SISTEMA

FIBRINOLITICO

Bioq Silvina Pons

Laboratorio de Hemostasia
FFyB- UBA

FUNCIONES DEL SISTEMA

FIBRINOLÍTICO
ENDOTELIO DEGRADAR LA MALLA DE
FIBRINA
PLAQUETAS

REPARAR Y REMODELAR LOS

Hemostasia TEJIDOS
EMBRIOGÉNESIS
COAGULACIÓN ANGIOGÉNESIS
INVASIÓN TUMORAL

1
 XII Prouroquinasa
Sistema fibrinolítico t-PA

Uroquinasa
Uroquinasa
PAI-1

Sistema Plasminógeno- Plasmina PLASMINÓGENO PLASMINA

Sistema Activador de Plasminógeno α2AP
HRG
SK FIBRINA
Laboratorio de Hemostasia FFyB-UBA

XII
XII Prouroquinasa
t-PA
t-PA
PK KK

PAI-1
Uroquinasa
Uroquinasa

PAI-1
PLASMINÓGENO PLASMINA
HRG α2AP
SK

FIBRINA pdf

2
 SUSTRATOS DE LA
PLASMINÓGENO PLASMINA
FIBRINA
FIBRINÓGENO
FACTOR Va
FACTOR VIIIa
MMP

FUNCIONES DE LA
PLASMINA

LISAR LA MALLA DE FIBRINA

ACTIVAR MMP

LIBERAR IL-6, α TNF

3
t-PA

UROQUINASA
PROUROQUINASA (SC-UPA)
XII PLASMINA

UROQUINASA (UPA)
PLASMINA

UROQUINASA DE BAJO PM

4
 u-PAR UPA UPAR

Glicoproteína rica en cisteína de 60kD

El C-terminal se une covalentemente a la
membrana por un ancla de GPI.
El N- terminal se une al u-PA.
Permite la activación del u-PA sobre la
superficie celular.

uPA- uPAr

5
 XII Prouroquinasa
FACTOR XII PK KK
Uroquinasa
COAGULACIÓN
Plasminógeno Plasmina
FIBRINOLISIS
Laboratorio de Hemostasia FFyB-UBA
Laboratorio de Hemostasia FFyB-
UBA

XII Prouroquinasa
ESTREPTOQUINASA t-PA
PK KK
Uroquinasa
PAI-1
PLG + SK PLG-SK PAI-1
Plasminógeno Plasmina
HRG α2AP
SK
PLASMINA PLG α2macro
FIBRINA pdf

6
 PAI-1
PAI-1

•Se sintetiza en CE, músc liso,

pool en plaquetas • Reactante de fase aguda

•Existen tres formas: activo, •Inhibe a t-PA y u-PA

latente y unido a vitronectina •NO inhibe a Pro uroquinasa ni
a SK

PAI-2
•Se encuentra en placenta, monocitos y
en muy baja cc. en plasma

• Extracelular: glicosilada y
Intracelular: no glicosilada

•Inhibe a t-PA y a u-PA

7
 TAFI
α2 Antiplasmina Thrombin Activatable Fibrinolysis
Inhibitor

• Procarboxipeptidasa B
• PM: 60000
• CC plasmática: 70 – 275 nM
• Síntesis hepática
• Función: inhibir la fibrinolisis.

TAFI OTROS INHIBIDORES

•PAI-3
•PROTEASA NEXINA
IIa
•α
α2 MACROGLOBULINA
•C1 INHIBIDOR
•HRG

8
 LIPOPROTEÍNA (a)

SISTEMA FIBRINOLÍTICO EN NIÑOS

SANOS NACIDOS A TÉRMINO SIST. FIBRINOLÍTICO EN NIÑOS SANOS
Componente Día 1 Día 180 Adultos Componente 1A5 11 A16 Adultos
fibrinolítico fibrinolítico AÑOS AÑOS
PLASMINÓGENO
UI/ml
1.95 3.0 3.36 PLASMINÓGENO
UI/ml 0.88 0.86 0.99
t-PA t-PA
ng/ml
9.6 2.8 4.9 ng/ml 2.15 2.18 4.9
PAI-1
PAI-1
6.4 8.1 3.6 UI/ml 5.42 6.07 3.6
UI/ml
α 2 ANTIPLSMINA
α 2 ANTIPLSMINA
0.85 1.11 1.02 UI/ml 1.05 0.98 1.02
UI/ml
α 2 MACROGLOBULINA
UI/ ml 1.69 1.56 0.86
α 2 MACROGLOBULINA 1.39 1.91 0.86
UI/ ml Albisetti, M, Albisetti,
2003 2003 Albisetti, M, 2003

