Células T FOXP3+ regulatorias en el sistema inmune humano

Abstracto |Las células T Forkhead boxP3 (FOXP3)+ son potentes mediadores de auto tolerancia dominante en
la periferia. Pero la confusión en lo que respecta a la identidad, a la estabilidad y a la función supresora de las
células T reguladoras humanas, hasta la fecha ha impedido el uso terapéutico general de estas células. Estudios
recientes han sugerido que las células T reguladoras humanas son funcional y fenotípicamente diversas. Aquí
discutimos los descubrimientos recientes en lo que respecta a las células T reguladoras humanas, incluyendo la
ontogenia y el desarrollo de subgrupos de células T reguladoras que tienen fenotipos naive y de memoria, los
mecanismos únicos de supresión mediados por subgrupos de células T reguladoras y los factores que regulan
el compromiso del linaje de células T reguladoras. Discutimos futuros estudios que se necesitan para el uso
terapéutico exitoso de células T reguladoras humanas.

Las células T regulatorias (TReg) que expresan el factor de transcripción forkhead box P3 (FOXP3) están
naturalmente presentes en el sistema inmune. Son indispensables para el mantenimiento de la auto tolerancia
dominante y la homeostasis inmune. Su disfunción (por ejemplo, la debida a la mutación del gen FOXP3) causa la
enfermedad autoinmune fatal, inmunopatologías y alergias. Las células TReg FOXP3+, la mayoría de las cuales son
células T CD4+ que expresan CD25 (el receptor de cadena α de la interleucina 2 (IL-2)), pueden suprimir la
activación, la proliferación y las funciones efectoras – tales como la producción de citoquinas – de un amplio rango
de células inmunes, incluyendo a las células T CD4+ y CD8+, células natural killer (NK) y NTK, células B y células
presentadoras de antígenos (CPAs) in vitro e in vivo. Esta habilidad única de controlar las respuestas inmunes
vuelve centrales a las células TReg FOXP3+ en la prevención de la enfermedad autoinmune, la inmunopatología y la
alergia, así como en el mantenimiento de la tolerancia al injerto y la tolerancia materno-fetal durante el embarazo.
Como una espada de doble filo, las células TReg FOXP3+ también pueden suprimir las respuestas inmunes
antitumorales y favorecer la progresión tumoral. De ese modo, a pesar de los intentos fallidos por parte de los
inmunologistas en el último cuarto del siglo pasado por definir a las células TReg en un nivel molecular, la
inmunobiología y la biología molecular relacionadas a las células TReg ahora se han convertido en un campo de
investigación intensa, con las células TReg FOXP3+ como el objetivo primario en la búsqueda de nuevas aplicaciones
clínicas.

Además de las células TReg FOXP3+ CD4+ CD25+, se ha mostrado que otras células T también poseen actividad
regulatoria y pueden, al menos en ciertas condiciones, prevenir la autoinmunidad en roedores. La mayoría de
estas células – tal como las células TR1 que secretan IL-10, las células T 3 colaboradoras (TH3) que secretan el factor
de crecimiento transformante-β (TGFβ) y ciertas células T CD4- CD8- y células T CD8+ CD28—son adaptativamente
regulatorias: o sea, adquieren funciones regulatorias siguiendo estimulación antigénica específica en medios de
citoquinas particulares. Éstas, por lo tanto, contrastan con las células TReg FOXP3+ CD4+ que ocurren naturalmente,
la mayoría de las cuales están determinadas desde el desarrollo en el timo como una subpoblación de células T
que se especializa en la función supresora.

Las células TReg humanas se caracterizaron inicialmente como células T CD4+ CD25+ en 2001 por varios grupos,
basados en el descubrimiento de 1995 de que las células TReg de ratón expresan constitutivamente CD25 (REF.13).
De un modo similar, en 2003, se describió a Foxp3 como un gen de control maestro en el desarrollo y la función
de las células TReg de ratón, y subsecuentes estudios han confirmado a FOXP3 como un marcador específico para
las células TReg humanas (TIMELINE). Sin embargo, se mostró entonces que la expresión de tanto CD25 como de
FOXP3 podría ser inducida en células T naive CD4+ a través de la activación celular, oscureciendo la identificación
de las células T FOXP3+ como células TReg puras. Como resultado, ha prevalecido cierta confusión en lo que respecta
al fenotipo, la función y la estabilidad de las células TReg FOXP3+ en humanos, produciendo discrepancias en la
literatura al respecto de la caracterización fenotípica y funcional de las células TReg en individuos sanos y pacientes
con enfermedades inmunológicas.

Estudios recientes han mostrado que las células T CD4+ FOXP3+ no son homogéneas en la función de expresión
génica, fenotípica y supresora, e indicaron que se necesita de una nueva base para la delineación confiable de
células TReg humanas. En esta revisión, discutimos el desarrollo de células TReg humanas, la definición de subgrupos
de células TReg basados en la expresión de FOXP3, CD4RA y CD45RO, los fenotipos y las funciones de los subgrupos
de células TReg FOXP3+ y sus aplicaciones clínicas.

Auto-tolerancia Dominante: se refiere a la supresión activa de una respuesta autoinmune in vitro o in vivo por las
células supresoras, incluidas las células T regulatorias. En contraste, la tolerancia delecional y la energía son
mencionadas como mecanismos de auto tolerancia recesiva o pasiva. La auto-tolerancia dominante es transferible
a los receptores naive, mientras que la auto-tolerancia recesiva no lo es.

Tolerancia central: La auto tolerancia que es creada a nivel de los órganos linfoides centrales. Las células T en
desarrollo en el timo, y las células B en la médula ósea, que reconocen fuertemente al antígeno propio enfrentan
la deleción o la inducción de languidez.

Auto-tolerancia: La tolerancia a tejido del propio individuo que se alcanza a través de mecanismos de tolerancia
tanto centrales como periféricos, incluyendo a deleción de células T, la languidez y la regulación inmune. Sin las
tolerancias central y periférica, los mecanismos del sistema inmune serían incapaces de distinguir lo los antígenos
propios de los ajenos, resultando en una autoinmunidad.

Corpúsculos de Hasall: Son pequeños grupos o capas concéntricos de epitelio estratificado queratinizado en la
médula del timo. Probablemente son células epiteliales en etapa final de diferenciación que participan en la
selección negativa de timocitos y/o sufren apoptosis ellas mismas.
Desarrollo de células TReg humanas

Origen tímico de las células TReg naturales. Antes del descubrimiento y de la caracterización de las células TReg
presentes de forma natural, la causa de la enfermedad autoinmune espontánea se atribuía principalmente a una
tolerancia central aberrante. El rol de las células TReg en la auto-tolerancia se implicó por dos modelos animales
de autoinmunidad: la enfermedad autoinmune fue inducida en ratones por una timectomía neonatal en los días
2-4 luego del nacimiento y en ratas a través de una timectomía adulta y subsecuentes rondas de irradiación con
rayos X. La enfermedad autoinmune inducida por cualquiera de los dos métodos puede prevenirse con la
transferencia de células T CD4+ desde ratones y ratas normales. Estos descubrimientos sugieren que el timo
normal produce células T con una función autoinmune preventiva, que su ontogenia en ratones puede ser
interrumpida por una timectomía neonatal y que son altamente proliferativas y por ende sensibles a rayos X.

