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ASR

Analytical % Scientific Research

Reporte final

ASR0034.0135.16

Título del estudio: Prueba de eficacia de la sustancia SBP Multiinsecticida, en aerosol, contra
los mosquitos de la especie Anopheles aquasalis

Metodología del Brasil Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria- ANVISA- Manual de


estudio: pruebas de eficacia en productos desinfectantes; prueba de eficacia en
aerosoles frente a insectos voladores. ANVISA, 3ª EDICIÓN, Brasilia 2009.
Cap. 5; pag.21-22

Director de estudio: Dra. Marcia R.T de C. Ranzani


Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n°, km 95- Charqueada-SP
Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3486-0673
Sitio web: www.asrlaboratorio.com.br
Email: marciaranzani@asrlaboratorio.com.br

Patrocinador: Reckitt Benckiser Brasil LTDA


Endereco: Rodivia Tavares, N° 8015, KM 18, Sao Paulo-SP
CEP.:05.577-900

Lugar de prueba: ASR Estudos e Analises Biologicas Ltda


Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n°, km 95- Charqueada-SP
Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3486-0673
Sitio web: www.asrlaboratorio.com.br
Email: asr@asrlaboratorio.com.br

Copia 01 enviada 21/02/2017

ASR Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n, km 95- Charqueada-SP I Brasil I Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3586-0673

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Reporte final

ASR0034.0135.16

Declaración de conformidad con principios de Buenas prácticas de Laboratorio (GLP)

Código del estudio ASR0034.0135.16

Título del estudio: Prueba de eficacia de la sustancia SBP Multiinsecticida, en aerosol, contra
los mosquitos de la especie Anopheles aquasalis

Este estudio fue conducido bajo mi supervisión, siguiendo la metodología descrita en Brasil Agencia
Nacional de Vigilancia Sanitaria- ANVISA- Manual de pruebas de eficacia en productos
desinfectantes; prueba de eficacia en aerosoles frente a insectos voladores. ANVISA, 3ª EDICION,
Brasilia 2009. Cap. 5; pag.21-22 y de acuerdo con los principios de Buenas prácticas de Laboratorio
(GLP) del estándar NIT- DICLA-035 (Revisión 02). PRINCIPIOS DE BUENAS PRACTICAS DE
LABORATORIO – BPL. INMETRO – Instituto Nacional de Metrología, Calidad y Tecnología- Sep /2011
y es un documento complementario que cumple con los principios de las buenas prácticas de
laboratorio recomendadas por la Organización económica de cooperación y desarrollo número 1
OECD Principios de Buenas Practicas de Laboratorio (Revisión 1997). ENV/MC/CHEM (98) 17. Este
reporte representa un preciso y verdadero registro de los resultados obtenidos, toda la data bruta
original, incluyendo un almacenamiento electrónico registrado, el plan de aprobación del estudio,
una copia del reporte final, y otros documentos y materiales relacionados con el estudio serán
mantenidos en el archivo central de ASR- Consultoría en Análisis Científicos Ltda.

No hubo enmendaduras y /o desviaciones desde el plan de estudio.

Firma 21/02/2017

________________________ ______________________

Marcia R.T. de C. Ranzani, Dra Fecha

Director de estudio

ASR Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n, km 95- Charqueada-SP I Brasil I Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3586-0673

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ASR0034.0135.16

Declaración de Programa de Aseguramiento de la Calidad (QAP)

Código del estudio ASR0034.0135.16

Título del estudio: Prueba de eficacia de la sustancia SBP Multiinsecticida, en aerosol,


contra los mosquitos de la especie Anopheles aquasalis

Este reporte ha sido inspeccionado, en relación al plan de estudio, procedimientos estándares de


operación y data bruta, para verificar el cumplimiento de Buenas Prácticas de Laboratorio. Las
inspecciones fueron desarrolladas de acuerdo con los estándares de calidad procedimentados del
Analytical & Scientific Research (ASR) de acuerdo con el estándar No NIT- DICLA-035 (Revisión 02).
PRINCIPIOS DE BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO – BPL. INMETRO – Instituto Nacional de
Metrología, Calidad y Tecnología- Sep /2011 y OECD Número 1 OECD Principios de Buenas Practicas
de Laboratorio (Revisión 1997). ENV/MC/CHEM (98) 17.
La traducción del reporte final fue verificada por Aseguramiento de la Calidad de ASR y representa
una precisa y verdadera traducción del reporte final original emitido 10/11/2016.

Esta copia n°1 del reporte final fue verificada por el Aseguramiento de la Calidad de ASR y representa
una precisa y verdadera traducción del reporte final original emitido 10/11/2016.

