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Mangeles.Ferrer@upct.es
Índice del módulo segundo:
1.- Introducción......................................................................................................... 1
2.- Las raíces como superficies absorbentes ............................................................ 2
3.- las membranas biológicas ................................................................................... 8
4.- Transporte pasivo y activo ................................................................................. 10
5.- Transporte de solutos a través de la membrana ............................................... 16
6.- Proteínas transportadoras de membrana.......................................................... 27
7.- Transporte de iones en la raíz ........................................................................... 48
8.- Absorción foliar de nutrientes........................................................................... 56
9.- Resumen............................................................................................................. 57
10.- APÉNDICES ..................................................................................................... 58
11.- Bibliografía ........................................................................................................ 68
1.- INTRODUCCIÓN
A excepción del carbono, las plantas terrestres toman los componentes esenciales de sus
tejidos del suelo. Los elementos minerales entran en la biosfera sobre todo a través del
sistema radicular y, en este sentido, las plantas actúan como verdaderos “mineros” de la
corteza terrestre. La absorción mineral de las plantas es un proceso muy efectivo. Ésto
se debe a la capacidad de éstas para absorber iones inorgánicos que se encuentran a
bajas concentraciones y al gran área superficial de las raíces. Después de su absorción,
los elementos minerales son almacenados, metabolizados o transportados vía xilema al
resto de la planta. Otros organismos, como bacterias y hongos también participan, junto
con las raíces, en la adquisición de nutrientes.
Una característica que comparten todas las células vivas es su capacidad para
mantener en su interior iones y moléculas notablemente fuera de equilibrio. En gran
medida, esta propiedad se debe a las características estructurales y funcionales de la
membrana plasmática1. El plasmalema es algo más que una doble capa lipídica
compuesta por distintos fosfolípidos y esteroles: contiene distintos tipos de proteínas,
algunas de ellas con una marcada actividad enzimática, a través de las cuales existe un
continuo tráfico de iones que permite a las células incorporar y acumular nutrientes,
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En las células vegetales la membrana plasmática recibe el nombre de plasmalema
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Máster de Nutrición Vegetal Módulo II: Absorción y transporte de nutrientes
en Cultivos Hortícolas Intensivos
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La forma de los sistemas radicales, al igual que el sistema caulinar, difiere mucho entre
las distintas especies vegetales y depende del hábitat de éstas. En las monocotiledóneas,
el desarrollo de la raíz comienza con la emergencia de tres a seis raíces primarias. A
continuación, aparecen las raíces adventicias, denominadas nodales. Más tarde, las
raíces primarias y nodales se alargan y se ramifican extensivamente formando un
complejo sistema radicular fasciculado (Fig. 2.1.B y C). En el sistema radicular
fasciculado, todas las raíces tienen el mismo diámetro (excepto cuando las condiciones
ambientales o las interacciones con patógenos modifican la estructura radicular), por lo
que es difícil distinguir la raíz primaria. Por el contrario, en dicotiledóneas, el sistema
radicular consta de una raíz principal que puede crecer en grosor como resultado de la
actividad del cambium secundario. De esta raíz principal se desarrollan raíces laterales
que dan lugar a un sistema radicular ramificado (raíz axonomorfa, ver Fig. 2.2).
amonio potasio
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Figura 2.2. Sistema radicular de dos dicotiledóneas: remolacha azucarera (A) y alfalfa
(B). El sistema radicular de la remolacha azucarera representado corresponde al de una
planta de 5 meses, y el sistema radicular de la alfalfa es el típico de una planta de 2
años. En los dos sistemas, se observa una raíz principal y, en el caso de la remolacha, se
observa que la porción superior de la raíz principal está engrosada ya que actúa como
tejido de almacenamiento. Ambas plantas han recibido un suministro adecuado de agua.
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periciclo
Primordio Células corticales
radicular
epidermis
lateral
Pelo
radicular
Zona de
maduración
Vaso maduro
Células endodérmicas diferenciadas
Diferenciación de los primeros vasos del xilema
Zona de elongación
Diferenciación de los primeros vasos del floema
Meristemo apical
División celular máxima
Centro quiescente
Cofia o caliptra
Figura 2.3. Sección longitudinal de la región apical de una raíz. Las células
meristemáticas se localizan cerca del extremo de la raíz. Estas células generan la cofía o
caliptra y los tejidos superiores de la raíz. En la zona de elongación, las células
diferenciadas producen xilema, floema y córtex. Los pelos radiculares, formados en las
células epidérmicas, aparecen en la zona de maduración. Tomado de Taiz y Zeiger,
1998.
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El floema se desarrolla antes que el xilema [ver Fig. 2.3, diferenciación de los vasos del
floema (rojo) y xilema (azul)], lo que corrobora que la función de éste es crítica cerca
del ápice radicular. De hecho, son necesarias grandes cantidades de carbohidratos para
poder mantener las divisiones y las elongaciones celulares en las zonas de crecimiento
apical. Los carbohidratos permiten un rápido crecimiento de las células proporcionando
energía y los esqueletos carbonados necesarios para la síntesis de compuestos
orgánicos. Los carbohidratos de 6 átomos de carbono (hexosas) funcionan además como
compuestos osmóticamente activos en los tejidos de la raíz. En el ápice de la raíz, donde
el floema no se ha desarrollado, el movimiento de los carbohidratos depende de la
difusión por el simplasto y, este proceso es relativamente lento (Bret-Harte y Silk,
1994). Se piensa que la baja velocidad de división celular en el centro quiescente puede
deberse a un aporte insuficiente de carbohidratos en esta región. Los pelos radiculares,
con su gran superficie para la absorción de agua y solutos, aparecen en la zona de
maduración, y es aquí donde el xilema desarrolla la capacidad de transportar grandes
cantidades de agua y solutos hacia el tallo.
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En el suelo, los nutrientes pueden moverse hacia la superficie de la raíz bien por
flujo masivo o por difusión. En el flujo masivo, los nutrientes son transportados por el
movimiento del agua del suelo hacia la raíz. La cantidad de nutrientes que llega a la raíz
por el flujo masivo depende de la velocidad del flujo del agua del suelo a la planta, la
cual depende de la velocidad de transpiración, y de la cantidad de nutrientes presentes
en la solución del suelo. Cuando la velocidad del flujo del agua y la concentración de
nutrientes en el suelo son elevadas, el flujo masivo juega un papel importante en el
proceso de absorción de nutrientes. En la difusión, los nutrientes minerales se mueven
de una región de alta concentración de nutrientes a otra región en la que la
concentración es menor. La concentración de nutrientes en la superficie de la raíz es
muy baja, lo que genera un gradiente de concentración entre la solución del suelo y la
raíz. La difusión de nutrientes, a favor del gradiente de concentración, y el flujo masivo
pueden incrementar la disponibilidad de nutrientes en la superficie de la raíz.
Cuando la absorción de nutrientes por las raíces es elevada y la concentración de
los nutrientes en el suelo baja, el flujo masivo proporciona sólo una pequeña fracción
del total de los nutrientes minerales necesarios para el correcto crecimiento y desarrollo
de las plantas (Mengel y Kirkby, 1987). Bajo estas condiciones, va a ser la velocidad de
difusión la que limita el movimiento de los nutrientes hacia la superficie de la raíz.
Cuando la difusión es demasiado lenta (para mantener cerca de la raíz una zona de alta
concentración de nutrientes) se forma una zona de reducción de nutrientes (del inglés,
nutrient depletion zone). Como se observa en la Figura 2.4, la reducción de los
nutrientes disminuye conforme nos acercamos a la superficie de la raíz. Conviene tener
en cuenta que la toma de un nutriente va a depender tanto de la afinidad de los
transportadores que facilitan su incorporación a la planta, como de la concentración de
dicho nutriente en la superficie próxima a la raíz.
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Como hemos comentado en el apartado anterior, la célula está rodeada por una
membrana que delimita su extensión y mantiene las diferencias esenciales entre el
contenido de la célula y su entorno y permite la existencia de determinados
compartimentos en su interior. Todas las membranas biológicas tienen una estructura
básica común: una doble capa (bicapa) bien de fosfolípidos o, en el caso de los
cloroplastos de glicosilglicéridos, en la cual se encuentran embebidas proteínas. La
composición de los lípidos y de las proteínas varía en las diferentes membranas, lo cual
confiere a cada tipo de membranas unas características funcionales únicas.
Los fosfolípidos son una clase de lípidos formados por dos cadenas de ácidos grasos
esterificados a dos de los grupos hidroxilo del glicerol. El tercer grupo hidroxilo está
ligado covalentemente a un grupo fosfato. Unido a este grupo fosfato, se encuentra una
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componente variable, denominada cabeza polar, que puede ser un residuo de serina,
colina, etanolamina, o inositol.
Los fosfolípidos son moléculas anfipáticas es decir, tienen un extremo
hidrofílico, la cabeza polar, y un extremo hidrofóbico, las dos colas hidrocarbonadas.
