REF] 20 100 / 20 160 Qapi° 20 E co7saay-t- 200006 IVD ‘Systéme didentification des Enterobacteriaceae el autres baciles & Gram négatif non fastidieux INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 E esi un systime standardisé pour identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles 4 Gram négatif ‘non fastidieux, comprenant 21 tests biachimiques ‘miniaturisés, ainsi quune base de données. La liste ‘completo des bactéries quill est possible didentiier avec ‘ce systéme est présente dans le Tableau d'identifcation en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests, Les réactions produltes pendant la période incubation se traduisent par des virages colorés ‘spontanés ou révélés par addition de réactits. La lecture de cos réactions se fait a aide du Tableau de Lecture et fidentifcation est obtenue a lade du Catalogue Analytique ou d'un logiciel identification PRESENTATION Coffret de 25 tosts (réf. 20 100) + 28 galeries API 20 E = 25 boltes incubation = 25 fiches de résultats +1 barrette de fermeture + 1 notice Coffret de 100 tests (réf. 20 160) = 100 galeries API 20 (4x26 galeries) = 100 bottes dincubation = 100 fiches de résultats = 1 barrette de fermeture = 1 notice COMPOSITION DE LA GALERIE La composition de la galerie API 20 E est reportée dans te Tableau de Lecture de cette notice. REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs = API NaC! 0,85 % Medium, 5 ml (Ref, 20 230) ou ‘API Suspension Medium, 5 mi (Ret. 20 150) ~ API 20 E coffret de réactifs (Ref. 20 120) ou réaclifs individuels : TDA (Réf, 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 4+ VP 2 (Ret. 70.422) NIT 1+ NIT 2 (Ref. 70.442) - Réaciif Zn (Ret. 70 380) + Oxydase (Ref. 55 636") * reference non commercialisée dans certains pays : utliser un réactif équivalent ~ Huile de paraffine (Rét, 70 100) + Catalogue Analytique API 20 E (Réf, 20 190) ou logiciel identification apiweby ™ (Ref. 40.011) (consulter bioMeriewx) Matériel ipeties ou PSipeties = Protége-ampouie + Portoir pour ampoules = Equipement général de laboratoire de bactériologie REACTIFS COMPLEMENTAIRES ~ APL OF Medium (Ref. 50 110) ‘Test pour la détermination du métabolisme fermentati ‘ou oxydalif du glucose. = API M Medium (Ref. 50 120) Test pour a détermination de la mobilté des bactéries abro-anaérobies. PRECAUTIONS D'UTILISATION + Pour diagnostic in vitro et pour controle micro- biologique. « Pour usage professionnel uniquement. Ce coffret contient des composants dorigine animale. La maitrise de lorigine eVou de tétat sanitaire des ‘animaux ne pouvant garantir de fagon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogéne transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les precautions dusage relalives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). ‘+ Les prélevements, cultures bactériennes et. produits fensemencés doivent etre considérés comme poten- tiellement infectioux et doivent étre manipulés de fagon approprige. Les techniques aseptiques et les precautions ususlles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent étre respectées tout au tong de la manipulation ; se référer & "CLS! M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur’ Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer 2 “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH = Demiére édition’, ou a la régiementation en vigueur dans le pays dullisation. ‘+ Ne pas utliser les réactfs aprés la date de péremption. + Avant ullisation, s'assurer de lintegrité de fembatlage des différents composants, + Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déforméo, sachet deshydratant ouvert, ‘+ Les performances présentées sont obtenues avec la meéthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- tion de méthodologie peut altérer les