam Tabel 2
dan 3 dan itu menjadi
jelas bahwa ukuran XRD tidak berkorelasi dengan baik dengan ukuran diperoleh dengan
menggunakan TEM. Ini mungkin ICP-AES analisis (Tabel 2). Hal ini juga jelas bahwa
pembentukan Fv-AgNP (Gambar 9a (v)) tidak berhasil,
meskipun UV-Vis spektrum mengungkapkan band SPR dan NP yang diamati pada gambar
TEM Gambar 9. Pola XRD diperoleh untuk (a) AgNPs disintesis menggunakan (i) natrium
borohidrida; (Ii) AC
ekstrak; (Iii) ekstrak AR; (Iv) Mp fucoidan dan (v) fucoidans Fv; dan (b) AuNPs disintesis
menggunakan
(I) natrium sitrat; (Ii) ekstrak AC dan (iii) ekstrak AR. AC: Ekstrak air mengalami organik
partisi pelarut. AR: ekstraksi air sederhana.
2.4. Antimikroba dan sitotoksisitas Studi
2.4.1. antimikroba Tes
Aktivitas antimikroba dari sampel ini dinilai panel menular
mikroorganisme berdasarkan tes yang difusi. Hasilnya ditunjukkan pada Gambar 10 dan
Tabel S2.
Hasil menunjukkan bahwa ekstrak kasar berair S. incisifolium (AC dan AR), serta Fv
dan Mp fucoidans saja, menunjukkan aktivitas diabaikan terhadap panel mikroorganisme.
Demikian pula,
NP disintesis menggunakan natrium borohidrida (SB-AgNP) serta semua AuNPs disintesis
juga mengungkapkan
aktivitas antimikroba diabaikan (Tabel S2, Gambar 10). Kegiatan yang paling ampuh
dipamerkan oleh
AgNPs disintesis menggunakan ekstrak air S. incisifolium (yaitu, AC-AgNPs dan AR-AgNPs),
menunjukkan aktivitas yang lebih besar daripada antibiotik ampicillin dan vankomisin
terhadap strain diuji.
Penting untuk dicatat bahwa strain dipilih adalah strain yang resisten antibiotik.
Penghambatan terbesar tercatat untuk strain ragi, diikuti oleh bakteri Gram-negatif
dan akhirnya bakteri Gram-positif dalam agar assay baik-difusi. Sebuah survei dari literatur
menunjukkan bahwa bakteri Gram-positif yang paling rentan terhadap NP pada umumnya.
Liu et al. [50] dievaluasi
natrium sitrat capped AgNPs terhadap E. coli (Gram negatif) dan B. subtilis (bakteri Gram-
positif)
dan menunjukkan bahwa penghambatan pertumbuhan terbesar adalah untuk bakteri Gram-
positif. Dalam terpisah
studi, Mittal et al. [51] menggunakan ekstrak tanaman dari fulgens Potentilla untuk
mensintesis AgNPs untuk mengevaluasi mereka
aktivitas antimikroba, menunjukkan aktivitas yang lebih besar terhadap bakteri gram positif
[51]. Perbedaan
di tingkat toksisitas AgNP terhadap bakteri Gram-positif dan Gram-negatif kemungkinan
berasal dari
dinding sel bakteri ini komposisi struktural. Dinding sel bakteri Gram-positif terdiri dari
peptidoglikan tebal lapisan, asam techoic, protein fungsional dan bilayer tunggal yang
dibungkus
lipid, sedangkan dinding sel bakteri gram negatif terdiri dari lapisan peptidoglikan tipis
tertanam
dalam waktu dua bilayers lipid dan lipopolisakarida (LPS). LPS memainkan peran utama
dalam melindungi
bakteri Gram-negatif [52]. Seperti, bakteri Gram-negatif seperti cenderung lebih tahan
terhadap
nanopartikel dari bakteri Gram-positif [50].
Anehnya, berair ekstrak sendiri saja tidak menunjukkan aktivitas apapun. Fucoidans memiliki
ditunjukkan sebelumnya aktivitas antikoagulan [31]. Dalam penelitian ini, fucoidans Fv
menunjukkan beberapa aktivitas
(2,8 mm) terhadap A. baumannii saja, menunjukkan bahwa fucoidan ini juga mungkin
memiliki aktivitas bakterisidal
(Tabel S2). Sementara fucoidan Mp itu sendiri tidak menunjukkan aktivitas apapun terhadap
mikroba yang dipilih,
sampel Mp-AgNP memang menunjukkan beberapa aktivitas terhadap strain uji (Tabel S2,
Gambar 10). Kurangnya
aktivitas diamati dapat juga berasal kemungkinan bahwa baik bakteri dapat menggunakan
mekanisme resistensi antimikroba yang menghasilkan resistensi terhadap berbagai
persiapan yang digunakan dalam hal ini
sMtuoldecyuleosr 20th16a, t21th, 1e6r3e3 adalah beberapa aktivitas sinergis antara NP dan
ekstrak rumput laut dan fuco1id2 aofn 2S1.

