UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

CAMPUS CELAYA-SALVATIERRA
DIVISIÓN DE CIENCIAS DE LA SALUD E
INGENIERÍAS
PROGRAMA DE INGENIERIA EN
BIOTECNOLOGIA

Bioquímica

Mtra. Luz María Landa Zavaleta

REPORTE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

“Cuantificación de proteína”

INTEGRANTES:
Dionicio González Mariel Betzabel
Morales Galvan Mariela
Posadas Barajas Yaraví
Vazquez Herrera Claudia Ivonne
Vértiz Flores Diego Abisai

Celaya Gto. a 16 de mayo de 2017

INTRODUCCIÓN
El término proteína deriva del griego "proteos" (lo primero, lo principal) y habla de su
gran importancia para los seres vivos. La importancia de las proteínas es, en un
primer análisis, cuantitativa: constituyen el 50% del peso seco de la célula (15% del
peso total) por lo que representan la categoría de biomoléculas más abundante
después del agua. Sin embargo su gran importancia biológica reside, más que en su
abundancia en la materia viva, en el elevado número de funciones biológicas que
desempeñan, en su gran versatilidad funcional y sobre todo en la particular relación
que las une con los ácidos nucleicos, ya que constituyen el vehículo habitual de
expresión de la información genética contenida en éstos últimos.

Las proteínas son biomoléculas de elevado

peso molecular (macromoléculas) y
presentan una estructura química compleja.
Sin embargo, cuando se someten a hidrólisis
ácida, se descomponen en una serie de
compuestos orgánicos sencillos de bajo
peso molecular: los α- aminoácidos. Este
rasgo lo comparten las proteínas con otros
tipos de macromoléculas: todas son
polímeros complejos formados por la unión
de unos pocos monómeros o sillares estructurales de bajo peso molecular. Existen
20 α-aminoácidos diferentes que forman parte de las proteínas. En las moléculas
proteicas los sucesivos restos aminoácidos se hallan unidos covalentemente entre
sí formando largos polímeros no ramificados. El tipo de enlace que los une recibe el
nombre de enlace peptídico. Las cadenas de aminoácidos de las proteínas no son
polímeros al azar, de longitud indefinida, cada una de ellas posee una determinada
composición química, un peso molecular y una secuencia ordenada de
aminoácidos.
La cuantificación de proteínas de manera
precisa es esencial para todos los
experimentos relacionados a proteínas
en una multitud de temas de
investigación. Se han desarrollado
diferentes métodos para cuantificar
proteínas totales, o alguna en particular
en un ensayo dado. Los métodos de
cuantificación de proteínas totales
incluyen métodos tradicionales tales como la medición de la absorbancia a 280 nm,
los ensayos de Bradford y ácido bicinconínico, así como métodos alternativos como
el de Lowry o ensayos novedosos desarrollados por los proveedores comerciales.
Los proveedores comerciales típicamente proveen un kit bien diseñado y
conveniente para cada tipo de ensayo. Los métodos para cuantificar proteínas
individuales incluyen el ELISA, el Western blot y, más recientemente, la
espectrometría de masas, entre otros.
El método de absorbancia de las soluciones de proteína es muy poco específico en
la región de la absorbancia de la radiación ultravioleta.

OBJETIVO
MATERIAL

Materiales: Reactivos:

● Espectrofotómetro o fotómetro ● 10 ml de solución de albúmina 2.5

​

● 10 tubos de ensayo mg/ml en KCl 0.5M

● gradilla ● 20 ml de KCl 0.5 M
● 2 pipetas de 5.0 ml ● 25 ml de reactivo de Biuret
● 2 pipetas de 10 ml ● ​muestras de proteína de
concentración desconocida

METODOLOGIA

1. Preparar 7 tubos marcados como se muestra en la Tabla 1. La solución de albúmina

contiene 2.5 mg/ml de proteína. Diluyendo volúmenes conocidos de la solución con
volúmenes conocidos de KCl, podemos producir diferentes concentraciones de
proteína para generar una curva estandar. Los tubos 6 y 7 contiene 5.0 ml de albúmina
de concentración desconocida en KCl. La albúmina se ha disuelto en soluciones
conocidas que incluyen KCl. Para mantener constante la concentración de KCl se
adicionan las cantidades indicadas.
2. Adicionar 3.0 ml de reactivo de Biuret a cada tubo y mezclar vigorosamente.
3. Reposar 20 min para que desarrolle el color. El color es estable al menos 1 hora.
4. Encender el espectrofotómetro y fijar la longitud de onda a 540 nm, Calibrar el
instrumento usando el tubo 1 como blanco.
5. Registrar los valores de absorbencia
Tabla 1: Composición de las soluciones para la determinación de la curva estándar de
proteína​.

Tubo Albúmina o muestra KCl (0.5 Concentración Absorbancia

desconocida M) final de proteína

1 0 5.0 0 0.000

2 1.0 ml de albúmina 4.0 0.5 0.104

3 2.0 ml de albúmina 3.0 1.0 0.154

4 3.0 ml de albúmina 2.0 1.5 0,209

5 4.0 ml de albúmina 1.0 2.0 0.232

6 5.0 ml de muestra 0.0 0.209

desconocida ?

7 5.0 ml de muestra 0.0 0.129

desconocida ?

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Se grafican los datos de las concentraciones de proteína con que se preparan las
soluciones para preparar la curva standar contra los valores de la absorbancia a 595 nm
obtenidos para cada una de dichas soluciones.

Concentracion de proteina Absorbancia

0 0

0.5 0.104

1 0.154

1.5 0.209

2 0.232
 Donde la ecuación y=0.1138x+0.026 indica la mejor aproximación al ajuste lineal
entre los puntos de la gráfica obtenidos en el laboratorio. En la ecuación, y expresa la
absorbancia en función de la concentración y x la concentración de proteína. REalizando un
despeje obtenemos la nueva ecuación para obtener la concentración en función de la
absorbancia:
y−0.026
x= 0.1138
Con la nueva ecuación, sustituyendo el valor de la absorbancia medido, podremos calcular
la concentración.

Para la muestra desconocida del tubo 6:

La absorbancia fue de 0.209.
sustituyendo el valor en la ecuación en función de x tenemos:

0.209−0.026
x= 0.1138 = 1.60
El valor para la concentracion de esta muesta calculado analiticamente es 1.60.
La aproximación gráfica es la siguiente:
Para la muestra desconocida del tubo 7:
La absorbancia fue de 0.129.
sustituyendo el valor en la ecuación en función de x tenemos:

0.129−0.026
x= 0.1138 = 0.9050
El valor para la concentracion de esta muesta calculado analiticamente es 0.9050.
La aproximación gráfica es la siguiente:
REFERENCIAS:
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema08.pdf