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REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO
1. INTRODUCCION
La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes
proteínas, las cuales son las responsables de los diferentes tipos de sangre.
Existen principalmente dos tipos de proteínas que determinan el tipo de sangre,
la proteína A y la B.
2. OBJETIVO
Comprender el concepto de grupo sanguíneo y conocer los tipos
sanguíneos más importantes.
Conocer las reacciones antígeno-anticuerpo (reactivo y suero
Determinar el grupo sanguíneo ABO.
3. FUNDAMENTO TEORICO
EQUIPOS
Centrifuga
Microscopio
MATERIALES
Tubos de ensayo
Lamina de escoba
Pipeta Pasteur
Sueros reactivos A, B,O
Muestra sanguínea
Gradilla
Solución salina
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
5. CONCLUSIONES
Para determinar a que grupo sanguíneo pertenece nuestra muestra problema
tenemos que tener sueros ya reconocidos
De esa manera nos será más sencillo.
La reacción puede demorar hasta 3 minutos(esperar) no en todos los casos.
6. RECOMENDACIONES
Tener los tubos limpios
Rotular para no confundirse de muestra, ni dar resultados erróneos
Repetir la prueba en caso de dudas para un resultado correcto
7. BIBLIOGRAFIA
Practica desrrollada en clase
http://wiki.fisiologia.me/images/8/8c/Practic8.pdf
http://www.kardiagnostx.com/documentos/Hemato_35.pdf
8. ANEXOS
INFORME
OBJETIVO:
I. IMPORTANCIA:
El control Coombs se utiliza en el laboratorio para comprobar la validez de
los tests negativos (Coombs) de antiglobulina demostrando la actividad
antigamma de la globulina antihumana utilizada en el test. Su preparación
consiste en la sensibilización de hematíes del grupo O D(Rho) positivo con
suero anti-D(Rho) capaz de producir aglutinación en albúmina. Se añade
una cantidad suficiente de anti-D(Rho) para recubrir las células, pero no
aglutinarlas. Cuando la globulina antihumana de un test de antiglobulina no
aglutina las células del test (reacción negativa), ésta permanece en el tubo
de ensayo en un estado activo. Cuando se agregan al tubo de ensayo los
hematíes recubiertos con el control Coombs de ORTHO, la aglutinación
resultante indica la presencia y la actividad de la globulina antihumana.
II. MATERIALES:
Micropipetas Pipetas
Puntas
Tubos de ensayo
Centrifuga
Gradilla
Pipeta pasteur
MUESTRA
sangre anticuagulada
reactivo D
III. PROCEDIMIENTOS
1. Preparan una solusion de glóbulos rojos al 5 % lavados
2. Agregar reactivo anti D 1/12 V/V y tapar con párrafil
3. Incubar a 37° por 1 hora, agitar cada 15 minutos
4. Lavar con solución salina 4 veces
5. Rotular otro tubo, agregar 2 gotas de reactivo anti GH ( anti globulina
Humana ) y una gota de suspensión al 5% de glóbulo rojo.