résultats. + Linterprétation des résultats du test doit étre faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de erigine du prelevement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats dautres tests, en particulier de lantibiogremme. ‘iadtérowx SA Frangais—1apf® 20 CONDITIONS DE STOCKAGE Lies galeries sont présentes dane une poche en aluminium avec sachets déshydratans. Apres ouverture de colleci(), conserver les galeries restantes avec les déshydratants en refermant Ia poche & Tide de la barrette de fermeture (présente dans te coffe!) placer Fextrémté de la poche entre les deux pices de la barrette et les clamper soigneusement, 2 fond, sur toute leur fongueur. Les galeries peuvent ainsi Gtre conservées 10 mois aprés ouverture de ta poche, 8 2-8°C (ou jusqua la Gate fmite Gulisaion indiqube sur Fembalage, si celle-! est anterevre) ) Recommandation pour Fouverture de celle-c: couper juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche droite, pour éviter dendommager les sachets. déshydra- tans ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 E ne doit pas ate ullisé directement & partir des prélévements dorigine clinique ou autres. Les microorganisms & identifier doivent dans un premier temps étre isolés sur un milieu de culture adapté a la culture des Enferobacteriaceae evou des bacilles a Gram négatif non fastidieux selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE ‘Test oxydase Le test oxydese doit étre réalisé selon les instructions du fabricant, iI constitue le 21°" test diidentiication & noter surla fiche de résultats, Préparation de la galerie ‘© Réunir fond et couvercle dune boite dincubation et répartir environ 6 ml d'eau distilée ou déminéralisée [ou toute eau sans addltif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl, CO2 ..)] dans les alvéoles pour créer tune atmosphere humide. * Inserire la référence de la souche sur ta languette latérale de la boite. (Ne pas inscrre la référence sur le couvercle, celuk-ci pouvant étre déplacé lors de la manipulation). + Sortr la galetie de son embaliage. + Placer la galerie dans la botte dincubation. NOTE: API 20 E doit @tre utilisé avec des Enterobacteriaceae eliou des bacilles & Gram négatif non fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants ot nécessitant des précautions de manipulation parliculiéres (ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base de données API 20 €. 11 convient dutiiser cautres techniques pour exclure ou confirmer leur présence. Préparation de inoculum ‘= Ouvrir une ampoule GAP! NaCl 0,86 % Medium (5 mi) ‘ou une ampoule dAPI Suspension Medium (5 mi) ‘comme indiqué au peragraphe "Précautions" de la notice du produit, ou uliser un tube contenant 5 ml eau physiologique stérile ou dea distilée stelle, ‘sans adit. ‘+A Taide dune pipette ou dune PSipette, prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures). + Réaliser une suspension bactérienne en homo- ‘généisant soigneusement les bacteries dans le milieu. Cette suspension doit tre ullisée extemporenément. NOTE : fa plupart des espéces de Vibrio sont halophiles, En cas de suspicion dun Vibrio, réaliser la suspension bbactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium, 704i -- 200906 Inoculation de ta galerie + Itoi fa eusponsion bactrionne dane fs tubes de a galerie a aide de la méme pipette (pour éviter la formation de bus au fond des tubes, poser ta pone de fa lpete ou dela PSipeta sure cbt do la cupule, en incinan\ lgecoment labile incubation vers raven ~"pour tes teste [CIT], [VE] et [GEL], remplr te et Expat, pour les autres tests, remplir uniquement les tubes (et ‘non les cupules), ~ pour les tests : ADH. LDC, ODC, H2S, URE créer une Bnaéroblose en remplssant leur cupule chuile de parefine + Refermer la bote