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CONTROLE

DE
CRESCIMENTO
MICROBIANO
1. Procedimentos
1.1) Controle de crescimento microbiano
1.1.1) Temperatura
Tubos de ensaio foram levados para aquecimento em diferentes temperaturas (5 e 15) e foram comparados com a
amostra referente a temperatura ambiente.

1.1.2) Radiao
Placas de petri com a cultura foram submetidas a radiao em Capela de Fluxo Laminar BIOSEG 06 CLASSE 11
TIPO 41- Srie FL17267, onde apenas um lado da placa foi exposto, tendo o outro protegido pela tampa da placa, para
fins de comparao.

1.1.3) Agentes qumicos


Os agentes qumicos abaixo foram expostos sobre a mesma cultura, para fins de comparao sobre os halos de
inibio. Em outra placa foram expostos 3 diferentes antibiticos com o mesmo intuito.

2. Materiais e Reagentes
2.1) Materiais
Ala de Drigalsky
Ala de inoculao
Algodo hidrfilo
Autoclave
Bchers
Bico de Bunsen
Capela de Fluxo Laminar BIOSEG 06 CLASSE 11 TIPO 41- Srie FL17267
Papel de embrulho
Pinas
Pipetas esterilizadas
Placas de petri
Suporte de tubos de ensaio
Swabs

2.2) Reagentes
gua oxigenada
gua sanitria
Antibiticos (Cefuronima,Clonanfenicol e Imipenem)
Pinho-Sol
Tintura de Iodo
gar Muller-Hinton
3. Resultados
3.1) Controle de crescimento microbiano
3.1.1) Temperatura

Imagem 1 Aspecto inicial do ensaio de temperatura

Imagem 2 Aspecto final do ensaio de temperatura

3.1.2) Radiao

Imagem 3 - Ensaio em fluxo laminar

Imagem 4 - Aspecto da cultura aps ensaio em


fluxo laminar

3.1.3) Agentes qumicos

gua oxigenada, gua sanitria, Pinho-Sol, Tintura de Iodo


Imagem 5- Ensaio de efetividade de diferentes agentes qumicos
sobre cultura de E. Coli.

Antibiticos

Imagem 6- Ensaio de efetividade de diferentes antibiticos


sobre cultura de E. Coli.

4. Discusso
4.1) Controle de crescimento microbiano
4.1.1) Temperatura
Em geral, o calor provoca a morte pela desnaturao de protenas, podendo levar a danos membrana e clivagem
enzimtica do DNA. O calor mido promove a esterilizao a uma temperatura mais baixa que o calor seco, uma vez
que a gua auxilia na ruptura de ligaes no covalentes (pontes de hidrognio) que mantm unidas as cadeias
proteicas em suas estruturas secundria e terciria.
Nos experimentos realizados, s houve crescimento microbiano (indicado pela turvao do meio) em temperatura
ambiente, comprovando a influncia positiva do aumento da temperatura no controle microbiano.

4.1.2) Radiao
Esta tem efeito germicida, que quando o mtodo capaz de destruir todos os microrganismos, incluindo tambm
suas formas de resistncia, denominadas de esporos. Os dois tipos de radiao utilizados para matar microrganismos
so a luz ultravioleta (radiao no ionizante) e raios-X, raios gama, feixes de eltrons (radiao ionizante). A maior
atividade antimicrobiana da luz UV ocorre a 250-260nm, que corresponde regio de comprimento de absoro
mxima pelas bases pricas e pirimdicas do DNA.
A leso mais importante causada pela irradiao UV consiste na formao de dmeros de timina, embora tambm
ocorra a adio de grupos hidroxil s bases. Como resultado, a replicao de DNA inibida, tornando os organismos
incapazes de crescer. As clulas possuem mecanismos de reparo de danos induzidos por UV, que envolvem a clivagem
de dmeros na presena de luz visvel (foto reativao) ou exciso de bases danificadas, que no depende de luz visvel
(reparo na ausncia de luz). Uma vez que a radiao UV pode causar danos crnea e pele, o uso de irradiao UV
na medicina limitada. Entretanto, utilizada em hospitais para matar organismos transmitidos pelo ar especialmente
em salas cirrgicas que no se encontram em uso, pois este mtodo de desinfeco superficial, sua ao lenta, e
no penetra a fundo nos materiais. Os esporos bacterianos so bastante resistentes e requerem uma dose at 10 vezes
superior quela das bactrias vegetativas.
No comparativo entre a parte exposta a radiao e a no exposta, a radiao foi altamente efetiva no controle da
bactria, exercendo seu papel de tornar o meio estril.