6. Luego del lavado de glóbulos rojos, con lo que se ha preparado anti D, 1
gota de anti D y 11 gotas de solución salina
el resultado del lavado de glóbulo rojos se echará la misma cantidad de
solución anti D , incubar 15 minutos y agitar y volverlo a incubar 15
minutos por 1 hora
IV. RESULTADOS PRESENCIA de aglutinación
INFORME
OBJETIVO
Determinar la presencia de AC adherido a membrana del hematíe
Introducción a la aglutinación in vitro de hematíes sensibilizado ante la
procedencia de reactivo
I. FUNDAMENTO
Los métodos usualmente empleados en el laboratorio de
inmunohematología evidencian la reacción entre un anticuerpo y su
antígeno correspondiente a través de la aglutinación con el empleo de
reactivos que pueden agruparse en cuatro grupos básicos:
células rojas reactivas
antisueros que contienen anticuerpos dirigidos a antígenos
específicos,
suero de antiglobulina humana (AGH) –que detectan
inmunoglobulinas
complemento anticuerpos
1,2 Dentro del primer grupo, las células rojas reactivas son utilizadas
ampliamente con diferentes propósitos: corroborar grupo sanguíneo
celular mediante la determinación del grupo sanguíneo serológico del
sistema ABO, detectar e identificar anticuerpos atípicos diferentes a los
del sistema ABO (células de pesquisa y de panel celular), para el control
de calidad de reactivos y ensayos de laboratorio utilizados de manera
rutinaria en los bancos de sangre
I. REACTIVO
CCC
Glóbulos rojos O RH (+) lavados, al 5%
Anti D 1/16(1 gota de anti D + 15 gotas de solución salina)
Antiglobulina humana IgG-C3d o suero de coombs de poli especifico
II. MATERIALES
Centrifuga
Tubos de hemolisis,10 ò 12 x 75 mm
Parafilm
Pipetas de pasteur
Papel de filtro
Gradillas para tubos
MUESTRA
Suspensión glóbulos rojos del paciente lavados, al 5%
III. PROCEDIMIENTO
1. Suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio en solución salina al 0.9%
lavados 4 veces
2. Agregar una gota de suero de coombs poliespecifica
3. Mezclar con suavidad y centrifuga por 15 segundos a 3400 RPM o 1 min a
1000 RPM
4. Leer e interpretar los resultados
OBJETIVO
Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados en vitro a los
hematíes del paciente durante un tiempo de incubación en el laboratorio
I. FUNDAMENTO
Investigación de anticuerpos pruebas cruzadas de compatibilidad fenotipos
eritrocitarios
El factor Du es una variante del factor D que tiene gran importancia en las
pruebas de laboratorio porque es antigénica y es importante para saber si es
compatible en las transfusiones de sangre,transplante y embarazos de tal
manera que no aya problema en el organismo de la persona
La prueba indirecta busca anticuerpos contra los glóbulos rojos que fluyen
libremente en el suero sanguíneo, que corresponde al líquido claro y amarillento
que queda después de remover los glóbulos rojos y los materiales coagulantes.
Esta prueba de Coombs indirecta sólo se usa rara vez para diagnosticar una
afección y, con más frecuencia, se utiliza para determinar si una persona podría
tener o no una reacción a una transfusión de sangre. Valores normales La
ausencia de aglutinación (falta de agrupación de células) es lo normal.
Significado de los resultados anormales Una prueba de Coombs directa anormal
(positiva) significa que la persona tiene anticuerpos que actúan contra sus
glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:
II. REACTIVOS
Albúmina bovina al 22%
CCC
Glóbulos rojos “ O” Rh (+) lavados al 5%
Anti-D
Albúmina
MUESTRA: Rh(+- o Rh(-) o Rh(+) débil (variante DU)
III. PROCEDIMIENTO
1. Hacer suspensión de GR 5% del paciente 1 gota de glóbulo rojo y 10
gotas de solución fisiológica
2. Rotular los tubos, agregar 1 gota anti D y mezclar , agregamos 1 gota de
albúmina
3. Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensión de GR del paciente y
centrifuga 1000 RPM x 1 minuto
4. Lectura aglutina 3-4 + = Rh (+)
No aglutina o aglutina débil =continuar con el titulo anti D
IV. INTREPRETACION
D C INTREPRETACION
+ - Rh positivo debil
- - Rh negativo
+ + Prueba no valida
INFORME
II. MATERIALES
Centrifuga
Tubos de ensayo 10 x 75 mm
Parafilm
Pipestas pasteur
Papel de filtro
gradillas
REACTIVOS
Solución fisiológica 0.9% (p/v)
Suero del paciente
Albumina bovina al 22-30 %
Antiglobulina humana poli especifica
III. PROCEDIMIENTOS
PRIMERA FASE
1) Preparar glóbulos rojos del donante al 5 %
2) Rotular 2 tubos (I.II)
3) Disponer 1 gota de glóbulos rojos del donador al tubo