Las cadenas de ácidos grasos de los fosfolípidos y de los glicosilglicéridos pueden tener
diferente longitud (normalmente contienen de 14 a 24 carbonos). Normalmente, una de
las colas presenta uno o más dobles enlaces cis (es decir, está insaturada). La presencia
de un doble enlace cis genera una suave curvatura en la cadena que impide que las
moléculas de lípido puedan empaquetarse una contra otra y, por lo tanto, afectan a la
fluidez de la misma (aumenta la fluidez). La fluidez de la membrana juega un papel
crucial en la función de ésta. La fluidez también depende de la temperatura. Las plantas
como organismos poiquilotérmicos (organismos que no pueden regular la temperatura
de su cuerpo) mantienen la fluidez de sus membranas en condiciones de bajas
temperaturas aumentando el porcentaje de ácidos grasos insaturados, como el ácido
oleico (un doble enlace, 18:1), ácido linoleico (dos dobles enlaces, 18:2) y α-linolénico
(tres dobles enlaces, 18:3). Este proceso está catalizado por enzimas denominadas
desaturasas. Los esteroides, como el sitosterol, estigmasterol, colesterol, etc., y los
glicolípidos aunque, menos abundantes, también son componentes de las membranas
vegetales.
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Figura 2.5. (A) La membrana plasmática, del retículo y otras endomembranas de las
células vegetales están constituidas por una bicapa de fosfolípidos en la que se
encuentran embebidas proteínas. (B) Micrografía electrónica en la que se observa la
membrana plasmática de células meristemáticas de la raíz de Lepidium sativum. Al
microscopio electrónico el plasmalema aparece como dos densas líneas separadas por
un espacio claro de un grosor total de 8 nm. (C) Estructura química de un fosfolípido
típico, la fosfatidilcolina. Tomado de Taiz y Zeiger (1998).
Las membranas presentan asimetría, esto es, existen diferencias entres sus dos
mitades, externa e interna. Esta asimetría no sólo se refiere a las proteínas, sino también
a los lípidos, lo que refleja las diferentes funciones de las dos caras de la membrana
celular. Además, la mayoría de las proteínas que quedan al descubierto sobre la
superficie celular y algunas de las moléculas lipídicas de la monocapa externa tienen
cadenas de oligosacáridos unidos covalentemente. Esta cubierta de azúcares,
denominada glicocáliz, ayuda a proteger la superficie celular del daño mecánico y
químico, y algunas de estas cadenas son reconocidas por proteínas (lectinas) que
intervienen en procesos específicos de adhesión célula-célula.
Js= - Ds (δcs/δx)
donde el flujo difusivo Js viene expresado en mol m-2 s-1, la concentración, cs, en mol m-
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, la distancia, x, en m y el coeficiente de difusión en m2s-1. El coeficiente de difusión es
característico de cada substancia (ver Tabla 2.1; las moléculas grandes tienen un
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coeficiente de difusión bajo), depende del medio (por ejemplo, la difusión en el aire es
más rápida que en medio líquido) y no es una constante ya que varía con la
concentración y con la temperatura. El gradiente de concentración (δcs/δx) es
aproximadamente Δcs/Δx es decir, la diferencia de concentración de la substancia s (Δcs)
entre dos puntos separados por la distancia Δx. El signo negativo indica que la difusión
se realiza desde la zona de alta concentración hacia la zona de menor concentración.
Si expresamos la diferencia de concentraciones como Δcs (que es la fuerza impulsora de
la difusión) y, la distancia (x) la combinamos con el coeficiente de difusión en un
término denominado resistencia (r), entonces la ecuación anterior puede expresarse
como:
Js= Δcs/r
Así, de esta forma se puede visualizar fácilmente que el flujo difusivo es proporcional a
la magnitud de la fuerza impulsora Δcs e inversamente proporcional a la resistencia, r.
Las unidades de la resistencia son unidades de tiempo por unidad de distancia (s m-1).
Esta ecuación es análoga a la ley de Ohm, la cual establece que el flujo de una
corriente eléctrica en un conductor es proporcional a la fuerza impulsora, el voltaje, e
inversamente proporcional a la resistencia opuesta por el conductor. Ambos son
ejemplos de una ley general que puede enunciarse como: El movimiento (flujo) de una
substancia es igual a la fuerza impulsora dividida por la resistencia.
En lugar de la resistencia podemos encontrar en la bibliografía la permeabilidad
(Ps). La permeabilidad es el recíproco de la resistencia (Ps= 1/r) y sus unidades son
unidades de distancia por unidad de tiempo, m s-1:
Js= Ps Δcs
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A partir de la ley de Fick se obtiene una expresión que nos permite calcular el
tiempo necesario para que una proporción de moléculas difundan a una cierta distancia
a partir de su posición de origen. Por ejemplo, el tiempo para que difunda la mitad de
una población inicial de moléculas (tc = ½) a una distancia concreta viene dado por la
siguiente ecuación:
tc= ½ = (distancia)2 K
Ds
donde K es una constante que depende de la forma del sistema (para facilitar los
cálculos posteriores utilizaremos un valor de K= 1) y Ds es el coeficiente de difusión.
Esta ecuación muestra que el tiempo requerido para que una substancia difunda una
cierta distancia aumenta en relación con el cuadrado de la distancia.
Para determinar el significado de esta expresión vamos a considerar dos ejemplos
numéricos. Primero, ¿cuánto tiempo tarda una pequeña substancia en difundir la
distancia equivalente al eje mayor de una célula eucariota típica? El coeficiente de
difusión de un soluto pequeño, como la glucosa, es aproximadamente 10-9 m2 s-1, y el
tamaño de una célula unos 50 µm. Así, tendríamos:
Este cálculo muestra que una pequeña molécula difunde rápidamente distancias de
dimensiones celulares. Pero, ¿qué ocurre con la difusión a mayores distancias? Podemos
calcular el tiempo necesario para que esa misma molécula se mueva una distancia de 1
m (que es por ejemplo, la longitud de una hoja de maíz), y obtendríamos:
tc= ½ = (1 m)2 = 109s ≈ 32 años
10-9 m2 s-1
un valor que excede en varios órdenes de magnitud la vida media de una planta de maíz,
que es solo de unos pocos meses.
Estos ejemplos numéricos ponen de manifiesto que el proceso de difusión puede
ser efectivo dentro de las dimensiones celulares pero, es demasiado lento para el
transporte de sustancias a largas distancias.
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μj = μj* + RT ln Cj + zj FE + Vj P
Donde:
μj es el potencial químico del soluto j en julios por mol (J mol –1),
μj* es el potencial químico en condiciones estándar (C=1 y E= 0; es un factor de
corrección que eliminaremos en las futuras ecuaciones y puede por tanto ignorarse),
R es la constante universal de los gases (8.314 J mol –1 K –1),
T es la temperatura absoluta en grados kelvins,
Cj es la concentración (sería más apropiado utilizar en la ecuación la actividad del
soluto; en soluciones muy diluidas la actividad es aproximadamente igual a la
concentración (mol vol-1) de j,
zj FE , la componente eléctrica que se aplica sólo a iones en disolución;
z es la carga electrostática del ion (+1 para cationes monovalentes, -1 para
aniones monovalentes, +2 para cationes divalentes, etc.),
F es la constante de Faraday (96.5 J mol –1 mV –1) y
E es el potencial eléctrico del sistema, y el último término,
VjP, expresa la contribución del volumen molar parcial de j (Vj) y la presión (P) al
potencial químico de j. (El volumen parcial molal de j es el cambio en volumen por mol
de substancia j añadida al sistema, para una adición infinitesimal). Este término
contribuye en menor medida al potencial químico que los términos relacionados con la
concentración y con la componente eléctrica, excepto en el movimiento del agua por
ósmosis. El potencial químico del agua (es decir, el potencial hídrico) depende de la
concentración de solutos disueltos y de la presión hidrostática del sistema.
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Membrana
Semipermeable
Potencial Potencial
químico en el químico
compartimento en el Descripción
A compartimento
B
Transporte pasivo (difusión) ocurre
espontáneamente a favor del gradiente de
μj
μj B potencial químico
A
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μsi = μs* + RT ln C si
Potencial químico Potencial químico Concentración
de la sacarosa de la sacarosa (actividad)
dentro de la célula en condiciones estándar
μse = μs* + RT ln C se
Δ μs = μsi - μse
= RT ln Csi/Cse
Δ μs = RT ln Csi/Cse
= RT x 2.303 log 10 Csi/Cse
Δ μs = 8.314 (J mol –1 K –1) x 298 (K) x 2.303 log 10 (0.01/0.1)= - 5.706 kJ mol –1
Pero, si la molécula que queremos transportar posee carga eléctrica, hay que
tener en cuenta, además, la componente del potencial eléctrico. Tomemos a modo de
ejemplo una sal, el cloruro potásico y supongamos que tanto K+ y Cl- son permeables.
Como estos iones difunden independientemente, cada uno tiene su propio potencial
químico. Así para la difusión del potasio tendremos que:
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Esta ecuación pone de manifiesto que los iones, como el potasio, difunde tanto en
respuesta a su gradiente de concentración (C K+i /C K+e) como a la diferencia de
potencial eléctrico entre los dos compartimentos (Ei- Ee). Esto implica que los iones
pueden ser conducidos pasivamente en contra se su gradiente de concentración si se
aplica el voltaje adecuado (campo eléctrico) entre los dos compartimentos. Debido a la
importancia del campo eléctrico en el transporte en el transporte biológico, μ con
frecuencia se denomina potencial electroquímico y Δμ es la diferencia de potencial
electroquímico entre dos compartimentos.