9
 PLACA VULNERABLE

t-PA
t-PA es un potente mitogénico y selectivo de la CML

t-PA en la capa fibrosa contribuiría a la

desestabilización de la placa

t- PA relacionado con la severidad de la lesión

Adapted from Libby P. Circulation 1995;91:2844–50

Plasminogeno Plasmina MMP

PAI-1
u-PAR u-PA
MONOCITO
Matriz LIMITA LA AUMENTADO
extracelular EN CÉLULA
MIGRACIÓN CELULAR
Lp(a) y LDL ENDOTELIAL Y
MUSCULAR
LISA

10
 UPA
UPA
CANCER
PAI-1
METASTASIS
UPAR

BUEN
PAI 2 PRONOSTICO

Laboratorio de Hemostasia FFyB-UBA

Leurer C 2015

30 kDa
MMP-3
K5
MMP- 7
ANGIOSTATINA
MMP-9
MMP-12

11
 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD
PLASMÍNICA CELULAR

u-PA PLASMINÓGENO
30 kDa
INHIBE LA MMP u-PAR
ANGIOGÉNESIS K5

ANGIOSTATINA
INDUCE LA
APOPTOSIS DE MMP-3
CÉLULA ENDOTELIAL

FIBRINOGENO /
FIBRINA Futuro terapéutico
MMP-9

PRO MMP-9
PLASMINA
MMP-3

PRO MMP-1 PRO MMP-3

MMP-1
COLÁGENO
PROTEOGLICANOS
ELASTASA
OTRAS
MMP

12
ACTIVACIÓN DEL SISTEMA
FIBRINOLÍTICO

PRODUCTOS DE DEGRADACIÓN

13
 COMPLEJOS SOLUBLES

FORMADOS POR
X0 – PDF X0 – pdf
MF-PDF MF-pdf
X0-YFP X0-E X0 - D
MF-Y0 MF- YFP

Pruebas para evaluar Sistema OBTENCIÓN DE LA

Fibrinolítico MUESTRA

Pruebas globales •SUJETOS

Pruebas inmunológicas
-Reposo de 20min
Pruebas funcionales
Pruebas de estimulación
-Ayunas o desayuno sin grasas
Determinación de actividad plasmínica -Sin alcohol ni tabaco

14
 OBTENCIÓN DE LA PRUEBAS PARA EVALUAR
MUESTRA SISTEMA FIBRINOLÍTICO

•EXTRACCIÓN
Pruebas globales
-Punción venosa limpia, sin estasis Lisis del coagulo
-Citrato ácido Tiempo de lisis de euglobulinas
Placa de fibrina
-Estabilizador de plaquetas (PAI-1)

PROTEÍNAS DE LA FRACCIÓN Pruebas para evaluar Sistema

EUGLOBULÍNICA Fibrinolítico
F I FVIII PAI-1 TAFI tPA Plg α2AP
Ag Ag
% % % % % % %
Pruebas inmunológicas
EUGLO- 71 50 42.4 38.2 90.8 65 7.1 Laurell
BULINA
ELISA

15
 Pruebas para evaluar Sistema SUSTRATOS
Fibrinolítico CROMOGÉNICOS
t- PA
Pruebas funcionales Plasma + Estimulador
Sustratos cromogénicos
plasmina SC Color
a 405nm

SUSTRATOS Pruebas para evaluar Sistema

CROMOGÉNICOS Fibrinolítico

PLASMINÓGENO
Pruebas de estimulación
Plasma + SK Plasmina Ejercicio
Infusión con desmopresina
Oclusión venosa
Color a 405 nm SC

16
 Pruebas para evaluar Sistema DD aumentado en distintas
Fibrinolítico situaciones clínicas
•Infección •Trauma
•Inflamación •Quemaduras
Determinación de actividad plasmínica
•Post cirugía •Post parto
- PDF/pdf
•Cáncer • Embarazo
- Dímero D
•TVP •Stroke
•Embolia de pulmón

