INTRODUCCIÓN

Existe una gran variedad de tamaños de microorganismos en el ambiente, lo

que implica el uso de material especial para poder observarlas, los microscopios, sin
embargo, contar simplemente con este aparato no nos garantiza la percepción del
organismo. Como la gran mayoría de estos diminutos seres no precisan de un color
(incoloros) es de gran importancia tratarlos de tal manera que puedan teñirse y
consecuente mente poder visualizarlos. El término tinción significa simplemente
colorear los microorganismos con un colorante que destaque ciertas estructuras. Sin
embargo, antes de teñir los microorganismos se les debe fijar al portaobjetos, lo que
provoca la muerte de los mismos pero preservas estructuras en su estado natural con
una distorsión mínima.

Tortora et al., 2007 afirma que cuando se deba fijar una muestra se extiende
una película delgada del material que contiene los microorganismos sobre la superficie
del portaobjetos. Esta película, denominada extendido, se deja secar al aire. A
continuación, en la mayor parte de los procedimientos de tinción el portaobjetos se
fija pasándolo varias veces a través de la llama de un mechero Bunsen con el lado
extendido hacia arriba o cubriéndolo con alcohol metílico durante un minuto. Se aplica
colorante, se lava con agua y se lo seca con papel absorbente. Es importante recalcar
que si no se realiza la fijación el colorante podría arrastrar a los microorganismos.

En el presente trabajo se conocerán las diferentes técnicas de tinción que se podrían

aplicar en un análisis microbiológico para que puedan ser bien ejecutadas en un
laboratorio y de esta manera observar a los microorganismos.
 ÍNDICE
TINCIÓN SIMPLE .................................................................................................................. 3
TINCIONES DIFERENCIALES .................................................................................................. 3
Tinción de gram. ....................................................................................................................... 3
Tinción de ácido-alcohol resistencia ........................................................................................ 4
TINCIONES ESPECIALES. ....................................................................................................... 5
Tinción negativa para capsulas................................................................................................ 5
Tinción para endosporas (esporas) .......................................................................................... 5
Tinción para flagelos ................................................................................................................ 5
Conclusión........................................................................................................................... 6
Referencias bibliográficas. ................................................................................................... 6
TINCIÓN SIMPLE
Es una solución que contiene agua o alcohol de un colorante básico único. Esta técnica
tiene como objetivo destacar el microorganismo completo para poder estudiar su
estructura. El colorante se aplica al extendido fijado durante un tiempo determinado y
luego se lava; a continuación, el portaobjetos se seca y se examina. En ocasiones se
agrega una sustancia química a la solución para intensificar la coloración; este aditivo
se denomina mordiente. Una de las funciones de la mordiente es aumentar la afinidad
de una muestra biológica por un colorante; otras es cubrir una estructura (como un
flagelo) para darle mayor espesor y facilitar la observación después de teñido. Algunas
de las tinciones simples utilizadas con frecuencia en el laboratorio son al azul de
metileno, la carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y la safranina.

TINCIONES DIFERENCIALES
Estas reacciones de modo diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto
pueden ser empleadas para establecer una distinción entre ellas. Las tinciones
diferenciales utilizadas con mayor frecuencia para bacterias son la tinción de gram y la
tinción de ácido-alcohol resistencia.

Tinción de gram.
Desarrollada por el bacteriólogo danes Hans Christian Gram en 1984 y es uno de los
procedimientos de tinción más utilizas ya que permite clasificar las bacterias en dos
grandes grupos, las gram positivas y las gram negativas. El procedimiento para
preparar este tipo de tinción es el siguiente:

 Un extendido fijador con calor se cubre con un colorante violeta básico, por lo
general violeta de genciana. Como el colorante violeta imparte su color a todas
las células se le denomina Colorante primario.
 Después de un breve lapso, se escurre el colorante violeta, se lava el extendido
y se le cubre con yodo, tanto las bacterias gram positivas como la gran
negativas aparecen de color violeta oscura o purpura.
 A continuación, se lava el portaobjetos con alcohol o con una solución de
alcohol-acetona. Esta solución es un agente decolorante que elimina el color
violeta de las células de algunas especies, pero no de otras.
 Se elimina el alcohol con agua y se tiñe el portaobjetos con safranina, un
colorante básico, luego se vuelve a lavar el extendido, se lo seca con el papel
absorbente y se lo examina con el microscopio

El colorante violeta y el yodo se combinan en el citoplasma de cada bacteria y lo

colorean de violeta oscuro o purpura. Las bacterias que conservan este color
después de haberles agregado el alcohol para decolorarlas se clasifican como
grampositivas; las bacterias que pierden el color violeta oscuro después de la
decoloración se clasifican como gram negativas.
 El método de gram es una de las tecinas de tinción más importantes en
microbiología médica pero sus resultados no pueden aplicarse de modo universal
porque algunas células bacterianas se tiñen de modo deficiente o no se tiñen. Los
resultados de la tinción de gram son más uniformes cuando se la utiliza en
bacterias jóvenes, en etapa de crecimiento.

