UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS- ESPE

CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGÍA
INFORME DE MICROBIOLOGÍA I

Integrante: Sasha Siguenza Practica N°: 09

Fecha: 05-07-2017 NRC: 2582

1. TEMA: Siembras bacterias por extensión y profundidad a partir de disoluciones seriadas

de una muestra. Recuento bacteriano.

2. RESUMEN:
Los métodos para siembra son diversos, y cumplen el mismo principio. En la práctica se
usó dos técnicas de siembra una a profundidad y otra por extensión, para este tipo de
siembras es necesario que la muestra este diluida. En el proceso de siembra por
extensión se necesita un codo de vidrio estéril, para expandir la muestra sobre la
superficie del medio sólido. Por otro lado para la técnica de siembra a profundidad es
necesario homogenizar la mezcla de la muestra con el medio diluido y colocarlo en una
caja Petri y dejar que se solidifique. En ambos casos, se debe trabajar cerca del mechero
para evitar cualquier contaminación. Además el objetivo de ambos procesos realizados
es obtener unidades formadoras de colonias, para su posterior estudio y caracterización.
Palabras clave: Codo de vidrio, colonias, Agua de peptona, homogenizar, técnicas de
siembra.

3. JUSTIFICACIÓN:
En la naturaleza, la mayoría de microorganismos se encuentran integrados en
poblaciones mixtas. Para facilitar su estudio es necesario aislarlos, obteniendo cultivos
puros. Una técnica para su asilamiento es aplicar diluciones seriadas de una muestra,
permitiendo la separación física de las colonias sobre la superficie de un medio de cultivo
sólido (Gamazo, 2005).

4. OBJETIVOS:
5.1 OBJETIVO GENERAL:
Sembrar microorganismos por técnicas de extensión y profundidad mediante disoluciones
seriadas de una muestra mixta.
5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Preparar disoluciones seriadas de muestra.
 Sembrar por extensión con codo de vidrio una muestra diluida.
 Sembrar a profundidad a partir de una muestra diluida.
 Hacer recuento de unidades formadoras e colonias.

5. HIPÓTESIS
A partir de disoluciones seriadas de una muestra y la aplicación de técnicas básicas de
extensión y profundidad se logrará obtener unidades formadoras de colonias.

6. MARCO TEÓRICO
En los hábitats naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas y complejas.
Para el estudio de un tipo de microorganismo, se necesita de un cultivo puro, que puede
obtenerse por diversas técnicas de siembra.
 Siembra en profundidad:
Esta técnica requiere que la muestra original este diluida varias veces para la
reducción de la población microbiana, obteniendo colonias separadas cuando se
 siembren. Para esta técnica se mezcla la muestra diluida con el agar líquido y se
coloca en una caja Petri estéril.
 Siembra por extensión:
Es una técnica directa, que hace uso de una muestra previamente diluida, la cual
es colocada sobre el agar sólido y se expande con ayuda de un codo de vidrio.
El resultado es la obtención de células aisladas que formaran colonias
independientes.
Ambos métodos de siembra serán viables, siempre y cuando el medio y el ambiente se
incubación sea el apropiado para la multiplicación de los microorganismos (Monserrat A,
2012).
7. METODOLOGÍA
A. Preparación de la dilución
1. Se tomó 1ml de muestra y se colocó en un frasco con agua destilada estéril
y se mezcló bien.
2. De la mezcla anterior se diluyó 1ml en 9ml de agua peptonada estéril y se
agitó bien.
3. Del tubo 1 se tomó un 1ml con ayuda de otra pipeta estéril y se traspasó
al tubo 2, agitando la muestra diluida.
4. El proceso anterior se realizó hasta el tubo 5, teniendo en cuenta utilizar
una pipeta estéril para cada proceso.
5. Al final de todo el proceso el tubo 5, tendrá una dilución 1:100000.
B. Siembra por extensión
1. A partir del tubo 5, se tomó 1ml con la pipeta estéril y se colocó en el centro
de la caja Petri con agar nutriente, cerca del mechero.
2. Se extendió sobre toda la superficie de la caja con ayuda del codo de vidrio
estéril.
3. Se tapó y se selló con parafilm.
4. Se etiquetó la caja con nombre, NRC, fecha y nombre de microorganismo.
5. Se llevó a incubación por 24h a 37ºC.
C. Siembra a profundidad
1. A partir del tubo 5, se tomó 1ml de muestra diluida y se mezcló con agar
nutriente derretido caliente, y se homogenizó bien.
2. La mezcla de depósito en la base de la caja Petri estéril.
3. Se distribuyó uniformemente.
4. Se tapó y se selló con parafilm.
5. Se etiquetó la caja con nombre, NRC, fecha y nombre de microorganismo.
6. Se llevó a incubación por 24h a 37ºC.
8. RESULTADOS
En la siembra por extensión se obtuvo crecimiento masivo de color amarillo, mientras que
en la siembra a profundidad no se observó ningún crecimiento de microorganismos.