Gambar 10. Aktivitas antimikroba (baik-difusi assay) terhadap panel mikroorganisme (Ab =
A. baumannii, Kp = K. pneumoniae, Ef = E. faicalis, Sa = S. aureus, Ca = C. albicans) untuk (a)
disintesis
nanopartikel dan (b) ekstrak air (AC dan AR), fucoidans (Fv dan Mp), dan kontrol:
Vankomisin (Van), Ampisilin (Amp), Kloramfenikol (CHI) dan air (H2O). konsentrasi NP
digunakan: ~ 0,2 mM. [Van], [Amp] dan [chi]: 1 mg / mL. AC: Ekstrak air mengalami pelarut
organik
partisi. AR: ekstraksi air sederhana.
Penghambatan terbesar tercatat untuk strain ragi, diikuti oleh bakteri Gram-negatif
dan akhirnya bakteri Gram-positif dalam agar assay baik-difusi. Sebuah survei dari literatur
menunjukkan bahwa bakteri Gram-positif yang paling rentan terhadap NP pada umumnya.
Liu et al. [50]
dievaluasi natrium sitrat capped AgNPs terhadap E. coli (Gram negatif) dan B. subtilis (Gram-
positif
bakteri) dan menunjukkan bahwa penghambatan pertumbuhan terbesar adalah untuk
bakteri Gram-positif. Di sebuah
Penelitian terpisah, Mittal et al. [51] menggunakan ekstrak tanaman dari Potentilla fulgens
untuk mensintesis AgNPs ke
mengevaluasi aktivitas antimikroba mereka, menunjukkan aktivitas yang lebih besar
terhadap bakteri gram positif [51].
Perbedaan tingkat toksisitas AgNP terhadap bakteri Gram-positif dan Gram-negatif adalah
mungkin berasal dari dinding sel komposisi struktur bakteri ini. Dinding sel Gram-positif
bakteri terdiri dari lapisan tebal peptidoglikan, asam techoic, protein fungsional dan bilayer
tunggal
yang dibungkus lipid, sedangkan dinding sel bakteri gram negatif terdiri dari tipis
lapisan peptidoglikan tertanam dalam dua bilayers lipid dan lipopolisakarida (LPS). Drama
LPS
peran utama dalam melindungi bakteri Gram-negatif [52]. Dengan demikian, bakteri Gram-
negatif yang mungkin
untuk lebih tahan terhadap nanopartikel dari bakteri Gram-positif [50].
Anehnya, berair ekstrak sendiri saja tidak menunjukkan aktivitas apapun. Fucoidans memiliki
ditunjukkan sebelumnya aktivitas antikoagulan [31]. Dalam penelitian ini, fucoidans Fv
menunjukkan beberapa aktivitas terhadap MCF-7,

persentase kelangsungan hidup NP ini ditemukan di atas 40% (Gambar S16b). AuNPs juga
dinilai untuk sitotoksisitas mereka terhadap garis sel MCF-7. AR dan AC-AuNPs ditampilkan
40%
aktivitas terhadap garis sel MCF-7 (pada 4,17 mM, Gambar 11b) dan hubungan respon dosis
itu
lagi diamati. SC-AuNPs, ekstrak air dan agen capping sendiri tidak menunjukkan sitotoksik
aktivitas terhadap garis sel MCF-7 (Gambar S16b).
Gambar 11. Persentase viabilitas sel untuk MCF-7, HT-29 dan MCF-12a baris sel setelah 24
jam dengan
(A) AgNPs dan (b) AuNPs. AC: Ekstrak air mengalami partisi pelarut organik. AR:
ekstraksi air sederhana.
Toksisitas NP juga dievaluasi terhadap sel kanker usus besar manusia (HT-29). Itu
AgNPs disintesis menggunakan ekstrak air muncul untuk mengerahkan beberapa toksisitas
terhadap HT-29 sel
Sejalan dengan persentase viabilitas sel di bawah 10% (5,29 mM dan 1,76 mM, Gambar 11a).