El tipo de inspecciones, así como las fechas que fueron reportadas al Director del estudio y el lugar
de las pruebas son presentadas a continuación:

Tipos de Inspección Notificación


Número Descripción Número Descripción
RIGQ n° 0399/16-B Plan de estudio 21/10/2016 21/10/2016
RIGQ n° 0402/16-B Proceso de 26/10/2016 26/10/2016
inspección*
RIGQ n° 0419/16-B Data bruta 10/11/2016 10/11/2016
RIGQ n° 0419/16-B Reporte final 10/11/2016 10/11/2016

Firma 21/02/2017

________________________ ______________________

Ivan Fernando Bortoli Fecha


Gerente de Aseguramiento de Calidad

ASR Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n, km 95- Charqueada-SP I Brasil I Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3586-0673

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ASR0034.0135.16

Aprobación del reporte final por el Gerente del lugar de la prueba

Código del estudio ASR0034.0135.16

Título del estudio: Prueba de eficacia de la sustancia SBP Multiinsecticida, en aerosol,


contra los mosquitos de la especie Anopheles aquasalis

Yo declaro que todo el estudio descrito en este reporte final fue garantizado por el estudio
conducido siguiendo la metodología descrita en “BRASIL, Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria-
ANVISA- Manual de pruebas de eficacia en productos desinfectantes; prueba de eficacia en
aerosoles frente a insectos voladores. ANVISA, 3ª EDICION, Brasilia 2009”. Cap. 4; pag.17-19 y de
acuerdo con los principios de Buenas prácticas de Laboratorio (GLP) del estándar NIT- DICLA-035
(Revisión 02). PRINCIPIOS DE BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO – BPL. INMETRO – Instituto
Nacional de Metrología, Calidad y Tecnología- Sep /2011 y es un documento complementario que
cumple con los principios de las buenas prácticas de laboratorio recomendadas por la Organización
económica de cooperación y desarrollo número 1 OECD Principios de Buenas Practicas de
Laboratorio (Revisión 1997). ENV/MC/CHEM (98) 17. Todos los datos brutos, incluyendo un
almacenamiento electrónico registrado, el plan de aprobación del estudio, una copia del reporte
final, y otros documentos y materiales relacionados con el estudio serán mantenidos en el archivo
central de ASR- Consultoría en Análisis Científicos Ltda. por un periodo de 10 años

Firma 21/02/2017

________________________ ______________________

Marcio Adriani Gava Fecha

Gerente de lugar de la prueba

ASR Sitio Izabel- Rodovia Charqueada-Rio Claro, s/n, km 95- Charqueada-SP I Brasil I Teléfono: +55 (19) 3486 2112 I + 55 (19) 3586-0673

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Índice

Declaración de conformidad con los principios de Buenas Prácticas de Laboratorio (GLP)….. 2


Declaración de programa de aseguramiento de la calidad (QAP)…………………………………………… 3
Aprobación del reporte final por el gerente del sitio de la prueba………………………………………… 4
Resumen……………………………………………………………………………………………………………………………… 7
1. Introducción…………………………………………………………………………………………………………………….. 7
1.1 Objetivo…………………………………………………………………………………………………………………………. 7
1.2 Sitio de la prueba y periodo de conducción del estudio………………………………………………….. 7
1.3 Personal involucrado en el estudio…………………………………………………………………………………. 8
1.4 Almacenamiento……………………………………………………………………………………………………………. 8
2. Materiales y Métodos………………………………………………………………………………………………………. 8
2.1 Información de la sustancia de prueba…………………………………………………………………………… 8
2.2 Equipos………………………………………………………………………………………………………………………….. 9
2.3 Materiales……………………………………………………………………………………………………………………… 9
2.4 Reactivos, soluciones y solventes…………………………………………………………………………………… 9
2.5 Metodología del estudio………………………………………………………………………………………………… 9
2.5.1 Selección de insectos…………………………………………………………………………………………………… 9
2.5.2 Justificación de la elección del sistema de prueba………………………………........................... 10
2.5.3 Origen del sistema de prueba………………………………………………………………………………………. 10
2.5.4 Diseño experimental…………………………………………………………………………………………………… 10
2.5.5 Concentración y dosis de aplicación…………………………………………………………………………….. 10
2.5.6 Método de aplicación………………………………………………………………………………………………….. 10
2.5.7 Metodología de Referencia…………………………………………………………………………………………. 10
2.5.8 Procedimiento experimental………………………………………………………………………………………. 10
2.5.8.1 Limpieza y validación………………………………………………………………………………………………… 10
2.5.8.2 Conducción del estudio……………………………………………………………………………………………. 11
2.5.8.3 Disposición final de insectos……………………………………………………………………………………… 11
2.5.9 Cálculos……………………………………..……………………………………………………………………………….. 11
2.5.9.1 Mortalidad……………………………………………………………………………………………………………….. 11
2.5.9.2 Noqueo……………………………………………………………………………………………………………………. 11
3. Plan de desviación del estudio…………………………………………………………………………………………. 11
4. Enmendaduras del plan de estudio…………………………………………………………………………………… 11
5. Resultados………………………………………………………………………………………………………………………. 12
6. Conclusión………………………………………………………………………………………………………………………. 13
7. Referencias……………………………………………………………………………………………………………………… 14

