Manejo de microorganismos y medios de cultivo
_________________________________________________________________________________________________________________________
1
1. INTRODUCCIN
Manejo de microorganismos y
medios de cultivo
Nez Jorge1; Ordez Gabriela2; Quinaluisa Jhon3
1
Escuela Politcnica Nacional, Facultad de Ingeniera Qumica y
Agroindustria, Quito, Ecuador
Resumen: El crecimiento de los microorganismos
depende de varios factores, entre ellos el manejo,
temperatura y medios de cultivo que se utilicen,
por lo cual, los objetivos de esta prctica son:
familiarizarse y aplicar normas de higiene y
tcnicas de manejo de microorganismos,
determinar la temperatura y medios de cultivo
ptimos para cada tipo de microorganismo, as
como algunas caractersticas morfolgicas; para
esto se inocul tres tipos de microorganismos:
Aspergillus Niger (hongo), levadura de pan y
staphylococus (bacteria) en tubos que contenan
diferentes medios de cultivo: Malta-Agar,
CZAPEC y PCA utilizando tcnicas de asepsia
para evitar la contaminacin, se expuso stos a
temperatura ambiente y a 30C durante
aproximadamente una semana. Los resultados
obtenidos muestran que no se produjo
contaminacin ya que los microorganismos se
desarrollaron normalmente; los hongos crecieron
mejor en Malta-Agar tanto a temperatura ambiente
como a 30 C, mientras que las levaduras crecieron
en PCA a ambas temperaturas, a diferencia de las
bacterias que no se desarrollaron en ninguno de
los medios y temperaturas establecidas. As mismo,
se determin a simple vista las caractersticas de
los microorganismos; los hongos presentaban dos
colores: negro y blanco, y las levaduras tenan una
coloracin amarilla con aspecto lechosa e inodora.
Palabras clave: microorganismos, inocular, medio
de cultivo, crecimiento, temperatura, asepsia.
Management of microorganisms
and culture media
Abstract: The growth of microorganisms
depends on several factors, among them the
management, temperature and culture media
used, therefore, the objectives of this practice
are: Familiarize and apply standards of hygiene
and management techniques of microorganisms,
determine the temperature and culture media
optimal for each type of organism, as well as
morphological features; for this is inoculated
three types of microorganisms: Aspergillus
niger (fungus), yeast and staphylococcus
(bacteria) in tubes containing different culture
media: Malta-Agar, CZAPEC and PCA using
techniques of asepsis to avoid contamination,
exposed them to ambient temperature and 30C
for approximately one week. The results
obtained show that there was no contamination
since the microorganisms were developed
normally; fungi grew best in Malta-Agar both at
room temperature and at 30 C, while the yeast
grew in PCA both temperatures, unlike bacteria
that were not developed in any of the culture
media and temperatures laid down. It is
determined at a glance the color and odour of
the microorganisms. Likewise, the
characteristics of the microorganisms were
determined at a glance; fungi showed two
colors: black and white, and yeast had a yellow
coloration, sticky and odorless.
Keywords: microorganisms, inoculated, culture
media, growth, temperature, asepsis.
Es importante conocer los principios bsicos en el
manejo de los microorganismos para alcanzar un
correcto aprendizaje de la microbiologa. Adems,
conocer el uso de los materiales y manipular
correctamente los mismos, ya que el conocimiento
de asepsia y trabajo ordenado generan buenos
resultados al final de la prctica. (Toro, 2005).
No es posible estudiar los microorganismos de
forma individual debido a su tamao, por lo que se
usa medios nutritivos artificiales de acuerdo al
microrganismo, en donde crecen con una alta
velocidad y generan poblaciones grandes. En esta
forma se logra manejar y realizar los estudios
deseados (Moran, 2004).
1
 Manejo de microorganismos y medios de cultivo
_________________________________________________________________________________________________________________________