Itu
fucoidan NP disintesis tampaknya kurang beracun terhadap garis sel HT-29 dengan
persentase mereka
kelangsungan hidup di hanya di atas 40% (Gambar 11a). Sebuah hubungan respon dosis
diamati untuk HT-29
garis sel, sedangkan SB-AgNPs ditemukan menunjukkan hanya toksisitas sedikit terhadap
garis sel HT-29
(Gambar S17b). Sebagai perbandingan, ekstrak air dan fucoidans saja dievaluasi karena
adanya
aktivitas terhadap garis HT-29cell (Gambar S17a), dan hanya fucoidan Fv tampaknya menjadi
racun terhadap
garis sel HT-29 (viabilitas bawah 40%). Seperti dengan garis MCF-7 sel, sitotoksisitas dari
AuNPs
terhadap HT-29 garis sel (Gambar 11b) dievaluasi dan ar dan AC-AuNPs menunjukkan
sebanding
sitotoksisitas (~ 40%) pada konsentrasi tertinggi (4,17 mM). Akhirnya, untuk mengevaluasi
selektivitas
NP disintesis untuk sel-sel kanker, garis sel payudara non-kanker, MCF-12a, digunakan
(Gambar 11).
Seperti dengan garis sel kanker, hubungan respon dosis juga diamati ketika NP diuji
terhadap MCF-12a. Meskipun beberapa sampel ditemukan menunjukkan beberapa
toksisitas terhadap MCF-12a, yang
tingkat toksisitas semua NP diuji terhadap MCF-12a jauh lebih rendah dibandingkan dengan
MCF-7 dan HT-29 jalur sel. Hasil pada Gambar 11 menunjukkan bahwa pada 5,29 mM, Mp-
AgNPs dan AC-AgNPs menunjukkan
beberapa aktivitas terhadap MCF-12a, dengan persentase viabilitas hanya di bawah 40%,
sedangkan AR-AgNP dan
sampel Fv-AgNP diikuti dengan viabilitas persentase di hanya di atas 40% (5,29 mM). berair
ekstrak dan fucoidans sendiri juga diuji, di mana fucoidan Fv dan ekstrak AR menunjukkan
persentase viabilitas dari ~ 40% di mana semua sampel lain menunjukkan viabilitas
persentase minimal 60%
(Gambar S18). Hasil yang diperoleh untuk garis sel MCF-12a menunjukkan bahwa hanya AR-
AuNPs menunjukkan
beberapa (rendah) aktivitas terhadap MCF-12a pada konsentrasi tertinggi (Gambar 11),
sedangkan AC-Aunp lakukan
tidak menunjukkan aktivitas apapun. Oleh karena itu hasil awal menunjukkan bahwa hijau
ini disintesis NP
menunjukkan beberapa selektivitas untuk jalur sel kanker.
Gambar 11 membandingkan selektivitas AgNPs untuk jalur sel diuji. Tampak bahwa
MCF-7 sel kanker lebih rentan terhadap AgNPs dari garis sel non-kanker (MCF-12a)
yang tampaknya agak tahan terhadap AgNPs (Gambar 11). Garis sel tiga, HT-29
garis sel tampaknya menjadi yang paling rentan terhadap AC-AgNPs dan AR-AgNPs. Namun,
usus besar
baris sel adenokarsinoma tampaknya kurang responsif terhadap Mp-AgNPs dan Fv-AgNPs
sampel,
tidak seperti garis sel MCF-7. Hasil yang diperoleh dari penelitian yang dilakukan pada sel
non-kanker
line, MCF-12a, menunjukkan bahwa AgNPs menampilkan sitotoksisitas selektif, karena
AgNPs disintesis menggunakan
ekstrak air S. incisifolium beracun terhadap sel MCF-7, tapi kurang begitu terhadap non-
kanker
garis sel, MCF-12a.
Ada beberapa mekanisme melalui mana AgNPs dapat membunuh sel-sel kanker dengan satu
mekanisme
melibatkan induksi stres oksidatif [15,54]. Ukuran, bentuk dan potensi zeta AgNPs yang
juga dikenal untuk memperoleh kematian sel melalui peningkatan spesies oksigen reaktif
(ROS) [54].
Meskipun sampel antimikroba yang paling aktif, yaitu, AC-AgNPs dan AR-AgNPs, juga
menunjukkan sitotoksisitas paling ampuh melawan sel-sel kanker yang diteliti, konsentrasi
yang digunakan dalam
Studi sitotoksisitas yang jauh lebih tinggi daripada yang digunakan untuk tes aktivitas
antimikroba. NP ini
karenanya tidak diharapkan untuk menjadi sangat beracun untuk manusia pada konsentrasi
yang lebih rendah digunakan untuk
tes antimikroba.