incubation + incuber a 36°C = 2 pendant 18-24 neues LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie ‘+ Aprés incubation, ta lecture de la galerie doit se faire en se référant au Tableau de Lecture += S13 tests ou plus (test GLU + ou -) sont posits, noter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées Puis révéler les tests nécessitant addition de réactifs = Test TDA: ajouter 1 goutle de réactif TDA. Une couleur marron-rougestre indique une réaction positive & noter sur la fiche de résultats, - Test IND: ajouter 1 goutle de réactif JAMES. Une couleur rose diflusant dans toute la cupule indique tne réaction positive a noter sur ia fiche de résultats. + Test VP: ajouter 1 goutte des réactfs VP 1 et VP 2. Attendre au minimum 10 minutes. Une couleur rose ou rouge indique une réaction positive & noter sur la fiche de résultats. Une faible coloration rose apperaissant aprds 10 minutes dot ére considérée négative. NOTE : Le test de la recherche de production diindole doit etre réalisé en dernier, car cette réaction libére des {gaz qui risquent daltérer Vinterprétation dautres tests de la galerie. Ne pas remettre le couvercle diincubation aprés Fajout du réactif * Si le nombre de tests positfs avant ajout des réactis (y ‘compris fe test GLU) ost infériour & 3: + Réincuber fa galerie 24 heures (¢ 2 heures) de plus ‘sans rajouter les réactifs + Revéler les tests nécessitant addition de réactife (voir pparagraphe précédent). = Pour compléter Fidentiication, il peut étre utile de realiser des tests complémentaires (se reporter au pparagraphe Identification). Interprétation LLidentifcation est obtenue 4 partir du profil numérique. + Détermination du profi numérique Sur la fiche de résultats, tes tests sont eéparés par ‘groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. La galerie API 20 E comportant 20 tests, fen additionnant & Tintérieur de chaque groupe les valours correspondant & des réactions positives, on obtient 7 chifres ; la réaction de foxydase qui constitue le 21° test est affectée de la valour 4 lorsquielie est positive + identification Elle est réalisée & partir de la base de données (V4.1) * afaide du Catalogue Analytique + Rechercher le profil numérique dans la liste des profs. * Alleide du logiciel didentiication apiweb T™ + Entrer manueliement au clavier le profil numérique & 7 chitfrs ‘ioMarioux SA Frangals-2ap® 20 Par ailleurs dans certains cas, le profil 7 chiffres étant ingufficamment discriminant, les tests. complémentaires suivants sont nécessaires : = Réduction des nitrates en nitites (NO) et en azote (N:) ajouter 1 goutte des réactfs NIT 1 ot NIT 2 dans fe tube GLU, Altendre 2 4 § minutes. Une coloration rouge indique une réaction positive (NO:). Une réaction ‘négative (coloration jaune) peut étre due a la production dezote (éventuelloment signalée par la présence de ‘microbulles) : ajouler 2 & 3 mg de réactif Zn dans fa cupule GLU. Apres § minutes, un tube resté jaune indique une réaction positive (N2) 4 noter sur la fiche de résultats. Sila cupule est orange-rouge, la réaction est négative, les nitrates encore présents dans le tube ont @té réduits en nitrites parle Zine. Cette réaction est interessante pour les bacilles & Gram négatit oxydase postive. NOTE : Pour les mémes raisons que le test indole (se référer & la note du paragraph “Lecture de la galerie’), le test de reduction des nitrates doit ére réalisé en dernier. o7seaH «r= 2000105 = Mobilité (MOB) : Inoculer une ampoule dAPI M Medium (cf notice. - Culture sur gélose de MacConkey (McC) : Ensemencer un milieu de Mac Conkey (cf notice, = Oxydation du glucose (OF-0) : inoculer une ampoule API OF Medium (cf notice). ~ Fermentation du glucose (OF-F) : tneculer une ampoule APL OF Medium (cf notice) Ces tests _complémentaires, _mentionnés dans. Fintroduction (Codage des profil) du Catalogue ‘Analytique, peuvent étre utllisés pour constituer un profil 9 chiffres, identifiable avec le logiciel didentifcation. nee vole 15316 473 (67) Enterobacter gergoviee Diautres tests supplémentaires peuvent étre proposés en ‘cas de faible discrimination, Se référer au logiciel ou Catalogue Analytique. CONTROLE DE QUALITE Les milieux, galeries et réactifs font Tobjet de controles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur fabrication, Un contréle bactériologique des tests de la galerie est de plus réalisable par Tutlisateur avec la souche 1. Escherichia coli ATCC* 25922 de préférence ou Tune des souches suivantes 2. Stenotrophomonas maltophilia ATOC 51331 4. Proteus mirabilis ATCC 35659 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 36657 ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Mansssss, VA 20110-2209, USA Pcl abv | Loc Jone | Lair} |tizs | uRE | TDA] IND] vp} | GEL] | GLU] MAN |INO| SOR|RHA}SAC|MEt | AMY }ARAINOz|Nz*| v ‘observe pour les souches ATCC 12047, ATCC 25022 ot ATCC 36657. + Profi obtenu apres 24-48 H dinoubatio pour fa scuche ATCC 51331, a partir de colonies cuivées sur gélose Trypoase Scja + sang, + Profs oblemus apres 18-24 H dincubation pour les aulros souches, 8 partir de colonias culties sur gélose Trypcase Soja + sang + Suspension bactérienne préparée en API NaC! 0,65 % Medium. Il est de la responsabililé de Fullisateur de s'assurer que le contrdle de qualité est mis en oeuvre conformément a la legislation locale en viguewr. LIMITES DU TEST Le systéme API 20 E est destin€ a fidentiication des Entorobacteriaceae et des baciles & Gram négatif non fastidieux présents dans la base de données (voir ‘Tableau didentification en fin de notice) et & eux seuls. Wl ne peut étre utllsé pour identifier d'autres rmicroorganismes ou exclure leur présence, Des discordances par rapport aux techniques conventionnelles peuvent étre observées. Elles sont dues aux différences de principe des réactions utilisées ‘en technique API. Des écarts de pourceniages peuvent également etre observés et s'expliquent par des variations de substrat + Pour cortaines espéces (ex. Klebsiella ou Profeus), des reactions du test glucose intialement positives peuvent parfois devenir négatives (apparition dune coloration bleu-vert). Dans ce cas, cette réaction doit étre ‘considérée comme négative. Les pourcentages indiqués dans le Tableau d'dentification prennent en compte ce genre de phénoméne. «Dans le cas didentifcation & Saimonelfa ou Shigella, tune identification sérologique doit étre effectuée pour cconfirmer identification bactérienne. «Les baciles & Gram négatif non fermentants, isolés de patients alteints de mucoviscidose, peuvent générer des: pprofils biochimiques atypiques susceptibies dakérer leur identification. '* Soules das cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent étre utilisées. RESULTATS ATTENDUS Se référer au Tableau didentifcation en fin de cette tice pour les résultats attendus des différentes séactions biochimiques, PERFORMANCES + Enferobacteriaceae 5514 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espéces de la base de données ont été testées = 92,80 % des souches ont été correctement identiiées (avec ou sans tests complémentaires). - 4,61 % des souches ront pas été identifiées, = 2159 % des souches ont été mal identifies. + autres baciles & Gram négatif non fastidioux : 2386 souches de diverses otigines et souches de collection appartenant aux espéces de la base de données ont été testées = 90,32 % des souches ont été correctement identifies (avec ou sans tests complémeniaires). = 6,16 % des souches n'ont pas été identifiées, = 3,62 % des souches ont été mal identifies, ‘ioMrieux SA