Se mostró evidencia directa del origen tímico de las células TReg y su persistencia en la periferia por la transferencia
adoptiva de suspensiones depletadas de células T periféricas o tímicas de células T CD4+ CD25+, lo cual resulta en
el desarrollo de varias enfermedades autoinmunes en ratones deficientes de células T singénicas.
Ontogenéticamente, las células T CD4+ CD25+ (y las células T FOXP3+, tal como se muestra posteriormente) se
vuelven detectables en la periferia aproximadamente 3 días después del nacimiento, indicando que a timectomía
neonatal abroga la producción tímica de células TReg. Además, la depleción de las células T FOXP3+ periféricas por
un tiempo limitado tiene como resultado la autoinmunidad en ratones. Basados en estos descubrimientos, se cree
que las células T FOXP3+ CD4+ derivadas del timo son células TReg “naturales”.

A pesar de que se han identificado timocitos FOXP3+ inmaduros en el timo humano, poco se sabe acerca de los
requerimientos del desarrollo de células TReg tímicas en humanos. Sin embargo, hay muchas condiciones
requeridas para el desarrollo de células TReg naturales en ratones; las células del estroma tímico, incluidas las
células epiteliales de la corteza y de la médula tímicas y las células dendríticas (CDs), contribuyen a la
diferenciación y a la selección de células TReg, aunque es controversial cómo y hasta qué punto cada componente
celular del estroma se requiere en este proceso. El desarrollo tímico de las células TReg requiere una alta afinidad
de interacciones entre sus receptores de células T (TCR) y los complejos MHC-péptido-propio presentados por las
células del estroma del timo. Estas células también proveen señales co-estimuladoras que son necesarias para el
desarrollo de las células TReg tal como se indica por la disminución en el número de células TReg generadas en la
subsecuente pérdida por parte del timo de la expresión CD40 y CD28. Además, se requieren tanto la IL-2 y la IL-7
en el microambiente tímico para el desarrollo de células TReg en ratones. Dada la similaridad conocida entre el
desarrollo del timocito en ratones y humanos, es muy probable que muchos de estos requerimientos para células
TReg en ratones sean similares en el desarrollo de células TReg en humanos.

Sin embargo, una estructura única en humanos – los corpúsculos de Hassall en la médula tímica – podría contribuir
a formar el microambiente especializado requerido para brindar soporte a las células TReg incipientes. Los
corpúsculos de Hassall secretan linfoproteína del estroma tímico (TSLP), la cual activa CDs CD11c+ inmaduras y
migratorias en el timo y promueve la expresión de moléculas co-estimuladoras. Las CDs activadas por TSLP
parecen inducir la expresión de FOXP3 en timocitos inmaduros CD4+CD8-CD25-, pero no lo hace en células T CD4+
naive derivadas de sangre periférica. Las CDs activadas por TSLP podrían contribuir con la selección positiva de
timocitos auto-reactivos de alta afinidad y brindar soporte a su diferenciación en células TReg FOXP3+ maduras.

El desarrollo de células TReg en humanos y ratones podría seguir un curso similar de ontogenia, a pesar de que en
humanos la mayoría de los eventos de desarrollo de células T tienen lugar in útero. El timo humano produce
células T maduras tan temprano como a la semana trece de la gestación, y en la semana catorce, cerca del 7% de
los timocitos CD4+ maduros expresan altos niveles de CD25, un marcador fenotípico asociado con la función de
las células TReg en sangre periférica de adultos. En esta etapa del desarrollo, los órganos fetales son supuestamente
colonizados por células TReg CD4+CD25hi. Estas células TReg fetales derivadas del timo expresan FOXP3 y son
funcionalmente supresoras cuando se cultivan juntamente con células T efectoras. Esta información indica que
las células TReg humanas funcionales comienzan a desarrollarse en el útero.

Figura 1 | Expresión de FOXP3 en células TReg humanas. Esquema para forkhead box P3, isoforma A (FOXP3A) y la estructura
proteica de FOXP3B, con la lista de los dominios conocidos encima y as funciones putativas debajo. La expresión de FOXP3 a
bajos niveles induce un fenotipo de células TReg limitado pero sin función supresora, la cual solo se obtiene cuando se
expresa altamente FOXP3. CTLA4, antígeno 4 del linfocito T citotóxico; HDAC, histona deacetilasa; IL, interleucina;
NF-κB, factor nuclear κB; NFAT, factor nuclear de células T activadas; RORα, receptor retinoacídico relacionado a
un receptor α huérfano.
El factor de transcripción FOXP3 en humanos y ratones.
El rol clave del gen FOXP3 en el mantenimiento de la auto-tolerancia se demostró primeramente en
ratones casposos (scurfy mice) y subsecuentemente en pacientes con inmuno-desregulación, poli
endocrinopatía, enteropatía, síndrome ligado al X (IPEX) como la anomalía genética causal que resulta
en varias enfermedades autoinmunes y alergias, lo cual se asemeja a las enfermedades observadas luego
de la depleción de las células TReg en roedores. De un modo importante, la expresión ectópica de FOXP3 en
células T CD4+ naive de ratón les confiere actividad supresora e induce la expresión de moléculas de firma
asociadas a células TReg tales como el CD25, el antígeno 4 del linfocito T citotóxico (CTLA4) yla proteína relacionada
al receptor de TNF inducido por glucocorticoide (GITR). La expresión de estos receptores también se correlaciona
con la expresión de FOXP3 en células T CD4+ humanas. Esta inducción de la actividad supresora en células T
convencionales por la expresión ectópica de FOXP3, junto con el desarrollo de la enfermedad autoinmune en
mutantes FOXP3 o ratones deficientes, indican que FOXP3 es el regulador maestro en la diferenciación y función
de las células TReg.

Los humanos expresan dos isoformas principales de FOXP3, cualquiera de las cuales puede conferir función
regulatoria cuando se sobre-expresa fuertemente. La isoforma delecional principal de FOXP3 (FOXP3B) carece del
exón 2 rico en prolina, el cual codifica el motivo Leu-X-X-Leu-Leu que se requiere para la unión al receptor α
huérfano relacionado al receptor del factor de transcripción del ácido retinoico (RORα), y carece de residuos
amino-terminales que puedan mediar la interacción con el factor nuclear de células T activadas (NFAT) con su
represión transcripcional resultante (FIG. 1). El rol de FOXP3B en la biología de las células TReg humanas aún no es
claro.

Aunque la expresión transitoria de FOXP3 no activa la supresión, la expresión sostenida de FOXP3 por células T
activadas puede conferir competencia regulatoria (FIG. 1). Además, en células TReg CD4+ humanas, la expresión
alta y estable de FOXP3 se requiere para la función supresora, y la pérdida de la expresión FOXP3 a lo largo del
tiempo debido a cultivos de largo plazo, disminuye la habilidad de las células TReg previamente potentes para
suprimir.