Métodos para determinar Dímero D Métodos para determinar Dímero D

ELISA: “GOLD STANDARD”
En microplaca.
Utiliza dos Anticuerpos.
No apto para la urgencia por el tiempo de
realización.
ELFA
Detección final por fluorescencia.
Totalmente automatizado.
ELISA y Quimioluminiscencia:
Detección final por quimioluminiscencia.
Requiere inmunoanalizador.
INMUNOTURBIDIMETRIA: Ac unido a partícula de látex.
Detección óptica.
Automatizado
AGLUTINACIÓN DE G.R.:
Ac híbrido que reacciona con el D-D y los GR.
Lectura visual.
AGLUTINACIÓN CON PARTÍCULAS DE LÁTEX:
Partículas de látex cubiertas con Ac.
Métodos cuali, semicuantitativa
Lectura visual y baja Sensibilidad.

17
 MÉTODOS PARA Métodos para determinar Dímero D
INMUNOCROMATOGRAFIA: Utiliza un Ac de captura sobre una
DETERMINAR DÍMERO D membrana permeable. Luego agregamos la muestra, la
solución de lavado y el 2do Ac.

AGLUTINACIÓN DE G.R.:
Ac híbrido que reacciona con el D-D y los GR.
Aglutinación Lectura visual.

con látex
AGLUTINACIÓN CON PARTÍCULAS DE LÁTEX:
Partículas de látex cubiertas con Ac. Métodos cuali,
semicuanti
Lectura visual y baja Sensibilidad.

MÉTODOS PARA DETERMINAR DÍMERO D-D

MÉTODOS PARA
DETERMINAR DÍMERO D
Método Sensibilidad Especificidad
Inmuno (%) (%)
ELISA Alta Baja Gold standard
filtración ELFA Alto Baja Elisa + fluorescencia

Aglut. Intermedia Intermedia Semicuantitativo

con latex Operador dependiente
Inmuno Alto Intermedia Rápido cuantitativo
turbidime
trico

18
 Calibradores y Unidades
MÉTODOS PARA
• UNIDADES FEU Digestión plasmínica controlada de la
DETERMINAR DÍMERO D Fibrina obtenida a partir de Fibrinógeno purificado en
presencia de XIIIa
Marca Métod Sensibilidad VPN Especificidad
(%) (%) • UNIDADES DDU Fragmentos de Dímero D purificado.
comercial o (%)
Organion ELISA 100 93 39 2 UNIDADES FEU ~ 1 UNIDAD DDU
Stago ELISA 100 94 33
Vidas ELFA 100 96 20
Stago LÁTEX 73 87 62

Anticuerpos Monoclonales MÉTODOS PARA

DETERMINAR DÍMERO D
Estandarización:
• Variedad de equipos comerciales
•Distintas técnicas
•Distintas unidades
•Cut-off
•Calibradores

19
 ALTERACIONES DEL SISTEMA
ALTERACIONES DEL SISTEMA FIBRINOLÍTICO
FIBRINOLÍTICO TENDENCIA HEMORRÁGICA
• Déficit de α2AP
• Déficit de PAI-1
•TENDENCIA TROMBÓTICA Adquiridas
• CID
• Cirrosis
•TENDENCIA HEMORRÁGICA • Cáncer de próstata

ALTERACIONES DEL SISTEMA

PAI-1
FIBRINOLÍTICO
TENDENCIA TROMBÓTICA
TNF TGFb VLDL RE
TATA BOX
• Aumento de PAI-1 4G/5G

• Déficit de t-PA -15 kb -675 -569 -28

• Déficit de Plasminógeno • Polimorfismo 4G/5G en -675

• Genotipo 4G/4G se asocia con niveles elevados
• Disfibrinógeno • Alelo 5G: une activador y supresor
• Aumento de TAFI • Alelo 4G: une solo activador

20
ALTERACIONES DEL SISTEMA ALTERACIONES DEL SISTEMA
FIBRINOLÍTICO FIBRINOLÍTICO

TENDENCIA TROMBÓTICA
TENDENCIA TROMBÓTICA
• Déficit de Plasminógeno
• Déficit de t-PA
2%- 3% de TVP ideopaticas en pac.
Muy raro
jóvenes
Asosciado a disfunción endotelial
TVP, TEP
Plg <40 %

Conjuntivitis lignosa ALTERACIONES DEL SISTEMA

FIBRINOLÍTICO

TENDENCIA TROMBÓTICA

• Disfibrinógeno
• Aumento de TAFI

21
22