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Índice de tablas

Tabla 1. Validación (control negativo), numero de insectos en ser noqueados después de 20 minutos
y mortalidad después de 24 horas de exposición de los insectos en la cámara……………………………….12

Tabla 2. Dosis aplicada (mg), número de insectos noqueados en cada tiempo de evaluación por
repetición, promedio de dosis (mg) y porcentaje de noqueo (%KD) en la prueba de tratamiento de
la sustancia………………………………………………………………………………………………………………………………….12

Tabla 3. Valor KT50 (min)………………………………………………………………………………………………………..…….13

Tabla 4. Número de insectos vivos y muertos y porcentaje de mortalidad en el tratamiento de la


sustancia, después de 24 horas de exposición………………………………………………………………………………14

Índice de figuras

Figura 1. Regresión lineal de porcentaje de noqueo durante los 20 minutos después de aplicación
de la sustancia…………………………………………………………………………………………………………………………….13

Anexo

Anexo 1. Copia digitalizada del certificado de análisis……………………………………………………………………15

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Resumen

Este estudio fue conducido de acuerdo al método “Prueba de eficacia en aerosoles frente a insectos
voladores” descrito en el manual de pruebas de eficacia en productos desinfectantes de la Agencia
Nacional de Vigilancia Sanitaria (ANVISA 2009). El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia
insecticida de la sustancia SBP Multi insecticida después de la aplicación espacial al mosquito
Anopheles aquasalis. El tratamiento con la sustancia fue desarrollado con cuatro réplicas, cada
réplica con 50 mosquitos hembra. Todas las fases de la conducción del estudio fueron mantenidas
en las siguientes condiciones ambientales: humedad relativa por encima de 70%, temperatura de
26 ± 2°C y fotofase de 12 horas. Los insectos fueron recolectados 12 horas antes de la iniciación del
estudio en contenedores plásticos con coberturas y después se liberaron a la cámara.
Inmediatamente después de liberar los insectos, la sustancia en prueba fue aplicada. Para los
mosquitos, la validación fue desarrollada antes de conducir la primera prueba del día, con una
prueba en blanco para verificar la ocurrencia de noqueo de los insectos evaluados en la cámara.
Esta prueba fue desarrollada en 50 insectos. La observación fue hecha después de 20 minutos,
contados desde la liberación. En el tratamiento con la sustancia prueba el promedio de dosis usado
fue 1034,75 mg divididos en 4 disparos en puntos diamatricalmente opuestos, para simular una
aplicación espacial. Después de 15 minutos de aplicación, la cámara fue ventilada y a los 20 minutos
los insectos fueron recolectados y enviados al cuarto de incubación con temperatura y humedad
controlada, agua y comida que fue aplicada. Los resultados obtenidos en la validación dela cámara
con el control negativo fue satisfactorio, sin noqueo ni mortalidad observada. En el tratamiento con
la sustancia en prueba, la mortalidad fue del 100% a las 24 horas de evaluación, siendo el estudio
finalizado. De acuerdo con la metodología utilizada, la sustancia de prueba se considera satisfactoria
si la mortalidad alcanza el 90 ± 10% dentro de las 72 horas. De acuerdo al metodología usada, la
sustancia en prueba, SBP Multi Insecticida, fue entonces considerada satisfactoria contra el
mosquito Anopheles aquasalis.

1. Introducción
1.1 Objetivo

El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia de la sustancia en prueba, SBP Multi Insecticida,
en aerosol, contra la especie de mosquito Anopheles aquasalis.