En contraste con el sistema humana, las células T CD4+naive de ratón carecen de expresión transitoria y promiscua
de FOXP3 luego de la activación. Sin embargo, las células T convencionales de ratón se convierten rápidamente
en células TReg FOXP3+ luego de la estimulación in vitro con TGFβ o ácido retinoico. Tales células TReg “inducidas”
o “adaptativas” expresan muchos de los marcadores fenotípicos asociados con la función regulatoria, tales como
FOXP3, CD25 y CTLA4, pero no exhiben el perfil de transcripción del gen de firma de las células TReg
CD4+CD25+FOXP3+ naturales ex vivo descritas en REF. 55. Ciertamente, gran parte del perfil regulatorio inducido
por TGFβ es independiente de FOXP3, ya que se expresa de un modo similar en las células T CD4+ tratadas con
TGFβ derivadas de ratones casposos (scurfy mice) deficientes de FOXP3.

En humanos, en contraste con las células T CD4+ FOXP3+ que se dan de modo natural, las células T FOXP3+
inducidas desde células T CD4+ naive por una estimulación TCR in vitro y TGFβ, muestran poca actividad supresora
in vitro, pero pueden secretar citoquinas pro-inflamatorias. Esto indica que las células T CD4+ convencionales
podrían requerir factores adicionales, además de los cambios fenotípicos y funcionales inducidos por la expresión
de FOXP3, para adquirir completamente l actividad supresora en humanos. Aun se debe determinar si las células
TReg FOXP3+ inducidas están fisiológicamente presentes in vivo tanto como las células supresoras funcionalmente
competentes en humanos y, si este es el caso, hasta qué punto las células TReg FOXP3+ periféricas son convertidas
de células T naive o derivadas del timo.

Tal como se mencionó anteriormente, el FOXP3 humano es expresado tanto por las células T activadas y
regulatorias en la sangre periférica, como lo son otros marcadores de células TReg conocidos, tales como el CD25,
CTLA4, GITR y CD95 (también conocido como FAS) (TABLA 1). Este aumento del FOXP3 en células T activadas
podría ser un componente del programa homeostático iniciado por estas células para ejercer un feedback
negativo durante el curso de una respuesta inmune. De modo importante, también muestra que las células T
FOXP3+ en humanos son funcionalmente heterogéneas, como se discute a continuación.

Delineación de las células TReg humanas

Ya que la detección de FOXP3 intracelular dificulta la conducción de una valoración funcional de las células TReg,
los marcadores celulares de superficie son cruciales en la identificación de células TReg viables. En ratones, las
células TReg CD4+ FOXP3+ en ratones naive pueden identificarse por la expresión de CD25 (REF. 13).

Ratones casposos (Scurfy mice)

Ratones con una mutación espontánea en Foxp3, lo que conduce a una rápida enfermedad fatal linfo-proliferativa,
causando la muerte a las 4 semanas de edad.

Inmuno-desregulación, poli endocrinopatía, enteropatía, síndrome ligado al X (IPEX)

Enfermedad causada por mutaciones en FOXP3 y caracterizada por enteritis refractaria, endocrinopatías
autoinmunes, incluyendo diabetes tipo 1, tiroiditis y alergia.

CCR, receptor de quimiocina CC; CTLA4, antígeno 4 del linfocito T citotóxico; FOXP3, forkhead box P3; GARP, repeticiones
predominantes de lo glicoproteína A; GITR, proteína relacionada al receptor de TNF inducida por glucocorticoide; ICOS, co-
estimulador de células T inducible; IL, interleucina; LAP, péptido asociado a la latencia; MS4A4B, 4 dominios que se expanden
en la membrana, subfamilia A, miembro 4B; PD1, célula de la muerte programada 1; R, receptor; TRANCE, citoquina inducida
por activación relacionada al TNF; TReg, célula T regulatoria.
Sin embargo, la expresión de CD25 no puede ser usada en estudios humanos ya que la sangre periférica aislada
de una población humana no consanguínea contiene hasta el 30% de células T CD4+ CD25+. Solo del ~1-2% de las
células con la expresión más alta de CD25 han mostrado ser funcionalmente supresoras y pueden ser considerada
células TReg. Además, dado que los niveles de expresión de FOXP3 y CD25 son proporcionales en células T FOXP3+
humanas, el aislamiento de células T que expresan altos niveles de CD25 excluye a las células TReg FOXP3low
(bajas)
CD25mid (medianas), las cuales tienen un fenotipo naive (CD45RAhi (alto)CD45RO-) (ver a continuación).
Adicionalmente, con fines prácticos, no hay un criterio firme para determinar dónde queda la frontera entre la
expresión intermedia o alta de CD25. Esta frontera “difusa” ha obstaculizado la reproductibilidad de los análisis
clínicos de la información de la cantidad y la función de las células TReg, particularmente bajos condiciones
inflamatorias en las cuales las células T activadas expresan CD25.

Recientemente, muchos grupos mostraron que la falta de CD127 de superficie celular (también conocido como
receptor de cadena α de la IL-7) puede ser una alternativa útil para el CD25, para la delineación y la purificación
de células TReg humanas: la expresión de FOXP3 y la habilidad supresora están enriquecidas en células T CD4+ que
expresan niveles bajos de CD127 (REFS 59,60). Sin embargo, las células T CD4+ convencionales tienden a inhibir
la expresión de CD127 luego de la activación. Por lo tanto, solo la expresión de CD127 no puede discriminar
precisamente células TReg de células T activadas ex vivo. De un modo alternativo, la expresión de CD62L (también
conocido como L-selectina), aunque no está restringida a células TReg, podría ser usado para diferenciar entre
células TReg, las cuales son CD25hi (altas) CD127low (bajas) CD62+, y las células T CD4+ convencionales recientemente
activadas, las cuales son CD62Llow (bajas) (REF. 63).

Adicionalmente, el uso combinado de CD127 y CD25 para aislar células TReg está comprometido por la existencia
de una población no reguladora de células T CD4+ que expresa FOXP3 en la periferia en humanos. Ciertamente
esta población, la cual expresa CD45RO y bajos niveles de FOXP3, tiene una expresión de baja a intermedia de
CD127 pero no suprime células efectoras in vitro y produce citoquinas pro-inflamatorias, incluyendo IL-2,
interferón-γ (IFNγ) e IL-17 (REF. 5). Estas células T FOXP3low (bajas) no regulatorias podrían ser células T CD4+
efectoras activadas, que in vitro han mostrado promover la expresión de FOXP3 sin la adquisición de una habilidad
supresora. La diferencia entre estas células T FOXP3+ no regulatorias y las células TReg FOXP3+ funcionales podrían
estar conectadas con el estado de metilación del gen FOXP3, el cual está incompletamente desmetilado en células
T CD45RO+FOXP3low (bajas) no regulatorias pero está completamente desmetilado en células TReg FOXP3+ con
actividad supresora. La existencia de esta población de células T FOXP3low (bajas) no regulatorias en individuos
normales evita el uso de la expresión de FOXP3 como un único marcador para células TReg humanas.