Frangaisoa 206 ‘o7S84H -¢- 200006 ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les {| incombe a chaque laboratoire de gérer les déchets et matériels @ usage unique contaminés en suivant lee jes effluents qUil produit selon leur nature et leur procédures relatives aux produits infectieux ou dangerosite, et cen assurer (ou faire assurer) le Potentolioment infecticux traitement ot éiimination selon les. réglementalions applicables, TABLEAU DE LECTURE ae RESULTATS tests | composanrs cries |, O75] neacrionsrenzymes : NEGATE PosiTie T peace ONPG coor naa 0,223 | (Ortho NitroPhény-8D- incolore jeune (1) galactopyrenes Galactopyranosidese) ‘ADH Larginine 1,9 _| Arginine DiHyydrolese: jaune rouge / orangé (2) ie Lysine 1.9 [Lysine DéCaroniase jaune Touge range (2) ‘0c ‘Lomithine 1.9_|Omithine DéCarbonjate Jame rouge /rangé (2) Lorn) trisodium citrate 0,756 | utilisation du CiTrate vert pale /jaune bleu-vert / blew (3) 1S | _sodumtioeutate | 0076 |prosucion avs incolore erste | eépot not fn Hse URE wee 076 [UREase jue rouge orange @) TDA ipmédiat TA Luyptoptene [0.36 | ryplaphane DésAminase Jame maron-ougesta lootts MMEE Hints Ino Leayptopnane | 0,19. | production c1NDole consi Vers vp2 79min production acttoine Ue] | sodamoyrvate | 19_[Rucion daca Incoore rose pale rose /rouge (5) ie nase | ‘non diffusion iffusion yment noir ce em) | 06 | Geianase (Get ate) EZ ‘ifsion au pigment ‘ermeiationonydaton cw Dalucose 19 | ermatons ona bleu bewvert {une jaune gris fermentation /oxydaton man D-mannitl 19 [femeniston bie rbewver jaune : fermentation exysaten No inostol 19 |fementaten leu bowser jaune fermentation /exyaaton SOR Desert 19 [farntaton! eu blewsert joune z fermentation /oxydaton RHA Lthamese 19 | fermentation ox bie /biewvert jaune a fermaniaton /oxydation sac Desacchar 19 |fementaton oxy bleu / lower jaune fexmeniation /oxydaton mew Dmotbiose 10 | imeniaton/o bee blew jaune femeniaton/xydation awy amygdatine oasr | expert! bleu /biewvert Joure 7 Fermentation /oxydation 7 APA Lerabinoee 19 |fameniation ox bev biewvert Jame ‘OX | (woke du test oydane) [ejochrome-Oxyaese (oir noticed ost oxydase) (1 Une tres légere couleur jaune est également postive. (2) Une couleur orange apparaissant aprés 36-48 H dincubation doit etre considérée négatve, {@) Lecture dans le cupule (zone aérobie). (4) La fermentation commence dans la patie Infrieure des tubes, roxydaton commence dans la cupule. (6) Une i6gere coloration rose apparoissant aprés 10 minutes doi etre lue négatve. ++ Les quantités inciquées peuvent &tre ajustées en fonction des titres des matiéres premieres. + Certaines cupules contiennent des composants d'origine animate, notamment des peptones, biolirieux SA” Francais 4ap@ 20€ TESTS COMPLEMENTAIRES ee RELATE rests | couposawrs acts | STS, | neacnonsenzres | eran — Réduction “NIT 1+ NIT 2/2-5 min yoscon de ose 7 “te, [sessumnicte | core | Prt de NOt i deere tube GLU ‘ZoL6 min tucon au ade Ne er ia Bia Maes woo ees ete reba rete Tt [mon Se taco hae cee peas oF a emerson Soa Bale at ine 0F.0 _|9c08e (API OF Medium) Joxydation : a fair vert, jaune meTHopoLocie po TABLEAU DIDENTIFIGATION Bt BeLIOGRAPHIE an TABLE DES SYHBOLES ny cara, logo eu, AP et pied sont des marques ues, déposées eu enaysites appateart&bMéreuK SA ou 8 Tune de es ls ATCC est une marque apeartanant’ Amecan Type Culture Calecton. es aes marques et noms de preduts meniooné das ce docu son des marques commerciales de burs deters respects BIOME|RIEUX HDs ercouesa au capital de 12 029 970 € RCS LYON 673 620 389 69280 Marcy-TEtolle/ France ‘Tél. 33 (0)4 78 87 20000 Fax 33 (0)4 78 87 2090 itp stww biomerieux com bioMérieux, Ine Box 15969, Durham, NC 2704-0969 / USA Tal. (1) 919.620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11 ce Innpins en France