Bioquímica Metabólica

Q.F.B. Patricia Alarcón Valdés

M en C. Gabriel Martínez González

MATERIALES QUE LOS ALUMNOS DEBERAN PRESENTAR PARA PODER

REALIZAR PRÁCTICAS DE LABORATORIO:

PERSONAL: Check list

Bata de algodón Institucional, limpia, planchada y con botones.
Manual de prácticas de laboratorio de BIOQUIMICA METABOLICA de la UICUI (no
fotocopias)
Marcador indeleble negro (Sharpie) doble punta
Cinta masking tape de 1 o 2 cm de ancho
Tijeras de acero inoxidable
Una franela para limpieza de mesas (que no suelte pelusas)
Espátula
Perilla o propipeta
Bulbo para pipeta Pasteur
Vidrio de reloj
Piceta de plástico de 250 o 500 mL
Equipo de bioseguridad (Guantes de látex, cubre bocas, lentes de seguridad)
Papel absorbente (Servitoallas)

POR EQUIPO: Check list

Cepillos de diferentes medidas para limpieza de materiales
3 envases de vidrio de 500mL de color ámbar.

POR GRUPO (Este material se deberá entregar al inicio del semestre al laboratorista)
Dos fibras Scotch Brite Cero rayas
Dos litros de jabón líquido para manos
Un litro de gel antibacterial
2 franelas
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PRÁCTICA No. 1

PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS LÍPIDOS.

OBJETIVOS:

Identificar en el laboratorio las propiedades fisicoquímicas que poseen los lípidos.

INTRODUCCIÓN:

Como lípidos se entiende toda especie de naturaleza no polar, cuya característica le da escasa o
nula solubilidad en medio acuoso, sin embargo, en solventes no polares, como el cloroformo,
éter o tetracloruro de carbono es capaz de disolverse. Los lípidos son ubicuos en la naturaleza y
están presentes en grasas animales además de aceites, tienen diversas funciones tanto
estructurales como energéticas.

La literatura informa diversas clasificaciones dependiendo de su estructura, función biológica,

capacidad de hidrólisis, solubilidad, entre otras.

Para facilitar el estudio de los lípidos, los químicos los han dividido en dos clases:

1. LIPIDOS COMPLEJOS: Contienen ácidos grasos unidos a un grupo -OH de otra

molécula; poseen la característica de ser saponificables para formar sales de ácidos grasos
conocidos como jabones. Comprenden de manera general a los fosfolípidos,
esfingolípidos y ceras.

2. LÍPIDOS SIMPLES: En contraste con lo que se pudiera pensar, estos lípidos son
moléculas estructuralmente bastante complejas; no se hidrolizan fácilmente en
disolución acuosa ácida o básica, pues no contienen ácidos grasos. Dentro de este grupo
se incluyen sustancias con las propiedades más variadas, tales como componentes
membranales, vitaminas, hormonas, etc. Los grupos que comprenden son: terpenos,
esteroides y prostaglandinas.

Cuando se trabaja con lípidos, es pertinente conocer si existe o no alguna saponificación, además
de identificarlo como saturado, o no, conocer si contiene algún grupo nitrogenado, además de
grupos fosfatos, etc. Sin embargo, mediante propiedades físicas no resulta fácil la caracterización
o identificación de un cuerpo lípido, pero si puede efectuarse hidrólisis mediante grupos álcalis
o ácidos para conocer si es de naturaleza lipídica, o por medios enzimáticos, realizando lipólisis.
Otros métodos de identificación de tipo cualitativo, son la cromatografía en capa fina, en
columna, o fase de vapor.

MATERIAL Y REACTIVOS:
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- Tubos de ensaye. - Bulbo de hule.

- Gradilla. - Sales biliares al 5%.
- Pipetas graduadas de: 1.0, 5.0 y 10.0 - Aceite de ajonjolí.
mililitros.
- Aceite de algodón. - Aceite de linaza.
- Aceite de cártamo. - Hexano.
- Solución de albúmina al 1%. - Solución de Extrán 100 a
1%
- Solución de Tween 80 al 1%. - Ácido nítrico concentrado.
- Ácido oleico saturado en butanol. - Acido esteárico saturado en
butanol.
- Aceite de ricino. - Éter etílico.
- Cloroformo. - Carbonato de Sodio al 1%.
- Alcohol etílico. - Colesterol
- Azul de metileno (solución al 0.025%
en butanol).
- Butanol.
- Fosfolípidos (lecitina de huevo).

