TINCIONES

Citohistología Humana
Pasos previos a la coloración

Cortes micrótomo

Baño de María a 37°C

Desparafinado en
horno 60°C, hidratación
 TINCIONES
• Proceso mediante el cual un cuerpo es
teñido por una sustancia colorante.
• Sin perder el color cuando es lavado con
un disolvente.
TEORÍAS DE LA COLORACIÓN
1. TEORÍA FÍSICA
– Proceso físico de adsorción
– Penetración en espacios intra e
intercelulares por cohesión molecular
TEORÍAS DE LA COLORACIÓN TEORÍA QUÍMICA
• El colorante se une a la sustancia
combinándose por agrupaciones
moleculares ácidas o básicas
formando uniones iónicas,
covalentes o puentes de Hidrógeno,
formando sales insolubles.
 COLORANTE
–Sustancia que puede conferir
color a otros cuerpos
 Esqueleto
incoloro
(anillo
aromático

cromófo
ro cromó
geno
auxócro
mo
 Clasificación de los colorantes

Por su origen

Naturales Artificiales o sintéticos

• Animales (Carmin)
•Vegetales •Colores de anilinas
(Hematoxilina,
Orceína, safranina)
 COLORANTES NATURALES
• Animales
– Carmín (hembra de cochinilla)

• Vegetales
– Índigo (Indigófera)
– Hematoxilina (Palo de Campeche)
– Orceína (líquenes)
– Safranina (azafrán)
– Achiote
 COLORANTES ARTIFICIALES
• Derivados del benceno.
– cromóforo
• Nitroso Fast green
• Nitro ácido pícrico
• Azo: Naranja G, Rojo Ponceau
• Quinona-imina: azul de
tolueno, safranina, azul de
metileno
• Xanteno: pironina Y,
Rodamina S
• Arilmetano: auramina O,
Fuschina básica
Indigo
COLORANTES ARTIFICIALES
Benceno + cromóforo = cromógeno

• Poseen
– Cromógeno
• Radicales asociados a color
– Auxócromo
• Radicales que intensifican la
acción del cromófono
 Clasificación de los colorantes
(auxócromo)

Ácidos Básicos

Neutros Indiferentes
 Colorantes Ácidos
• Poseen grupos hidroxilo o carboxilo y en
solución liberan iones hidronio y el colorante
queda en carga negativa (aniónicos)
• Afinidad a grupos amino de proteínas,
• Afinidad por componentes
básicos(citoesqueleto).
• tiñe citoplasma rosado o rojo
• Ej.
• Eosinato de Sodio
• Fucsina ácida
• Naranja G
 Colorantes Básicos
Poseen grupos amino los que en solución tienden a
adquirir iones hidronio y el colorante queda con
carga positiva (catiónicos).

• Afinidad a componentes ácidos

– ADN,
– glucosaminoglucanos
• (Es colorante nuclear )
• Ej. Azul de metileno
– Safranina,
– Azul de toluidina
– hematoxilina
 Colorantes neutros
• Son sales en las que tanto la parte básica
como la parte ácida proporcionan color
• Ejemplo:
• Eosinato de azul de metileno
 Colorantes Indiferentes
Realmente no se unen a los elementos
de los tejidos
por afinidad química sino por disolución.
• Ejemplo
– Sudán III
– Rojo escarlata

Tumor ovárico, gotas rojas de lípido teñida por Sudan III

 Por su forma de coloración

Ortocromáticos Policromático

Monocromáticos Metacromático

Pancromático
 Ortocromáticos
• Colorantes que tiñen el tejido de un solo
color, el cual será el mismo que posee la
solución.
• Ej. Eosina Y
 Monocromáticos
• Colorantes que tiñen de un solo color, pero no siempre es el mismo
color de la solución
• Ej. Hematoxilina
 Metacromáticos
• Tiñen de diferentes colores dependiendo el grado de
polimerización en que se encuentren (grado de oxidación
del colorante). Ej. Azul de toluidina

