ENZIMAS: MECANISMO DE ACCIÓN

IMPORTANCIA BIOMÉDICA
Las enzimas son necesarias para que las reacciones se produzcan a una velocidad adecuada para la célula.
Casi todas las enzimas son proteínas globulares, excepto el RNA y la ribozima.
Para que las reacciones se canalicen hacia rutas que sean útiles en lugar de reacciones colaterales que
despilfarren energía.
Pueda regularse la producción de distintas sustancias según las necesidades. Son esenciales para la
desintegración de nutrientes a fin de que proporcionen energía y bloques de construcción de DNA, proteínas,
membranas, tejidos y todas las funciones conocidas.
LAS ENZIMAS SON CATALIZADORES EFICACES Y MUY ESPECÍFICOS
Las enzimas que catalizan la conversión de uno o más compuestos (sustratos) hacia uno o más compuestos
diferentes (productos) aumentan los índices de la reacción no catalizada correspondiente por factores de al
menos 106.
Igual que los catalizadores, las enzimas no se consumen ni se alteran de manera permanente como
consecuencia de su participación en una reacción.
Son muy eficientes y selectivos. También son catalizadores estereoespecíficos y de manera típica catalizan
reacciones de sólo un estereoisómero de un compuesto dado (p. ej., azúcares D, mas no L; aminoácidos de L
pero no D).
LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR EL TIPO DE REACCIÓN
Los nombres de uso frecuente para casi todas las enzimas describen el tipo de reacción catalizada,
seguido por el sufijo -asa. Los nombres de uso frecuente para casi todas las enzimas describen:

 el sustrato preferente
 el tipo de reacción catalizada
 seguido por el sufijo “asa”
La International Union of Biochemists (IUB) agrupa las enzimas en seis clases:
Oxidorreductasas: (catalizan oxidaciones y reducciones).
Transferasas: (catalizan la transferencia de porciones, como grupos glucosilo, metilo o fosforilo).
Hidrolasas: (catalizan la división hidrolítica de C—C, C—O, C—N y otros enlaces).
Liasas: (catalizan la división de C—C, C—O, C—N y otros enlaces mediante eliminación de átomo,
dejando dobles enlaces).
Isomerasas: (catalizan cambios geométricos o estructurales dentro de una molécula).
Ligasas: (catalizan la unión de dos moléculas acopladas a la hidrólisis de ATP).
A todas las enzimas se les asigna un número de clasificación enzimática EC (enzyme classification) de cuatro
dígitos.
1er dígito: indica uno de los 6 principales clases de enzimas.
El 2do y 3ro indican la subclase y subsubclase de
sustratos.
4to es el número de serie de los grupos químicos de
enzima específica.
LOS GRUPOS PROSTÉTICOS, LOS COFACTORES Y LAS COENZIMAS TIENEN FUNCIONES
IMPORTANTES EN LA CATÁLISIS
Grupos prostéticos
Están estrechamente integrados en la estructura de una enzima Los grupos prostéticos se distinguen
por su incorporación estrecha y estable hacia la estructura de una proteína mediante fuerzas
covalentes o no covalentes. Los ejemplos son fosfato de piridoxal, flavina mononucleótido (FMN),
flavina adenina dinucleótido (FAD), pirofosfato de tiamina, biotina y los iones metálicos de Co, Cu, Mg,
Mn y Zn. Los metales son los grupos prostéticos más comunes.
Cerca de un tercio de todas las enzimas que contienen iones metálicos unidos de manera estrecha se
llama metaloenzimas. Los iones metálicos que participan en reacciones redox por lo general forman
complejos con grupos prostéticos como el hem o agrupaciones de hierroazufre.

Los cofactores se asocian de manera reversible con enzimas o sustratos

Los cofactores desempeñan funciones similares a las de grupos prostéticos, pero se unen de una
manera transitoria y disociable a la enzima o a un sustrato como ATP. Por ende, al contrario de los
grupos prostéticos asociados de manera estable, para que ocurra catálisis debe haber cofactores en el
medio que rodea a la enzima. Los cofactores más comunes también son iones metálicos. Las enzimas
que requieren un cofactor ion metálico se llaman enzimas activadas por metal para distinguirlas de las
metaloenzimas para las cuales los iones metálicos sirven como grupos prostéticos.

