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Trasferencia de embriones en Yeguas

Elaborado por: Enith Mayte Bulla Arias

Código: 201111304

Rotación de granjas

Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia

Facultad de Ciencias Agropecuaria

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Tunja

2017

1
Resumen

En nuestro país se ha intensificado el uso de las biotecnologías reproductivas especialmente la

transferencia de embriones en la producción equina, ya que permite aumentar la eficiencia

reproductiva y ofreciendo al productor ventajas sanitarias, zootécnicas y económicas,

La trasferencia de embriones es una técnica de la reproducción donde se busca explotar las

características fenotípicas y genotípicas de una yegua, básicamente se extrae un embrión del útero

de la yegua donante y se coloca en otra yegua la receptora quien gestara y dará a luz el potro, para

esto debe realizarse un proceso completo que empieza con un examen reproductivo completo de la

yegua donante para saber si la yegua puede ser usada en el programa o diferentes alteraciones

encontrar enfermedades y tratarlas, luego debe hacerse un recelo observando conducta reproductiva

, palpación recalcó y seguimiento con ecografía para monitorizar la actividad folicular, sin dejar de

lado la importancia de la receptora ya que de ello dependerá el éxito de un programa de

transferencia embrionaria.

La súper ovulación se ha desarrollado a nivel de investigación básica con altos costos, y no

representan hoy una herramienta para el área clínica de campo en el país, pero son de gran interés

para el conocimiento de la fisiología, de disfunciones reproductivas y del desarrollo en la especie

debido a el número de folículos que ovulan en respuesta a súper ovulación en la yegua son

limitados.

La principal razón de un programa de reproducción en un criadero es la producción de embriones

y de crías vivas, para hacer más eficiente la reproducción en equinos es fundamental conocimiento

de la fisiología hormonal y su regulación normal de la yegua y para la de la aplicación de cualquier

hormona.

Palabras clave: Embriones equinos, sincronización del celo, aplicación de hormonas.

Yeguas donadoras, yeguas receptoras.

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Abstract

In our country the use of reproductive biotechnologies has been intensified, especially the transfer

of embryos in equine production, since it allows to increase the reproductive efficiency and offering

to the producer sanitary, zootechnical and economic advantages,

Embryo transfer is a technique of reproduction where it is sought to exploit the phenotypic and

genotypic characteristics of a mare, basically an embryo is extracted from the uterus of the donor

mare and placed in another mare the recipient who will be born and give birth to the foal For this a

complete process must be carried out starting with a complete reproductive examination of the

donor mare to know if the mare can be used in the program or different alterations to find diseases

and to treat them, then one should be made a suspicion observing reproductive behavior, palpation

emphasized and Follow up with ultrasound to monitor the follicular activity, without neglecting the

importance of the recipient since this will depend on the success of an embryo transfer program.

Super ovulation has been developed at the level of basic research with high costs, and they do not

represent a tool for the field clinical field in the country, but they are of great interest for the

knowledge of the physiology, reproductive dysfunctions and development in The species due to the

number of follicles that ovulate in response to SOV in the mare are limited.

The main reason for a breeding program in a hatchery is the production of embryos and live

offspring, in order to make breeding more efficient in equines, it is fundamental knowledge of

hormonal physiology and its normal regulation of the mare and for the application of Any hormone.

Key words: Equine embryos, synchronization of estrus, application of hormones.