4) Agregar 2 gotas del suero del paciente (receptor)
5) Mezclar suavemente y centrifugar 1000 RPM por minuto
6) Leer el resultado
SEGUNDA FASE
TERCERA FASE
9. Lavar los hematíes 3-4 veces con solución salina, en el último lavado
invertir el tubo sobre papel filtro hasta la obtención de un “botón seco”
10. Agregar 2 gotas del reactivo poli especifico , mezclar y centrifugar a
3500 RPM durante 15 segundos
Examinar si hay aglutinación anotar
11. Agregar una gota de células de control coombs, si la prueba es negativa
Centrifugar leer y anotar los resultados, esta prueba debe ser positiva ,
de lo contrario los resultados no son válidos y el procedimiento debe
repetirse
IV. INTREPRETACION
I. FUNDAMENTO
II. REACTIVOS
Solución salina fisiológica : cloruro de sodio al 0,85 o 1,9 % (p/v)
Albumina bovina al 22-30%
Antiglobulina humana
III. MATERIALES
Centrifuga
Aglutinoscopio
Tubos de ensayo 10 x 75 mm
Parafilm
Pipetas pasteur
Papel filtro
IV. PROCEDIMIENTOS
FASE I
1. Preparar una suspensión de globulos rojos del receptor al 5% en S.F
2. En un tubo de ensayo II gotas del suero del donante
3. Agregar 1 gota de la suspensión de hematies al 5 %del receptor,mezclar
centrigar
4. Observar el sobrenadante para detectar hemolisis .desprender suavemente el
botón de células del fondo del tubo para observar si hay aglutinación . anotar
los resultados tubo en mano
Observar si hay hemolisis desprendemos suavemente el botón celular del
fondo del tubo no hubo aglutinación .seguimos con las fases
FASE II
5. Agregar 2 gotas de albumina de bovina ,mezclar e incubar a 37 C durante 15 a
30 minutos
6. Centrifugar, observar el sobrenadante para evidenciar hemolisis , desprender
suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar los resultados , tubo
en mano
FASE III
7. Lavar 3-4 veces con salina para la prueba de antiglobulina indirecta , en el
ultimo lavado invertir el tubo sobre papel filtro hasta la obtención de un “botón
seco “
8. Agregar II gotas del reactivo poliespicifico,mezclar y centrifugar inmediatamente
examinar si hay aglutinación empleando ayuda visual.anotar los resultados
tubo en mano
9. Agregar una gota de células control de coombs, si la prueba es negativa.
centrifugar y leer resultados . esa prueba debe ser positiva , de lo contrario los
resultados no son validos y el procedimiento completo debe repetirse
10. Agregamos una gota de la CCC si la prueba es negativa
V. INTREPRETACION
Se considera que existe compatibilidad si no se visualiza hemolisis o
aglutinación en ninguno de los pasos de la prueba cruzada
Hemolisis o aglutinación en cualquier paso =incompatible
Aglutinación en primera centrifugación = incompatible x igM
Aglutinación en segunda centrifugación = incompatibilidad x igG
INFORME
DETECCION DE AG SECRETOR
OBJETIVO
Determinar si el paciente tieen el antígeno A o B secretor en la saliva
I. FUNDAMENTO
Se pone en contacto en la saliva con el suero que contiene el anticuerpo
especifico contra el antígeno que se requiere encontrar en la saliva , en
seguida se adiciona hematíes que representan en su superficie el antígeno
estudiado
Si la persona de un grupo B, pone en contacto su saliva , primero con un suero
anti B,posteriormente se adiciona hematies del grupo sanguíneo B .si no
aglutina el paciente tiene Ag B secretor
II. MATERIALES
Centrifuga
Baño maria
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipeta pasteur
Reactivos de antígeno (A,B)
Puntas
Micropipetas
III. PROCEDIMIENTO
1. en un tubo recoger de 3 a 5 ml de saliva del paciente a investigar el antígeno
secretor
2. calentar la saliva durante 10 minutos en baño maria a temperatura de
ebullición ( para destruir las enzimas salivales )
3. centrifugar la saliva a 3500 rpm durante 5 minutos
4. adicionar en un tubo 1 gota del sobrenadante de la saliva
5. adicionar 1 gota del antisuero capaz de reaccionar con el antígeno que se
pretende detectar (A, B) el antisuero a utilizar depende del grupo sanguíneo
a que pertenece el paciente.
6. Mezclar y incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
7. Agregar una gota de la suspensión de hematíes al 5%, según el antígeno
que deseamos detectar en la saliva.
8. Mezclar y incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos
9. Centrifugara 3500 rpm durante 15 segundos
La presencia de aglutinación es considerada negativo y la ausencia de
aglutinación indica positivo
El resultado positivo se produce en personas secretoras y negativo en
personas no secretoras