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Biotecnologia Farmacêutica

2017 - 2018

Aulas Práticas

Problemas

1. A produção de biomassa utilizando hexadecano como substrato


limitante pode ser descrita pela seguinte equação:

C16H34 + aO2 + bNH3  cCH1,6600,27N0,20 + eH2O + dCO2


Biomassa

Se o coeficiente respiratório (RQ=moles CO2 produzido/moles O2 consumido)


for 0,43, determine os coeficientes estequiométricos.

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2. O crescimento de uma levedura, S. cerevisiae, em glucose pode,
simplesmente ser descrito pela seguinte equação:

C6H12O6 + 3 O2 + 0,48 NH3  0,48 C6H10NO3 + 4,32 H2O + 3,12 CO2


Levedura

Num fermentador descontínuo de 50 m3, a concentração final de


levedura foi de 5 g (peso seco).dm-3.

Utilizando a estequiometria da reacção:

a) Determine a concentração e a massa total de glucose e de (NH4) 2SO4


no meio de fermentação.

b) Determine os coeficientes de rendimento Yx/s (biomassa / glucose) e


Yx/O2 (biomassa / oxigénio).

c) Determine a massa total de oxigénio necessário.

d) Se a taxa de crescimento, na fase de exponencial, for


rx = 0,7 g(peso seco). dm-3 h-1, determine a velocidade de consumo de oxigénio
(gO2. dm-3.h-1).
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Cinética Microbiana
1. Uma E.coli, para produção de uma proteina recombinante
cresceu, num meio de crescimento em que a glucose era o
substrato limitante, num fermentador descontínuo, e
obtiveram-se os seguintes resultados:

Tempo (h) Conc. Celular Conc. Glucose


(g/L) (g/L)

0 1.25 100.0
9 2.45 97.0
a) Calcule a taxa máxima de
16 5.10 90.4
crescimento específico.
23 10.5 76.9
b) Calcule a taxa ou velocidade
30 22.0 48.1
volumétrica de formação de
34 33.0 20.6
biomassa.
36 37.5 9.38
40 41.0 0.63
42 41.5 0.60 c) Calcule a taxa ou
velocidade volumétrica de
consumo substrato.
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d) Calcule o rendimento em biomassa.

e) Calcule a taxa ou velocidade específica de consumo substrato.

f) Qual a máxima concentração celular que seria de esperar se fosse


utilizada uma concentração inicial de glucose de 120 g/L, com uma
concentração de inóculo idêntica?

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2. Uma linhagem de células de hibridoma de rato é utilizada
para produzir anticorpos monoclonais. O crescimento destas
células em cultura descontínua foi monitorizado, obtendo-se os
seguintes resultados:
Tempo Conc. Celular

(d) (cel.mL-1.10-6)
0 0.45
0.2 0.52
0.5 0.65
1.0 0.81
1.5 1.22
2.0 1.77 a) Determine a taxa específica de
2.5 2.13
crescimento (m).
3.0 3.55
b) Qual o tempo de duplicação da
3.5 4.02
cultura?
4.0 3.77
4.5 2.20

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3. A equação para a produção de ácido acético em aerobiose, a partir de etanol


é:
C2H5OH + O2  CH3CO2H + H2O
(etanol) (ac. Acético)

Acetobacter aceti foi adicionado ao meio, agitado vigorosamente, contendo


10 g L-1 de etanol. Ao fim de algum tempo a concentração de etanol é 2 g L -1
e de ácido acético 7,5 g L-1. Como se compara o rendimento global do ácido
acético a partir do etanol com o rendimento teórico?

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4. Suponha que se pretende produzir penicilina por fermentação
num B.S.T.F. utilizando para o efeito uma E. coli, cuja taxa
específica de crescimento é de 0,35 h-1.
Para uma concentração, após inoculação de 0,012 g.dm-3,
calcule o tempo necessário para que a biomassa aumente de um
fator de 4,5.104.

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5. Ao efectuar-se o estudo do efeito da temperatura na produção


de ácido láctico, pela estirpe Lactobacilus debrucei, obtiveram-
se os valores indicados na tabela seguinte. A partir destes
valores calcule a energia de activação deste processo.

É este valor de energia de activação característico para este


tipo de bioconversão?
Temperatura (ºC) Constante de velocidade
(mol/L h)

40.4 0.0140
36.8 0.0112
33.1 0.0074
30.0 0.0051
25.1 0.0036

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6. A equação seguinte representa o modelo de Luedeking e
Piret para a formação de produto:
rP = a . rx + b . x (kg m-3 h-1)
em que:
rx - taxa volumétrica de formação de biomassa
rP - taxa volumétrica de formação de produto
x – concentração de biomassa
a) Indique as unidades dos parâmetros a e b.

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b) Os valores da tabela seguinte referem-se à produção de ácido


láctico num quimiostato a várias taxas de diluição.
Determine os parâmetros a e b desta fermentação.

