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INTRODUCCIÓN A

LOS MÉTODOS
ESPECTROSCOPICOS
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS
Los métodos espectroscópicos son un grupo de métodos
analíticos que se basan en la espectroscopia atómica y molecular.
(Intensidad radiación).
La espectroscopía es la ciencia que trata de las interacciones de
varios tipos de radiación electromagnética con la materia.

Históricamente, se refería solo a la descomposición de la luz


visible en sus λ que la componen, originándose espectros.

Ahora se incluyen otros tipos de radiación electromagnética.


ANÁLISIS ANÁLISIS
CUALITATIVO CUANTITATIVO

Revela la identidad Indica la cantidad


de los elementos y de cada sustancia
compuestos de la en una muestra
muestra

Métodos gravimétricos
Métodos volumétricos
Métodos electroanalíticos
Métodos espectroscópicos
MÉTODOS CLÁSICOS MÉTODOS INSTRUMENTALES
•Separación de los •Son métodos modernos de
componentes de una mezcla. separación, cuantificación e
•Precipitación identificación de especies
•Extracción químicas.
•Destilación
•Se basa en fenómenos
•Análisis cuantitativo
químico-físicos.
•Medidas gravimétricas
•Medidas volumétricas
MÉTODOS MÉTODOS
QUÍMICOS INSTRUMENTALES

Están basados en Se basan en interacciones


interacciones materia- materia-energía. Utilizan
materia, es decir, instrumentos para evaluar una
reacciones químicas. propiedad física o fisicoquímica.

Métodos gravimétricos Métodos espectroscópicos


Métodos volumétricos Métodos electroanalíticos
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS
La radiación electromagnética es una energía (E) que se transmite
por el espacio a enormes velocidades.
Adopta diferentes formas reconocibles con la luz (UV, visible, IR),
el calor (E térmica), radiaciones γ, rayos X, entre otros.

La representación de estas manifestaciones en función de λ o ν constituye el


espectro electromagnético.
RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA
La RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA es un fenómeno complejo que podemos
entender como diminutos paquetes de energía que se propagan en el aire y que
podemos clasificar según su origen:

NATURALES: El sol, las tormentas eléctricas, campo magnético terrestre.

ARTIFICIALES: Industrias, electrodomésticos, nuevas tecnologías de


comunicación.
PROPIEDADES DE LA RADIACIÓN
ELECTROMAGNÉTICA
COMPORTAMIENTOS COMO ONDAS
(frecuencia, longitud de onda, periodo, amplitud, numero de onda)

La FRECUENCIA (ν) de una onda es el numero de ondas que pasa por un


punto fijo cada segundo. Se mide en hertzios (Hz).

La LONGITUD DE ONDA (λ) es la distancia entre dos picos o dos valles de


una onda.

Este modelo no toma en cuenta la absorción o emisión de energía


radiante.
PROPIEDADES DE LA RADIACION
ELECTROMAGNETICA
COMPORTAMIENTOS COMO PARTÍCULAS

La radiación es un flujo de partículas discretas o


paquetes ondulatorios de energía denominados
fotones.

La energía de estos fotones es proporcional a la


frecuencia (ecuación de Planck)

c = velocidad de la luz (3 x 1010 cm/s)


h = cte Planck (6,62 x 10-37 kJ/s)
RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS

Todas viajan a la Se diferencian en la


velocidad de la luz frecuencia y la longitud
https://www.youtube.com/watch?v=ixwxOQf50kc de la onda.
EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

El ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO es el intervalo de todas las


frecuencias posibles desde cero hasta el infinito.
EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

Frecuencias mas altas, longitudes de onda corta y energías mas altas

Frecuencias mas bajas, longitudes de onda larga y energías mas bajas


INTERACCIONES DE LA RADIACIÓN CON LA MATERIA
La radiación electromagnética al incidir sobre la materia puede
originar los siguientes procesos: Absorción, transmisión,
reflexión, refracción y dispersión.
INTERACCIONES DE LA RADIACIÓN CONLA MATERIA
Las interacciones realmente importantes en la espectroscopia son las
que dan lugar a las transiciones entre diferentes niveles de energía de
las especies químicas.

Muestra Radiación
Energía térmica, emitida
eléctrica o
química
ESPECTROSCOPÍA
UV-Vis
TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS DE ABSORCIÓN

Espectroscopía de absorción es la medida de la cantidad de luz absorbida


por un compuesto en función de la longitud de onda de la luz.

En general se irradia una muestra con una fuente de luz y se mide la


cantidad de luz transmitida a varias longitudes de onda, utilizando un
detector y registrando el fenómeno en un grafico.
ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA
La ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA (UV) detecta las transiciones
electrónicas de los sistemas conjugados y proporciona información sobre
el tamaño y la estructura de la parte conjugada de la molécula.

Da información más específica que la de IR y RMN por lo que se utiliza


menos que estas técnicas.