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Figura 2.7. Capas límite. La presencia de capas no agitadas cerca de las membranas
impide determinar la concentración de los solutos en la superficie de la membrana, la
concentración real de solutos es inferior a la medida, por tanto, los verdaderos
gradientes a través de la membrana no pueden calcularse. En las células vegetales, las
capas no agitadas son particularmente importantes, ya que su espesor aumenta debido
a la presencia de la pared celular. Tomado de Flowers y Yeo, 1997.
Cuando las sales difunden a través de una membrana, pueden generar un potencial
eléctrico de membrana (voltaje). Consideremos que las dos disoluciones de KCl están
separadas por una membrana como ocurre en la Figura 2.8. Los iones K+ y Cl-
atravesarán la membrana de forma independiente (por separado), difundiendo a favor de
sus respectivos gradientes de potencial electroquímico. Y, a menos que la membrana sea
muy porosa, las permeabilidades de los dos iones serán diferentes.
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Condiciones iniciales
[KCl]A>[KCl]B
El potencial de difusión
persiste hasta que se alcance
equilibrio
Condiciones de equilibrio:
[KCl]A = [KCl]B
En el equilibrio, el potencial
de difusión es
igual a cero
Figura 2.8. Desarrollo del potencial de difusión y separación de cargas entre dos
compartimentos separados por una membrana que presenta mayor permeabilidad para
los cationes. Si la concentración de cloruro potásico es mayor en el compartimento A
([KCl]A > [KCl]B), los iones potasio y cloro difundirán a mayor velocidad hacia el
compartimento B y, se establecerá un potencial de difusión. Como las membranas son
más permeables al potasio que al cloro, los iones potasio difundirán más rápidamente
que los iones de cloro y tendrá lugar una separación de cargas (+ y -). Tomado de Taiz y
Zeiger, 1998.
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Como la membrana es permeable tanto a los iones K+ como a los iones Cl-, en el
ejemplo anterior no se alcanzará el equilibrio para ningún ion hasta que los gradientes
de concentraciones se reduzcan a cero. Sin embargo, si la membrana fuera permeable
sólo a los iones K+ , la difusión de los iones K+ transportaría cargas a través de la
membrana hasta que el potencial de membrana equilibrara el gradiente de
concentración. Dado que para producirse un cambio en el potencial se requieren muy
pocos iones, este equilibrio se alcanza casi instantáneamente. El transporte estaría
entonces en equilibrio, incluso aunque el gradiente de concentraciones no hubiera
cambiado.
Je→i = J i→e
Los flujos están relacionados con Δμ; así en el equilibrio también serán iguales los
potenciales electroquímicos del interior y el exterior de la célula:
μji = μje
Agrupando los términos, se obtiene que la diferencia en el potencial eléctrico entre los
dos compartimentos en el equilibrio es:
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z jF
Esta diferencia en el potencial eléctrico se conoce como potencial de Nernst (ΔEn) para
un ion:
ΔEn = Ei – Ee
Hay que destacar que una diferencia en las concentraciones de 10 veces para un catión
monovalente corresponde a un potencial de Nersnt de -59 mV (Ce/ Ci = 1/10, log 10 –1=
-1). Es decir, que un potencial de membrana de -59 mV mantendría un gradiente de
concentración de diez veces de un ion que fuera transportado por difusión pasiva (es
decir, que mediante un transporte pasivo la concentración de un ion monovalente en el
interior de la célula es 10 veces superior a la concentración de ese mismo ion en el
exterior; Cji = 10 x Cje). De la misma forma, esta ecuación permite, a partir de una
simetría en la concentración, calcular el potencial con el cual el ion estará en equilibrio.
Todas las células muestran un potencial de membrana que es debido a la
distribución asimétrica de los iones entre el interior y el exterior de la célula. Conviene
recordar que el interior de la célula es negativo con respecto al exterior. El citosol
contiene un gran número de cargas fijas, que no difunden, como los grupos amino (-
NH4+) y carboxilo (-COO-) de macromoléculas como proteínas, ácidos nucleicos, etc.
Además, las células bombean de forma activa diversos cationes como H+, Ca2+ y Na+ al
apoplasto. Todo esto hace que en el citosol predominen las cargas negativas y que en las
paredes celulares se acumulen cationes.
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por lo que debe existir algún mecanismo que secrete estos iones al exterior, impidiendo
de este modo que alcancen la concentración de equilibrio. Los aniones presentaron unas
concentraciones internas mayores que las teóricas, indicando que su toma se debe a un
transporte activo (en el equilibrio se obtiene que Δμ > 0, luego ha tenido que aplicarse
energía para acumular el ion en la célula).
Estos equilibrios pueden calcularse a partir de la expresión del potencial
electroquímico de los iones. El trabajo necesario para incorporar un mol de un ion a la
célula es igual a la diferencia del potencial electroquímico de ese ion entre el interior y
el exterior de la misma:
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K+ 1 74 75 equilibrio
Na+ 1 74 8 interior
a
Calculada para cada ion a partir del potencial de membrana y su concentración en el
medio externo, aplicando la ecuación de Nernst. Como T = 298ºK, RT/F= 58,9 y la
expresión queda por tanto: Ci= Ce x exp [- (n)(-110)/(58,9)]. Así, para el ion Mg2+,
Ce= 0.25 y n= + 2; Ci= 0.25 x exp [-(+2)(-110)/(58,9)]= 1 340
b
Las raíces se equilibraron frente a un medio de la concentración indicada en la
columna 2, a una temperatura de 25 ºC hasta que su concentración no varió con el
tiempo.
c
Aquellos iones que se encuentran en la raíz a mayor concentración que la predicha por
la ecuación de Nernst, son impulsados hacia el exterior por las diferencias de potencial
electroquímico; su acumulación se ha producido contra estas diferencias de potencial
utilizando energía metabólica (acumulación activa). Por el contrario, la mayor parte de
los cationes están a menor concentración de la predicha por el equilibrio pasivo, por lo
que un mecanismo de secreción es necesario para impedir su acumulación pasiva.
Solamente el potasio se encuentra en equilibrio pasivo.
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Nitella o Chara, cuyas células internodales poseen varios centímetros de longitud, casi
un milímetro de diámetro y un volumen de citosol apreciable. En la Figura 2.10 se
representan a modo de resumen las conclusiones de estos estudios y los llevados a cabo
con plantas superiores.
Hay muchos iones que atraviesan las membranas de las células vegetales de forma
simultánea. Por ello, el potencial de Nernst de una sola especie iónica rara vez puede
describir el potencial de difusión real de la membrana. La contribución de todos los
iones al potencial de difusión de la membrana viene dado por la ecuación de Goldman:
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Esta ecuación nos proporciona un valor bastante aproximado del valor real del
potencial de difusión de una membrana. En dicha ecuación se asume que la difusión de
los iones es independiente y a favor del gradiente de potencial químico y que para
determinar el valor del potencial de difusión de la membrana basta con conocer las
concentraciones (C) y las permeabilidades (P) de los tres iones más relevantes de la
célula es decir el K+, Na+ y Cl-, a ambos lados de la membrana. Los valores así
calculados son muy similares a los valores experimentales ya que estos tres iones son
los que presentan una mayores concentraciones y coeficientes de permeabilidad en las
células vegetales y por tanto, dominan la ecuación.
Cuando se conocen las permeabilidades y los gradientes de los iones, es posible calcular
el potencial de difusión de la membrana mediante la ecuación de Goldman. Sin
embargo, en plantas y en hongos, los valores experimentales del potencial de membrana
son mucho más negativos que los obtenidos a partir de la ecuación de Goldman. Por
ejemplo, el potencial de membrana medido en células del tallo y de raíces de plántulas
está comprendido entre –130 a –110 mV, mientras que el calculado (a partir de la
ecuación de Goldman) oscila entre –80 a –50 mV. Estos resultados ponen de manifiesto
que el potencial de difusión no es el único componente que contribuye al potencial de
membrana y, por tanto, debe existir otro mecanismo. Pues bien, este exceso de voltaje
se debe a la acción de una bomba electrogénica, es decir una enzima que bombea de
forma activa (utiliza energía metabólica, ATP) protones al exterior (es decir saca
protones del interior de la célula y los vierte al exterior) y que se denomina ATP
foforilasa de protones o H+-ATPasa del plasmalema.
Siempre que un ion entra o sale fuera de la célula sin ser equilibrado con el
movimiento de un contraión de carga opuesta, se crea un voltaje a través de la
membrana. Cualquier mecanismo de transporte activo que provoque el movimiento de
una carga eléctrica neta, modificará el valor de potencial de membrana respecto al
predicho por la ecuación de Goldman. Este tipo de transporte se denomina bomba
electrogénica, y es común en las células de todos los organismos.