Ilustración 1 Tinción de gram

Tinción de ácido-alcohol resistencia

Este tipo de tinción no se fija de modo firme solo a las bacterias que poseen ceras
en las paredes de sus células. Los microbiólogos utilizan esta tinción para
identificar a todas las bacterias del género Mycobacterium, que comprenden dos
patógenos importantes: Mycobacterium tuberculoosis y Mycobacterium leprae.

En el procedimiento de esta tinción se aplica el colorante rojo carbolfucsina a un

extendido fijado y se calienta suavemente el portaobjetos durante varios minutos.
Luego se enfría el portaobjetos y se lava con agua. A continuación, el extendido se
trata con ácido-alcohol, un decolorante que elimina el color rojo de las bacterias
que no son acido-alcohol resistentes. Los microorganismos acido-alcohol
resistentes retienen el color rojo porque la carbolfucsina es más soluble en los
lípidos de la pared celular que en los acido-alcohol resistentes.

Ilustración 2 Tinción de ácido-alcohol resistencia

TINCIONES ESPECIALES.
Este tipo de tinción se encarga de darle color a partes específicas de un
microorganismo como endosporas y flagelos, y para detectar la presencia de
capsulas.

Tinción negativa para capsulas.

La importancia de este tipo de tinción se encuentra en la detección de capsulas de
los microorganismos. Poder identificarlas es un medio para determinar la virulencia
del microorganismo. Es decir, el grado hasta el cual un patógeno puede causar
enfermedad.

La capsula es una cubierta gelatinosa que cubre a varios microorganismos.

La tinción de la capsulas es más difícil que otros tipos de procedimientos de tinción

porque los materiales capsulares son hidrosolubles y pueden desprenderse o
eliminarse durante los lavados rigurosos. Para demostrar la presencia de capsulas
es importante mezclar las bacterias con un colorante simple, como la safranina.
Debido a su composición química las capsulas no aceptan la mayoría de los
colorantes biológicos, como la safranina.

Tinción para endosporas (esporas)

Una endospora es un estructura especial, resistente y latente que se forma dentro
de una célula y que protege a una bacteria de las condiciones ambientales
adversas. Aunque las endosporas son relativamente inusuales en las células
bacterianas, pueden ser formadas por algunos géneros de bacterias. Las
endosporas no se tiñen con los métodos comunes, como la tinción simple y la
tinción de gram, porque estos colorantes no atraviesan sus paredes.

La tinción más utilizada para este fin es la tinción de schaeffer-fulton para

endosporas. Se aplica el colorante primario verde de malaquita a un extendido
fijado con calor y se lo calienta hasta la emisión de vapores durante alrededor de 5
minutos. El calor ayuda a que el colorante atraviese la pared de la endospora.
Luego se lava el preparado con agua durante cerca de 30 segundos para eliminar la
verde malaquita de todas las partes de las células salvo las endosporas. A
continuación, se aplica sobre el extendido safraniana, un colorante de contraste,
para teñir las porciones de la célula distinta de las endosporas. Como las
endosporas presentan un índice de refracción alto se las puede detectar con el
microscopio óptico cuando no están teñidas, pero no se las puede diferencias de
las inclusiones de material reserva sin una tinción especial.

Tinción para flagelos

Los flagelos microbianos con estructuras de locomoción demasiado pequeñas para
ser vistas con un microscopio óptico sin tinción. Este método de tinción consiste en
aumentar el tamaño de los flagelos con un mordiente y el colorante carbolfucsina.
Ilustración 3 Tinciones especiales

CONCLUSIÓN.
Es evidente que los métodos de tinción han ayudado al avance de la microbiología.
Gracias a estas variadas técnicas de coloración se han podido visualizar a
numerosas bacterias y otros microorganismos, que a su vez han sido objeto de
estudio. Estos mecanismos son unas de las primeras herramientas que se usan en
un laboratorio de microbiología para encontrarle soluciones a ciertos problemas
que se relacionan con los diminutos seres. De igual manera, dependiendo del tipo
de análisis que se quiere realizar, el investigador determina cual es el método más
eficiente para él ya que cada tipo de tinción agrega color a partes y/u organismos
específicos, tal es el caso de las tinciones especiales que son capaces de teñir
específicamente a las capsulas microbianas, a los flagelos o endosporas.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Tortora, A., Funke, B. y Case, C., (2007), Introducción a la microbiología (9ª edición),
España: Editorial medica panamericana.