Donor mares, recipient mares

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Tabla de Contenido

Introducción ........................................................................................................................................ 6
Marco teórico ...................................................................................................................................... 9
Fisiología de la reproducción de la yegua ...................................................................................... 9
Elección de donantes y receptoras............................................................................................. 11
Hembra Donante ....................................................................................................................... 11
Hembra Receptora ..................................................................................................................... 11
Superovulación:............................................................................................................................. 12
Sincronización de celos: ................................................................................................................ 13
Recuperación embrionaria: ........................................................................................................... 14
Transferencia Del Embrión Al Útero De La Yegua Receptora ..................................................... 15
Propuesta ....................................................................................................................................... 17
Conclusiones y Recomendaciones ................................................................................................ 18
Bibliografía ....................................................................................................................................... 19

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Lista de tablas

Tabla 1............................................................................................................................................... 10

Tabla 2............................................................................................................................................... 15

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Introducción

A través de los años con el avance de la biotecnología de la reproducción, ha permitido que cosas

que se pensaban fueran imposibles, se convirtieran en una realidad, esto proporciona a los criadores

de caballos una oportunidad para experimentar directamente con los embriones en busca de la

selección de la genética deseable, rasgos genéticos específicos como el sexo, color, la prevención

de enfermedades genéticas, usando las mejores yeguas y sementales para obtener una descendencia

con mejores desempeños que sus progenitores, y que estos tengas el mayor número de

descendientes. En los últimos años la utilización de esta técnica ha creciendo ya que ha aumentado

el número de criadores que quieren adoptar esta técnica pasando de la utilización de esta,

exclusivamente para yeguas con problema de fertilidad donde la trasferencia de embriones es su

única alternativa para obtener descendencia de estas, ha donadoras más jóvenes que los criadores

quieren aprovechar al máximo su potencial genético sin desgastar animales especialmente los de

competencia , eliminando los riesgos de la gestación y el parto en yeguas con alto valor lo que es

muy bueno ya que el éxito de esta técnica es aceptable en ejemplares jovenes , o desde otro puno

vista animales muy viejos con muy buenas crías de las que se quiera obtener el mayor número de

crías posibles.

Esta tiene grandes ventajas en comparación a la monta natural en las cuales se consideran la

prevención de enfermedades reproductivas como las enfermedades infectocontagiosas, de gran

importancia dentro de estas las enfermedades Zoonoticas como la Brucella; a nivel zootécnico tiene

ventajas competitivas ya que en poco tiempo no solo se aumentan el número de animales, como

animales con alto valor genético.

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Aunque la transferencia de embriones en equinos fue reportada por primera vez en 1972 en Gran

Bretaña por Oguri y Tsutsumi (Oguri N, 1972), aunque estuvo limitada ya que tenía dificultades ya

que se tenía que tener las yeguas donadoras y receptoras en un mismos sitio y hacia fines de la

década de los 80's fue descrita la técnica de enfriamiento de embriones equinos (Carnevale EM,

2010) lo que permitió que los embriones que fueran recolectados en campo les diera un tiempo

corto para que fueran enviados a bancos de receptoras para su posterior transferencia evitan así el

traslado de animales; En Colombia comenzó a hablarse de transferencia de embriones desde

comienzos de la década de los años ochenta y hasta mediados de los años noventa, las empresas y

los veterinarios particulares lograron entre 600 a 1.000 preñeces por año (Gutiérrez, 2010) en

diferentes especies, esta técnica es muy utilizada en Colombia y en otros países siendo Brasil uno

de los pioneros en Suramérica en trasferencia de embriones que exporta.

La trasferencia de embriones en equinos es una técnica avanzada de la reproducción asistida la cual

consiste en extraer un embrión del útero de una yegua con alto valor genético tanto en parámetros

genotípicos como fenotípicos, la madre biológica la donante es inseminada o cubierta al momento

de la ovulación, aproximadamente ocho días después (Ángel & Bran, 2010) y se realiza un lavado

uterino, donde se recolecta los embriones y colocarlo en el útero de otra yegua la receptora; el

número promedio de receptoras por donadora que se requiere para una transferencia debería ser

entre 6 y 11 ; entre 70 y 80% de las receptoras responden a la sincronización (Bolívar, 2008),

En nuestro país la transferencia de embriones ha logrado un posicionamiento significativo en las

prácticas reproductivas equinas, entre las empresas que se destacan por vender genética que va

desde embriones sexados hasta fertilización in vitro, están CGR Biotecnología, con fecundación in

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vitro, Embryogen, In Vitro del Sinú, anteriormente Vitrogen, que entregó el negocio a través de

franquicia, el Centro de Investigación en Medicina y Reproducción Animal de la Universidad de

La Salle, en asocio con una empresa brasileña, la empresa Sembrio Ltda, la Alianza Pro Genética y

Bioembryo Internacional, una alianza empresarial entre la liquidada Ctelca y un laboratorio

brasileño (Gutiérrez, 2010).