Bahan dan metode

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini termasuk natrium borohidrida, natrium sitrat,
emas (III) klorida
tryhidrate, perak nitrat, yang fucoidans dari Fucus vesiculosus (Fv), Undaria pinnatifida (Up)
dan
Macrocystis pyrifera (Mp) rumput laut, Vancomycin (Van), Ampisilin (Amp), Kloramfenikol
(CHI)
yang dibeli dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA) dan digunakan tanpa pemurnian lebih
lanjut. Semua
pelarut yang diredistilasi sebelum digunakan. Milli-Q air (15,0 mW? Cm1, Millipore Merck
KGaA, Billerica,
MA, USA) digunakan dalam semua reaksi, termasuk prosedur ekstraksi. S. incisifolium
dikumpulkan
dari Noordhoek, dekat Port Elizabeth di pantai selatan-timur Afrika Selatan dan tersimpan
beku (20? C)
sampai digunakan.
Lima obat strain resisten dipilih untuk studi antimikroba. ini termasuk
dua strain gram positif, Enterococcus faecalis (ATCC 51299; strain resisten vankomisin) dan
Staphylococcus aureus subsp. aureus (ATCC 33591, sebuah methicillin-resistant strain), dua
gram-negatif
strain, Acinetobacter baumanii (ATCC BAA-1605; amulti-obat strain resisten) dan Klebsiella
pneumoniae
subsp. pneumoniae (ATCC 700.603, sebuah -lactam strain resisten), dan strain ragi, Candida
albicans (ATCC
24.433). Untuk cukup menilai potensi nanopartikel disintesis sebagai antimikroba, itu
penting untuk juga menilai sitotoksisitas mereka terhadap berbagai manusia (kanker dan
non-kanker)
 baris sel. nanopartikel yang disintesis dievaluasi terhadap sel adenocarcinoma kolon
manusia
line (HT-29), payudara garis sel karsinoma manusia (MCF-7) dan payudara epitel non-
tumorigenic sel
line (MCF-12a).

3.1. Sintesis dari Silver Nanopartikel (AgNPs)

3.1.1. AgNPs Sintesis Menggunakan NaBH4 (SB-AgNP)
Metode yang digunakan untuk sintesis tradisional AgNP menggunakan NaBH4 didasarkan
pada metode
dikembangkan oleh Solomon et al. [55].
3.1.2. Sintesis AgNP Menggunakan Dijual Lagi Fucoidans
The fucoidans diperoleh dari F. vesiculosus (Fv), U. pinnatifida (Up), M. pyrifera (Mp) juga
digunakan untuk mensintesis nanopartikel Ag. Secara singkat, 10 mg fucoidans murni (Fv,
Mp atau Up) dilarutkan
di 10 mL air suling. Untuk solusi ini, 500? L dari solusi 0.1MAgNO3 ditambahkan. Solusinya
kemudian diaduk pada 100? C selama 15 menit untuk F. vesiculosus fucoidin, 30 menit untuk
M. pyrifera
fucoidan, dan 60 menit untuk fucoidan U. pynnatifida, untuk menghasilkan Fv-AgNPs, Mp-
AgNPs dan
Up-AgNPs, masing-masing. Waktu reaksi yang dipilih bergantung pada laju pembentukan NP.
3.1.3. Sintesis AgNP Menggunakan S. incisifolium encer Ekstrak
Secara singkat, ekstrak beku-kering (2 mg) dilarutkan dalam 10 mL air suling. ekstrak AR
yang ekstrak air hanya digunakan sebagai adalah, sementara ekstrak AC adalah ekstrak air
pertama dikenakan
untuk partisi pelarut organik. Solusinya diizinkan untuk campuran selama 10 menit setelah
itu 500? L dari
a AgNO3 (0,1 M) larutan ditambahkan dan reaksi diizinkan untuk melanjutkan selama 18
jam. Metode ini
digunakan untuk kedua AR dan AC ekstrak untuk menghasilkan AR-AgNPs dan AC-AgNPs,
masing-masing.

. Synthesis of Gold Nanoparticles (AuNPs)

The protocols employed in the synthesis of AuNPs were the same as that used in the synthesis
of the AgNPs. Attempts to synthesise AuNPs using the commercially available fucoidans (Fv, Mp
and Up) were unsuccessful and will therefore not be described here.
