1.

TINCIÓN GRAM

1.1. OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de la tinción de Gram.

1.2. ALCANCE

Personal Tecnólogo Médico y Técnico Paramédico de la sección de Bacteriología del

Hospital Regional de Rancagua.

El clínico solicita la técnica de tinción Gram cuando existe una sospecha de una infección

bacteriana.

1.3. RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboración y actualización de las técnicas, protocolos y capacitaciones

desarrolladas para las técnicas de tinción Gram es el Tecnólogo Médico.

1.4. TERMINOLOGIA

Tinción: Una tinción es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el

contraste en la imagen vista al microscopio.

Estandarizar: Se conoce como estandarización al proceso mediante el cual se realiza una

actividad de manera estándar o previamente establecida.

Infección: Es el término clínico para la colonización de un organismo huésped por especies

exteriores, el organismo colonizador es perjudicial para el funcionamiento normal y

supervivencia del huésped, por lo que se califica al microorganismo como patógeno.

1.5. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

1.5.1. FUNDAMENTO:

La tinción de Gram es una de las tinciones más importantes en bacteriología, es un método

que diferencia las bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas,

basado en las diferencias existentes entre las paredes celulares de las bacterias. Ambos

tipos de bacterias se tiñen distintamente debido a estas diferencias constitutivas de su pared.

1.5.2. TIPO DE MUESTRA:

Muestra clínica que requiera de esta tinción.

1.5.3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Materiales:

Portaobjetos 25,4 x 76,2 mm.

Asa calibrada.

Mechero.

Guantes de látex o vinilo.

Reactivos:

Colorante cristal violeta.

Solución de bicarbonato

Lugol.

Decolorante alcohol-acetona.

Colorante de contraste Safranina.

Equipos:

Microscopio

1.5.4. PROCEDIMIENTO:

Marcar un portaobjetos conservado en alcohol y flameado previamente antes de usar y

frío, con el número de muestra a teñir.

En caso de realizar un frotis para tinción a partir de colonias: se inocula una pequeña

cantidad de la colonia a estudiar, sobre una gota de agua puesta en el portaobjetos,

posteriormente esparcir y pasar por la llama del mechero hasta que quede fija.

En caso de realizar un frotis para tinción directo de la muestra: se debe rotar la tórula

extendiendo la muestra en el portaobjeto. Dejar secar.

Añadir 2 gotas aprox. de cristal violeta y además adicionarle igual cantidad de solución de

bicarbonato 1% a la preparación.

- Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.

Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparación con agua corriente sobre el

lavamanos.
 Agregar 2 gotas de solución Lugol a la preparación, y dejar actuar 1 minuto. Transcurrido

el tiempo, lavar de la misma manera al punto anterior.

Con cuidado, añadir gota a gota el alcohol-acetona en la preparación y dejar que

permanezca por 30 segundos,

Luego lavar la preparación de la misma manera que el lavado anterior.

Añadir el colorante de contraste, Safranina hasta cubrir la preparación y dejar actuar

durante 1 minuto y luego lavar.

Dejar secar al aire y observar al microscopio, posteriormente observar al microscopio con

aumento de 40X y 100X.

1.6 FORMULARIOS Y REGISTROS:

Se informaran bacterias como Gram negativas y Gram positivas, así como su característica

morfológica (bacilos o cocos) y su agrupación (diplo, cadena, etc.).

En caso de muestras de expectoración y bronquiales, se informara leucocitos y células. Se

informara en el cuaderno correspondiente a la muestra.