Ejercicio 1 Ejercicio 2
Siembra por extensión Siembra a profundidad
Crecimiento masivo Crecimiento nulo
Foto 1- Fuente: Sasha Siguenza, 2017 Foto 2- Fuente: Sasha Siguenza, 2017
9. DISCUSIÓN
Según (Solano, 2006) para estudiar una bacteria en el laboratorio y poder identificarla, es
necesario tener una población bacteriana homogénea, que permita la obtención de
cultivos puros.
Al analizar los resultados, en ninguna de cajas se obtuvo una colonia pura, y de acuerdo
a lo señalado por (García V. , 2002), para que la siembra sea exitosa es necesario un
trabajo minucioso evitando la contaminación por el ambiente, y que siempre se trabaje
cerca de la lámpara de alcohol, y así reducir al mínimo cualquier contaminación. En la
siembra por extensión se pudo distinguir un crecimiento masivo del microorganismo, que
puede deberse a un incorrecto manejo del material (codo de vidrio), por otro lado en la
siembra a profundidad no hubo crecimiento en ninguna de las cajas, lo que nos lleva a
pensar que no se puso la cantidad suficiente de muestra o se colocó los cultivos a una
temperatura incorrecta en la incubadora, lo que se constata con lo mencionado por
(Delgado, 2012), que nos dice la importancia de un ambiente adecuado para el
crecimiento del microorganismo esto engloba cantidad de nutrientes suficientes en el
medio y temperatura óptima que dependerá del microorganismo que se desee estudiar.

10. CONCLUSIONES
 Se preparó disoluciones seriadas de muestra, utilizando una pipeta estéril para
cada proceso.
 Para la siembra bacteriana ya sea por extensión y a profundidad se utilizó una
muestra diluida, ambas siembras nos permiten obtener un cultivo puro. Que nos
garantiza el estudio de un microorganismo especifico en el laboratorio.
 En cada proceso de siembra se debe cuidar la contaminación, por esta razón se
trabaja cerca del mechero o lámpara del alcohol.

11. BIBLIOGRAFÍA

 Delgado, K. (15 de Abril de 2012). Riesgos de contaminación y medidas preventivas.

Obtenido de http://riesgos-de-contaminacion.blogspot.com/2012/04/riesgos-de-
contaminacion.html
 Gamazo, C. (2005). Manual practico de Microbiologia. España: Elsiver.
 García, P., Fernández , M., & Paredes, F. (2013). Microbiología Clínica . España.
 Leveau J, Bauix M. (2000). Microbiología Industrial. Zaragosa: Acribia.
 Olivas, E. (2012). MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA.
Mexico: ICB.
 Prieto, J. (2011). Microbiologia en la ciencia de la salud. España: Elsevier.
 Solano, C. (2006). Practicas de Microbiologia. Mexico: UPNA.
 Vera, C. (2004). Introduccion a la Microbiologia. Costa Rica: EUNED.
 Williams, & Wilkins. (2000). Pruebas Bioquimicas para identificación de Baterias
Importancia Clinica. Estados Unidos: Medica Panamericana.