3.2.1. Synthesis of AuNPs Using Sodium Citrate (SC-AuNPs)
The sodium citrate capped AuNPs (SC-AuNPs) were synthesised following a method used by
Ojea-Jimenez et al. [43].
3.2.2. Synthesis of AuNPs using S. incisifolium AC and AR Aqueous Extracts
The AC-AuNPs and AR-AuNPs were synthesised using the AC and AR seaweed aqueous
extracts respectively, employing the same protocols described above for the AgNPs. For all synthetic
procedures, the NPs synthesized were centrifuged at 10,000 rpm for 20 min. The supernatant was
then discarded, the pellet was collected and re-suspended in distilled water and centrifuged again
at 10,000 rpm. This process was repeated twice.
3.3. The Rate of Nanoparticle Formation
The rate of nanoparticle formation was followed using UV-Vis spectroscopy by monitoring the
SPR band of the AgNPs or AuNPs using UV-Vis spectrophotometry. An aliquot (4 mL) of each
sample
was taken for UV-Vis analysis every 30 min for 18 h in case of AgNPs. For gold nanoparticles, a 4 mL
aliquot was taken for UV-Vis analysis every 5 min for 5 h.
3.4. Determination of the Total Polyphenolic Content, Reducing Power and the Radical Scavenging
Power of the
Aqueous Extracts and Fucoidans
The total phenolic content, reducing power and the radical scavenging power of the aqueous
extracts of S. incisifolium and the fucoidan samples was determined by the method described by
Topiwala et al. [36].

3.5. Peralatan
UV-Vis spektrum semua sampel dikumpulkan menggunakan Cintra UV-Vis (GBC,
Braeside, Victoria, Australia) atau Cary 60 (Varian, Santa Clara, CA, USA) menggunakan
panjang jalur 1 cm
cuvette kuarsa. Spektrum IR dicatat pada Spectrum 400 FT-IR / FT-NIR spektrofotometer
(Perkin Elmer, Waltham, MA, USA) yang dilengkapi dengan aksesori ATR. NMR (1H dan HSQC
eksperimen) diperoleh pada 400 MHz Avance IIIHD Nanobay spektrometer (Bruker,
Rheinstetten,
Jerman) dilengkapi dengan 5 mm BBO penyelidikan di 333 K menggunakan 1D standar dan
2D NMR pulsa
urutan. Semua spektrum yang direferensikan ke puncak pelarut terdeuterasi residual. Pola
XRD
sampel bubuk lyophilized dari AgNPs dan AuNPs disintesis diperoleh pada Bruker AXS
(Rheinstetten, Jerman) D8 Muka difraksi (tegangan 40 KV; saat 40 mA). XRD spektrum
tercatat di kisaran 30-90? menggunakan Cuk? (? = 0,154 nm) monokromatik radiasi sumber
sinar-X.
Ukuran NP dihitung menggunakan persamaan Debye-Scherrer (Persamaan (1)) [56].
d=
k?
cos?
(1)

mana d adalah ukuran; k adalah konstanta Scherrer (0,9); ? adalah panjang gelombang sinar-
X; adalah lebar XRD
puncak pada ketinggian setengah ditentukan dari grafik; ? adalah sudut difraksi Bragg.
Penentuan pencucian ion di kedua AgNP dan Aunp dicapai menggunakan ICAP
6200 induktif Ditambah Plasma-Atomic Emission Spectrometer (ICP-AES, Thermo, Waltham,
MA,
AMERIKA SERIKAT). instrumen dikalibrasi dan divalidasi menggunakan NIST (National
Institute of Standards
dan Teknologi, Gaithersburg, MD, USA) standar dilacak dibeli dari Ventures Anorganik
(Christiansburg, VA, USA) untuk mengukur elemen yang dipilih. Solusi disentrifugasi pada
10000 rpm
dan supernatan dikumpulkan. Dari supernatan ini, 2 mL aliquot diencerkan 10 kali lipat di
suling
air. Solusinya diencerkan kemudian diserahkan untuk analisis ICP-AES.