Las coenzimas sirven como transbordadores de sustrato

Las coenzimas sirven como transbordadores —o agentes de transferencia de grupo— reciclables, que
transportan muchos sustratos desde su punto de generación hacia su punto de utilización.
La asociación con la coenzima también estabiliza sustratos como átomos de hidrógeno o iones hidrido
que son inestables en el ambiente acuoso de la célula. Otras porciones químicas transportadas por
coenzimas son grupos metilo (folatos), grupos acilo (coenzima A) y oligosacáridos (dolicol).
Las vitaminas B hidrosolubles proporcionan componentes importantes de muchas coenzimas.

LA CATÁLISIS OCURRE EN EL SITIO ACTIVO

El centro catalítico o sitio activo es un sitio de alta especificidad por el sustrato y forma un ambiente
delicadamente ajustado a una sola reacción, generalmente localizado en las enzimas multiméricas en la
interface entre subunidades
Los reactivos llamados sustratos deben colisionar con la enzima.
La colisión molecular tiene que ocurrir en una orientación adecuada (la misma presencia de la enzima
favorece la colisión).
El sustrato debe poseer la suficiente energía de activación para superar el estado de transición (o estado
intermediario).
En el estado de transición se alinean los grupos del sustrato, se forman cargas inestables transitorias y se
reordenan enlaces.
MECANISMOS PARA FACILITAR LA CATÁLISIS
Por proximidad; acercamiento del sustrato con el sitio activo, se genera un ambiente con aumento del
índice de reacción hasta en miles de veces.
Acido básica; los grupos ionizables de las cadenas laterales de aminoácidos promueven un ambiente
ácido o básico
Por tensión; las enzimas proteolíticas rompen enlaces covalentes, prácticamente estiran, debilitan o
deforman el enlace y lo romperán
Covalente; en las enzimas que transfieren grupos, forman un nuevo enlace covalente entre la enzima y el
sustrato mediante un mecanismo de ping-pong (el primer sustrato se une a la enzima y su producto se
libera antes de la unión al segundo sustrato.
LOS SUSTRATOS INDUCEN CAMBIOS CONFORMACIONALES EN ENZIMAS
Si bien el “modelo de cerradura y llave” de Fischer
permitió comprender la especificidad extrema de
interacciones entre enzima y sustrato, la rigidez
implícita del sitio activo de la enzima no explicó los
cambios dinámicos que acompañan a la catálisis.
Esta desventaja fue abordada por el modelo de
adaptación inducida de Daniel Koshland, que declara
que cuando los sustratos se aproximan y se unen a
una enzima, inducen un cambio conformacional, una
modificación análoga a colocar una mano (sustrato)
dentro de un guante (enzima)
LA PROTEASA DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH) ILUSTRA LA CATÁLISIS ACIDOBÁSICA

Las enzimas de la familia de la proteasa aspártica, que incluye la enzima digestiva pepsina, las catepsinas lisosómicas y la
proteasa producida por el VIH, comparten un mecanismo catalítico común.

La proteasa es una enzima que el VIH necesita para completar su proceso de replicación dando lugar a
nuevos virus capaces de infectar otras células
LA QUIMOTRIPSINA Y LA FRUCTOSA-2,6-BISFOSFATASA ILUSTRAN LA CATÁLISIS COVALENTE

Quimotripsina: Si bien se modifica durante el proceso de catálisis, la quimotripsina surge sin cambios en el
momento en que se completa la reacción.
Fructosa-2,6-bisfosfatasa: Es una enzima reguladora de la gluconeogénesis y cataliza la liberación hidrolítica del
fosfato en el carbono 2 de la fructosa 2,6bisfosfato.

LOS RESIDUOS CATALÍTICOS ESTÁN MUY CONSERVADOS

ISOZIMAS/ISOENZIMAS son formas de enzima distintas que catalizan la misma, surgen por medio de duplicación de gen.
Algunas también pueden aumentar la supervivencia al proporcionar una copia de “respaldo” de una enzima esencial.

LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE ENZIMAS FACILITA SU DETECCIÓN

La actividad catalítica de enzimas revela su presencia, facilita su detección y proporciona la base para
inmunovaloraciones ligadas a enzima.

En condiciones apropiadas, el índice de la reacción catalítica que se está monitoreando es proporcional a la cantidad de
enzima presente, lo cual permite inferir su concentración.
 Enzimología de molécula única y análisis de compuestos para descubrir nuevos fármacos

Ahora es posible con la nanotecnología, valorar la actividad de una sola molécula de sustrato.

El descubrimiento de fármacos y otros agentes terapéuticos requiere valoraciones enzimáticas idóneas para
investigación de alta capacidad de procesamiento. Con los sistemas robotizados automatizados junto con los
procesadores de datos y la informática, es posible analizar miles de posibilidades simultáneas de unión enzima-
sustrato.

A esto se le conoce como Química combinatoria, utiliza segmentos de sustratos (farmacóforos) y los almacena
en librerias.

Inmunoanálisis ligado a enzima

Es factible explotar la sensibilidad de las valoraciones enzimáticas con el fin de detectar proteínas que carecen de
actividad catalítica. En el análisis inmunosorbente ligado a enzima (ELISA) se usan anticuerpos enlazados de manera
covalente a una “enzima reportera” como la fosfatasa alcalina o la peroxidasa de rábano picante cuyos productos se
detectan con facilidad, por lo general mediante la absorbancia de luz o por medio de fluorescencia.

El suero u otras muestras biológicas que serán analizadas son colocados en una placa de microtitulación de plástico,
donde las proteínas se adhieren a la superficie de plástico y quedan inmovilizadas. A continuación, cualesquiera
áreas absorbentes restantes del pozo se “bloquean” al añadir una proteína no antigénica, como albúmina de suero
bovino. Entonces se añade una solución de anticuerpo enlazado de manera covalente a una enzima reportera. Los
anticuerpos se adhieren al antígeno inmovilizado y quedan inmovilizados. Después se eliminan mediante lavado las
moléculas de anticuerpo libres excesivas. A continuación, se determinan la presencia y cantidad de anticuerpo unido
al añadir el sustrato para la enzima reportera.

Las deshidrogenasas dependientes de NAD(P)+ son valoradas de manera espectrofotométrica

Las propiedades fisicoquímicas de los reactivos en una reacción catalizada por enzima dictan las opciones para la
valoración de la actividad enzimática. En las valoraciones espectrofotométricas se explota la capacidad de un
sustrato o producto para absorber luz.

Muchas enzimas se valoran al acoplarlas a una deshidrogenasa dependiente de NAD(P)+.

APLICACIONES MÉDICAS

Las enzimas tienen gran valor en el diagnóstico y pronóstico de ciertas enfermedades.

Se mide la actividad biológica (fosfatasa alcalina)

Se utilizan como reactivos para determinar metabolitos (ejemplo urato oxidasa para medir ácido úrico en la sangre).

En la sangre se encuentran dos clases de enzimas: Las de mayor concentración son específicas de la sangre
(coagulación y las del metabolismo de las lipoproteínas).

Las de menor cantidad o inespecíficas. Estas se incrementan cuando se daña un órgano, su cantidad se incrementa
en proporción al daño.

Debido a que pocas enzimas son específicas de un órgano, suele medirse la actividad de varias enzimas (perfiles).

EL ANÁLISIS DE CIERTAS ENZIMAS POR EL LABORATORIO AYUDA AL DIAGNÓSTICO CLÍNICO

El análisis cuantitativo de la actividad de las enzimas en el suero sanguíneo ayuda a determinar el estado patológico.
Después de una lesión, puede aparecer un aumento de ciertas enzimas de acuerdo al órgano en donde ocurrió la lesión
en un determinado tiempo.

LAS ENZIMAS FACILITAN EL DIAGNÓSTICO DE DIVERSAS ENFERMEDADES GENÉTICAS

Las mutaciones en el DNA se traduce en una mala copia de las proteínas (enzimas). Alteran la eficiencia catalítica y la
especificidad de las enzimas.