La energía metabólica necesaria para llevar a cabo este tipo de transporte casi
siempre es proporcionada por la hidrólisis del ATP. En las plantas se ha demostrado la
dependencia del potencial de membrana del ATP observando el efecto del cianuro (CN-)
en el potencial de membrana (Fig. 2.11). El cianuro inhibe la síntesis de ATP y, en
estas condiciones el potencial de membrana se encuentra cercano al potencial de
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difusión de Goldman, el cual corresponde al movimiento pasivo de K+, Na+ y Cl-. Por
consiguiente, el potencial de membrana de las células vegetales tienen dos
componentes: el potencial de difusión y otra componente debida al transporte
electrogénico de iones. En presencia de cianuro, se inhibe este transporte, y el pH del
medio externo aumenta mientras que, el pH citosólico se acidifica. Esto pone de
manifiesto que el transporte activo de protones al exterior de la célula es electrogénico.
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Existen dos tipos de proteínas transportadoras que facilitan la entrada de solutos a través
de la membrana: los canales iónicos y los transportadores (carriers) (Fig.2.13).
Los canales iónicos, en general son proteínas transmembrana que funcionan como
poros selectivos en la membrana. El transporte a través de un canal es siempre pasivo,
sin embargo, los canales iónicos no son simples poros acuosos conductores, sino que
desarrollan tres funciones fundamentales:
a) Permiten el flujo de iones a su través a una velocidad muy superior a la de
cualquier sistema biológico (108 iones s-1 frente a 103 iones s-1 que mueve un
transportador o una ATPasa-H+)
b) Son capaces de discriminar qué iones pasan a su través, es decir presentan
selectividad iónica. La especificidad del transporte viene dada por el tamaño del
poro y la densidad de la superficie cargada en su interior. La región del canal
que determina la especificidad se denomina filtro selectivo (ver Fig. 2.14). El
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transporte a través de los canales puede o no implicar una unión transitoria del
soluto con la proteína canal
c) En respuesta a un estímulo, las proteínas del canal son capaces de adoptar
diversos estados conformacionales. En general, existe un estado conductor
(estado abierto, que permite el paso de iones a su través cuando las puertas están
abiertas; ver Fig. 2.14) y dos no conductores (estados inactivo y de reposo). A
nivel del potencial de reposo celular, la probabilidad de apertura de algunos
canales es mínima, es decir, que sólo un reducido número de canales puede
abrirse al azar, pero sí pueden abrirse en respuesta a un estímulo adecuado. La
despolarización celular (es decir, los cambios en el potencial de membrana)
aumenta la probabilidad de apertura de los canales, pero si la despolarización se
mantiene, la probabilidad de apertura disminuye como consecuencia del proceso
de inactivación iniciado simultáneamente por el de activación; así el canal pasa
al estado inactivo-cerrado desde el cual no puede volver a abrirse. Para que el
canal vuelve a abrirse es necesario que el canal inactivado pase al estado de
reposo, proceso al que denominamos reactivación del canal. Por tanto, la
magnitud de la corriente que cruza la membrana depende de la densidad de
canales, de la conductancia del canal abierto y de cuánto tiempo el canal
permanece en dicho estado.
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Figura 2.14. Modelo de un canal regulado por voltaje (canal de K+) de una célula
vegetal. El canal está compuesto por un tetrámero de la subunidad principal (α) que
contiene un filtro selectivo y una puerta regulada por voltaje. La secuencia de esta
puerta consiste en una serie de aminoácidos básicos que proporcionan carga positiva y
que, en respuesta al potencial de membrana producen la apertura o cierre del canal. Las
subunidades reguladoras β también pueden estar presentes. Tomado de Taiz y Zeiger,
1998.
Así mismo y mediante la técnica de patch clamp (ver Apéndice B) se han podido
distinguir dos tipos de “puertas” en los canales, en función del tiempo que permanecen
abiertas en respuesta a un estímulo prolongado. Así, se han caracterizado los canales
que se activan rápidamente (denominados tipo R, rapidly activated) y los que se activan
lentamente (tipo S, slowly activated). La diferencia entre ambos canales, como su
propio nombre indica es que los canales tipo R se abren y se cierran rápidamente en
respuesta a un estímulo [por ejemplo un cambio en el voltaje (los cambios en el voltaje,
es decir los cambios en el potencial de membrana, son los principales estímulos que
promueven la apertura de los canales)] mientras que los canales tipo S permanecen
abiertos mientras dure el estímulo. Ambos tipos de canales también se han identificado
en el tonoplasto y, se denominan como canales vacuolares rápidos (FV, fast vacuolar
channels) o canales vacuolares lentos (SV, slow vacuolar channels).
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moléculas como el agua. Los canales que facilitan el transporte de moléculas de agua se
denominan acuaporinas2. El descubrimiento de las acuaporinas fue bastante
sorprendente para la comunidad científica ya que, hasta entonces se pensaba que la
bicapa lipídica era suficientemente permeable al agua y que, simplemente cambiando la
composición de lípidos se controlaba el flujo de agua. Hoy en día, desde el aislamiento
de la primera acuaporina en 1991 en eritrocitos humanos, estas proteínas se han
identificado en todos los seres vivos. No cabe duda que su identificación en células
vegetales ha revolucionado la visión de las relaciones hídricas de las plantas. Así, la
existencia de las acuaporinas proporciona a la planta a) una ruta de baja resistencia al
flujo de agua en condiciones de elevada transpiración, b) facilita el paso del agua por la
endodermis radicular y c) permite controlar el flujo del agua en la planta. Dicho control
se llevaría a cabo regulando la actividad y la expresión de los genes que codifican para
acuaporinas y, de esta forma, la célula es capaz de modificar la permeabilidad al agua
de sus membranas según se requiera.
Figura 2.15. Los dos modelos de difusión facilitada. Los solutos pueden transportarse a
favor de su gradiente electroquímico mediante canales iónicos (a) y proteínas
transportadoras (b). Los canales iónicos permiten la comunicación directa del interior y
el exterior de la célula y facilitan el paso de un elevado número de iones en cada
apertura. Esta apertura puede estar regulada por un ligando o por el valor del potencial
de membrana. Los transportadores o carriers se unen selectivamente a los iones en una
de las superficies y sufren cambios conformacionales que permiten al ion atravesar la
membrana. Tomado de Campbell & Reece (2002).
2
La Real Academia Sueca de las Ciencias concedió el premio Nobel de Química 2003 a los profesores
Meter Agre por el descubrimiento de las acuaporinas, y Roderick Mackinnon por el estudio de la
estructura de los canales iónicos
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Hasta ahora hemos visto el transporte pasivo de solutos es decir, aquel que tiene lugar a
favor de un gradiente de potencial electroquímico, como por ejemplo el proceso de
acumulación de cationes en la célula. Por el contrario, la acumulación de aniones y la
secreción de cationes, procesos que tienen lugar en contra del potencial electroquímico
de los iones, precisan de un aporte de energía. La energía metabólica se transforma en
energía útil para el transporte de iones en las membranas a través de la actividad de las
bombas primarias (ver Fig. 2.16). Estas bombas son proteínas de membrana que
mueven iones (masa y carga) en contra de su gradiente de potencial electroquímico,
utilizando energía metabólica y generando gradientes tanto de concentración como
eléctricos. El transporte de iones que tiene lugar a través de las bombas primarias se
denomina transporte primario.
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Son muchos los estudios que sugieren que, en células vegetales sólo el H+ y el
Ca2+ se transportan mediante bombas primarias. Por tanto, son necesarios otros
mecanismos que permitan el transporte activo del resto de solutos imprescindibles para
el desarrollo vegetal. Un modo de transportar estos compuestos sería mediante
cotransporte es decir, acoplar la energía liberada por el transporte de un soluto que se
mueve a favor de su potencial electroquímico con la incorporación de otro ion que se
desplaza en contra de su potencial. Este mecanismo, por el que el transporte de una
sustancia proporciona la energía necesaria para la acumulación de otra en contra de su
potencial electroquímico, se denomina transporte secundario activo, para
diferenciarlo de aquellas situaciones en que el transporte está acoplado directamente a
una reacción metabólica, como la hidrólisis del ATP.
Cuando los protones son expulsados del citosol por las ATPasas de H+ electrogénicas se
crea un potencial de membrana y un gradiente de pH a expensas de la hidrólisis del
ATP. La energía acumulada asociada a H+ puede expresarse por tanto, como el
gradiente de potencial electroquímico para el H+, o fuerza protón motriz o Δp, que
consta de dos componentes: una asociada a la asimetría de concentración de H+ y como
diferencia de potencial eléctrico (ver Apéndice C: Teoría Quimiosmótica):
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ΔμH+/F= Em – ENH+
Las ATPasas de H+ están codificadas por una familia multigénica, constituida por al
menos 10 miembros y, cada gen codifica una isoforma diferente de la enzima. La
Figura 2.17 muestra el modelo funcional propuesto para una ATPasas de H+ de
levaduras, enzima que es muy similar a la presente en el plasmalema de las células
vegetales. La proteína consta de 10 dominios transmembrana y varios dominios
hidrofílicos presentes tanto en la cara citoplásmica como en la apoplástica. Algunos de
los dominios transmembrana forman un poro que permite el transporte de H+. El
dominio catalítico se encuentra en la cara citosólica de la membrana. En dicho dominio
se encuentra el residuo aspártico que se fosforila durante el ciclo catalítico y al que
puede unirse el ortovanadato. La actividad de las ATPasas-H+ del plasmalema se regula
por la concentración de sustrato (ATP), pH, temperatura (como cualquier otra enzima) y
por señales específicas, como luz, fitohormonas, y por el ataque por patógenos
(Palmgren, 2001).