Sampel morfologi dan analisis unsur yang dicapai dengan menggunakan Transmission
Electron
Microscopy (TEM) dan Energi dispersif X-ray spektroskopi (EDX). gambar TEM dikumpulkan
menggunakan
a Tecnai G2 20 bidang-emisi gun (FEG, FEI, Hillsboro, OR, USA) TEM, dioperasikan pada mode
bidang cerah
pada tegangan percepatan 200 kV. Spektrum EDX dikumpulkan menggunakan nitrogen cair
didinginkan lithium
doped detektor silikon (EDAX, Hillsboro, OR, USA). Ukuran nanopartikel dalam gambar TEM
adalah
ditentukan dengan menggunakan software ImageJ. Ukuran hidrodinamik nanopartikel
ditentukan dengan menggunakan
Zetasizer NanoSeries Instrument (Malvern, Worcestershire, UK). Pengukuran dilakukan di
rangkap tiga dan rata-rata untuk mendapatkan ukuran rata-rata dari nanopartikel. Demikian
pula, potensi zeta dari
nanopartikel juga ditentukan dalam rangkap tiga.

3.6. Antimikroba dan sitotoksisitas Studi

Campuran reaksi nanopartikel disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 20 menit dan pelet
dikumpulkan
dan dicuci beberapa kali dengan air Milli-Q. pelet ini kemudian kembali ditangguhkan di 3 mL
suling
air. Konsentrasi akhir sampel disiapkan disajikan pada Tabel S1.
Pemilihan mikroorganisme dilakukan sedemikian rupa sehingga dua bakteri gram positif
Enterococcus
faecalis (ATCC 51299) dan Staphylococcus aureus subsp. aureus (ATCC 33591), dua gram
negatif
strain Acinetobacter baumanii (ATCC BAA-1605) dan Klebsiella pneumoniae subsp.
pneumoniae (ATCC
700.603), dan strain ragi, Candida albicans (ATCC 24433) dipilih. Uji difusi agar
dilakukan sesuai dengan metode Dhand et al. [57]. Mikroorganisme diinokulasi
menjadi 5 mL medium pertumbuhan: A. baumanii dalam kaldu kedelai trypticase, E. faecalis
di otak infus jantung
kaldu (dilengkapi dengan 4? g / mL vankomisin), sedangkan K. pneumoniae subsp.
pneumoniae, S. aureus
subsp. aureus dan C. albicans diinokulasi ke dalam kaldu nutrisi. Semua strain diinkubasi
pada 37? C,
semalam, gemetar pada 160 rpm pada orbital shaker. The OD600 dari budaya ditentukan
dan
disesuaikan dengan OD600 = 0,5 untuk standardisasi. Setiap mikroorganisme dalam suspensi
cair (100? L) adalah
menyebar ke piring agar tergantung pada media tumbuh pada (lihat di atas). Empat sumur
yang dibuat pada setiap lempeng agar dan 75? L (lihat Tabel S1 untuk konsentrasi masing-
masing sampel) dari masing-masing nanopartikel
larutan sampel ditambahkan. Delapan ulangan, pada dua piring agar terpisah (4 ulangan per
piring), yang
disiapkan untuk setiap sampel nanopartikel. Kontrol (1 mg / mL) yang digunakan adalah
vankomisin, ampisilin
dan kloramfenikol. Lempeng kemudian diinkubasi pada 37? C selama 24 jam. Hasilnya
diperoleh
mengukur diameter zona bening (zona inhibisi) sekitar sumur.
Sitotoksisitas nanopartikel disintesis dievaluasi terhadap dua kanker dan satu
non-kanker garis sel. Garis sel MCF-7, MCF-12a, dan HT-29 diperoleh dari ATCC dan
ditanam sebagai berikut: MCF-7 dan HT-20 sel ditumbuhkan di Dulbecco Modified Eagle
Media (DMEM)
dilengkapi dengan 1% dari penstrep (penisilin-streptomisin) dan 10% serum janin sapi (FBS).
sel MCF-12a ditumbuhkan dalam DMEM-F12 yang 1% penstrep dan 10% serum janin sapi
yang
menambahkan. Selain suplemen ini, 25? L hidrokortison, 10? L dari faktor pertumbuhan
epidermal
(EGF) dan 80? L insulin ditambahkan ke DMEM-F12. Semua tiga baris sel yang tumbuh di
bawah standar
kondisi budaya (37? C dan 5% CO2). Sel trypsinized ketika mereka anak sungai (70% -90%)
setelah itu mereka dihitung pada sel CountessTM penghitungan ruang slide. Jumlah sel
hidup
digunakan untuk menghitung volume sel menjadi berbudaya dalam 96 piring dengan baik.