Heterogeneidad de las células TReg humanas. Tal como se sugirió previamente, las células T FOXP3+ humanas son
fenotípica y funcionalmente heterogéneas, incluyendo células T supresoras y no supresoras. Estudios recientes
han mostrado que la expresión de CD45RA o de CD45 RO, la cual es mutuamente exclusiva tanto en células T
FOXP3+ como en otras, es un marcador particularmente útil cuando se combina con la expresión de CD25 y/o
FOXP3.

Las células TReg CD45RO+CD25hi (alta)CD4+ son similares a las células TReg en términos de la expresión de CD25 y
otros marcadores de células TReg, potente actividad supresora, y un aparente estado anérgico, y por lo tanto
originalmente se pensó que eran la contraparte humana de las células TReg CD25+CD4+. Sin embargo, ahora se ha
vuelto claro que, a diferencia de los ratones, las células T FOXP3+ CD4+ con un fenotipo naive (o sea, que expresan
CD45RA pero no expresan CD45RO) también poseen potentes funciones supresoras y están presentes en la sangre
periférica y es prevalente en la sangre del cordón. Una comparación del comportamiento de la expresión del gen
tanto in vitro como in vivo entre células TReg CD45RA+FOXP3+ y CD45RO+FOXP3+ ha revelado que estos subgrupos
son funcionalmente diferentes pero están relacionados en su desarrollo (FIG. 2).
Células TReg CD45RA+FOXP3low (bajas) naive. Las células TReg “naive” se caracterizan por su expresión de superficie
de CD45RA y sus bajos niveles de FOCP3 intranuclear (REFS 5, 20, 66). La expresión de CD45RA sin la expresión
concomitante de CD45RO es un marcador fenotípico de las células T naive que no han experimentado maduración
mediada por estimulación de TCR. Sin embargo, basados en la información de los ratones, las células TReg necesitan
ser estimuladas continuamente por su antígeno análogo, presumiblemente un auto antígeno, para ser
mantenidas en la periferia. Por lo tanto, aunque expresan CD45RA, estas células TReg no pueden ser consideradas
estrictamente como células T naive. De hecho, se ha sabido por más de 20 años que las células T CD4+ pueden
expresar CD45RA. Sin embargo, la mayoría de las células TReg CD45RA+ FOXP3low (bajas) naive también expresan
CD31 (también conocida como PECAM1), un marcador de superficie celular específico para emigrantes tímicos
recientes, mientras que virtualmente todas las células TReg CD45RO+ no lo tienen. Por lo tanto, se puede concluir
que la mayoría, sino todas, las células TReg derivadas del timo encontradas en la periferia son células TReg CD45RA+
FOXP3low (bajas) naive. La ausencia de expresión de Ki67, un marcador de proliferación nuclear, indica que estas
células TReg naive están en una etapa quiescente, justificando su denominación alternativa como células TReg “en
reposo”.

Anergia

Un estado de no respuesta al antígeno. Las células B o T anérgicas no pueden responder a sus antígenos análogos
bajo óptimas condiciones de estimulación.
Figura 2 | Diferenciación de células TReg. Los marcadores fenotípicos son indicados durante la diferenciación de células T
CD4+ dentro de los linajes celulares de células T convencionales y células T (TReg). Todos los linajes celulares se originan en el
timo y emigran como células T CD45RA+ naive. La activación de las células T naive en la periferia induce su diferenciación
tanto en subgrupos convencionales como regulatorios. Las células T convencionales pueden diferenciarse más en células T
memoria, las cuales pueden ser entonces reactivadas. A pesar de que la formación de memoria convencional no ha sido
descrita, las células TReg han demostrado diferenciarse en células TReg efectoras terminales con una expresión única de
marcador de superficie celular. También contribuyendo con el compartimiento, las células T Reg CD45RA- periféricas son
convertidas en células parecidas a las TReg, las cuales derivan de las células T convencionales. Estas células TReg convertidas en
parecidas tiene una expresión de marcador de superficie celular parecida a la expresada por las células TReg naturales. CTLA4,
antígeno 4 del linfocito T citotóxico; FOXP3, forkhead box P3; ICOS, co-estimulador de células T inducible; IL, interleucina.

Las células TReg naive proliferan luego de la estimulación in vitro por TCR y son altamente resistentes a la apoptosis,
lo cual está en contraste con las células TReg CD45RO+ CD25hi (altas) FOXP3+, las cuales tienden a ser hiporresponsivas
y apoptóticas luego de la activación in vitro (ver a continuación). Los experimentos que involucran la transferencia
de células TReg naive humanas a ratones NOD/Shi-scid II2rg-/- (NOG) y que son analizadas in vivo por un repertorio
TCR en un donante saludable, han mostrado que, una vez activadas, las células TReg naive proliferan, promueven
la expresión de FOXP3 y convierten células TReg CD45RO+ CD25hi (altas) FOXP3. Esta información indica que la
contraparte humana de las células TReg naturales derivadas del timo es más probable que sea la población de
células TReg CD45RA+ GOXP3low naive que la población de células TReg CD45RO+CD25hi FOXP3+. Esta idea es
respaldada por el descubrimiento de que casi todas las células T CD4+ que expresan FOXP3 encontradas en sangre
del cordón umbilical son células TReg CD45RA+ FOXP3low.
Apoptosis

Una forma común de muerte celular, la cual también es conocida como muerte celular intrínseca o programada.
Muchos estímulos del desarrollo y fisiológicos causan la apoptosis, y este mecanismo es usado frecuentemente
para eliminar células no deseadas, superfluas o potencialmente dañinas, como las que sufren transformación.

Ratones NOD/Shi-scid II2rg-/- (NOG)

Ratones inmunodeficientes que pueden ser adoptivamente transferidos con células humanas. Cuando se los
reconstituye con células madre del cordón umbilical humano, estos ratones permiten el análisis de
comportamiento de las células humanas in vivo.

A pesar de que los emigrantes tímicos FOXP3+ recientes constituyen una población homogénea con un fenotipo
distintivo (CD45RA+ FOXP3low CD31+), los timocitos FOXP3+ en desarrollo son más heterogéneos en su fenotipo.
El análisis de las células en el timo humano ha identificado timocitos FOXP3+ que expresan CD45RA, tanto como
CD45RO – y un co-estimulador de células T inducible (ICOS) – expresando timocitos FOXP3+ (se discute a
continuación). CD45RO e ICOS son usualmente expresados por células T que han experimentado antígenos del
tipo memoria en la periferia, y no se expresan por emigrantes tímicos recientes. La expresión transitoria de estos
marcadores podría tener un rol importante en el desarrollo tímico de las células TReg. Por ahora, se ha mostrado
que el ligando ICOS es esencial para la supervivencia de las células TReg ICOS in vitro. De un modo especulativo, el
desarrollo de las células TReg en el timo podría requerir la expresión transitoria de la activación y/o marcadores
memoria tales como CD45RO e ICOS para evitar la deleción.