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fosfatasas que eliminan residuos fosfato del dominio autoinhibidor de las ATPasas-H+
del plasmalema. De esta forma, activan estas enzimas que forman parte de la cascada
de respuestas que activan los mecanismos de defensa de las plantas.
Tabla 2.4. Características de las tres clases de enzimas que bombean protones.
Localización
celular Membrana Membrana - ¿Membrana
Procariotas Plasmática Plasmática Plasmática?
Nº subunidades
diferentes
Periféricas 5 (F1) 0 ≥ 2 (plantas) 1
Intrínsecas 3-8 (F0) 1 ≥ 1 (plantas)
Masa molecular 500 kDa 100 kDa 750 kDa (complejo) 81 kDa
8 a 10 subunidades
diferentes
Nota: Los nombres antiguos aparecen entre paréntesis. Adaptado de Azcón-Bieto y Talón, 1993 y Sze et
al., 1999.
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Además de las ATPasas de H+, las plantas poseen en el plasmalema un segundo tipo de
bomba primaria que también pertenece a las ATPasas de tipo P: una Ca2+-H+ ATPasa.
Esta enzima excreta Ca2+ del citosol al tiempo que incorpora H+ en un proceso
dependiente de ATP. Esta bomba es también de tipo P ya que el bombeo de Ca2+
requiere la formación de un intermediario fosfatado durante la catálisis. La contribución
de esta bomba a la acumulación de energía en el plasmalema es muy pequeña ya que,
además de ser menos electrogénica que la ATPasas de H+, es mucho menos activa que
ésta. Su función es evacuar el Ca2+ del citoplasma, para mantener su concentración en
torno a 0.1 µM es este compartimento celular.
Espacio extracelular
Membrana Dominios
plasmática transmembrana
Dominio
regulador
Citoplasma
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Aunque se sabe desde hace mucho tiempo que la vacuola es el compartimento celular
donde las células vegetales almacenan agua y solutos, hace relativamente poco tiempo
que se conocen los mecanismos responsables, asociados al tonoplasto, de esta función.
La fuerza que impulsa la acumulación de agua y que permite la generación de la
turgencia en las células es osmótica3. A su vez, el origen del potencial osmótico es la
acumulación de iones, principalmente el K+, en la vacuola. El tonoplasto, que es la
membrana que delimita la vacuola, regula el tráfico de iones y de otros metabolitos
entre el citosol y la vacuola, como el plasmalema regula la entrada y salida de solutos de
la célula. Sin embargo, el transporte del tonoplasto ha permanecido relativamente
inaccesible hasta que no se han desarrollado los métodos adecuados para la obtención
de vacuolas intactas y vesículas de tonoplasto.
La energía que se emplea en el tonoplasto para mover iones está asociada a la actividad
de bombas primarias. En el tonoplasto existen dos tipos de bombas primarias y ambas
bombean protones hacia el interior de la vacuola. Por esta razón, el lumen vacuolar es
típicamente ácido y positivo. Medidas directas con microelectrodos indican que el pH
vacuolar se encuentra alrededor de 5, aunque el pH de las vacuolas de algunas especies
es muy bajo, y pueden tener un pH de 1. Este fenómeno se conoce como
hiperacidificación (ver Tabla 2.5).
3
Este proceso es de gran relevancia ya que la elongación de las células vegetales
depende de la entrada de agua a las vacuolas, por tanto, el potencial osmótico de éstas
debe mantenerse en unos valores adecuados para permitir la entrada de agua desde el
citoplasma. El valor del potencial osmótico (ψs) para la soluciones diluidas ideales es
ψs= -RT Ci, donde Ci es la concentración de solutos del sistema. El valor del potencial
osmótico es idéntico al de presión osmótica (π), pero poseen signo opuesto es decir:
ψs= -π. En otras palabras, la presión osmótica es siempre positiva y el potencial
osmótico siempre posee valores negativos.
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Tejido Especie pH
* El pH vacuolar de Opuntia fluctúa a lo largo del día. Esta planta, como muchas suculentas, presenta un
tipo especial de fotosíntesis denominada metabolismo ácido de las crasulaceas (CAM), que provoca un
descenso del pH vacuolar durante la noche.
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denomina de tipo V y se parece mucho más a otras bombas de protones - las bombas F-
ATPasas- presentes en mitocondrias y cloroplastos4. Mientras que las ATPasa-H+ de
tipo P, presentes en el plasmalema, están constituidas por un solo péptido de 100 kDa,
las ATPasa-H+ de tipo V son complejos enzimáticos de gran tamaño, aproximadamente
de 750 kDa, compuestos por al menos 10 subunidades diferentes. Al igual que las F-
ATPasas, las subunidades de las V-ATPasas se organizan en un complejo catalítico
periférico, de apariencia lobulada muy característica, V1, y un complejo canal integrado
en la membrana, Vo que facilita el transporte de protones (ver Fig. 2.18). Por la
similitud existente entre las F-ATPasas y las V-ATPasas se ha asumido que operan
como pequeños motores giratorios.
Figura 2.18. Modelo del motor rotatorio de una V-ATPasa. Como se aprecia en la
figura este complejo está constituido por varios polipéptidos. El complejo catalítico V1
se puede disociar fácilmente del tonoplasto. Los distintos componentes estructurales de
este complejo catalítico se nombran con letras mayúsculas (A-H). El complejo V0,
forma un poro que permite el transporte de H+ hacia el interior del lumen vacuolar. Los
4
Es recomendable visitar la página web del profesor W. Junge. En ella se ilustra entre otros aspectos la
rotación del complejo ATP sintasa del cloroplasto en la sección titulada “From light to ATP”.
http://www.biologie.uni-osnabrueck.de/Biophysik/Junge/overheads.html
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6.2.2.2.- La pirofosfatasa de H+
La H+-PPasa y otras enzimas que utilizan PPi son inducidas en algunas plantas
cuando los niveles de oxígeno son bajos (hipoxia) o por frío (chilling). En estas
situaciones, los niveles de ATP son muy reducidos por lo que se cree que estas enzimas
representan un sistema de reserva para mantener las actividades celulares esenciales en
situaciones de estrés.
Aunque la energía libre liberada por la hidrólisis del PPi es menor que la
liberada tras la hidrólisis del ATP, esta falta es compensada por el hecho de que la H+-
PPasa vacuolar sólo transporta un protón por cada molécula de PPi hidrolizada, mientras
que la V-ATPasa parece transportar dos protones por molécula de ATP hidrolizada. Así,
la energía disponible por ion de H+ transportado es aproximadamente la misma, y cada
enzima puede, de esta forma, generar el mismo gradiente de potencial electroquímico de
H+.
6.2.2.3.- Los transportadores ABC
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Figura 2.19. Modelo hipotético del transporte secundario activo. La energía conductora
del proceso puede acumularse como fuerza protón motriz (representado por un triángulo
en la derecha de A) y puede emplearse para incorporar un substrato (S) en contra de su
gradiente de concentración (triángulo de la izquierda). (A) En la conformación inicial,
los lugares de unión a la proteína están expuestos hacia la cara externa y pueden captar
un protón. (B) Esta unión provoca un cambio conformacional que permite la unión a la
proteína del substrato, S. (C) La unión con S da lugar a otro cambio conformacional de
forma que quedan expuestos los lugares de unión y sus substratos en el interior de la
célula. (D) La liberación del protón y de S en el interior de la célula restaura la
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conformación original del transportador y permite que éste inicie un nuevo ciclo.
Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
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Figura 2.22. Esquema general con el que se pretende dar una visión general de los
distintos canales iónicos y carriers presentes en el tonoplasto y plasmalema de las
células vegetales. Tomado de Taiz y Zeiger (2002)
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Hasta ahora hemos descrito el transporte celular en términos energéticos. Sin embargo,
el transporte celular puede estudiarse mediante el empleo de la cinética enzimática ya
que, como hemos visto, el transporte mediado por proteínas transportadoras o carriers
implica una unión y una disociación de los solutos al “sitio activo” de las proteínas. Una
ventaja de las aproximaciones cinéticas es que abre nuevas perspectivas a la hora de
analizar la regulación del transporte. Así, en la difusión la velocidad de incorporación
de una molécula es directamente proporcional a la concentración externa de la molécula
transportada. Por el contrario, en el transporte mediado por un carriers el transporte se
satura, es decir tiende a una velocidad máxima (Vmax) que no puede excederse y que es
independiente de la concentración del soluto. Vmax hace referencia a que el lugar de
unión del transportador está siempre ocupado, ligado al soluto (ver Fig. 2.23A) y es la
concentración del transportador, y no la concentración del soluto, la que se convierte en
el factor limitante del proceso. La constante Km, que equivale a la concentración de
soluto que determina una velocidad de incorporación igual a la mitad de la velocidad
máxima de transporte, refleja las propiedades de un lugar de unión dado. Es decir, la
velocidad de transporte, v, se ajusta a una curva de Michaelis-Menten:
En general conviene tener en cuenta que el transporte de un ion puede ser tanto
activo como pasivo cuando se analiza un amplio rango de concentraciones para un
soluto dado. En la Figura 2.23B se muestra la incorporación de sacarosa por los
protoplastos de soja en función de la concentración externa de sacarosa. La
incorporación aumenta bruscamente con la concentración y comienza a saturarse a una
concentración de 10 mM. A concentraciones superiores a ésta, la toma de glucosa sigue
una cinética lineal y no saturable. La inhibición de la síntesis de ATP bloquea el
transporte saturable pero no afecta al lineal. Estos resultados parecen indicar que la
toma de glucosa a bajas concentraciones se realiza mediante un transportador activo
(transportador tipo simporte sacarosa-H+) y a concentraciones mayores, la sacarosa
penetra en la célula a favor de su gradiente de concentración y, por tanto, su
incorporación no se ve afectada por la presencia de inhibidores de la síntesis del ATP y,
parece ser que el transporte no saturable se podría llevar a cabo mediante un
transportador de baja afinidad.
