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Medio LISS

Solución salina de baja fuerza iónica

I.- Introducción

Cuando una reacción antígeno-anticuerpo ocurre en un medio de baja fuerza iónica se disminuye
el tiempo de incubación requerido. La captura de los anticuerpos aumenta y por consecuencia el
grado de aglutinación también.

Se ha observado que al incubar glóbulos rojos suspendidos en LISS se produce un aumento en


la sensibilidad, lo que da como resultado la detección de una gran variedad de anticuerpos
sanguíneos mediante la prueba indirecta de Coombs. A su vez , el uso de este medio permite
acortar el tiempo de incubación de 60 minutos a 10 minutos, con un aumento en el título de dos a
cuatro veces, sin producir reacciones falsas positivas. Esto fue explicado por Fritzsimmons y
Morel quienes postulan que en un medio de bajo poder iónico, los grupos ionizados tanto del
antígeno como del anticuerpo están expuestos, generándose un aumento en la atracción entre
las cargas opuestas de ambos, y produciéndose un aumento en la velocidad de asociación de
hasta mil veces.

II.- Características
Solución amortiguadora de baja fuerza iónica que contiene fosfato,
glicina y 0,1 % de Azida de Sodio como preservante.

pH: 6,7
Conductividad (23 ºC): 3,7 mmho/cm

III.- Presentación

Frasco gotario x 10 ml
Frasco plástico Nalgene de 500 mL.

IV.- Preparación de la muestra

No se requiere preparación especial del paciente antes de tomar la muestra . La sangre debe
ser recolectada mediante técnicas médicas aprobadas.Para el test de antiglobulina indirecto se
requiere suero fresco (no mas de 48 hrs) . Si se utiliza plasma en el test de antiglobulina
indirecta, no se detectarán los anticuerpos que se unen al complemento ya que el Calcio no está
disponible.
La contaminación bacteriana puede interferir con los resultados y la interpretación del ensayo.
Si se produce una demora en la realización del ensayo la muestra se debe refrigerar entre 2 y
8ºC.
V.- Procedimiento

1.- Lavar 2 o 3 veces los glóbulos rojos en PBS, luego una vez en LISS y resuspenderlos al 2-3
% en LISS.

2.- A un tubo de 10 x 75 o 12 x 75 mm agregar un volumen del suero en estudio y un volumen


igual de la suspensión de glóbulos rojos al 2-3 % en LISS.

3.-Mezclar muy bien e incubar a 37 ºC por 15 minutos en baño termorregulado o en un


incubador.

4.-Centrifugar, observar si hay hemólisis en el sobrenadante, observar si hay aglutinación


resuspendiendo suavemente el botón celular. Registre los resultados.

5.- Continuar con la técnica habitual de Antiglobulina Indirecta.

VI.- Precauciones

1.-Es importante que se coloquen volúmenes iguales de antisuero y suspensión de hematies en


LISS al ser incubados, pues al aumentar el volumen de suero , aumenta a su vez la fuerza
iónica del medio, produciendo disminución de la velocidad de asociación antígeno - anticuerpo.

2.-Al emplear tubos de vidrio en las reacciones, se pueden usar satisfactoriamente pipetas
Pastear corrientes para colocar en ellos las gotas de suero o de suspensión de glóbulos rojos en
LISS, sin embargo al usar tubos plásticos, que poseen fuerzas electrostáticas que atraen las
gotas hacia sus paredes , el volumen varía demasiado entre gota y gota, por lo tanto se
recomienda en estos casos el uso de pipetas automáticas.

3.- Es muy importante lavar los glóbulos rojos en solución salina PBS antes de resuspenderlos
en LISS, ya que de otra manera puede dar lugar a falsos negativos.

4.- Se recomienda preparar la suspensión de Glóbulos rojos en LISS el mismo día que se va a
utilizar y eliminar el resto ya que algunos antígenos se pueden deteriorar con una incubación
prolongada en el medio de baja fuerza iónica.

5.- La solución de Liss debe mantenerse refrigerada entre 2 y 8 ºC, y debe eliminarse después
de abierto el frasco si se observa turbio.

VII.- Referencias

1.- Mollison, P.L. Transfusión de sangre en Medicina Clínica, Editorial Reverté S.A., 1987, p. 609-611,
926.
th
2.-Technical Manual 10 Ed. American Association of Blood banks, Arlington, Virginia ,1990, p.279, 556-
557.

3.- Moore, H., & L. Mollison (1976) Use of a low ionic strength medium in manual test for antibody
detection. Transfusion, 16:291.