4.1.3) Agentes qumicos


gua oxigenada (Perxido de hidrognio)
O perxido de hidrognio utilizado como antissptico, mas sua eficcia limitada pela capacidade do organismo
produzir catalase, enzima que degrada H2O2.
O perxido de hidrognio um agente oxidante que ataca os grupos sulfidril inibindo, assim, a atividade enzimtica
da bactria, levando a morte da mesma.

Imagem 7 Estrutura molecular do perxido de hidrognio

gua sanitria
O cloro tambm corresponde ao componente ativo do hipoclorito (gua sanitria, Clorox), o qual utilizado como
desinfetante, por ser um agente oxidante potente que provoca a morte por promover a ligao cruzada de grupos
sulfidril essenciais de enzimas, originando o dissulfeto inativo.

Imagem 8 - Estrutura molecular do hipoclorito de sdio

Antibiticos
Cefuronima
O mecanismo de ao desse antibitico anlogo ao das penicilinas, onde promovem inibio da sntese da parede
celular de bactrias e a ativao de enzimas autolticas na parede celular. Foi efetiva contra a E.Coli que por se tratar
de uma bactria gram-negativa, teve suas membranas destrudas pelo mecanismo de ao potente do antibitico, mas
poderia ter sido melhor. A causa desse fato pode ter sido dada pela resistncia da bactria gerada por enzimas
betalactamases.

Clonanfenicol
O mecanismo de ao desse antibitico tambm age diretamente no ataque a membrana da bactria, inibindo a sntese
de protenas devido ao bloqueio especfico dos ribossomos bacterianos, atravs da inibio da transpeptidao dos
ribossomos.Asiim, o antibitico foi efetivo contra E. Coli. , mas nem tanto comparado aosdemais, o fato pode ser dado
pela necessidade do antibitico de reconhecer ribossomos especficos, que talvez a E.Coli no apresente em grandes
quantidades.
Imipenem
Seu mecanismo de ao interferir na sntese da parede celular de bactrias sensves. Tambm tem uma grande
capacidade de penetrar nas membranas extracelulares das batrias gram- negativas do que outros betalactmicos,
sendo altamente resistentes a hidrolise por betalactamases. Sendo assim, esse antibitico foi o mais eficiente, deixando
o halo de inibio bem expeo e definido.
Pinho-Sol
O pinheiro (pinus elliottii) produz uma resina que, ao ser destilada, libera o leo de terebintina, cujo componente mais
importante o alfapineno, que, na presena do cido, produz o alfaterpineol, principal componente do leo de pinho,
usado em perfumes e bactericidas domsticos. Terpinen-4-ol capaz de reprimir em 40 a 50% da produo de
citocinas como interleucina-1 beta (IL-1), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interleucina-10 (IL-10) e
prostaglandina E2 (PGE2), quando moncitos do sangue perifrico de humano so estimulados por
lipopolissacardeos (LPS) de E. coli 40.

Imagem 9 Estrutura molecular


do alfaterpineol

Tintura de Iodo
A tintura de iodo foi altamente eficaz contra o crescimento bacteriano, j que um germicida, com alto poder de
penetrao, reagindo com o substrato proteico da clula bacteriana, proporcionando efetiva ao contra as bactrias
vegetativas existentes na pele ntegra quando utilizado em menor concentrao, portanto, muito utilizado para
antissepsia.

Qual foi o mais eficiente p tratar E. Coli?

A tintura de iodo e a soluo de gua sanitria foram os mais eficientes para tratamento de E. Coli, pois formaram os
maiores halos de inibio na cultura bacteriana. O resultado pode ser dado provavelmente pelo fato da soluo de
gua oxigenada ser pouco estvel quando comparada a de gua sanitria, j que essas exercem basicamente o
mesmo mecanismo de ao.

5. Bibliografia
6.1) LEVINSON, Warren. Microbiologia mdica e Imunologia. Traduo por Martha Maria Macedo Kyaw:
consultoria, superviso e reviso tcnica por Cynthia Maria Kyaw. - 10.ed.- Porto Alegre: Artmed, 2010.

6.2) VERMELHO, Alane Beatriz et al. Prticas de Microbiologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2015.

6.3) https://repositorio.unesp.br/bitstream/handle/11449/104763/nogueira_mnm_dr_arafo.pdf?sequence=1
Em 18/11/2017, s 20:12 hrs