Los microorganismos ms pequeos son las PCA Malta agar CZAPEC

bacterias y estas son capaces de crecer y Medio de (componente (componente (componente
desarrollarse dentro del medio que se encuentren, cultivo s /litro sol) s /litro sol) s /litro sol)
Extracto de Nitrato
presentan tres tipos de formas, esfricas cilndricas
Triptonas 5g malta 30g sdico 2,00 g
y bacilos. Los hongos son eucariotas, unos son Extracto de Cloruro
filamentosos denominados mohos y otros que son levadura 2.5 potsico 0,50
unicelulares llamadas levaduras (Garca, 2008). g g
Sulfato
2. METODOLOGA Glucosa 10 g ferroso 0,01 g
componentes
Fosfato
2.1 Marco Terico dipotsico
Agar Agar 15 g 1,00 g
bacteriolgic Sacarosa
Como se dijo previamente las bacterias son los
o 12 g 30,00 g
organismos ms pequeos procariotas, en su parte Agar agar
externa tienen una pared celular rgida que esta 12,00 g
alrededor de la membrana citoplasmtica que pH 5,5 5,5 6,8 +-0,2
protege a la bacteria de daos mecnicos. La Recuperado de: http://www.biokar-diagnostics.com/
mayora se reproducen asexualmente, de todos los
factores necesarios para el crecimiento de las Los recipientes de cultivo deben estar inicialmente
bacterias el de mayor influencia es la temperatura, estriles y despus de la introduccin del
ya que cada bacteria requiere una temperatura microorganismo hay que evitar las
mnima de crecimiento (Garca, 2008). contaminaciones externas, para evitar la
Los hongos filamentosos que son los mohos contaminacin de los tubos se usa generalmente
poseen tallos compuestos de filamentos largos tapones de algodn. Adems, el exterior del
denominados hifas. Las levaduras que son hongos recipiente puede contaminarse y es posible que
unicelulares sin filamentos tienen una forma cuando se abra se contamine el interior, es por esta
esfrica u oval, las levaduras por lo general son razn que se pasa el orificio del tubo por la llama
encontradas en las frutas y hojas como una capa de del mechero despus de retirar el tapn y antes de
polvo blanco (Tortora, 2007). cerrarlo nuevamente (Roger, 2000).
Inculo es el material microbiano que se usa para
sembrar o inocular un frasco de cultivo, se realiza 2.2 Metodologa
con un asa que se esteriliza en una llama antes de
ser usada. Aqu se encuentra el medio de cultivo En esta prctica se usaron tres microorganismos un
que es un sustrato o solucin de nutrientes hongo: aspergillus niger, una levadura: levadura
necesarios para el desarrollo de un determinado de pan y una bacteria: staphylococcus. Los cuales
microorganismo (Roger, 2000). se sembraron a temperatura ambiente y
Los medios de cultivo se clasifican segn su temperatura de 30C, en tres medios de cultivos
consistencia en lquidos, slidos y semislidos distintos: malta-agar,CZAPEC y PCA. Para esto se
adems segn su origen pueden ser: naturales los esterilizo el asa en el mechero hasta llegar al rojo
cuales son preparados con sustancias naturales vivo, despus se enfri la misma en un medio
animales o vegetales, sintticos que contienen estril para evitar quemar a los microorganismos.
composiciones qumicas definidas y semisintticos Se tom el microorganismo y posteriormente se lo
que son sintticos aadidos un extracto orgnico de inoculo en el medio de cultivo tapando
crecimiento (Torres, 2006). inmediatamente el recipiente, a cada tubo se lo
flameaba antes de tomar o colocar el
En la Tabla 1 se presentan los componentes de los microrganismo para evitar contaminacin. Este
3 diferentes medios de cultivo de los proceso se realiz para cada microorganismo antes
microorganismos por litro de medio producido. mencionado. Finalmente se dej transcurrir una
semana para observar los resultados de crecimiento
Tabla 1. Componentes de los medios Malta Agar de cada uno de los microorganismos.
(MA), Plate Count Agar (PCA), y CZAPEC.

