Diagnóstico, prevención y control de

Enfermedades en Acuicultura, la experiencia de

Chile una situación a considerar.

Relator invitado: Dr. Juan Battaglia Aljaro DMV

Unidad de Microbiología de peces
Veterquimica S.A. Chile
jbattaglia@veterquimica.cl

Puno, Marzo del 2015.

Enfrentando las patologías en acuicultura.

1 • Diagnóstico

2 • Muestreo

3 • Veterinario

4 • Laboratorio

5 • Autoridad

6 • Historial
¿Qué ve el productor?

Deterioro Sostenido

Mortalidad.

Indicadores de crecimiento:
Factor de condición
FCR
SGR
GF3
Observación de sintomatología.
La observación del comportamiento de los peces y la aparición de
anomalías externamente son las primeras señales que el productor
debe pesquisar para tomar las medidas necesarias.
Necropsia.
Actividad que se realiza para analizar la sintomatología de los peces, que
consta de un análisis anatomopatológico externo e interno.
Aquí además se toman las muestras necesarias para los análisis posteriores
que pueden incluir:
Siembra en medios.
Sistema miniaturizados Api®.
Frotis para tinción.
Frotis para IFAT.
Muestras para PCR.
Muestras para CC.
Muestras para ELISA.
Muestra para histología.
Antibiograma y MICs.
Necropsia.
 Frotis para tinción.

Existen diversas metodologías de tinción de frotis, las más utilizadas son:

Tinción de Gram.

Tinción de AOS.

Tinción de Giemsa.
 Métodos convencionales en tubo y placa

Existe una gran variedad de pruebas bioquímicas que se realizan a las

bacterias pero existen algunas que son sumamente importantes, entre
las que se pueden destacar:

Forma celular
Motilidad
Gram
Oxidasa
Catalasa
Crecimiento a diferentes Tº y Salinidades.
Crecimiento en diferentes medios
Cultivos bacterianos.

Comercialmente existen una serie de medios de cultivos que pueden ser

divididos en tres categorías:

Generales
Selectivos o específicos
Metabólicos
Medios generales.
Estos medios se caracterizan por presentar los nutrientes necesarios para el
desarrollo de una gran variedad de bacterias, sin embargo, no todas las bacterias
crecen en este tipo de medio.
Medios generales
Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:

TSA con y sin suplemente de NaCl. En este medio se puede crecer bacterias como Vibrio
anguillarum, V. ordalii, Aeromonas salmonicida y Yersinia ruckeri.

Agar Nutritivo: de amplio espectro.

Agar Chocolate: es un medio sumamente rico en nutrientes y se ocupa ampliamente en la

microbiología. En la acuicultura se utiliza para el crecimiento de P. salmonis.

Agar Marino (2216 de Zobbels): Agar para el aislamiento de bacterias marinas.

Medios Selectivos o específicos

Estos medios se utilizan para aislar los patógenos de otras bacterias

ambientales.

También don usados para aislar bacterias de fastidioso crecimiento,

como Flavobacterium psychrophilum ,Tenacibaculum maritimum o
Renibacterium salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos
Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:

TCBS: Selectivo para Vibrios.

MacConkey: Selectivo para Enterobacterias (Yersinia ruckeri y Aeromonas

salmonicida).

Columbia Blood Agar: Bacterias β Hemoliticas (Streptococcus spp).

TYES / AOA: selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de FW.

FMM: Selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de SW.

KDMC / KDM2: Selectivo para el patógeno de peces Renibacterium

salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos
Medios metabólicos

Estos medios sirven para determinar actividades enzimáticas, degradación de

azucares y aminoácidos principalmente.

Entre los más utilizados para la caracterización de patógenos bacterianos

podemos encontrar:

Medio Descarboxilasa de Moller (Aminoácidos).

OF (Azucares).
Citrato de Simmons.
Medios metabólicos
IFAT.

Immuno Florescent Antibody Technique.

Está técnica sirve para detectar al patógeno directamente en frotis de

órganos y lesiones mediante el uso de anticuerpos específicos que están
marcados con fluoróforos.
Existen una gran variedad de Kits comerciales para la realización de esta
herramienta diagnóstica.
 PCR.
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una herramienta altamente utilizada para la
detección de patógenos bacterianos y virales principalmente.

Existen 2 tipos de PCR

PCR Convencional.
PCR en Tiempo Real.

PCR convencional encontramos 3 tipos de protocolos:

PCR de Detección
PCR de Tipificación
RT–PCR.
PCR convencional (Detección)

En la literatura existe una gran cantidad de protocolos de PCR para la

detección de patógenos bacterianos de peces, entre los que podemos
encontrar:

Aeromonas salmonicida.
Yersinia ruckeri.
Flavobacterium psychrophilum.
Flavobacterium columnare.
Tenacibaculum maritimum.
Piscirickettsia salmonis.
Vibrio anguillarum.
Streptococcus phocae
Streptococcus iniae.
PCR en tiempo real.
PCR de tipificación.
Cultivo Celular
 ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbet Assay.
Ensayo Inmuno–Enzimatico.

Existen dos tipos:

Detección de antígenos.
Detección de anticuerpos.
Histología
Antibiograma y MICs
Antibiograma y MICs

20 µL de Inoculo bacteriano

80 µL de medio cultivo

100 µL de medio de cultivo con

Ab

C- 0,031 0,063 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 C+

32 X X X X X X X X X X X
Antibiograma y MICs.
CMI OT Flavobacterium
CMI FLU Flavobacterium psychrophilum
psychrophilum 4% 4%
0,031 ppm
16% 4%
0,031 ppm 4% 0,063 ppm
16% 4% 32%
20% 4%
0,063 ppm 12% 0,25 ppm
4%
0,125 ppm 0,5 ppm
36% 24%
1 ppm 2 ppm
8%
4 ppm 4 ppm
8%

CMI FFC Flavobacterium CMI AO Flavobacterium

psychrophilum psychrophilum
8% 4% 8% 8%
0,125 ppm 8% 0,063 ppm
4%
32% 0,25 ppm 0,125 ppm
32% 8%
0,5 ppm 2 ppm
16% 1 ppm 68% 8 ppm
4%
4 ppm 16 ppm
32 ppm
Sistemas minuaturizados Api®.
Aglutinación en porta objetos y Dot–Blot.
Western–Blot.
Secuenciación de genes.
Muchas gracias por la atención….