Las polimerasas en la PCR es capaz de producir miles de copias de segmentos de DNA, detectar alteraciones en las
secuencias de DNA y corroborarse mediante ensayos enzimáticos. Puede usarse para detectar mutaciones genéticas,
identificar agentes patógenos como virus bacterias y parásitos (enfermedad de Chagas, Neisseria meningitidis,
Trypanosoma cruzi.

La detección e fragmentos de restricción facilita el diagnóstico de enfermedades hereditarias utilizando endonucleasas

de restricción (dividen el DNA en sitios específicos), de utilidad para facilitar el diagnóstico prenatal de algunos
trastornos hereditarios entre otros células falciformes, talasemia β, fenilcetonuria en lactantes y enfermedad de
Huntington.

 La mutagénesis dirigida hacia sitio, que se usa para cambiar residuos que se sospecha son importantes en la
catálisis o la unión a sustrato, proporciona información acerca de los mecanismos de acción de enzima.
 Las proteínas de fusión recombinantes, como His marcada o enzimas de fusión de GST, se purifican con facilidad
por medio de cromatografía de afinidad.

EL DNA RECOMBINANTE CONSTITUYE UN IMPORTANTE RECURSO PARA ESTUDIAR ENZIMAS

La tecnología del DNA recombinante es un recurso importante en el estudio de las enzimas. Con la clonación del gen
y la expresión en la bacteria Escherichia coli o en virus, es posible tener enzimas altamente purificadas.

Además, es posible crear proteínas modificadas que se purifican cn cromatografía de afinidad. Una vez expresada la
proteína se pueden dirigir mutagénesis dirigida hacia sitios para cambiar residuos de AA al alterar los codones. Esto
facilita la identificación de las funciones específicas de residuos de AA en la unión sustrato enzima.

FACTORES QUE AFECTAN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS

Efecto de la Temperatura: Las reacciones inorgánicas la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura.
En los sistemas biológicos, un aumento de la temperatura desnaturaliza las proteínas.

Efecto del pH: El pH óptimo de nuestro cuerpo fluctúa entre los extremos de 6.9 y 7.7

Los cambios de pH modifican la carga iónica de los aminoácidos teniendo una consecuencia tremenda en la
actividad enzimática.

ANÁLISIS ENZIMÁTICOS

Dos métodos generales para medir la cantidad de una enzima plasmática y no producen resultados equivalentes:

Actividad enzimática (velocidad de la reacción catalizada por la enzima). Es un método muy simple

Inmunoensayos o por electroforesis.

La actividad enzimática se reporta en unidades internacionales (UI).

UI = Unidad de la enzima que cataliza la conversión de 1 μmol de sustrato en producto por minuto en las
condiciones utilizadas en el análisis.

1 katal (kat) es la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 mol de sustrato en producto por segundo en las
condiciones utilizadas en el análisis.
PRUEBAS FUNCIONALES CARDÍACAS

La cardiopatía coronaria implica daño al músculo cardiaco por obstrucción del riego sanguíneo coronario. Este puede
ser gradual, o repentino, parcial o total.

El infarto del miocardio, es la máxima expresión de la insuficiencia coronaria y se traduce patológicamente

por la existencia de necrosis en una zona del músculo cardíaco.

Infarto al Miocardio

La enzima más utilizada es la CK (creatina cinasa) y la LDH (lactato deshidrogenasa). Se conocen varias formas
enzimáticas de la creatin fosfoquinasa llamadas isoenzimas.

Las isoenzimas en condiciones diferentes a las de infarto al miocardio.

Con frecuencia el patrón de elevaciones de las enzimas en el suero en condiciones diferentes a las del infarto al
miocardio, difiere del que se observa durante el infarto al miocardio.

Los falsos positivos realzan la importancia de efectuar pruebas a múltiples muestras obtenidas a intervalos
adecuados.

El patrón de las isoenzimas que se encuentra en el feto en desarrollo se duplica en el adulto en algunas condiciones
patológicas. Tal alteración se observa con mayor frecuencia en el músculo esquelético.