Tinción metacromática
Pulmón: fibrosis de depósitos amiloides
de la lengua
 Policromáticos
• Son mezclas o combinaciones de dos o más colorantes, con esto se
utilizan las propiedades de cada uno de colorantes.
• Eosina A: eosina Y + verde brillante amarillento + café de Bismark

Tinción policromática de estructuras

capilares de pared fina
 Pancromáticos
• Son colorantes o mezclas de colorantes que por su tinción
diferencial se logra distinguir todos los elementos celulares
• Ej. Papanicolaou

Coloración Papanicolaou: Trichomonas vaginalis

 Por su método de coloración

Directos Combinada

Indirectos Simple

Progresivo
 Directos
• Conocida como sustantivo
• Obedece a principios físicos como
capilaridad, osmolaridad, absorción
• Ej. Azul de metileno y eosina
Tinción con Azul de
metileno de corte de
hueso, osteones
 Indirectos
• Conocida como Adjetivo
• Este tipo de coloraciones utiliza mordientes, su función es
la de unir el colorante y la estructura que se va a colorear
• Ej. Cristal Violeta y hematoxilina

Tinción con Cristal

Violeta, B. anthracis
 Progresivos
• Se hace actuar al colorante hasta que llegue a su punto
óptimo
• Es necesario tomar tiempo de tinción se debe determinar
con precisión
• Ej. Wright

Tinción con Wright en

frote sanguíneo
 Regresivos
• Las células y tejido se sobre tiñen y la diferencia la logro
removiendo el exceso de colorante por medio de
soluciones básicas ácidas.
• A este proceso de le llama diferenciación
• Ej. Papanicolaou

Tinción hematoxilina-eosina, en tejido

de próstata
 simple
• Se colorean solo algunos elementos del preparado
• Núcleos, fibras,
• Ej. Eosina, tionina

Tinción nuclear
 combinada
• Utiliza combinación de colorantes o soluciones
• Tiñe una variedad de estructuras celulares y tisulares
• Ej. Papanicoloau

Papanicolaou cervico-vaginal
con coilocitos

Tinción nuclear
Colorante utilizados en
Histología
 HEMATOXILINA …1
• Colorante Vegetal (Extracto de la planta leguminosa
Haematoxylon campechianum, palo de Campeche)
• Colorante básico
• Al oxidarse produce un color morado oscuro hemateína
– Tiñe los núcleos celulares (Hematoxilina de Mayer)
– Tiñe además otras estructuras (Hematoxilina de Harris)
 HEMATOXILINA …2
• Se debe utilizar previa oxidación
– Al aire (varios meses de exposición)
– Oxidantes artificiales
• Óxido de mercurio
• Permanganato de Potasio
• Dicromato potásico

• Colorante indirecto
– En la práctica se utiliza como en forma de laca (mordiente)
hematoxilínica
 HEMATOXILINA …3
• Utiliza mordientes (sustancias que se utilizan para
fijar tintes)
– Iones metálicos
– Sales de Hierro III y Aluminio II

• La hematoxilina puede combinarse junto con otros

colorantes, tales como la eosina o el ácido pícrico, y
en conjunto son capaces de teñir otras estructuras
citoplasmáticas.
HEMATOXILINA …4
 EOSINA…1
• Es un colorante artificial,
• Distingue detalles citoplasmáticos
• Al colorear se observa
– Base incolora
– Parte ácida coloreada
• Color rosado o rojo
 EOSINA…2
• Presenta autofluorescencia espontánea
• Se emplea en soluciones acuosas y alcohólicas
• Se utiliza una bateria de coloración.
 HEMATOXILINA-EOSINA…1
• Es la combinación mas utilizada
• Colorea
– Componentes nucleares -------------- Azul violaceo
– Componentes citoplasmáticos------- Tonalidad rosada
• Es una mezcla policromática neutra
– Hematoxilina ---------------- Básica
– Eosina-------------------------- Ácida
HEMATOXILINA-EOSINA…2
Coloraciones Romanowsky
Coloraciones Romanowsky...1
• Comprende varios colorantes policromáticos
• Lo conforman
– Un colorante ácido Un colorante básico