Efector de células TReg CD45RO+ FOXP3hi. Las células T CD45RO+ FOXP3hi, las cuales parecen derivar
principalmente de las células TReg CD45RA+ FOXP3low naive, tienen una potente actividad supresora in vitro y
muestran hiporrespuesta luego de la activación in vitro. Su hiporrespuesta in vitro, la cual fue atribuida a la anergia
en estudios previos, es realmente secundaria a su alta susceptibilidad a la apoptosis luego de la activación y
durante la supresión. Tal como se muestra a través de la expresión de CD25, GITR, CD95 y CTLA4, los cuales son
conocidos por estar aumentados por células T CD4+ convencionales recientemente activadas, tienen
características de células T recientemente activadas. De un modo importante, al igual que las células TReg naturales
en ratones, éstas son altamente proliferativas in vitro e in vivo, como se ha substanciado por la incorporación in
vivo de glucosa marcada con tritio, con la expresión de Ki67 y la expansión clonal de las células T que expresan
TCRs particulares. Así, en contraste con las células TReg naive que están en un estado de reposo, las células T
CD45RO+ FOXP3hi se pueden pensar como un subgrupo funcionalmente diferenciado y activado de células TReg,
aunque deben ser más estimuladas a través de su TCR para ejercer la supresión in vitro. Basados en estos
descubrimientos, las células T CD45RO+ FOXP3hi pueden ser llamadas células TReg “efectoras”. En contraste con
las células TReg naive, las cuales son enriquecidas en la sangre del cordón y el subgrupo principal de células TReg in
útero, las células TReg efectoras son más prevalentes en adultos y en personas mayores (CAJA 1).
 Caja 1 | Las células T FOXP3+ regulatorias a lo largo de la vida

Células T regulatorias en el útero

 Las células T regulatorias (TReg) aisladas de tejidos fetales expresan marcadores que son asociados con el
fenotipo de las células TReg o con la activación de células T, incluyendo CD62L, CD45RO, OX40 (también
conocido como CD134), la proteína relacionada al receptor TNF inducida por glucocorticoide (GITR), las
moléculas MHC de clase II y el antígeno 4 del linfocito T citotóxico (CTLA4) intracelular. Estos
descubrimientos son de cierto interés dado que la mayoría de los investigadores que han caracterizado a
las células TReg en sangre de cordón umbilical han reportado que las células TReg tienen un fenotipo naive,
con una alta expresión de CD45RA y una expresión baja de CD45RO.
 La expresión de marcadores de tipo memoria por células TReg fetales podría indicar la activación en el tejido
periférico. Esto es sustanciado por la presencia de pequeñas cantidades de células parecidas a efectores
TReg que contienen un fenotipo Ki67+ CD45RAlowCD45RO+FOXP3hi en la sangre del cordón umbilical.
 Descubrimientos recientes indican que las células TReg fetales tienen un rol temprano en el mantenimiento
de la auto-tolerancia fetal y en el establecimiento de la tolerancia feto-materna.

Cambios de toda una vida en subgrupos de células TReg

 El análisis de la prevalencia de células TReg naive en sangre periférica indica que su proporción dentro de las
células T CD4+ declina con la edad, comenzando en un rango del 4-10% en la sangre del cordón y
disminuyendo al 1-4 en adultos jóvenes y al 0.5-1.5% en donantes ancianos saludables.
 Sin embargo, la prevalencia de células TReg efectoras se incrementa levemente con la edad comenzando
desde un rango de 0-0.5% en la sangre del cordón e incrementándose a un 1-2.5% en adultos jóvenes y a
un 1-4% en donantes ancianos saludables.
 Por causa de la involución tímica en adultos, la producción tímica de células T está grandemente reducida
pero aún es detectable en personas mayores, sugiriendo que el tejido tímico involucionado aún podría
estar activo.

A pesar de que las células TReg efectoras expresan CD45RO, el cual es un marcador de células T de memoria
convencionales, no hay evidencia de células TReg de memoria o de recuerdo de respuestas en experimentos con
ratones, volviendo impreciso el llamar a las células TReg efectoras como una población de células TReg
verdaderamente de “memoria”. Ciertamente, el análisis de la rotación de células TReg efectoras in vivo indican que
estas células sufren una rápida rotación, la cual no es indicativa de una población de células T de memoria de vida
larga. Sin embargo, permanece la posibilidad de que las células TReg efectoras puedan madurar para convertirse
en células supresoras terminalmente diferenciadas que rápidamente sucumben a la muerte celular (ver a
continuación). Todavía se debe determinar si la población de células TReg efectoras contiene una subpoblación de
tipo memoria de larga vida.

Involución tímica

La disminución dependiente de la edad del volumen epitelial del timo, la cual resulta en una producción disminuida
de células T.
El análisis fenotípico indica que el subgrupo de células TReg efector es heterogéneo en la expresión de ICOS y HLA-
DR. La expresión diferencial de ICOS ha mostrado delinear dos subgrupos funcionalmente diferentes de células
TReg efectoras en la periferia. Ciertamente, las células TReg ICOS+ o ICOS- efectoras producen activamente las
citoquinas supresoras IL-10 o TGFβ, respectivamente.

De un modo interesante, solo las células TReg ICOS+ efectoras pudieron suprimir el aumento de la expresión de
CD86 en CDs, lo cual sugiere que los objetivos de supresión para cualquiera de los subgrupos pueden ser
diferentes.

De un modo similar, la expresión de HLA-DR identifica a una subpoblación terminalmente diferenciada de células
TReg efectoras. El HLA-DR es expresado aproximadamente por un tercio de las células TReg efectoras en sangre
periférica de adultos. Las células TReg HLA-DR+ suprimen la proliferación in vitro de células T convencionales y
secretan citoquinas más rápidamente que las células TReg HLA-DR-. Ciertamente, la activación y la expansión de
células TReg CD25hi HLA-DR- in vitro conduce a la generación de células TReg HLA-DR+. Estas células TReg HLA-DR+
efectoras generadas in vitro exhiben una capacidad supresora similar a la observada en células TReg HLA-DR+
efectoras ex vivo; tanto las células TReg HLA-DR+ aisladas ex vivo o generadas in vitro suprimen más eficientemente
que las células TReg HLA-DR-. La cinética de la expresión de HLA-DR por células TReg efectoras es distinta de las
células T CD4+ convencionales: las células T convencionales expresan temporalmente HLA-DR luego de la
activación, mientras que las células TReg efectoras mantienen la expresión HLA-DR al menos por treinta días post-
activación. Dados estos descubrimientos in vitro, es probable que las células TReg efectoras puedan ganar y retener
la expresión HLA-DR in vivo. Al tomarlas en conjunto, las células TReg HLA-DR+ aisladas ex vivo parecen constituir
un subgrupo terminalmente diferenciado en el pool de células TReg efectoras (FIG. 2).