Concentração na corrente de
Taxa de saída (kg m-3)
diluição (h-1) Células Ác. láctico
0.10 8.00 24.0
0.20 8.00 16.0
0.30 8.00 13.3
0.35 7.95 12.5
0.39 7.80 11.8

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Fermentação em contínuo

7. Calcule o caudal de alimentação a utilizar num fermentador


contínuo agitado de 150 litros e para que o tempo de
residência médio seja de 2 horas.
Qual a velocidade de diluição deste fermentador?

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8. Numa fermentação contínua (em que o único produto


pretendido é a biomassa microbiana) utilizou-se um CSTF.
Considerando os dados abaixo indicados, determine:

a) a velocidade de diluição máxima a usar

b) a produtividade correspondente.

Dados: mmax = 0,5 h-1 ; Ks = 0,08 g/L ; So = 12 g/L ; x = 2,8 g/L

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9. Apresentam-se a seguir valores experimentais correspondentes à
cultura em modo descontínuo e em modo contínuo, de um
determinado microorganismo.
Sabendo que nos ensaios em contínuo se manteve constante a
concentração do substrato limitante na corrente de alimentação,

a) determine os valores do coeficiente de rendimento biomassa /


substrato (Yx/s).

b) Considere um fermentador de 1 m3, que é igualmente satisfatório


para operação descontínua e contínua. Suponha que o tempo que
decorre entre o final de uma fermentação descontínua e a inoculação
da seguinte é de 2 h.
Com base nos dados apresentados conclua qual o modo de
operação e quais as condições operacionais que permitem atingir a
produtividade mais elevada.

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Cultura Contínua Cultura Descontínua

Taxa [Biomassa] [Lactose] Tempo após [Biomassa]


diluição (kg (peso seco) (kg / m3) inoculação (h) (kg (peso seco)

(h-1) /m3) /m3)

0.012 1.11 0.04 6 0.50

0.022 1.18 - 8 0.60

0.035 1.26 0.03 10 0.75

0.054 1.33 0.11 12 0.94

0.077 1.36 0.16 14 1.18

0.092 1.37 - 16 1.33

0.114 1.25 0.29 18 1.40

0.133 1.21 - 20 1.39

0.161 0.98 0.89

0.172 0.88 1.07

0.205* - -
*wash-out

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10. Numa indústria os responsáveis pela produção são
confrontados com o problema de poderem efectuar a biossíntese
de uma proteina recombinante, num fermentador agitado com
200L de meio complexo, em modo descontínuo ou em modo
contínuo. Uma cultura de E. coli a 30ºC é utilizada para a
produção da referida proteína.
O tempo que decorre entre o final de uma fermentação
descontínua e a inoculação da seguinte é de um dia, enquanto
que a fase exponencial se inicia 2h após a inoculação, com uma
concentração de biomassa de 0,65 g.L-1. A concentração celular
máxima, 10,5 g.L-1, obteve-se a uma taxa máxima de crescimento
específico de 0,35 h-1.

Na fermentação, em modo contínuo, a concentração máxima de


biomassa, 6,5 g.L-1, obteve-se a um caudal volumétrico de 16 Lh-1.

Com base nos dados apresentados conclua qual o modo de


operação a escolher, tendo em consideração a produtividade das
fermentações. Comente.

Biorreactores para Biocatalisadores Imobilizados


1. Uma enzima, em células inteiras de Arthrobacter globiformis
catalisa a conversão de hidrocortisona (massa molecular = 333) a
prednisolona. A células são imobilizadas em esferas de alginato de
cálcio e utilizadas num reactor de leito fixo (tipo pistão) para a
síntese de prednisolona. Esta conversão pode ser descrita pela
cinética de Michaelis-Menten, com uma Kmi de 30 mmol.m-3 e uma K2i
de 12 mmol.h-1U-1. Utilizaram-se 150 kg de células, com uma
actividade enzimática de 75 U/g célula e uma concentraçãao em
substrato na corrente de alimentação de 60 g/L.

a) Determine o grau de conversão do substrato, para um caudal volumétrico


de 4,5 L.h-1.
b) determine o tempo de residência normalizado a um caudal volumétrico
de 6,0 L.h-1.

c) Nesta bioconversão, indique qual seria a sua escolha entre o reactor


contínuo agitado (CSTR) e o de leito fixo (PFR) se a quantidade de enzima
a utilizar fosse a mesma nos dois reactores. Justifique a sua resposta.
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Esterilização
1. Um determinado meio de fermentação, a esterilizar, em
modo descontínuo apresenta 1010 contaminantes
viáveis/cm3, sendo o seu volume de 1,0 m3. Admitindo-se
um risco de contaminação de 1 em 1000 calcule:

a) O factor Del global para esta esterilização.

b) O tempo de permanência a 121ºC, sabendo que os factores Del


de aquecimento e de arrefecimento são, respectivamente, 11,5 e 9,8.

c) Os factores Del globais que resultariam de um factor de escala,


respectivamente de 10 e de 1000.

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