1.2 Lugar de la prueba y periodo de conducción del estudio

Este estudio fue llevado a cabo en el laboratorio de Entomología del Analitycal Scientific Research
ASR – Estudios de análisis biológicas Ltda. Las fechas abajo presentadas representan el periodo en
el cual el estudio fue conducido.
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Inicio del estudio 21/10/2016


Inicio de la fase experimental 07/11/2016
Final de la fase experimental 08/11/2016
Final del estudio 10/11/2016

1.3 Personal involucrado en el estudio

Director del estudio Dra.Marcia Regina Toledo de Camargo Ranzani


Investigador Katia Fernanda Claudino Bastelli
Aseguramiento de Calidad Ivan Fernando Bortoli
Gerente de lugar de prueba Marcio Adriani Gava

1.4 Desde el almacenamiento

Toda la data bruta del plan de estudio, una copia del reporte final y otros documentos y materiales
relacionados con el estudio fueron retenidos en el archivo central del Analytical & Scientific
Research ASR, localizado en Rua Santa Cecilia, 225, Centro, Charqueada-SP y fueron almacenados
por un periodo mínimo de 10 años.

2. Materiales y Método

2.1. Información de la sustancia en prueba:

Sustancia en prueba: SBP Multi Insecticida


Recibida: 19/09/2016
Código ASR: SA-0246/16
Propósito comercial: 00487/16
Nombre común del ingrediente activo:Trasflutina, Imiprotrina y Cipermetrina (2)
Número CAS del ingrediente activo: Transflutina 118712-89-3 (1)
Imiprotrina 72963-72-5 (1)
Cipermetrina 52315-07-8 (1)
Concentración declara del principio Transflutina 0,02% (2)
activo: Imiprotrina 0,02% (2)
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Cipermetrina 0,05% (2)


Composición cuali cuantitativa Componentes Concentración (%)(2)
Transflutina 0,0200
Imiprotrina 0,0200
Cipermetrina 0,0500
BHT 0,0050
Trioleato de Tetraglicerina 0,8999
Isopar L 8,7640
Agua desmineralizada 65,2411
Butano/Propano 25,0000

Número de lote I15/64 (2)


Fecha de manufactura 16/09/2016 (2)
Fecha de expira 16/09/2018 (2)
Tipo de formulación Aerosol
Cantidad recibida 7 botellas
Sustancia en prueba enviada por Reckitt Benckiser Brasil LTDA
(1)
Referencias Pubchem, Data base de química abierta
(2)
Información enviada por el patrocinador

2.2 Equipo

 Balanza semi analítica


 Dosificador de precisión automática
 Cronometro digital
 Termohigrometro
 Cámara de prueba con volumen de 5,8 m3 (Peet Grady Chamber/WHO)
 Sistema de CO2

2.3 Materiales

 Contenedores plásticos de 500 y 1000 ml


 Pistolas
 Aspirador de insectos manual o de batería
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2.4 Reactivos, soluciones y solventes

 Detergente neutro
 Solución de acetona al 10% v/v en alcohol etílico
 10% de solución de azúcar

2.5 Metodología de estudio

2.5.1 Selección de insectos

Las especies de insectos seleccionada fueron mosquitos de la especia Anopheles aquasalis, adultos
de edad 3 a 5 días, criados en el insectario con temperatura y humedad controlada (24 a 28 °C y 70
% respectivamente) alimentados con una dieta específica y aclimatizados por lo menos 12 horas
antes del estudio.

2.5.2 Justificación del sistema de prueba elegido

La especie de mosquitos seleccionada fue recomendada por la metodología de la “Agencia Nacional


de Vigilancia Sanitaria- ANVISA. Manual de pruebas de eficacia en productos desinfectantes”;
prueba de eficacia en aerosoles frente a insectos voladores. ANVISA 3ª edición, Brasilia, 2009”.
Capitulo 5; pagina 21-22

2.5.3 Origen del sistema de prueba

El sistema de prueba fue obtenido del " Laboratorio de Fisiología y control de artrópodos y vectores
(LAFICAVE) da FIOCRUZ / RJ y criados en el insectario de ASR bajo condiciones controladas de
temperatura, humedad y fotofase.

2.5.4 Diseño experimental

El estudio fue conducido usando un control y cuatro repeticiones, con 50 (cincuenta) individuos
femeninos por repetición.

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2.5.5 Concentración y dosis de aplicación

La dosis aplicada fue 1000 ± 50 mg, dividida en 4 disparos diametralmente en puntos opuestos, para
estimular la aplicación espacial, definida como la metodología usada.

2.5.6 Metodología de aplicación

La aplicación fue espacial, el método recomendado por la metodología

2.5.7 Metodología de referencia

BRASIL, “Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria- ANVISA. Manual de pruebas de eficacia en


productos desinfectantes”; prueba de eficacia en aerosoles frente a insectos voladores. ANVISA 3ª
edición, Brasilia, Capitulo 5; pagina 21-22

2.5.8 Procedimiento experimental

2.5.8.1 Limpieza y validación

La cámara fue limpiada por lavado con un detergente neutro, seguido de un enjuague con agua. En
el intervalo de cada repetición, la cámara fue limpiada con solución de acetona en alcohol etílico,
seguido de agotamiento.