Actividad supresora de las células TReg humanas

Ensayo de supresión in vitro de células TReg humanas. Actualmente, el estudio funcional de la supresión mediada
por células TReg humanas está limitado a ensayos de cultivos in vitro. Se debería enfatizar como un aviso de que
no hay evidencia directa en el presente de que el ensayo de supresión in vitro refleja directamente las capacidades
supresoras in vivo de las células TReg. Además, la mayoría de los ensayos de supresión in vitro miden el consumo
de timidina por las células T cultivadas en presencia o en ausencia de células TReg. Esto está basado en la asunción
de que las células TReg no proliferan in vitro porque las células TReg de ratón son consistentemente hiporresponsivas
in vitro. Esto es verdad para las células TReg CD45RA-FOXP3hi efectoras humanas; sin embargo, las células TReg
CD45RA+ naive humanas activamente proliferan in vitro y se diferencian en células TReg CD45RA- efectoras
mientras suprimen la proliferación celular efectora. Esto indica que la captación de timidina por las células TReg
cultivadas y las células T efectoras no es apropiada para medir la actividad supresora de las células TReg CD45RA+
naive humanas. Proponemos que es más preciso medir la dilución de la 5,6-carboxifluoresceína diacetil
succinimidil éster (CFSE) en células T efectoras para determinar el porcentaje y la cantidad de células en
proliferación.

Los mecanismos moleculares precisos de la supresión por las células TReg humanas todavía deben ser
determinados, a pesar de que estudios con ratones in vitro e in vivo han implicado varios mecanismos (TABLA 2).
Estos incluyen la modulación del microambiente de la citoquina, la disrupción metabólica de la célula diana, la
alteración de la capacidad activadora de las CD y la citólisis (revisado en REFS 1, 74, 75). Por ejemplo, las células
TReg humanas pueden ser supresoras in vitro aún en ausencia de CPAs, indicando que la supresión de las células
diana puede ocurrir a través del contacto directo entre las células TReg y las células T efectoras.
 Tabla 2 | Mecanismos supresores de las células TReg
Molécula(s) clave Función Referencias
Ratón Humano
Mecanismos de supresión contacto-dependientes
CTLA4 Inhibición de la función 76 -
co-estimuladora de las
CPA
Interacción con CD80 y 101 -
CD86 en células T
convencionales
CD73-CD39 Hidrólisis de ATP 102 -
extracelular inflamatorio
LAG3 Inducción de la 103 -
señalización inhibitoria a
través de moléculas MHC
de clase II
Granzima B (ratón) y Lisis de células T 104, 105 106
granzima A (humana) convencionales
Ligando CD95-CD95 Inducción de la apoptosis - 107
en células T
convencionales
Mecanismos de supresión mediados por citoquinas
TGFβ y LAP Inducción de FOXP3 en 108, 109 -
células T convencionales
IL-10 Atenuación de la función - 20
de las CD
Conversión de células T 110, 111 111
convencionales en células
TR1
Galactina 1 Arresto del ciclo celular y 112 -
apoptosis en células T
convencionales
CD25 Adsorción de IL-2 113 -
IL-35 La inducción de la 114 115
expresión de células T
convencionales de IL-35
por células TReg promueve
la supresión (la IL-35 no
se expresa en células TReg
humanas)
CPA, célula presentadora de antígenos; CTLA4, antígeno 4 del linfocito T citotóxico; CD, célula dendrítica; FOXP3, forkhead
box P3; IL, interleucina; LAG3, gen 3 de activación linfocitaria; LAP, péptido asociado a la latencia; TGFβ, factor de crecimiento
transformante-β; TReg, célula T regulatoria.

Un estudio reciente en ratones ha mostrado que CTLA4 es crucial para la función supresora de las células T Reg
FOXP3+ tanto in vitro como in vivo. El CTLA4 expresado por las células TReg puede modular la expresión de CD80 y
CD86 por las CDs y así inhibir la activación de las células T efectoras. En humanos, es intrigante que solo las células
TReg CD45RO+ FOXP3hi efectoras expresen altos niveles de CTLA4. Todavía se debe determinar si la acción de CTLA4
en las CPAs es indispensable para la función supresora in vitro de las células TReg.

Fuerza de señal del TCR y medio de citoquinas. Con el aviso del ensayo de supresión in vitro discutido
anteriormente, han sido caracterizadas las condiciones de cultivo que permiten que las células TReg ejerzan in vitro
una actividad supresora.

Las células TReg humanas deben ser activadas a través de su TCR para ser funcionalmente supresoras. Una vez
activadas, aparentemente no necesitan ser viables en co-cultivo para media la supresión, como las células TReg
fijadas con paraformaldehido luego de la activación se mantienen como supresoras. Esto se correlaciona con el
descubrimiento de que la mayoría de las células TReg efectoras son apoptóticas luego de la estimulación con TCR
in vitro pero aún son altamente supresoras. Esta información sugiere que las células TReg humanas sufren una
modulación inducida por la activación de moléculas específicas de superficie celular y que este cambio, sin
mayores alteraciones de la función de las células TReg, puede mediar la supresión.

La efectividad de la supresión también depende de la calidad de la estimulación de las células T, como la fuerza
de la estimulación de las células T tiene una fuerte influencia en el resultado de la supresión. Las células T efectoras
activadas en presencia de unas fuertes señales co-estimuladoras son refractarias a la supresión mediada por
células TReg, así como las células T efectoras suplementadas con citoquinas que promueven el crecimiento. Al
incrementar la fuerza de la señal del TCR recibida por las células T efectoras en el cultivo también se puede
incrementar la resistencia a la supresión. Estos descubrimientos sugieren que las células TReg humanas
probablemente no pueden suprimir la producción de citoquinas pro-inflamatorias y la proliferación en
condiciones en las cuales las células T efectoras son fuertemente activadas.

Adicionalmente, en microambientes pro-inflamatorios, las células TReg humanas pueden ser inducidas a secretar
la citoquina pro-inflamatoria IL-17 (REF. 78). Las células TReg IL-17+ FOXP3+ han sido aisladas de sangre periférica
humana y son supresoras en ensayos de co-cultivo en presencia de baja estimulación con TCR, pero
concomitantemente pierden la habilidad de suprimir y ganan la capacidad de secretar IL-17 cuando son
fuertemente activadas en presencia de las citoquinas pro-inflamatorias IL-1β e IL-6 (REF. 78). Es probable que la
pérdida de la supresión observada en presencia de factores que activan fuertemente se deba tanto al incremento
de la resistencia de las células T efectora y la disminución de la función de las células TReg.