MÉTODOLOGÍA:

A) PRUEBA DE SOLUBILIDAD:

Uno de los criterios para definir a los lípidos es su solubilidad en disolventes orgánicos, por
lo que es conveniente comprobarlo y analizar a qué se debe esta propiedad común de los
lípidos.

PROCEDIMIENTO

 A cinco gotas de los aceites, adicionar 1 mL del solvente por probar y anotar sus
observaciones en cuadro.
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SOLVENTES
LÍPIDO
H2O EtOH Hexano CH3-O-CH3
CARTAMO
AJONJOLÍ
LINAZA
RICINO
 Anota tus observaciones usando cruces para denotar el grado de solubilidad: (-)
insoluble; (+) parcialmente soluble; (++) soluble.

 Escribe tus conclusiones.

B) PRUEBA DE EMULSIFICACION:

En esta prueba el objetivo es comprender dicha propiedad presente en los lípidos, y los
factores que pueden modificarla.

PROCEDIMIENTO

En tubos de ensayo debidamente etiquetados, efectuar las siguientes pruebas, utilizando 5

gotas de aceite y 2 mL del emulsificante en cada caso, agitar fuertemente durante al menos
medio minuto, se deja reposar el tubo y se anotan sus observaciones en el cuadro siguiente:

Na2CO SALES
MUESTR AGU ALCOHO ALBUMIN EXTRA
3 AL BILIARE
A A L A AL 1% N AL 1%
1% S AL 5%
AJONJOLI
ALGODÓ
N
RICINO
LINAZA

PUEDE EMPLEARSE TWEEN-80 AL 1% Y OTROS ACEITES, EN CASO DE NO

DISPONER DE ALGUNO DE LOS ANTERIORES.

ANOTAR EL TIEMPO QUE TARDAN EN ROMPERSE LAS EMULSIONES.

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C) PERMEABILIDAD DE UNA MONOCAPA LIPIDICA:

La membrana juega un papel muy importante en la integridad celular, por lo que es

conveniente comprender su composición y cómo es afectada su permeabilidad al modificar
sus constituyentes lipídicos.

PROCEDIMIENTO.

- Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones del cuadro siguiente,
colocando la solución de butanol-lípido-azul de metileno con cuidado, dejando resbalar
por las paredes del tubo, logrando formar 2 capas.

REACTIVO Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Testigo

Agua destilada (mL) 2 2 2 2 2
Acido esteárico (mL) 2
Ácido oleico (mL) 2
Fosfolípidos (mL) 2
Colesterol (mL) 2
Azul de metileno-
2 2 2 2 2
butanol (mL)
DEJAR EN REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE

OBSERVACIONES:

TIEMPO EN TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TESTIGO

REPOSO (min)
2
8
30
90
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CUESTIONARIO.

1. Explique lo que entiende por molécula anfifílica y escriba un ejemplo en base al

experimento.

2. ¿Cuál es la diferencia entre un lípido saturado, insaturado y un poliinsaturado?

Fundamente su respuesta a nivel molecular.

3. Mencione que tipo y configuración de ácidos grasos predominan en los animales y

plantas superiores

4. ¿A qué se debe que algunos de los lípidos tratados puedan ser más solubles en
determinados disolventes?

5. En el organismo humano, ¿cuál es la finalidad de emulsificar un lípido?

6. Escribe el nombre de algunos agentes emulsificantes en los humanos.

7. ¿Cómo se explica la diferencia entre la solubilidad con alcohol frío y caliente?

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8. ¿Cómo se comportan los lípidos en presencia de: detergentes, proteínas y electrolitos?

9. ¿Qué es la saponificación de lípidos?

10. Investigue otros métodos para el aislamiento, purificación e identificación de lípid

BIBLIOGRAFÍA:

 Mathews, C. K.; Van Holde, K. E.; Ahern, K. G. Bioquímica, 3a Edición, Pearson

education, Madrid 2002.

 Stryer L. Bioquímica 3a Edición, Reverte. 1990.

 Lehninger Albert L. Principios de Bioquímica, edición omega 2001.

 Ornet N. Bioquímica humana, 10a edición, Editorial Panamericana 2003.