Algunos estudios cinéticos del transporte de iones a través de la raíz muestran varias
componentes saturables para un mismo soluto (ver Fig. 2.24). Estos resultados se han
interpretado asumiendo la presencia de diferentes transportadores para un mismo soluto
en el mismo tejido, cada uno de ellos con un valor de Km diferente para el soluto
transportado (Epstein, 1972). En el caso del K+, recientemente, se ha caracterizado el
canal de la entrada de K+ y se han secuenciado y clonado los genes de los canales
moduladores de la entrada de K+ (inward-rectifying K+ channels) y de los
transportadores de tipo simporte. El sistema de transporte de alta afinidad responsable
de la toma de K+ a bajas concentraciones parece estar mediado por un transportador
secundario activo tipo simporte que incorporaría K+ junto con H+ y que también
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Observada
(nmol x 106 células x h)
Carriers
Velocidad
Difusión
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Figura 2.24. El transporte de potasio en las raíces de cebada muestra dos fases
diferenciadas. Este tipo de cinética de incorporación se denomina cinética bifásica y
sugiere la existencia de dos mecanismos para el transporte de potasio. El primero, sería
un sistema de transporte de alta afinidad, activo, de tipo simporte y con un valor de Km
para el potasio entre 0.02 a 0.03 mM y, el segundo, sería un sistema de baja afinidad
(que puede o no mostrar cinéticas de saturación) debido a la difusión del potasio a
través de un canal. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
Se han observado cinéticas de absorción parecidas a las mostradas en la Fig. 2.24 para
otros cationes y aniones. Así por ej., cuando la raíz dispone de gran cantidad de sulfato,
el sistema de absorción es de baja afinidad y constitutivo (se expresa siempre y por
tanto, continuamente disponible). Si el contenido de sulfato en el medio desciende hasta
valores inferiores al umbral crítico (que causan deficiencia), entonces se induce la
formación de un segundo transportador de sulfato de elevada afinidad capaz de
“trabajar” de forma efectiva aun a concentraciones de sulfato micromolares.
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Hasta ahora, en nuestra discusión del transporte celular de iones no hemos incluido a la
pared celular. Cuando hablamos del transporte de pequeñas moléculas, la pared celular
podemos considerarla como un entramado de polisacáridos y proteínas abierto a través
del cual los nutrientes minerales pueden difundir fácilmente (ver Apéndice D: La pared
celular).
Compartimentos: célula
Pared celular
citosol
vacuola
plasmodesmos Tonoplasto
Simplasto: espacio Plasmalema
constituido por el Apoplasto: espacio
citoplasma de las distintas extraprotoplasmático
células que presenta Compartimentos: tejidos constituido por las paredes
continuidad a través de los Simplasto Apoplasto celulares y los espacios
plasmodesmos aéreos y que puede
Rutas de transporte lateral presentar continuidad en el
Ruta Transmembrana. seno de un tejido
Los solutos y el agua se apoplasto
mueven atravesando de
forma reiterada el simplasto
plasmalema y las paredes
celulares. También pueden
penetrar al interior de la
vacuola.
Ruta Simplástica: las sustancias que entran al citoplasma, una Ruta Apoplástica. El agua y los
vez que han atravesado el plasmalema, pueden desplazarse solutos disueltos en ésta difunden a
célula a célula vía plasmodesmos. La compleja estructura de los través de las paredes celulares y de
plasmodesmos probablemente regula esta vía de transporte. los espacios aéreos
(Recordad que por esta vía se desplazan ciertas proteínas,
ARNm y otras moléculas grandes como los virus)
Debido a que todas las células vegetales están rodeadas por la pared celular, los iones
pueden desplazarse a lo largo de un tejido a través de las paredes celulares sin entrar en
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el interior de célula (ver figura 2.25). Este espacio continuo constituido por todas las
paredes celulares se denomina espacio libre o apoplasto.5 Podemos determinar el
volumen del apoplasto de un tejido simplemente comparando la toma de agua marcada
con 3H y de manitol marcado con 14C. El manitol es un azúcar-alcohol no permeable
que se equilibra en el espacio libre pero que no puede entrar a la célula. El agua, por el
contrario, permea libremente tanto en la célula como en la pared celular. Las medidas de
este tipo normalmente muestran que entre el 5 y el 20 % del volumen de un tejido
vegetal está ocupado por las paredes celulares.
Lámina media
plasmalema
Partículas proteicas adheridas a
Pared la membrana externa del RE
celular
tonoplasto
Retículo
Citoplasma endoplásmico
(RE)
vacuola
plasmodesmos
Partículas proteicas
Partículas proteicas presentes en la Desmotúbulo
“incrustadas” en la
cara interna del RE que forman el
membrana plasmática que
denominado “central rod” y por tanto, rodea al plasmodesmo
los plasmodesmos carecen de lumen
Plasmalema
Partículas proteicas
“incrustadas” en la
membrana plasmática
“Manga” Microcanales
citoplásmica
La membrana plasmática de las células vegetales, junto con dominios específicos del
retículo endoplásmico, forman una estructura denominada plasmodesmos. Los
plasmodesmos son puentes citoplásmicos (rodeados por membrana) que atraviesan las
paredes celulares y que permiten la comunicación entre células adyacentes. Como
resultado de estas uniones, el citoplasma no aparece como un en espacio individualizado
5
Apoplasto. El apoplasto puede definirse como el espacio externo a la membrana plasmática donde se
encuentra la pared celular y que puede presentar continuidad en el seno de un tejido
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7.2.- LOS IONES SE MUEVEN POR LAS RAÍCES TANTO POR EL SIMPLASTO
COMO POR EL APOPLASTO
Si nos fijamos en la Figura 2.27, en la cual se representan los rasgos más distintivos de
la estructura primaria de una raíz, se puede apreciar que el apoplasto forma una sistema
continuo desde la superficie de la raíz hasta el córtex pero, en el límite entre el el córtex
y el cilindro vascular (la estela) se encuentra una capa de células especializadas: la
endodermis.
Las paredes radiales y tangenciales de la endodermis están impregnadas con lignina y
suberina y estos depósitos hidrofóbicos se conocen como banda de Caspari. La
existencia de la banda de Caspari en las células de la endodermis supone, dada su
hidrofobicidad, una barrera infranqueable en el camino hacia el xilema: tanto el agua
como los nutrientes deben obligatoriamente atravesar el plasmalema de las células que
componen la endodermis. La permeabilidad, selectividad y afinidad de los canales y
transportadores localizados en el plasmalema de las células de la endodermis
determinan, en última instancia, qué solutos y a qué velocidad se incorporan o se
liberan.
Teniendo en cuenta todo lo anterior, un ion puede desplazarse en dirección radial en la
raíz siguiendo la ruta apoplástica , transmembrana o simplástica . Pero,
51
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Banda
Endodermis de
Caspari
Rutas
simplástica y periciclo xilema floema
transmembrana córtex
epidermis
Ruta apoplástica
Figura 2.27. Movimiento radial de iones a través de la raíz. El movimiento radial del
agua y los nutrientes a través de la raíz puede seguir tres rutas: transmembrana,
simplástica y apoplástica. La existencia de la banda de Caspari interrumpe el transporte
vía apoplasto y los solutos deben atravesar el plasmalema de la endodermis. Esto
desempeña una función decisiva, la de barrera selectiva, pues las fases lipídicas de las
membranas biológicas son barreras efectivas contra la difusión no selectiva de iones
hacia el cilindro central de la raíz. (Recordad que las barreras de semipermeabilidad
celular no están en la pared celular, sino en las membranas y que, las cualidades
transportadoras de una biomembrana se determinan a partir de las proteínas
transportadoras que contiene). Tomado de Taiz y Zeiger (2002).
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Una vez que los iones se encuentran en el simplasto deben pasar, desde la estela a los
elementos conductores del xilema para que puedan ser transportados hacia la parte aérea
de la planta. Como los elementos conductores del xilema son células muertas, los iones
deben salir del simplasto al apoplasto y, atravesar la membrana plasmática por segunda
vez.
