Sel Inti MALDI-TOF MS pada Sperma : Uji Molekul untuk Diagnosis

Kesuburan Pejantan.
 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dalam dua dekade terakhir spektrofotometri massa telah banyak

digunakan dalam aplikasi biologis, terutama penentuan biomolekul besar.
MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) dapat digunakan untuk
menganalisa biomolekul besar seperti protein, sebelum di radiasi dengan
sinar laser maka protein tersebut harus di co-kristalisasi dengan
menggunakan senyawa kimia tertentu yang disebut sebagai “matriks”.

Kesuburan pejantan dapat digambarkan sebagai keberhasilan dari

spermatozoa untuk menumpuk di oosit, yang merupakan proses yang sangat
rumit, kinerja yang berbeda, sangat berbeda dengan kenyataan pada sel
sperma yang di teliti seperti mortalitas, structural dalam integritas, viabilitas
atau reaksi acrosomik. Masing-masing fungsi ini dapat diuji secara in vitro
untuk mengevaluasi kualitas sperma, namun hasilnya seringkali berkolerasi
buruk dengan kesuburan pejantan asli., jadi perubahan pandangan pengujian
sperma diperlukan. Yang berkembang baru ini dalam bioteknologi reproduksi
adalah penjelasan etiologi infertilitas pejantan melalui proteomic. Cara ini
dibenarkan kenyataanya bahwa spermatozoa matang secara transkripsi dan
genetis dapat menyebabkan fungsi sel-sel alel tersebut sebagian besar
didasarkan pada ekspresi gen awal selama spermatogenesis dan perubahan
protein kompleks dapat modifikasi letak transkripsi yang terjadi pada saat
pematangan
 PEMBAHASAN

Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight (MALDI-

TOF) Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) pertama kali
diperkenalkan pada tahun 1987, adalah teknik ionisasi yang lunak dalam
mass spectrometry untuk menganalisis biomolekul (biopolimer seperti:
protein, peptida dan glukosa) dan molekul organik yang besar (seperti
polimer, dendrimer, dan makromolekul lain). Bahan tersebut cenderung
mudah pecah dan berkeping-keping ketika diionisasi oleh metode ionisasi
yang lebih konvensional.
Maldi-Tof Mass Spectrometry digunakan untuk menganalisis senyawa
dengan berat molekul yang rendah, yaitu protein yang bersifat hidrofobik,
glikoprotein, dan fosfopeptida. Gabungan dari berbagai matriks ternyata
memberikan hasil yang baik. 8,9 Pelarut matriks bersifat mudah menguap,
ketika terjadievaporasi, senyawa matriks, kemudian akan mengkristal dan
bergabung dengan molekul analit. 1,7 Pada saat sinar laser ditembakkan ke
kokristal, matriks-analit tersebut dalam kedap udara tertentu dan akan
menyerap foton dan diablasikan.
Metode baru yang lebih cepat dan lengkap untuk mendeteksi senyawa
hasil metabolisme seperti gula, asam lemak, asam amino, dan senyawa
organik lainnya dari jaringan hewan atau tumbuhan. Matriks terdiri dari
pengkristalan molekul. Identitas sesuai senyawamatriks ditentukan sampai
batas tertentu dengan trial dan error, tetapi didasarkan pada beberapa
pertimbangan desain molekul:·Matriks yang mempunyai cukup berat molekul
rendah tetapi cukup besar untuk tidak menguap selama persiapan
sampel.·Sering bersifat asam, bertindak sebagai sumber proton
untukmendorong ionisasi dari analitik.·
Evaluasi kualitas sperma terutama didasarkan pada ukuran in vitro
fungsi sperma seperti motilitas, viabilitas dan atau reaksi akrosom. Namun,
hasilnya seringkali sangat berkolerasi dengan fertilitas dan alat diagnostic
alternatif diperlukan baik dalam pengobatan hewan dan manusia. Dalam
studi percobaan baru-baru ini, telah menunjukkan bahwa profil MS dari
sperma ayam yang menggunakan profil MALDI dapat mendeteksi perbedaan
yang signifikan antara spermatozoa subur/ subfertil dan menunjukkan bahwa
profil semacam itu dapat berguna untuk pengujian kesuburan pejantan
secara in vitro. Kami juga mengidentifikasi 40% puncak m/z yang diamati
pada profil MS sperma melalui analisis identifikasi protein resolusi tinggi dari
atas sampai bawah. Hal ini menunjukkan bahwa spectrum MALDI-TOF MS
yang diperoleh dari sel sperma utuh mengandaung sebagian besar produk
degradasi protein, banyak terlibat dalam jalur fungsional penting dalam
sperma seperti struktur dan pergerakan metabolisme energi. Protein yang
diidentifikasi oleh model pra-dictif .
Dalam penelitian, kami melakukan prosedur eksperimental standar
yang lebih besar yang dirancang untuk mengembangkan model matematika
prediktif –prediktabelitas berdasarkan profil sel MALDI-TOF sel induk yang
diperoleh melalui metode cepat dan tanpa metode. Metode berbasis sel
MALDI-TOF yang utuh ini menunjukkan akurasi diagnostic yang tinggi dalam
menidentifikasi kesuburan pejantan/ subfertil pada populasi besar pejantan
yang diketahui kesuburan dari dua garis keturunan genetic yang berbeda (
garis petelur daging dan telur)