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Marco teórico

Fisiología de la reproducción de la yegua

Antes de la aplicación de cualquier hormona es necesario saber la fisiología hormonal y su

regulación normal de la yegua, los nacimientos de muchas especies de grandes mamíferos se

producen en pulsos anuales que son regulados por señales del ambiente, como el fotoperiodo y la

temperatura (Ruiz, 2016) la yegua es poliestrica estacional. El ciclo estral se define como una serie

de procesos repetitivos entre dos ovulaciones consecutivas que preparan la yegua para la

concepción, estos ciclos duran alrededor de 21 días, y la mayoría de yeguas ovulan en un tiempo de

48 horas finalizado el estro (MONTENEGRO, 2006) esta es caracterizada por concentraciones

plasmáticas de progesterona por debajo de 1 ng/ml, pudiéndose dividir en fase folicular (proceso

ovulatorio) y luteal (diestro) (Souza, 2011)

La melatonina, hormona producida durante la noche por la glándula pineal es considerada que

actúa como intermediario entre la percepción del ciclo claro-oscuro y la respuesta Hipotálamo-

hipofisiaria en esta especie. (Palmer y Guillaume,1962). El aumento de la luz solar hacia los largos

días de verano estimula la retina, la cual transmite una señal neuronal a los núcleos

supraquiasmáticos a través del hipotálamo (tracto retinohipotalámico), se hace sinapsis a la glándula

pineal para estimular la liberación de neurotransmisores inhibitorios hacia los pinealocitos, esta

proyección es realizada por las células ganglionares de la retina, y la entrada fótica es mediada por

el glutamato y la adenilciclasa desde la hipófisis (Kalsbeek A, 2006)A continuación, la producción

de melatonina disminuye, en el hipotalamose produce así la liberación de Hormona Liberadora de

Gonadotropina (GnRH), que aumenta la Hormona Luteinizante (LH) y la Hormona Folículo

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Estimulante (FSH), las cuales producen el desarrollo folicular del ovario produciendo un folículo el

cual actúa como glándula encargada de la producción de estrógenos, responsables de la disminución

del tono uterino y el comportamiento de la yegua en celo y en última instancia induce la ciclicidad

reproductiva (Kalsbeek et al., 2006).

Después de la ovulación empieza el periodo llamado el diestro en el cual la hormona dominante es

la progesterona, secretada por el cuerpo lúteo (CL) hasta los 14 a 16 días post-ovulación. (Restrepo,

2011) Si en este momento no hay una vesícula embrionaria en el útero el mecanismo bioquímico-

inmunológico que regula el reconocimiento maternal de la gestación no recibe señales del embrión

y desencadena un aumento de prostaglandina PGF2alfa en el endometrio, posiblemente alentado o,

al menos coordinado por la oxitocina. La PGF2alfa causa la luteolisis y regresión posterior del CL.

(Higuera, 2013) Al mismo tiempo, tiempo que disminuye la concentración de la progesterona, la de

estrógenos comienza a aumentar, a medida que comienza una nueva ola de crecimiento folicular

(Souza, 2011).

Tabla 1

Niveles hormonales y actividad ovárica durante el ciclo estral de la yegua

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Elección de donantes y receptoras

La transferencia de embriones es un delicado y minucioso procedimiento reproductivo que está

supeditado a una serie de pasos o etapas de riguroso cumplimiento como la elección de las hembras

donantes y selección de hembras receptoras.