El proceso por el cual los iones salen del simplasto y entran en las células
conductoras del xilema se denomina carga del xilema. La carga del xilema es un
proceso que no se conoce todavía con exactitud a pesar de haber sido objeto de
numerosos estudios.
¿Cómo pueden llegar los iones al xilema? Pues, como hemos visto a lo largo de
este módulo los iones pueden “entrar” al xilema mediante difusión que, como sabemos
es un proceso pasivo. Aunque en este proceso de carga del xilema pasiva podría haber
alguna etapa (sólo una) en la que pudiera haber un requerimiento de energía
metabólica. Esta etapa en la que se podría ser necesaria una fuente de energía
metabólica sería el paso de los iones a través de la membrana bien en las células
epidérmicas, o del córtex o de las células endodérmicas. Según este modelo de
difusión pasiva, los iones se transportaría pasivamente hacia la estela vía simplasto a
favor de su gradiente electroquímico, y podrían salir de las células vivas de la estela
(posiblemente debido al poco oxígeno disponible en el interior de la raíz; recordad que
es necesario el ATP para mantener la actividad de las bombas primarias y que un
6
Otra de las consecuencias de la presencia de la endodermis en la raíz es la existencia
de la presión radicular, que se genera en el xilema de la raíz y empuja el agua
verticalmente hacia arriba. Cuando la transpiración es muy reducida o nula, como
ocurre durante la noche, las células de la raíz pueden aún secretar iones dentro del
xilema. Dado que los tejidos vasculares en la raíz están rodeados por la endodermis, los
iones no tienden a salir del xilema. De esta manera, el aumento de concentración dentro
del xilema causa una disminución del potencial hídrico del mismo, y el agua se
desplaza hacia dentro del xilema por ósmosis, desde las células circundantes. Se crea así
una presión positiva llamada presión de raíz (presión radicular), que fuerza al agua y a
los iones disueltos a subir por el xilema hacia arriba. Las gotas de agua similares al
rocío que aparecen a primeras horas de la mañana, en plantas de pequeño porte ponen
de manifiesto la existencia de la presión radicular. Estas gotas no son rocío sino que
proceden del interior de la hoja, este fenómeno lo conocemos con el nombre de
gutación (del latín “gutta”, gota). La presión radicular es menos efectiva durante el día,
cuando el movimiento de agua a través de la planta es más rápido, debido a la
transpiración. Esta presión no es suficiente para llevar el agua hasta la parte más alta de
un árbol de gran porte, más aún, algunas plantas como las confieras no desarrollan
presión de raíz. Por lo que su presencia no está generalizada y su intensidad, variable
según las especies, suele ser baja.
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alto
Cloro (Cl-)
Potencial electro químico
Potasio (K+)
bajo
Parénquima Elementos
Epidermis Córtex Endodermis
Solución xilemático del xilema
exterior
Banda de
Caspari
Tejidos
radiculares
Figura 2.28. Diagrama ilustrativo de los perfiles del potencial electroquímico del
potasio y el cloro en raíces de maíz. Para determinar el potencial electroquímico, las
raíces se sumergen en una disolución 1mM de KCl y 0.1 mM de CaCl2. El electrodo de
referencia se coloca en la solución que baña la raíz y el electrodo de medida (específico
para ion) se introduce en los diferentes tejidos radiculares. En el eje horizontal se
muestran los diferentes tejidos que se encuentran en una sección transversal de la raíz.
El incremento substancial de potencial electroquímico para el K+ y el Cl- entre la
solución externa y la epidermis indica que los iones son incorporados en la raíz
mediante un mecanismo de transporte activo. Por el contrario, el potencial disminuye en
el xilema, lo que indica que los iones son transportados al xilema mediante difusión a
favor del gradiente de potencial electroquímico. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
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Sin embargo, existen en la literatura otros estudios que indican que la etapa final
de la carga del xilema se lleva a cabo mediante un proceso activo en la estela (Lüttge y
Higinbotham, 1979). Con un tipo de “dispositivo” como el que aparece en la Figura
2.29, es posible realizar medidas simultáneas de la toma de iones dentro del citoplasma
de las células epidérmicas o corticales y de la carga del xilema. Mediante tratamientos
con inhibidores y hormonas vegetales, se ha visto que la toma de iones en el córtex y los
procesos de carga del xilema operan de forma independiente. Así por ejemplo, los
tratamientos con inhibidores de la síntesis proteica, por ej., con cicloheximida, o con
una citoquinina, benziladenina, inhiben el proceso de carga del xilema pero no afectan
a la toma de iones en el córtex. Estos resultados sugieren que la salida de iones de las
células de la estela se regula de forma independiente a la toma de éstos por las células
corticales.
Estudios bioquímicos recientes sugieren que las células parenquimáticas del
xilema desempeñan un papel crucial en el proceso de carga del xilema. La membrana
plasmática de las células parenquimáticas del xilema contiene bombas primarias de
protones, acuaporinas, y una gran variedad de canales iónicos tanto de entrada como de
salida de iones. En cebada, se han identificado dos tipos de canales para la salida de
cationes en las células parenquimáticas del xilema: canales específicos para la salida de
K+ y canales no selectivos para la salida de cationes. La actividad de estos canales está
regulada tanto por el potencial de membrana como por la concentración de calcio
citosólico (De Boer y Wegner, 1997). Este descubrimiento sugiere que el flujo de iones
de las células parenquimáticas del xilema a los elementos conductores, no es un simple
proceso de difusión pasiva, sino que se encuentra bajo un estricto control metabólico.
Figura 2.29. Medida de la toma de iones por la raíz y de la carga del xilema. Podemos
medir la relación entre ambos procesos simplemente colocando un segmento de raíz
entre dos compartimentos y añadiendo un ion radiactivo en uno de ellos (el
compartimento A en este caso). La velocidad de desaparición del elemento en el
compartimento A proporciona una medida de la toma de ese ion, y la velocidad de
aparición en el compartimento B proporciona una medida de la carga del xilema.
Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
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La nutrición foliar puede reducir el periodo de retardo (lag) entre la aplicación y la toma
del nutriente por la planta, que puede ser importante durante la etapa de rápido
crecimiento. Puede también evitar el problema de toma limitada de nutrientes en el
suelo, muy particularmente para los micronutrientes. Por ejemplo, la aplicación foliar de
nutrientes minerales como el hierro, manganeso, cobre es más efectiva y económica que
la aplicación a través del suelo, ya que éstos son adsorbidos por las partículas del suelo
y por tanto, están menos disponibles.
Cutícula
Capa
cuticular
Capa de
pectina
Pared celular
primaria
Pared celular
secundaria
Plasmalema
Citoplasma
ectodesmos
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La toma de nutrientes por las hojas es más efectiva cuando la solución nutritiva
permanece en la hoja como una delgada película. Para conseguir esta capa fina se suele
añadir a las soluciones nutritivas surfactantes químicos, como el detergente Tween 80,
que reducen la tensión superficial. El movimiento de los nutrientes a la planta se cree
que se realiza mediante difusión a través de la cutícula y penetración al apoplasto del
mesófilo de donde, del mismo modo que los nutrientes transportados por el xilema, son
incorporados a las células o retransportado a otras partes de la planta. También los
nutrientes pueden incorporase a través de los ectodesmos, canales hidrofílicos de
naturaleza extracitoplásmica que facilitan el intercambio entre el espacio interior de la
hoja y el exterior (Figura 2.30). Aunque la toma a través de los estomas podría ser una
vía de entrada de nutrientes se cree que la arquitectura del poro estomático impide la
penetración de líquidos (Fig.2.30).
9.- RESUMEN
Las plantas intercambian solutos con el medio que las rodea y entre los diferentes
tejidos y órganos que forman el cuerpo de la misma. Tanto el transporte a nivel celular
como el transporte a largas distancias está controlado por las membranas celulares.
Las fuerzas conductoras que permiten el transporte biológico, entre las que se
incluye el gradiente de concentración, el gradiente de potencial eléctrico y la presión
hidrostática, se integran en una expresión conocida como potencial electroquímico. El
transporte de solutos a favor del gradiente químico (i.e., difusión) se conoce como
transporte pasivo. El movimiento de solutos en contra del gradiente de potencial
electroquímico se conoce como transporte activo y requiere energía metabólica.
La extensión con la cual las membranas permiten o restringen el movimiento de
una substancia se denomina permeabilidad. La composición de la membrana y las
propiedades químicas de los solutos son los principales determinantes de la
permeabilidad de la membrana. Cuando los cationes y los aniones atraviesan la
membrana a diferentes velocidades, se genera un potencial eléctrico denominado
potencial de difusión. Para cada ion, la relación entre la diferencia de voltaje a través de
la membrana y la distribución de un ion en el equilibrio se describe mediante la
ecuación de Nernst. La ecuación de Nernst muestra que la diferencia de concentración
de un ion entre dos compartimentos está equilibrada con la diferencia de voltaje
existente entre dichos compartimentos. Esta diferencia de voltaje, o potencial de
membrana, se ha visto en todas las células vivas y, se genera por una distribución
asimétrica de los iones dentro y fuera de las mismas. Todos los potenciales de difusión a
través de la membrana se recogen en la ecuación de Goldman. Las bombas
electrogénicas, las cuales llevan a cabo el transporte activo y transportan una carga neta,
cambian el potencial de membrana del valor creado mediante difusión.