Aplicaciones clínicas de la biología de las células TReg

Las células TReg disfuncionales pueden ser una causa de la enfermedad autoinmune, las alergias y la
inmunopatología. Pero aún se debe determinar cómo se involucran estas células en la pato-fisiología de las
enfermedades inmunológicas comunes como la enfermedad autoinmune. Tienen un rol en el mantenimiento de
la tolerancia al injerto y al feto-materno y el control de varias respuestas inmunes; por ejemplo, para las células
cancerígenas y microorganismos. Sin embargo, aún debe ser establecido cómo monitorear de un modo confiable
la contribución de las células TReg a la tolerancia y al control inmune. Con la información reciente de que las células
T FOXP3+ son heterogéneas e incluyen subgrupos de células T regulatorios y no regulatorios, es importante y
necesario el poder medir cuantitativa y cualitativamente cada subpoblación de células T FOXP3+, más que la
enumeración de la población total de células T FOXP#+ y el examen funcional in vitro de las células TReg CD25hi.
Ciertamente hay patrones específicos a la enfermedad en la composición de las células TReg FOXP3+ naive y
efectoras y células T FOXP3+ no regulatorias. Apuntar a una subpoblación particular de células TReg FOXP3+ en vez
de a todas las células T FOXP3+, hace que el control de las respuestas inmunes sea más efectivo: por ejemplo en
terapia celular con células TReg, su expansión in vivo para suprimir las respuestas inmunes y la depleción de las
células TReg o el bloqueo funcional para potenciar las respuestas inmunes.

Inmunosupresión por terapia con células TReg. La terapia celular basada en la expansión ex vivo de las células TReg
y su transferencia a pacientes es actualmente el foco de una intensa investigación para tratar la enfermedad
autoinmune e inhibir la ocurrencia de la enfermedad injerto-contra-huésped luego del trasplante de médula ósea.
La transferencia de células TReg expandidas es efectiva en la prevención y, en algunos casos, el tratamiento de
enfermedades inflamatorias y autoinmunes en curso en ratones. Sin embargo, se necesita abordar muchos
asuntos clave antes de su uso clínico.

Primero, por causa de la heterogeneidad de las células T FOXP3+, la población de células TReg que debería estar
aislada por expansión debe ser determinada. La expansión de las células T que expresan FOXP3, aisladas basados
en la expresión de CD25 y CD127, necesita ser emprendida con cautela porque esta población contiene células T
CD45RO+ FOXP3low que producen citoquinas pro-inflamatorias y podrían constituir del 30-50% de las células T
FOXP3+CD4+. Además, muchos reportes han indicado que las células TReg CD45RA+ FOXP3low naive tienen la
capacidad más alta de mantener la expresión de FOXP3 luego de la expansión, haciendo de este subgrupo la
población de elección para aislar.

Segundo, se ha mostrado que las células TReg efectoras son propensas a morir por apoptosis y expandirse
pobremente incluso en cultivos con altas dosis de IL-2 (REF. 72). En contraste, las células TReg naive pueden ser
fácilmente expandidas y desarrollar una alta frecuencia de células TReg FOXP3+ funcionales, lo cual una vez más
respalda el uso de células TReg CD45RA+ FOXP3low naive como el subgrupo de elección para la expansión de las
células TReg.

Aun así, incluso las células TReg naive purificadas adecuadamente, cuando se las cultiva en un medio facilitador de
citoquinas conteniendo altas dosis de IL-2, pueden dar lugar a una fracción sustancial de las células T que producen
citoquinas pro-inflamatorias. Así, es importante desarrollar y establecer un “coctel” de citoquinas y químicos que
puedan permitir la expansión de las células TReg 100% funcionales que no secreten citoquinas pro-inflamatorias.
La rapamicina (Sirolimus/Rapamune; Wyeth), la cual puede incrementar sustancialmente la pureza de las células
TReg a través de la eliminación de las células no-TReg, podría ser útil como un componente de este coctel.

Rapamicina

Una droga inmunosupresora que no previene la activación de células T pero bloquea la expansión clonal mediada
por IL-2, bloqueando mTOR (la diana en los mamíferos de la rapamicina).

Desacetilación

Una modificación post-traduccional de los componentes de la cromatina, particularmente las histonas. Se

correlaciona con la cromatina transcrita activamente. Las histonas deacetilasas han sido identificadas como
componentes de los complejos co-represores nucleares, los cuales revierten las acciones de la histona acetil-
transferasas, para así inhibir la transcripción del gen.
Tercero, incluso si se alcanza el 100% de pureza in vitro, la estabilidad in vivo de las células TReg infundidas,
especialmente bajo condiciones pro-inflamatorias, no se garantiza. Realmente, en ratones, los reportes recientes
han resaltado la plasticidad de las células TReg hacia fenotipos celulares efectores TH1, TH2 o TH17 bajo condiciones
patológicas. A pesar de que la información en los ratones indica que las células TReg transferidas pueden sobrevivir
por varios meses, se debe determinar cuánto pueden sobrevivir las células TReg infundidas en humanos y si una
sola infusión de células TReg expandidas es suficiente para mostrar efectos terapéuticos. Adicionalmente, como la
expresión estable de FOXP3 es un prerrequisito para la función supresora de las células TReg, la estabilidad
funcional de las células TReg FOXP3+ podría mantenerse o incluso potenciarse por una histona desacetilación del
gen FOXP3 o por la promoción de la acetilación de la propia proteína de FOXP3 por inhibidores de la histona
desacetilasa tales como el vorinostat (también conocido como ácido hidroxámico suberoilanilida (Zolinza;
Merck)). La droga está en uso clínico para la dirección del linfoma de la célula T cutánea pero todavía se debe
determinar si éste puede tener un efecto específico a la célula TReg in vivo.

Así, la terapia celular exitosa usando células TReg FOXP3+ depende de cómo las células TReg son preparadas como
una población pura y cómo pueden ser mantenidas como una población funcionalmente estable in vivo y también
in vitro cuando son expandidas en una forma antígeno-específica. Se necesitan de más estudios en lo que respecta
a cómo pueden ser inducidas las células TReg antígeno específicas y funcionalmente competentes desde células T
naive in vitro.

Potenciación inmune enfocada en células TReg. Hay evidencia acumulándose de que las células TReg FOXP3+
impiden el desarrollo de la inmunidad tumoral efectiva en huéspedes con cáncer e inmunidad antimicrobiana en
individuos con infección crónica.

Se ha documentado que una gran cantidad de células TReg CD25+CD4+ están presentes en tumores y nódulos
linfáticos de drenaje en pacientes con cáncer. En particular, las proporciones disminuidas de las células T CD8+ a
las células TReg FOXP3+CD25+CD4+ en tumores se correlacionan con un mal pronóstico. También se ha mostrado
en muchos modelos de ratones que la depleción de las células TReg potencia las respuestas inmunes anti-
tumorales, conduciendo a la erradicación de tumores. De un modo similar, en humanos, los estudios recientes
han mostrado que las células T CD4+ antígeno-específicas pueden expandirse en pacientes con cáncer e individuos
sanos luego de la estimulación antigénica in vitro de células T CD4+ periféricas aisladas del individuo luego de la
depleción de las células T CD25+CD4+.