Untuk masing-masing dengan baik, 100? L sel
ditambahkan (1? 105 sel hidup) dan diinkubasi selama 24 jam pada 37? C dan 5% CO2. Tes
viabilitas sel adalah
dilakukan dengan menggunakan uji MTT seperti yang dilakukan dalam studi yang dilakukan
oleh Nune et al. [58]. uji
dilakukan di 96-baik piring microtitre. Untuk masing-masing dengan baik, 100? L sel
ditambahkan (1? 105 sel hidup)
dan diinkubasi selama 24 jam pada 37? C dan 5% CO2. media dibuang setelah 24 jam dan
nanopartikel
ditambahkan dalam rangkap tiga. Sel dan media yang digunakan sebagai kontrol. 96-baik
piring microtitre adalah
kemudian diinkubasi selama 24 jam pada 37? C, 5% CO2. Nanopartikel telah dihapus dari
sumur menggunakan
multi-channel mikropipet setelah 24 jam dan sel dicuci dengan PBS untuk memastikan
penghapusan lengkap
nanopartikel. MTT larutan stok (5 mg / mL) 1 mL dicampur dengan 10 ml media dan 100? L
dari
larutan kemudian ditambahkan ke masing-masing. Piring, ditutupi foil, diinkubasi selama 4
jam pada 37? C dan
5% CO2. Setelah inkubasi, MTT kemudian dibuang sebelum 100? L DMSO (> 99,5%)
ditambahkan ke
masing-masing dengan baik dan diinkubasi lagi selama 15 menit sampai warna ungu muncul.
Absorbansi pada 570 nm
 dibacakan pada multi-plate reader (BMG Labtech, Ortenberg, Jerman).
Persentase viabilitas dihitung sebagai berikut menggunakan Persamaan (2):
% Viabilitas =
OD o sampel uji f
OD o kontrol f
? 100 (2)
Studi viabilitas sel dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya disajikan sebagai berarti?
standar
deviasi. P-nilai dihitung dengan fungsi TTEST di excel. P-nilai diwakili sebagai
p <0,05 dengan perbedaan terkuat dan p> 0,05 dengan perbedaan kurang.

4. Kesimpulan
Sebuah "hijau" Metode itu berhasil digunakan dalam sintesis untuk Au dan Ag NP (di kamar
suhu dan kondisi tekanan) menggunakan dua berbeda disiapkan S. ekstrak air incisifolium
(AC dan AR ekstrak). Metode persiapan ekstrak air dipengaruhi tingkat di mana
NP dibentuk serta ukuran dan bentuk mereka. studi spektroskopi NMR dan FT-IR, serta
sebagai DLS dan pengukuran potensial zeta, menegaskan bahwa polisakarida kompleks utama
komponen dari ekstrak air, dengan teknik yang terakhir mengkonfirmasikan kehadiran ini
polisakarida pada permukaan NP. Namun, sejak fucoidans murni hanya bisa menghasilkan
AgNPs pada temperatur tinggi, menjadi jelas bahwa metabolit lain yang hadir di berair
ekstrak, seperti phlorotannins atau polifenol, memainkan peran penting dalam pembentukan NP.
kehadiran
antioksidan ini dikonfirmasi oleh penilaian antioksidan, mengurangi tenaga dan jumlah
kemampuan polifenol dari ekstrak air dan sampel fucoidan. Metode ekstrak air
persiapan mempengaruhi ukuran, bentuk dan morfologi NP disintesis. Organik atau lebih
konstituen non-polar telah dihapus dari ekstrak air AC dengan ekstraksi sebelumnya rumput laut
dengan pelarut organik, diikuti oleh ekstraksi berair. Hal ini mengakibatkan produksi lebih kecil

NP (yang juga diproduksi pada tingkat yang lebih cepat), serta NP yang lebih seragam dalam bentuk
dan ukuran dispersi. Yang terakhir ini dapat dijelaskan oleh ekstrak AC jelas memiliki lebih tinggi
konten polifenol, mengurangi daya dan aktivitas antioksidan dari ekstrak AR. NP dihasilkan
menggunakan ekstrak AR mengakibatkan lebih besar, NP berbentuk berbagai. AgNPs dan AuNPs
sampel kontrol
juga disusun dengan menggunakan metode luas dilaporkan sintesis, yaitu, menggunakan NaBH4 dan
natrium
sitrat, masing-masing.
Hasil pendahuluan yang diperoleh dalam penelitian ini menunjukkan bahwa AgNPs disintesis
memiliki
kegiatan antimikroba yang kuat, sedangkan NP diproduksi menggunakan natrium borohidrida
menunjukkan diabaikan
aktivitas terhadap mikroorganisme diuji. Menariknya, AR-AgNPs ditemukan lebih
efektif dalam membunuh mikroorganisme diuji, terutama bakteri gram negatif. Sebagai tambahan,
methicillin-resistant S. aureus dan ragi, C. albicans, adalah yang paling rentan terhadap AgNPs.