Hembra Donante

Es necesario realizar un examen reproductivo completo donde se valorará el estado del útero y la

fase reproductiva en la que se encuentra y los antecedentes de fertilidad, (Lopez, 2009) si en el

examen reproductivo como endometritis se deberá tratar la yegua antes de sometida a un programa

de transferencia de embriones, el manejo de la donante incluye el recelo (retajeo) para monitorear la

conducta reproductiva, la palpación rectal y ultrasonografía para monitorear la actividad folicular

durante el ciclo estral. (Carnevale EM, 2010), se consideran como potenciales donantes: las yeguas

viejas que ya no se pueden gestar, yeguas en entrenamiento o en competición, potras de dos años,

hembras que tienen una historia de pérdida embrionaria por causas hormonales o

endometriales, yeguas con defectos adquiridos en los miembros locomotores, hembras con mamitis

(Bran, 2017).

Hembra Receptora

La selección y el manejo de la yegua receptora es posiblemente el factor más importante que afecta

el éxito de un programa de transferencia embrionaria. Las yeguas receptoras deben tener ciclos

estrales normales, y estar libres de anormalidades uterinas y ováricas. La edad óptima de las yeguas

receptoras es de 3 a 10 años. La sincronización entre la yegua donante y la yegua receptora puede

ser llevada a cabo usando prostaglandina F2α (PGF2α) sola o combinada con progesterona exógena.

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Las yeguas en celo son examinadas diariamente por palpación rectal y ultrasonografía para

monitorear el crecimiento folicular y detectar la ovulación (Higuera, 2013). La sincronización de la

ovulación entre la yegua receptora y la yegua donante tiene un intervalo de +1 a -3 días (ej: la yegua

receptora puede ovular un día antes y hasta 3 días después que la yegua donante).

Con el objetivo de eliminar la necesidad de sincronizar yeguas donantes y receptoras, se han

utilizado yeguas ovariectomizadas tratadas con progestágenos como receptoras sin embargo, el

éxito obtenido varía y el método no ha sido ampliamente adoptado (Vanderwall, 2011). Se utilizan

yeguas que han ovulado un día antes o de 0 a 3 días después de la yegua donante, también hay que

tener muy en cuenta el tamaño de la hembra ya que esto influirá también en tamaño del potro a

término.

Durante el celo, la donante es examinada diariamente para evaluar el crecimiento folicular que

permite saber el momento óptimo de la inseminación con semen fresco, refrigerado o congelado. La

ovulación es inducida utilizando gonadotrofina coránica humana (; 5 UI/kg. EV o IM) o la

aplicación de agonistas de la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH) acetato de deslorelin;

2.2 mg pellet subcutáneo). El día de la ovulación es detectado y designado como Día 0, y está

precedida aproximadamente de 5 a 7 días de actividad estrogenica caracterizada por altos niveles de

estradiol. Actualmente no hay ningún método practico y eficiente para inducir la superovulación en

las yeguas y esto limita la eficiencia de la transferencia embrionaria (Carnevale EM, 2010). Lo

óptimo es tener tres receptoras por cada donante.

Superovulación:

La yegua es monovulatoria por medio de protocolos de súper ovulación se busca inducir múltiples

ovulaciones para aumentar potencialmente la recuperación de embriones para la transferencia

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inmediata o criopreservación, anatómicamente la yegua no está diseñada para múltiples ovulación

así como se pueden obtener en otras especies como la vaca, debido al poco espacio disponible en la

fosa de la ovulación y al gran tamaño de los folículos preovulatorios en esta especie. (Ángel &

Bran, 2010)

Por lo dicho anteriormente los protocolos de superovulación, aunque en la literatura se reportan sus

resultados han sido limitados, hace algún tiempo, está disponible en el mercado un preparado de

FSH equina (FSHe) purificada la FSHe es eficiente pero existen inconvenientes para superovular

algunas yeguas debido a la amplia variación en la respuesta por cada individuo (Logan NL, 2007)

Sincronización de celos:

Para sincronizar los celos se tiene que evaluar primero el ciclo reproductivo en el la hembra se

encuentre y se deberá utilizar un método diferente según la fase que se encuentre, para esto examina

diariamente por palpación rectal y ultrasonidos para monitorizar el crecimiento folicular y detectar

la ovulación.