2
 Manejo de microorganismos y medios de cultivo
_________________________________________________________________________________________________________________________
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
En la Tabla 2, se presentan los datos cualitativos
referentes al crecimiento de los diferentes
microorganismos a temperatura ambiente y 30C,
siendo el valor 3 aquel que refleja la mejor
apreciacin de crecimiento y 0 donde no se haya
percibido algn indicio de crecimiento.
Tabla 2. Valores cualitativos del crecimiento de
los diferentes microorganismos a las 2
temperaturas de prueba para los 3 medios de
crecimiento utilizados.
Como se observa en la Tabla 1, para la levadura se
apreci un crecimiento satisfactorio en el medio
PCA para ambas temperaturas, donde se observ
una coloracin amarilla un poco lechosa y sin olor
caracterstico como se observa en la Figura 1,
mientras que para el medio CZAPEC no existi
indicio de crecimiento microbiano. Respecto al
medio de Malta Agar se apreci un crecimiento
menor de las levaduras que en el PCA. El PCA
tiene una composicin que brinda un ambiente
adecuado para el crecimiento de las levaduras
como es la presencia de glucosa, triptonas, para
descomponer los azcares y protenas necesarias
para su crecimiento, adems de su composicin en
extracto de levadura como se presenta en
BIOKAR, 2016. Este medio PCA es ms adecuado
para el crecimiento de bacterias, pero, en este caso
fue beneficioso para el crecimiento de levaduras
por el pH del medio que seguramente fue cido,
siendo el rango adecuado para su desarrollo un pH
entre 3,5 a 5.
Para el crecimiento de levaduras el MA es un
medio muy adecuado para su crecimiento, por su
composicin de azcares y el extracto de malta,
pero talvs el pH de este medio no haya sido
adecuado para un desarrollo ptimo del
microorganismo. CZAPEC es un medio adecuado
para el crecimiento de levaduras, pero no se
percibi la presencia de crecimiento de levaduras,
por lo que posiblemente este medio no estuvo
adecuado con los nutrientes necesarios para el
crecimiento del tipo de levadura de pan. Para
ambas temperaturas, el crecimiento de levaduras
fue relativamente el mismo, es decir no afecto la
diferencia de temperaturas para el mismo, esto se
debe a que el rango de temperaturas adecuado para
el crecimiento de levaduras se encontr entre la
temperatura ambiente y los 30 C, como se
presenta en el documento de BIOKAR, 2016.
Con respecto a las bacterias, como se observa en la
Tabla 1, no se percibi crecimiento alguno de
microorganismo como se observa en la Figura 2, a
pesar de que PCA y MA, son los medios adecuados
para el desarrollo de bacterias, en especial el PCA,
ya que el extracto de malta es el ms adecuado para
nutrir bacterias Gram positivas siendo el
estafilococo una de ellas, por lo que existen varios
factores que pudieron impedir el crecimiento de las
bacterias como son, una incorrecta inoculacin,
aunque no se contamin el medio, es posible que
no se haya podido implantar la bacteria, tambin
MEDIO CZAPEC PCA MA
T T T
TEMPERATURA amb. 30 C amb 30 C amb. 30 C
LEVADURA 0 0 0 0 3 3 3 3 1 1 1 1
HONGO 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3
BACTERIA 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
pudo requerirse un medio de crecimiento selectivo
como el Estreptococo 110 Agar, que adems de
contener peptonas, esta enriquecido con fosfato
dipotsico D- manitol, y establecido con un pH
adecuado de 7.0, totalmente adecuado para
proporcionar los nutrientes que permitan el
crecimiento de este tipo de bacteria (Gran
Farmacutica, 2014) . Otro factor importante, pudo
haber sido que no fue suficiente el tiempo de la
experiencia, y posiblemente hubiera sido necesario
esperar ms tiempo para percibir el crecimiento.
Adems hay que tomar muy en cuenta que el
estafilococo crece en ausencia de microorganismos
competitivos, y por esa razn, proporcionar el
medio adecuado no fue suficiente para mantener
las condiciones adecuadas para su crecimiento, ya
que esto no garantiza que no exista la presencia de
un microorganismo competitivo que se haya
introducido en el medio en el proceso de
inoculacin.
Con respecto a los hongos se puede observar que
su crecimiento fue favorable en los 3 medios,
siendo Malta Agar, el sitio con los nutrientes
adecuados para el desarrollo de estos
microorganismos, ya que en estos se apreciaron
partculas negras y blancas que en conjunto
permitieron observar la cantidad de
microorganismos que lograron desarrollarse lo que
se puede apreciar en la Figura 3. Segn BIOKAR,
2016 el medio MA es el ms adecuado para el
3
 Manejo de microorganismos y medios de cultivo
_________________________________________________________________________________________________________________________

crecimiento de hongos, por lo que para estos

microorganismos se pudo comprobar la
informacin bibliogrfica con el experimento
realizado, pero hay que tomar en cuenta, que al
crecer favorablemente en los 3 medios, este
microorganismo se puede considerar como muy
poco selectivo, y un medio de cultivo complejo
sera ideal para su crecimiento.

1 2 3

Figura 3. Fotografa del crecimiento de hongos. 1.

Medio MA. 2. Medio PCA. 3. Medio CZAPEC.
Bibliografa.

1 2 3

Figura 1. Fotografa del crecimiento de la levadura

de pan. 1. Medio CZAPEC. 2. Medio PCA. 3.
Medio MA.

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

El medio adecuado para el ptimo crecimiento de

Figura 2. Fotografa del crecimiento de levaduras.
levaduras fue el PCA (Plate Count Agar). No
existi indicio de crecimiento de bacteria en
ningn medio por lo que no fue posible determinar
el ms adecuado para su crecimiento. El medio
adecuado para el ptimo crecimiento de hongos fue
MA (Malta Agar). El hongo inoculado en el
proceso experimental es muy poco selectivo. Un
correcto proceso de inoculacin garantiza que el
cultivo no se contamine. Las temperaturas de
prueba no fueron un dato de comparacin ya que
en ambas se obtuvieron los mismos resultados
debido a que se encontraron en los rangos de
ptimo crecimiento de microorganismos.

4
 Manejo de microorganismos y medios de cultivo
_________________________________________________________________________________________________________________________

Probar con nuevos rangos de temperatura para

observar si existe un mejor crecimiento de los
microorganismos. Usar nuevos medios de cultivo
que favorezca el crecimiento de la bacteria.

6. REFERENCIAS

BIOKAR diagnostics (2016).EUGON BROTH,

recuperado de: http://www.biokar-
diagnostics.com/, Francia.
Garca, V., (2008), Introduccin a la
microbiologa, Barcelona, Espaa: Editorial
Reverte.
Gran farmacutica (2014). Medios de cultivo y
pruebas bioqumicas, recuperado de:
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-
cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation.
Morn, E., (2004), Manual de prcticas de
microbiologa, Ciudad de Jurez, Mxico:
Universidad de Jurez.

Roger, Y., (2000), Microbiologa, Barcelona,

Espaa: Editorial Reverte.

Toro, D., (2005), Manual para la introduccin al

laboratorio de microbiologa, Manizales,
Colombia: Universidad de Caldas.

Torres, C., (2006), Medios de Cultivo, Buenos

Aires, Argentina: Universidad Nacional del
Nordeste.

Tortora, G., (2007), Introduccin a la

microbiologa, Buenos Aires, Argentina: Editorial
Panamericana.