30/01/2017

DEFINICIÓN
CROMATOGRAFIA
 La cromatografía en capa fina es la técnica de
separación e identificación de sustancias químicas
EN CAPA FINA mediante un disolvente que se mueve sobre un
soporte solidó adsorbente.
 1. METODO ASCENDENTE: el eluyente asciende por
capilaridad una placa casi en vertical.
 2. METODO DESCENDENTE: el eluyente desciende por
gravedad y capilaridad desde un recipiente una placa
casi en vertical.

VENTAJAS DESVENTAJAS
 Análisis químico de materias orgánicas complejas
 Separación e identificación de compuestos o mezclas
 Identificación en cantidades del orden en microgramos
Las propiedades de la fase
 No se requieren cantidades grandes de muestra
 Sencillon, barato y con una pureza alta
estacionaria pueden alterarse
 El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mediante la adición disoluciones
mucho menor y la separación es generalmente mejor tamponadoras para mantener el pH
 Resultados son fácilmente reproducibles deseado
 En la preparación de las placas también se pueden
adicionar indicadores fluorescentes o aglomerantes

CARACTERISTICAS ADSORBENTES
Tipo de muestra
Componentes polifuncionales
FASE ESTACIONARIA
(Plantas y animales)
Sólido muy poroso
polar
El tamaño de las partículas del adsorbente: Componentes neutros o
ligeramente básicos o
cuanto más finamente dividido esté mayor
lipófilos
será su adhesión al soporte (no susceptibles a la acidez:
Esteroides, ácidos grasos,
Se puede añadir un adherente (yeso,...).
ceras vitaminas
liposolubles)
•Celulosa
•Almidón
•Azúcares
•Carbón activo (carbón en polvo)
•Kieselguhr (tierra de diatomeas
•Silica: Si)
•Gel de Sílice (polar)
•(pH 4-5)
•10-40 mm agente
•aglomerante: CaSO4
•Revelantes: Amarillo y Verde

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ADSORBENTES Tipos de interacciones

Tipo de muestra

•Alúmina u Oxido de aluminio

componentes polares (Ligeramente básico y polar)
(retiene con mayor avidez los • (pH 7-8)
componentes polares) • aglomerante: Hidróxido de aluminio
• Revelantes: AgNO3
Interacciones Fuertes Interacciones Débiles

CARACTERISTICAS Tipos de interacciones

Principales Eluyentes
 FASE MOVIL
Éter de petróleo
 Generalmente menos polar que la fase estacionaria ELUYENYES Éter dietílico
 Los componentes que se desplacen con mayor velocidad POLARES Ciclohexano
Acetato de etilo
serán los menos polares. (ARRASTRE RAPIDO)
Tetracloruro de carbono
 Eluyentes polares rompen mejor las uniones muestra-fase Piridina
estacionaria Benceno
Etanol
 Eluyentes no polares no rompen las uniones muestra-fase ELUYENYES Cloroformo
estacionaria NO POLARES Metanol
(ARRASTRE LENTO) Diclorometano
Agua
Ácido acético

Serie Elutropica MÉTODO

ORDEN DE POLARIDAD (SERIE ELUTROPICA)
hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehído<
ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas<H2O
PARA PORDER CONSEGUIR LA ELUSION (MEZCLAS)
Mayor poder de elusión
 Efectúa la dispersión del adsorbente (dos partes
de agua y una de adsorbentes)
 Aplicar con un dispoisitivo una capa uniforme de
un adsorbente (fase estacionaria sobre una
placa de vidrio u otro soporte) .
 La placa debe quedar libre de grumos y
rugosidades (extensores)
 Un dispositivo que mantenga las placas durante
la extensión

 Una cámara en la que se desarrollen las placas

HEXANO: ACETATO DE ETILO (100:1) cubiertas.
HEXANO: ACETATO DE ETILO (20:1)  Pueden usarse reveladores corrosivos (difiere en
HEXANO: ACETATO DE ETILO (10:1) papel y en columna)
HEXANO: ACETATO DE ETILO (1:1)  Es preciso también poder guardar con facilidad
las placas preparadas y una estufa para
activarlas.

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METODO Aplicación de las muestras

 El espesor del adsorbente
 Disolver la muestra en un disolvente orgánico no polar (P eb bajo).
0.1-0.2 mm para separaciones
 En solventes polares (cloroformo:metanol (1:1)
analíticas.
 Aplicar con micropipetas y microjeringuillas o tubos capilares.
0.5- 2.0 mm para separaciones
 El punto de aplicación de la muestra se denomina toque al borde inferior
preparativas.
 Deja secar para evaporar el disolvente
 Dejar reposar las placas
 El eluyente se introduce en la cámara una hora antes para saturación de la
 Activar el agente adsorbente: Incubar
atmósfera
30-60 minutos a 105-110 ºC (las placas
de celulosa no deben calentarse más de  El tiempo de desarrollo cualitativo, por lo general, no llega a los 30 min. En una
10 minutos a 105ºC). cromatografía preparativa puede llegar a un par de horas.

 Enfriar para evitar los agrietamientos  La mejor posición de desarrollo para un componente es el punto medio entre el
origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se
desplazan con mayor y menor velocidad.
 El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.

REVELADO PARAMETROS RF (Ratio o Font) y RX

Y
 Si los compuestos separados no son coloreados  Es la posición de un
METODOS QUIMICOS: una reacción química entre un reactivo compuesto sobre una placa
como una fracción decimal XA
revelador y los componentes separados
 Yodo: complejo amarillo-marrón (temporal)  Mide la retención de un XB
 Ácido sulfúrico: complejos orgánicos (manchas negras relacionadas con componente.
la cantidad del componente  La distancia recorrida se mide
 2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas) (base de Shift) desde el centro de la mancha.
 Verde de bromocresol (para ácidos carboxílicos)  El máximo valor de RF = 1,
 Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas) (ideal es un RF entre 0.65 y
 Ninhidrina (para aminoácidos) 0.7)
METODOS FISICOS.  El Rx es la razon de la A A+B B
 Añadir un adsorbente un indicador fluorescente distancia recorrida entre la
sustancia problema y el X XA
 Ultravioleta RF X RX
compuesto de referencia XB
Y

Influencia de la Estructura
de los compuestos en el RF Recomendaciones de la CCF

Compuestos poco  No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).

Compuestos muy
 No utilizar compuestos muy volátiles.
polares: polares
 Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).
Interaccionan Interaccionan débilmente
 Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con
fuertemente con la fase con la fase estacionaria
eluyentes cada vez menos polares.
estacionaria Corren mucho  Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir
Corren poco RF grande utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes más polares,
RF pequeño hasta dar con el más apropiado.
 Saturación posible de la atmósfera de la cámara, las paredes se
tapizan con papel impregnado del eluyente.
 A veces pueden obtenerse separaciones mejores sin poner papeles
en las paredes, cosa que no debe olvidarse.

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Recomendaciones de la CCF

 Si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma

placa y se desarrolla con varios eluyentes.
 Si los Rf son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no
se trataba del mismo compuesto.
 Si los Rf son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.
 Si el Rf se eluyen sobre la misma placa con el mismo eluyente u
otros de menor polaridad, hasta apreciar una separación mínima.
 No usar reveladores químicos porque alterarían los compuestos UV