Existen diferentes métodos básicos para sincronizar las yeguas, el cual va indicado según la

individualidad de la yegua:

En casos que exista una yegua con un cuerpo lúteo.5 Podemos actuar utilizando prostaglandinas; la

PGF2a provoca la lisis del CL mediante la acción directa sobre las células lútea s y también,

indirectamente, a través de reducciones de suministro de sangre al CL (Reproducción equina) esta

acortaría la fase lúteal y reiniciaría el ciclo.

Los inductores de ovulación se pueden utilizar cuando la yegua falla en ovular en varias ocasiones

dentro de 48 horas ocurrido el servicio, o si se falla en forma repetida regresión folicular o el

excesivo tamaño de los mismos, la GN-RH inyectable es aplicada en la dosis de 0.04 mg. de

buserelina (fsh y lh), vía intramuscular 6 hrs. antes del servicio. (Ángel & Bran, 2010)

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Se utilizan tratamientos con progesterona intravaginal o progestágenos los cuales pueden ser

aplicados en cualquier momento del ciclo, se mantienen durante 7 a 9 días y al retirarlos se da una

dosis de PGF2alfa. (Ángel & Bran, 2010).

Los implantes subcutáneos de deslorelim (folicular) son muy efectivos aplicados al momento del

servicio provocando la ovulación dentro de las 24 a 48 hs. Post- implante (Oguri N, 1972)

Recuperación embrionaria:

Los embriones equinos son selectivamente transportados a través del oviducto hacia el ˙tero entre

los día 5-½ a 6 postovulación, el tamaño del embrión crece exageradamente hasta blastocito

expandido. Aunque los embriones pueden ser recuperados entre los días 6 y 9 después de la

ovulación, los días óptimos son el séptimo o el octavo (Vanderwall, 2011).

Consecuentemente para la obtención del embrión se procede a hacer un lavado uterino

transcervical o flushing la cual empieza con el lavado de la zona del periné usando detergente

suave, se enjuaga muy bien con agua limpia y se seca. Se coloca un guante de plástico estéril en el

brazo y gel lubricante estéril, luego introduce el catéter o la sonda estéril, que cuenta con un balón

en la vagina. Después de la introducción del catéter en la vagina éste es colocado a través del

cérvix en el cuerpo uterino, el balón es insuflado con 80 cc de aire o solución salina estéril y luego

se tracciona hacia atrás contra el orificio cervical interno para prevenir la pérdida de líquido. Una

vez colocado el catéter, el ˙tero es lavado tres a cuatro veces con solución salina amortiguada con

fosfatos puro o modificado (DPBS) previamente entibiado (30 - 35º C) conteniendo 1% (v/v) de

suero fetal bovino, penicilina (100 unidades/ml) y estreptomicina (100 µg/ml; (Vanderwall, 2011).

El ˙útero es llenado con 1 a 2 litros de DPBS en cada lavado (4 a 8 litros son usados durante todo el

proceso de recolección). Después de llenado el ˙tero se le permite al líquido salir y pasar a través de

un filtro para embriones La infusión y recuperación de líquido en el útero debe realizarse por
14
gravedad; generalmente se utiliza 1 Litro de solución salina fosfatada buffer o ringer lactato

(Hartman) por lavado, para un total de tres a cinco lavados continuos. (Angel, 2010) El líquido del

lavado es conducido a través de un filtro, una vez finalizado el lavado el contenido del filtro es

vaciado en una caja de Petri con cuadrícula para la búsqueda y enjuagado en el estereoscopio para

localizar el embrión.