La validación fue desarrollada antes de conducir la primera prueba del día, con una prueba en blanco
para verificar la ocurrencia del noqueo de los insectos en la cámara de prueba. Este estudio fue
desarrollado con 50 mosquitos hembra. El valor del noqueo no puede exceder 5% de la población
probada. La observación fue hecha después de 20 minutos, contados desde la liberación.

2.5.8.2 Conducción del estudio

El estudio fue conducido en un ambiente con temperatura y humedad controlada, a 24-28°C y


humedad relativa de 70% respectivamente. Los insectos fueron recolectados en contenedores
plásticos con coberturas y fueron liberados a la cámara. Inmediatamente después de liberar los
insectos, la sustancia en prueba fue aplicada.

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La sustancia en prueba fue aplicada con la ayuda de un dosificador automático a una dosis de 1,000
± 50 mg, dividido en 4 disparos en puntos diamatricalmente opuestos para estimular la aplicación
espacial. El número de insectos noqueados fue grabado a los 40 s, 1 min, 1min 30 s, 2,3,5,7,10,15
and 20 min., usando un cronometro y un contador.

Después de 15 minutos de aplicación, la cámara fue ventilada y en 20 minutos los insectos fueron
recolectados, y transferidos a un contenedor plástico con tapas y mantenidos en incubación con
temperatura y humedad controlada, agua, comida. La mortalidad fue valuada después de 24 horas.

2.5.8.3 Disposición final de insectos

El desecho biológico generado durante la conducción del estudio fue desechado siguiendo el
procedimiento estándar SOP-S-0013

2.5.9 Cálculos

2.5.9.1 Mortalidad

La mortalidad fue calculada siguiendo la siguiente ecuación:

% mortalidad = (numero de insectos muertos/total de insectos) x 100

2.5.9.2 Noqueo

El noqueo fue calculado siguiendo la siguiente ecuación:

% de noqueo= (numero de insectos noqueados/ total de insectos) x 100

KT50:

Desde el análisis de regresión dado por y = a Ln (x) + b, de acuerdo con el SOP-M 0065

KT50= e (50-b/a)

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3. Desviación del plan de estudio

No hubo desviaciones en el plan de estudio

4. Enmendaduras del plan de estudio

No hubo enmendaduras en el plan de estudio

5. Resultados

No se observó ningún noqueo (KD) de ninguno de los insectos en el control negativo después de 20
minutos de exposición y 24 horas después de la incubación no hubo mortalidad observada (Tabla 1)

Tabla 2 muestra la dosis y datos obtenidos del número de insecto noqueados durante los 20 minutos
después de la aplicación de la sustancia de prueba y los porcentajes de noqueo que fueron usado
en la construcción de la curva de regresión (Figura 1), cuyos valores, a y b obtenidos de la ecuación
fue usada para el cálculo de KT50.

En este estudio, el valor KT50 representa el tiempo en minutos por el cual el 50% de la población
cayó debido al efecto de la sustancia en prueba fue de 4.5 minutos (Tabla 3)

Tabla 4 muestra los datos de insectos vivos y muertos y el porcentaje de mortalidad. Las 24 horas
de evaluación, la sustancia logró el 100% de mortalidad.

El certificado de análisis, muestra los resultados del contenido del análisis del ingrediente activo de
la sustancia en prueba Anexo 1

Tabla 1. Validación (control negativo), número de insectos y mortalidad después de 24 horas de


exposición de los insectos en la cámara

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Tabla 2. Dosis aplicada (mg), numero de insectos noqueados en cada tiempo de evaluación de cada
repetición, promedio de dosis (mg) y porcentaje de noqueo (%KD) en el tratamiento de la sustancia
de prueba

Figura 1. Regresión lineal del porcentaje de noqueo durante los 20 minutos de evaluación después
de la aplicación de la sustancia en prueba

Tabla 3. Valor KT50 (min)

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KT 50 (min) 3.9

Tabla 4. Numero de insectos vivos y muertos y porcentaje de mortalidad en el tratamiento de la


sustancia en prueba después de 24 horas de exposición.

6. Conclusión

De acuerdo a la metodología adoptada, la sustancia en prueba SBP Multi Insecticida fue


considerara satisfactoria contra la especie de mosquito Anopheles aquasalis

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7. Referencias

Anexo 1. Copia digitalizada del Certificado de Análisis

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