AuNPs di sisi lain, ditemukan terjadi di zona yang jauh lebih rendah dari penghambatan.
The AgNPs disintesis dari ekstrak air S. incisifolium menunjukkan beberapa aktivitas terhadap
baris sel HT-29, sedangkan yang disintesis menggunakan fucoidans murni menunjukkan aktivitas
yang lebih besar terhadap
MCF-7. Menariknya, AgNPs menunjukkan tingkat toksisitas yang lebih rendah untuk garis sel non-
kanker (MCF-12a),
menunjukkan beberapa selektivitas. Konsentrasi yang digunakan dalam penelitian sitotoksisitas jauh
lebih rendah
daripada yang digunakan untuk studi antimikroba. The AuNPs, termasuk SC capped AuNPs,
menunjukkan sedikit toksisitas terhadap sel kanker. Seperti dengan AgNPs, toksisitas AuNPs
terhadap
baris sel non-kanker itu diabaikan dibandingkan dengan garis sel kanker.
Bahan Tambahan: Bahan Tambahan dapat diakses di: http://www.mdpi.com/1420-3049/21/
12/1633 / s1.
Ucapan Terima Kasih: Pendanaan untuk studi ini disediakan oleh National nanosains Pascasarjana
Pengajaran dan
Program pelatihan (NNPTTP) platform di University of Western Cape, NRF CPRR (EA) dan NRF CSUR
(DB) hibah.
Penulis Kontribusi: D.R.B. dan E.A. disusun dan dirancang percobaan; M.M. melakukan
eksperimen; M.M., K.D. dan M.L.R.-H. menganalisis data antimikroba; J.J.B. diidentifikasi rumput
laut; M.M.,
M.E.M. dan N.S. menganalisis data antikanker; D.R.B. dan E.A. kontribusi reagen / bahan / alat
analisis; E.A.
dan D.R.B. menulis kertas.
Konflik Kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Ramteke, C .; Chakraborty, T .; Sarangi, B.K .; Pandey, R.-A. Sintesis nanopartikel perak dari air
yang
ekstrak daun Ocimum sanctum untuk aktivitas antibakteri ditingkatkan. J. Chem. 2013, 2013,
278925. [CrossRef]
2. Rickerby, D.G .; Morrison, M. Nanoteknologi dan lingkungan: Sebuah perspektif Eropa. Sci.
Technol.
Adv. Mater. 2007, 8, 19-24. [CrossRef]
3. Le, A.-T .; Huy, P.T .; Tam, P.D .; Huy, T.Q .; Cam, P.D .; Kudrinskiy, A.A .; Krutyakov, Y.A. sintesis
hijau dari
halus-tersebar nanopartikel perak yang sangat bakterisida melalui teknik Tollens dimodifikasi. Curr.
Appl. Phys.
2010, 10, 910-916. [CrossRef]
4. Sironmani, A .; Daniel, K. Perak nanopartikel universal partikel multifungsi untuk penginderaan
bio,
pencitraan untuk diagnostik dan pengiriman obat yang ditargetkan untuk aplikasi terapeutik. Dalam
Penemuan Obat dan
Pembangunan-Present and Future; Kapetanovic, I., Ed .; Intech: Rijeka, Kroasia 2011.
5. Rai, M .; Yadav, A .; Gade, A. Perak nanopartikel sebagai generasi baru antimikroba. Biotechnol.
Adv. 2009,
27, 76-83. [CrossRef] [PubMed]
6. Bhatt, P .; Tandel, K .; Sheter, V .; Rathi, K.R. Beban luas resistan terhadap obat dan pandrug-tahan
bakteri gram negatif di sebuah pusat perawatan tersier. Mikroba baru baru Menginfeksi. 2015, 8,
166-170. [CrossRef]
[PubMed]
7. Huh, A.J .; Kwon, Y.J. "Nanoantibiotics": Sebuah paradigma baru untuk mengobati penyakit
menular menggunakan Nanomaterials
di era resisten antibiotik. J. Control. Rilis 2011, 156, 128-145. [CrossRef] [PubMed]
8. Sousa, C .; Botelho, C .; Oliveira, R. Nanoteknologi diterapkan biofilm medis. Ilmu terhadap
Mikroba
Patogen: Berkomunikasi Penelitian dan Teknologi Kemajuan sekarang; Mndez-Vilas, A., Ed .;
Formatex:
Badajoz, Spanyol, 2011; Volume 3, pp. 878-888.