Identificação e validação de microssatélites

no cromossomo X humano para aplicação

em Genética Forense

Projeto de Monografia I

Jéssica Nascimento Costa

Filipe Brum Machado
Introdução
1. Marcadores

 Marcadores moleculares ou marcadores genéticos são regiões

no DNA que determinam o perfil genético de um indivíduo.
 padrão ou perfil de fragmentos que lhe é particular

 Marcadores polimórficos, ou seja, regiões que apresentam mais

de um alelo por lócus:
 apresentam dois tipos de polimorfismos: o de comprimento
e o de sequência.

marcadores
Polimorfismo de comprimento e
polimorfismo de sequencias
 O deslizamento
(slippage) da DNA
polimerase durante a
replicação do DNA é
tida como a principal
causa da variação no
número de repetições
nesses locos.

 Os diferentes
números de
repetições
caracterizam os
diferentes alelos.
Marcadores Moleculares
 Polimorfismo de Comprimento

◦ VNTRs - minisatelites:segmentos de DNA contendo cerca de

8 a 100 pares de base repetidos, mais frequentes próximos
aos telômeros

◦ STRs – Microsatelites:unidades de repetição com cerca de 1

a 7 pares de bases, mais distribuída por todo o cromossomo
mais frequentes que os VNTRs e com maior variação.

◦ O microssatélite é o principal tipo de marcador utilizado na

genética forense.
•VNTR marcadores são
detectados usando os sítios de
restrição que flanqueiam
(como mostrado) ou
utilizando iniciadores de PCR,
no caso em que eles são
chamados "VNTR
amplificáveis" ou "AMP-FLPs".

• Sequências de
flanqueamento originais são
usados ​como iniciadores de
PCR com marcadores de STR.
STR - Microsatelite
 São unidades de repetição de pares de bases do
DNA (AT, CG), que são utilizados como marcador
genético em:
◦ estudos de parentescos, as migrações
humanas e de origem humana.

TTTTTTTTTT = T10
AGAGAGAGAGAG = AG6 Mononucleotido
CATCATCATCATCATCAT = CAT6 Dinucleotídeos
TAGTTAGTTAGTTAGTTAGTTAGT = TAGT6 Trinucleotideos
Tetranucleotideos
2. X-STRs na Genética Forense

 Em virtude do alto poder de individualização e

praticabilidade, a análise dos STRs tornou-se uma rotina
amplamente utilizada na prática forense.

 A grande maioria dos exames de vínculo biológico, aborda

os STRs localizados em autossomos e cromossomo Y,
sendo a análise de marcadores do cromossomo X algo
ainda recente (ASAMURA et al., 2006a).
 No entanto, os X-STRs são capazes
de complementar a análise dos
marcadores autossômicos e do
cromossomo Y de forma muito
eficiente

 Pois estes marcadores se

caracterizam por apresentarem
maiores valores de MECs (mean
exclusion chance) que os
autossômicos, ou seja, possuem
uma maior capacidade de excluir
de uma situação de investigação de
paternidade, indivíduos não
relacionados à criança testada e,

 Em virtude disso, suficiente poder

estatístico é obtido quando poucos
X-STRs são analisados (SZIBOR et
al., 2003).
Justificativa
 O repertório de marcadores
microssatélites com potencial aplicação na
Genética Forense é desconhecido;

 Com a inserção de novos genomas

humanos nos bancos de dados públicos,
será possível estabelecer a variação
interindividual em loci de microssatélites
com potencial aplicação na Genética
Forense.
Objetivos
Objetivo Geral
 Identificar e validar marcadores microssatélites no cromossomo X
humano para aplicação em análise forense.

Objetivos específicos
 Identificar in silico microssatélites tetra e pentanucleotídeos no
cromossomo X.

 Validar o polimorfismo dos microssatélites in silico.

 Validar in vitro o polimorfismo observado in silico.

 Determinar parâmetros forenses para os novos marcadores

selecionados.
Metodologia

 Mineração de microssatélites no cromossomo X;

 Critérios de seleção para locos potencialmente
polimórficos;
 Validação in silico do polimorfismo;
 Desenho de Iniciadores;
 Sujeitos da pesquisa;
 Amplificação e caracterização dos novos alvos;
 Mineração de Critérios de seleção
microssatélites para locos
no cromossomo X potencialmente
polimórficos

Banco de dados
Com os Pontuação
cromossomos X (score) e
Discriminação

Software

Tandem Repeat
Finder TRF
Validação in •18-22 nucleotídeos
silico do •com produtos in Sujeitos da
polimorfismo silico de 100 a 450pb pesquisa

Como essas Estimar as

seqüência de frequências
repetições se OligoPerfect
OligoCalc alélicas
dispõe

Multiple
Sequence Desenho de
Alignment Iniciadores
CLUSTALW
Amplificação e Os produtos de
PCR amplificação
caracterização
Quantitativa serão separados
dos novos
Fluorescente por eletroforese
alvos
capilar .

A análise de fragmentos através de eletroforese

capilar é uma técnica amplamente empregada na
pesquisa genética. Essa técnica baseia-se na
determinação do tamanho de fragmentos
amplificados por PCR, utilizando primers marcados
com fluorescência, por comparação com um
marcador de tamanho conhecido (size standard). O
uso de diferentes fluorescências permite a análise
vários fragmentos (lócos) ao mesmo tempo.
CRONOGRAMA DE EXECUÇÃO
Atividades

1o Sem 2o Sem

Identificação in silico de X-STRs

Alinhamento dos microssatélites entre os

genomas referência

Validação in vitro dos microssatélites

Determinação da informatividade dos

novos microssatélites

Redação e defesa da monografia

Orçamento
Referencias
 Butler, J.M. Advanced Topics in Forensic DNA typing. London: Elsevier Academic
Press, 2011, 680p.
 Duarte, F. A. M. CONSELHO NACIONAL DE PESQUISA, Comitê sobre A Avaliação do
DNA Como Prova Forense. Funpec RP, 2001.
 http://www.bgbx.com.br/?pagina=idiograma
 ASAMURA, H.; SAKAI, H.; KOBAYASHI, K.; OTA, M.; FUKUSHIMA, H. MiniXSTR
multiplex system population study in Japan and application to degraded DNA
analysis. Int. J. Legal Med., v.120, p.174-181, 2006b.
 SZIBOR, R.; KRAWCZAK, M.; HERING, S.; EDELMANN, J.; KUHLISCH, E.;KRAUSE,
D. Use of X-linked markers for forensic purposes. Int. J. Legal Med., v.117,p.67–
74, 2003.
 http://www.lifesciences.sourcebioscience.com/genomic-services/faq/microsatellite-
genotyping/
Identificação e validação de microssatélites
no cromossomo X humano para aplicação
em Genética Forense

Projeto de Monografia I

Jessica Nascimento Costa