Basados en estos descubrimientos, se han hecho esfuerzos para encontrar moléculas de superficie celular que
sean predominantemente expresadas por células TReg o que puedan modular específicamente la función de las
células TReg. El uso de anticuerpos monoclonales específicos para tales moléculas ha revelado que los anticuerpos
monoclonales específicos para CD25 (un anticuerpo depletivo), CTLA4 (un anticuerpo de bloqueo), GITR (un
anticuerpo agonista) y OX40 (un anticuerpo agonista) pueden potenciar la inmunidad tumoral en ratones.
Pequeñas moléculas, tales como la ciclofosfamida, que eliminan células TReg, también pueden potenciar la
inmunidad tumor-específica. Anticuerpos monoclonales de bloqueo CTLA4-específicos (tales como ipilimumab
(MDX-010; Bristol-Myers Squibb/Medarex), ahora están en uso clínico para tratar etapas avanzadas de cáncer.
Desde que muchos marcadores de superficie celular específicos para las células TReg también se expresan en
células T activadas, las combinaciones de estos anticuerpos monoclonales que tienen por objetivos diferentes
moléculas puede ser más efectivo en el control del balance entre las células TReg y las células T efectoras hacia la
dominancia de las células T efectoras.

La contribución de las células TReg a enfermedades infecciosas es por lo demás compleja. La depleción de las células
TReg puede potenciar la respuesta antimicrobiana y erradicar los microorganismos. En contraste, las células T Reg
suprimen las respuestas de las células T antimicrobianas hasta un cierto punto, permitiéndole la sobrevivencia a
una cierta cantidad de microorganismos y así permitiendo el desarrollo de las células T de memoria. También
están directamente involucradas en las respuestas anti-infecciosas como facilitadoras para la entrada temprana
de las células T efectoras dentro de los tejidos infectados. En humanos, se ha mostrado que la cantidad de células
TReg aumentan en estudios más recientes de infecciones virales crónicas tales como la hepatitis C crónica y las
infecciones por HIV, y también en condiciones severas tales como el choque séptico. Al igual que con la
inmunoterapia del cáncer, las respuestas inmunes antimicrobianas pueden ser controladas por una selección
diferenciada de células TReg y células T efectoras.

Juntas, las terapias basadas en células TReg son una estrategia prometedora para el manejo de varias
enfermedades inmunológicas y respuestas inmunes (TABLA 3).

Tabla 3 | Aplicación clínica de las células TReg

Aplicación En uso
Infección Moléculas que inhibe la
función de las células TReg,
tales como el anticuerpo
específico para CTLA4
(ipilimumab (MDX-010;
Bristol-Myers
Squibb/Medarex))
Cáncer Moléculas que depletan
poblaciones de células
TReg, tales como DAB389-
IL-2 (Denileucina Difitox
(Ontak; Eisai))
Auto-inmunidad Moléculas que imitan la
supresión mediada por
células TReg, tales como el
Alergia CTLA4-lg (Abatacept
(Orencia; Bristol-Myers
Squibb))
Embarazo Moléculas que favorecen
Trasplante* la sobrevivencia y el
desarrollo de células TReg,
tales como la rapamicina
(Sirolimus/Rapamune;
Wyeth)
CTLA4, antígeno 4 del linfocito T citotóxico; Ig, inmunoglobulina; TReg, célula T regulatoria. *En uso limitado por algunos
pacientes con enfermedad de injerto-contra-huésped.
Bajo investigación Efectos colaterales y
avisos
Moléculas que inhiben la Baja eficacia en
función y la enfermedades
diferenciación de células infecciosas
TReg
Moléculas que depletan Inducción de auto-
células TReg inmunidad
Terapia celular basada en Supresión de la vigilancia
la expansión* de las del cáncer y de la
células TReg inmunidad
Moléculas que imitan la
supresión mediada por
células TReg
Moléculas capaces de Viabilidad durante el
mantener o mejorar la embarazo no evaluada
pureza y la sobrevivencia
de las células TReg
 Caja 2 | Asuntos que abordar para las células TReg humanas

 ¿Cuáles son los roles respectivos de las células T regulatorias (TReg) naive y efectoras en el mantenimiento
de la auto-tolerancia en humanos?
 ¿Cuál es la relación entre los subgrupos de células TReg efectoras (células TReg HLA-DR+ y HLA-DR- y células
TReg co-estimuladores de células T inducibles (ICOS)+ e ICOS-)?
 ¿Las células TReg inducidas tienen un fenotipo específico comparadas con las células TReg efectoras?
 ¿Cuál es el principal mecanismo (o mecanismos) molecular de supresión mediado por células TReg en
humanos?
 ¿Qué tan estables son los subgrupos de células TReg a lo largo de la vida? ¿Las células TReg hacen respuestas
de memoria o de recuerdo de respuestas? ¿Qué tan variable es el repertorio de receptores de células T de
los subgrupos TReg a lo largo de la vida?
 ¿Podemos determinar una combinación de moléculas que pueda mantener una estabilidad de células TReg
y pureza in vitro e in vivo¸ para así prevenir la conversión de células TReg en células T patogénicas?
 El descubrimiento de un marcador de superficie de la célula TReg altamente específico se requiere para
proveer a un anticuerpo monoclonal en depleción altamente seleccionado para el manejo del cáncer.

Conclusión

Desde la descripción de las células T supresoras en los tempranos 1970s, se ha hecho un progreso considerable
en la caracterización de las células TReg. Ahora está bien establecido que las células T FOXP3+CD4+ humanas
pueden dividirse en subpoblaciones basados en la expresión de sus marcadores de superficie celular tales como
CD45RA y CD45RO y el nivel de la expresión de FOXP3. Luego de la estimulación antigénica, las células T Reg
CD45RA+FOXP3low naive parecen diferenciarse en células TReg CD45RO+FOXP3hi efectoras, las cuales ejercen una
fuerte supresión y luego mueren por apoptosis. La población de células T FOXP3+ también incluyen células T no
regulatorias, lo cual impide el uso de FOXP3 como un único marcador para células TReg humanas.

Aún debe determinarse cómo las células TReg, en particular las células TReg efectoras, ejercen la supresión in vitro
e in vivo. Las células TReg pueden usar mecanismos diferentes de supresión concurrentemente y secuencialmente.
Sin embargo, todavía es posible que exista un mecanismo central de la supresión que es comúnmente usado por
todas las células TReg en cualquier lugar o en cualquier medio. Adicionalmente, dadas las células TReg efectoras con
fenotipo parecido al de memoria, no es claro si las células TReg montan una respuesta de memoria y, si es el caso,
dónde podría estar el nicho de reposo para estas células TReg de “memoria” residentes.

Para la terapia basada en células TReg en humanos, el asunto clave que se debe abordar sigue siendo la estabilidad
de las células TReg in vitro e in vivo. Debido a su posible plasticidad hacia fenotipos celulares TH1, TH2 o TH17
patógenos, es menester determinar la combinación correcta de las moléculas que mantendrían la pureza y la
estabilidad de las células TReg in vitro durante y/o luego de la expansión y luego de su transferencia a los pacientes.
Aún se necesita de la identificación de un marcador de superficie celular altamente específico para TReg para una
selección apretada de las células TReg que se van a depletar para el tratamiento del cáncer. A pesar de que muchos
asuntos en lo que respecta a la confiabilidad a largo plazo y a la seguridad aún deben de ser abordados, la terapia
basada en células TReg es una modalidad terapéutica prometedora que es aplicable a un amplio rango de
enfermedades inmunológicas (CAJA 2).