Es colorante neutro
 Coloraciones Romanowsky...2
• Colorantes básicos
• Azul de metileno (trimetil-tionina) ya que por medio de
y sus derivados oxidación se pueden lograr
son colorantes metacromáticos otras mezclas de azures y
esto es lo que diferencia a los
colorantes Romanowsky de
los otros
Coloraciones Romanowsky...3
• Colorantes ácidos
• Eosina
Y sus derivados Los compuestos más utilizados
son la eosina Y, eosina B,
eritrocina B y Floxina B
 Wright

Giemsa

Leishman
Coloraciones
Romanowsky
May-Grunwald

McNeal

Jenner
 Wright…1
• Es la más utilizada de las mezclas de Romanowsky
• Aplicación

– Frotes Sanguíneos,
– Muestras citológicos
– Fijación simultánea
– características metacromáticas

• Se ve influida por el pH
• Diferentes elementos celulares tengan afinidad selectiva
Wright…2

Tinción con Wright de

un frote sanguíneo
 Giemsa…1
• Segunda en importancia
• Identifica parásitos
– Malaria
– Tripanosomiasis
– Protozoarios
• Debe fijarse con metanol
• Deben prepararse disoluciones adecuadas
Giemsa…2

Microsporium. Sp en
intestino
Coloración Papanicolaou
 Papanicolaou
• George Nicholaus Papanicolaou (1883-1962)
• Prueba más adecuada para el diagnóstico de
cáncer uterino
TINCION DE PAPANICOLAOU
• Hematoxilina: tinción nuclear (Harris)
• Orange G: tinción de queratina y
prequeratina y eritrocitos
• Eosina A (36, 50, 65):
– Eosina Y: tinción del citoplasma de las
células escamosas maduras, cilios y
nucleolos
– Verde brillante amarillento: tiñe verde-azul
las células intermedias y parabasales
– Ácido fosfotúngstico: mordiente para el
verde brillante amarillento
• Café de Bismark R: tinción de la mucina
 Pasos básicos para la tinción
papanicolau
Fijar muestra Hidratación Tinción Nuclear

Tinción
Naranja G Eosina A
citoplasma

Tinción
Deshidratación Azulamiento
citoplasma

Aclaramiento Observación
Coloración Papanicolaou

Coloración Papanicolaou
 Otras Tinciones…1
TINCION ALGUNOS COLORANTES
UTILIZADOS
Intravital Fagocitosis, Azul y Rojo de Tripan, Tinta
china.

Supravital Verde Janus (mitocondrias), Azul de

Cresil (reticulocitos).

Micorrizas coloreadas con Azul

de Tripan
 Otras tinciones….
• Tinción vital:
– Se aplica en tejidos o células vivas
– INTRAVITAL:
• Colorante en suspensión coloidal
• Fagocitado por las células
• Azul y rojo de trypan
• Tinta china
• Supravital:
– Penetran en las células vivas y tiñen
específicamente algunos componentes
– Rojo neutro
– Verde Janus
– Azul de Cresil brillante
 TINCION Algunos Colorantes utilizados
Otras
Reacción de Perls
Tinciones...2
Azul de prusia (hierro)

Histoquímicas Enzimas
Plata de Montana Melanina

Métodos Argénicos Reticulina (P. carinii)

Cristal Violeta Cartílago

Reaccion de Feulgen DNA

Inclusiones intracelulares Carbohidratos

Reacción de PAS
Luxol fast blue
mielina

Bielchowskys
Oro, fibras
reticulares

Tricromico
de Gomori
Tincion de Perls, hemosiderina Tincion argentica, fibras reticulares

Tincion de PAS
Celulas caliciformes
Rojo Sudán
Tinción de lípidos

Fluorescencia
Gracias