Tabla 2

Sistemas de clasificación de embriones equinos

Transferencia Del Embrión Al Útero De La Yegua Receptora

La transferencia del embrión al útero de la yegua receptora es una de las fases más delicadas de la

técnica, dentro de las cuales existen dos tipos quirúrgica y no quirúrgica sin importar si el embrión

es congelado o se transfiere in vivo,

El embrión es lavado y transferido al útero de la hembra receptora se ha observado diferencia en

tasas de gestación cuando las receptoras ovulan entre un día antes y tres días luego de la hembra

donadora. El embrión es cargado en una pajilla de inseminación y luego en una pistola para

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transferencia de embriones. Al parecer es importante no dilatar el cérvix con los dedos e ir retirando

la pistola de transferencia al momento de liberar el embrión para que no roce con los pliegues

uterinos (Logan NL, 2007)

La transferencia del embrión al útero de la yegua receptora es una de las fases más delicadas de la

técnica. Existen dos tipos: quirúrgica y no quirúrgica. La primera se realiza mediante incisión en el

flanco del ijar, para acceder a un cuerno del útero. Evidentemente, tiene el riesgo de toda técnica

quirúrgica, mientras que la segunda es fácil de realizar vía transvaginal, con un resultado de 50-75%

de éxito (Vanderwall, 2011). Actualmente, se realizan más las técnicas no quirúrgicas o vaginales,

introduciendo el embrión en el cuerpo uterino de la yegua receptora, vía cerviz, con la ayuda de un

catéter de inseminación ya que están producen un buen resultado igual o incluso se habla de

superior que la técnica quirúrgica.

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Propuesta

Surge como una necesidad del departamento de Boyacá, crear un banco de receptoras en la Granja

experimental Tunguavita ubicada en el municipio de Paipa vereda el Salitre, ya que en los últimos

años la reproducción asistida en Colombia ha ido tomando mucha fuerza y cada vez tenemos

diversas formas de obtener cigotos de yeguas élite; el objetivo es un embrión de excelente calidad

listo para ser transferido a su madre sustituta.

Por lo expuesto anteriormente, la propuesta está basada en tres pilares; en primer lugar la Granja

experimental Tunguavita, cuenta con vientres de yeguas que cumplen con las cualidades aptas para

ser candidatas a receptoras dentro de las que se encuentran mansedumbre, ya que son animales

descosquillados, se dejan llevar de cabestro, entran al brete de palpación sin miedo, buena sanidad y

habilidad materna en su mayoría.

En segundo lugar, la granja cuenta con instalaciones adecuadas para la puesta en marcha de esta

propuesta ya posee un laboratorio de Biotecnología, con elementos óptimos para el desarrollo de la

transferencia de embriones.

En tercer lugar y no menos importante, se tiene un excelente recurso humano compuesto por

profesores, estudiantes y personal de planta idóneo para llevar a cabo esta propuesta; además de

fortalecer la consecución del conocimiento a través de la práctica y puesta en marcha de un banco

de receptoras.

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Conclusiones y Recomendaciones

 Se puede concluir que los programas de transferencia embrionaria se utilizan para avanzar

en programas de selección y manejo genético, y son muy importantes para un plan de

reproducción y medicina reproductiva, para favorecer la reproducción de animales que

padecen serias disfunciones orgánicas, sean estas reproductivas o no.

 Ante una necesidad inminente en el departamento podemos aprovechar los espacios que

dispone la granja experimental Tunguavita en pro de los criaderos

 Por medio de la puesta en marcha de esta propuesta podemos generar espacios de

investigación en áreas como la fisiología, embriología y genética, así como extensión a la

comunidad.

 Establecer un plan de manejo de un banco de receptoras desde el momento de la doma,

acostúmbrala a la palpación rectal y vaginal y a la manipulación normal en el brete como el

baño perineal con agua fría y jabón, esto hace que durante del procedimiento de trasferencia

la yegua este tranquila y no se le cause ningún tipo de stress; exámenes reproductivo

completo y control de la gestación.

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