Las membranas contienen proteínas especializadas, canales iónicos,
transportadores o carriers y bombas primarias, que facilitan el transporte de solutos.
Los canales iónicos son proteínas transportadoras que atraviesan la membrana
formando poros por los cuales los solutos difunden a favor de su gradiente de potencial
electroquímico. Los transportadores se unen al soluto en un lado de la membrana y lo
liberan en el otro lado. La especificidad del transporte viene determinada por las
propiedades de los canales y de los transportadores.
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10.- APÉNDICES
Para estudiar las raíces en el suelo se requiere de un mecanismo que nos permita
observarlas directamente. Ya en 1873, el botánico alemán Julius Sachs estudió el
sistema radicular usando un recipiente que tenía una cara de cristal. En la actualidad,
existen grandes laboratorios que disponen de cámaras subterráneas para la observación
del sistema radicular. Estas cámaras se denominan rizotrones (del Griego rhizos, que
significa “raíz” y tron, que significa “instrumento para el estudio”) y permiten analizar
el crecimiento radicular mientras la parte aérea de la planta se encuentra expuesta a las
condiciones naturales.
En un rizotrón, las raíces crecen en una cámara con paredes de vidrio. Las cuadrículas
en el cristal indican la profundidad del suelo. Los detalles de la morfología (tipo de raíz
y distribución) bajo condiciones naturales pueden observarse con unos microscopios
especiales, montados cerca de las paredes de cristal de la cámara. Además, puede
medirse la cinética del crecimiento radicular simplemente tomando fotografías a
diferentes intervalos de tiempo. Los fisiólogos vegetales utilizan esta información
(velocidad de crecimiento) y la relacionan con los cambios en la composición de
nutrientes y con los niveles de agua disponible en el suelo para calcular la actividad de
la raíces a lo largo del perfil del suelo.
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Debido al elevado coste que conlleva construir y mantener un rizotrón, éstos se han
substituido por minirizotrones o periscopios de raíces. Los minirizotrones son tubos
transparentes de plástico que se introducen en el suelo con un cierto ángulo de
inclinación y cerca de la planta que quiere examinarse. Un dispositivo óptico como un
espejo inclinado con una lente de aumento o una pequeña videocámara se introduce en
el tubo para observar las raíces (ver figura). Este dispositivo proporciona información
sobre la densidad de raíces en el suelo, el crecimiento y fenología de la misma.
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obtiene de este modo una célula vegetal sin pared celular que se denomina protoplasto.
La adhesión del extremo de la micropipeta (con un diámetro de 1µm) con el protoplasto
se denomina sellado y debe tener una resistencia elevada, normalmente se sitúa
alrededor de 109 ohmios (GΩ), que permite reducir el ruido de fondo (debido a la
ruptura) lo suficiente para obtener una alta resolución de la corriente asociada al flujo
iónico de un solo canal.
Figura 1. Micrografía de una micropipeta empleada en la técnica del patch clamp unida
a la superficie de un protoplasto de una célula de la aleurona de cebada. Tomado de
Taiz y Zeiger, 1998.
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Los experimentos de patch clamp revelan que los canales están abriéndose y
cerrándose continuamente a una velocidad altísima (Fig. 3). A esta propiedad de abrirse
y cerrarse se denomina gating y la probabilidad de apertura refleja la actividad del
canal. El flujo de iones que pasa a través de los canales es, pues, un proceso
discontinuo. La cantidad de iones que fluyen a través de un canal cuando está abierto,
está determinada por su conductancia y por la magnitud de la fuerza ion motriz (Azcón-
Bieto y Talón, 2000). Cuando el número de canales abiertos aumenta en respuesta al
potencial de membrana, los canales se denominan canales regulados por voltaje
(voltage-gated-channels).
La representación gráfica de la intensidad de corriente que atraviesa los canales
en función del voltaje que se aplica da lugar a las denominadas curvas I-V
(intensidad/voltaje), cuya pendiente es una medida de la conductancia del canal (Figura
3). Asumiendo que el flujo de iones a través de la bicapa lipídica de las membranas es
nulo, la permeabilidad de una membrana para un determinado ion es un valor integrado
del número de canales, su conductancia y su actividad (gating) (Azcón-Bieto y Talón,
2000).
Los canales más abundantes en el plasmalema y en el tonoplasto son los canales de K+.
Actualmente, se conoce que la entrada y la salida de K+ están reguladas por dos tipos de
canales (Maathuis et al., 1997). Los canales que modulan la salida de K+ (outward-
rectifying channels) se abren sólo cuando el potencial de membrana favorece la salida
mediante difusión de K+ y, los canales moduladores de la entrada de K+ (inward-
rectifying channels) se abren sólo cuando el potencial de membrana favorece la entrada
mediante difusión del K+. Como cada tipo de canal tiene sus propios mecanismos de
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Δp= ΔE – 59 ΔpH
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¿Cuánto potasio puede entrar en la célula usando este Δp? Debido a que el potasio tiene
carga positiva y el potencial de la membrana dentro de la célula es negativo, el potasio
puede entrar a través de los canales iónicos por la componente eléctrica de Δp, que
equivale a -120 mV. Usando la ecuación de Nernst podemos calcular que en el
equilibrio con una concentración externa de 1 mM de K+ y un ΔE= -120 mV, la
concentración de K+ en el interior de la célula será de 100 mM. Esto es, la componente
eléctrica de la fuera protón motriz, Δp, se ha usado para generar una asimetría de
concentración de 1/100 para el potasio a ambos lados de la membrana.
La fuerza protón motriz puede usarse también para la incorporación de sacarosa (un
compuesto que no tiene carga) en contra de su gradiente de concentración. El transporte
de sacarosa en plantas se lleva a cabo mediante un transporte con protones de tipo
simporte. Como la sacarosa se cotransporta junto con los protones, intervendrán en su
transporte las dos componentes del potencial electroquímico (es decir, la componente
eléctrica y el gradiente de pH; -238 mV en nuestro ejemplo).
Δ μs = μsi - μse
Así, podemos calcular que para una concentración externa de sacarosa de 1 mM (10-3
M), un Δp de –238 mV se equilibrará con una concentración interna de sacarosa de 10
M. Hay que tener en cuenta que este gradiente de concentración tan elevado no se puede
conseguir en los sistemas biológicos ya que las células cuentan con mecanismos que
regulan la concentración de solutos y alcanzados ciertos niveles, se bloquean los
transportadores, lo que impide su transporte.
La pared celular es una estructura altamente organizada compuesta por una red
tridimensional de microfibrillas de celulosa que se encuentran embebidas en una matriz
constituida por polisacáridos (hemicelulosas y pectinas), proteínas y fenoles en una
solución ligeramente ácida. La pared celular confiere fuerza mecánica a la célula
vegetal e impide la entrada de organismos potencialmente patógenos. Este entramado de
redes poliméricas que constituyen la pared celular actúa a modo de filtro, restringiendo
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químico para los cationes, desde el ámbito más próximo (compartimento 1) al más
remoto (compartimento 2) respecto a los aniones fijados; es decir que el sistema no está
en equilibrio. Así pues, difunden cationes de 1 a 2, hasta que las fuerzas motrices
(gradiente de potencial por un lado, gradiente de concentración por otro) se equilibran.
El equilibrio resultante se llama equilibrio de Donan. Se caracteriza porque la fase de
Donan que contiene los iones fijados no difundibles presenta una concentración total de
iones superior a la fase externa y porque se mantiene un gradiente de potencial
(potencial de Donan) cuya dirección viene dada por la carga del ion no difundible; en el
caso que esté fijado un anión, la fase de Donan en equilibrio con el entorno está siempre
cargada negativamente. Veamos lo expuesto con un ejemplo numérico. Imaginemos dos
compartimentos separados por una fase de Donnan, en un compartimento, por ejemplo
en el interior, hay cargas negativas no difundibles, por ejemplo P-, mientras que en el
compartimento exterior, e, existen iones difundibles como el K+ y el Cl-. Inicialmente,
debemos suponer que existe equilibrio de cargas es decir, se cumple que:
[K+]e = [Cl-]e
[K+]i = [P-]i
En esta situación, el Cl- difundirá desde el exterior, e, hacia el interior, i, y los iones K+
le acompañarán por el efecto de cargas. Si llamamos Ce a la concentración inicial de
K+e, que es igual a la de Cl-e, y Ci a la concentración inicial de K+i y x a la cantidad de
K+ = Cl- que difunde del compartimento e al i, en el equilibrio, los productos de los
iones difundibles debe ser igual
o bien
(Ce - x) (Ce - x) = (Ci + x) x
En el equilibrio tendremos que la concentración del K+ será Ce= 6 y Ci= 9; es decir, los
iones potasio han penetrado en contra de gradiente de concentración, mientras que para
el Cl- su Ce= 6 y Ci= 4, por lo que los iones cloruro han penetrado a favor de gradiente.
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A
2
B Espacio
libre de
Donnan
(DFS)
Apoplasto Espacio
Espacio
libre
libre
acuoso aparente
Espacio
libre de
Plasmalema Donnan
(DFS)
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