Ultra : más allá

Violeta: frecuencia más alta del visible

https://www.youtube.com/watch?v=MM6BjtLEH34
•Aplicabilidad: mayoría de especies absorben Uv-V
•Alta sensibilidad: detección entre 1· 10-4 y1· 10-5 M
Cuantitativo
•Selectividad moderada-alta: se identifica λ analito.
•Buena exactitud: error relativo 1 - 5 %
•Facilidad y comodidad: instrumentos modernos

ANÁLISIS

•Disolución diluida en el analito


•Disolvente transparente en la región del espectro
•Interacciones entre disolvente y especie absorbente
Cualitativo
•Polaridad disolvente influye en la posición de los
máximos de absorción
•Comparar espectros de analitos con los de compuestos
conocidos medidos en el mismo disolvente.
APLICACIONES

CAMPO DE APLICACIÓN
- Especies absorbentes: compuestos orgánicos que
contengan grupos cromóforos y especies inorgánicas como
son los metales de transición.
- Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un
reactivo para producir un compuesto absorbente.

TAREA:
Consultar 3 aplicaciones de la espectroscopía UV-visible en
el campo de acción de sus carerras. Dar ejemplos
específicos y bien explicados.
Espectroscopia visible ultravioleta

Transiciones electrónicas
s*

p*
n

s
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS
Las longitudes de onda de la luz UV que absorbe una molécula se determinan
por las diferencias de energía electrónica entre los orbitales de la molécula y por
lo tanto dependen de la estructura de la molécula..

Caso 1: Cuando solo existen enlaces sigma (σ) en la molécula

Los enlaces σ son muy estables y los electrones que conforman estos enlaces
generalmente no son afectados por radiaciones con longitudes de onda
superiores a 200 mn.
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS
Caso 2: Cuando hay enlaces múltiples (π) además de los σ, son posibles otras
tres transiciones electrónicas además de las σ σ* :

Los enlaces π tienen electrones que pueden ser excitados más fácilmente y
promovidos a niveles de energía más altos.

Caso 3: Cuando hay electrones no enlazantes (pares de e- no compartidos) se


pueden producir otros dos tipos de transiciones electrónicas :
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS

EJEMPLO
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS
¿Qué tipo de transiciones se podrían dar en las
siguientes moléculas? ¿Cuáles espera que absorban
en el UV cercano?
ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Los espectrofotómetros suelen operar entre 200 y 400 nm que


corresponden a la energía de un fotón de 70 a 140 kcal/mol.

Estos equipos abarcan la región del visible (mayor longitud de onda,


menor energía) y se denominan espectrofotómetros UV-visible.

Las energías UV-visibles corresponden a la energía que se necesita para


excitar un electrón desde un orbital molecular a otro.
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA

¿Qué es un espectrofotómetro UV – Visible?


OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
El espectrofotómetro UV-vis esencialmente consta de:
•Fuente de luz adecuada con un λ con cambio continuo
•Sistema de lentes y espejos que dividen el haz de luz en dos: uno que pasa por la
celda de muestra y otro que pasa por la celda de referencia: MONOCROMADOR
•Detector
•Sistema de registro del espectro.

Un espectrofotómetro UV-vis opera comparando la


cantidad de luz transmitida a través de la muestra
con la cantidad de luz del haz de referencia.
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
Instrumento de
haz sencillo

Instrumento de
doble haz
ESPECTROFOTÓMETRO DE ARREGLO DE DIODOS
“Diode array”
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
Espectro:
•La forma más sencilla de representar el espectro UV-vis es mediante una
gráfica de Absorbancia vs λ (nm).

DATOS ESPECTROSCOPICOS
CARACTERISTICOS UV:

Longitud de onda de máxima absorción.

El valor de la absorción molar (ξ) o de cada


máximo
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
Muestra:
•Se emplean celdas de cuarzo de diferentes tamaños. Las más comunes son de 1
cm de espesor con capacidad de aprox. 3 mL.

•Las soluciones deben prepararse muy diluidas (ej: 1mg en 100 mL de solvente para
sustancias con PM 100 – 200)
•La muestra se disuelve en un solvente (con frecuencia etanol) que no absorba por
encima de 200 nm.
ABSORCIÓN DE RADIACIÓN UV-VISIBLE
ABSORCIÓN DE RADIACIÓN UV-VISIBLE
ABSORCIÓN DE RADIACIÓN UV-VISIBLE
ABSORCIÓN DE RADIACIÓN UV-VISIBLE
CONCEPTOS IMPORTANTES

DESPLAZAMIENTO BATOCRÓMICO (hacia el rojo): Desplazamiento


hacia menores frecuencias o mayores longitudes de onda (mayores λmax).

DESPLAZAMIENTO HIPSOCRÓMICO (hacia el azul): Desplazamiento


hacia mayores frecuencias o menores longitudes de onda (menores λmax).
CONCEPTOS IMPORTANTES
La absorbancia es la cantidad de luz que absorbe una muestra

•La absorbancia A, de la muestra a una longitud de onda


determinada viene dada por la ley de Lambert-Beer

•Donde c es la concentración de la muestra en M.

• l = espacio que recorre la luz a través de la celda en cm (paso


óptico)

• ξ = Coeficiente de extinción molar o absorción molar. Esta mide la


intensidad con que la muestra absorbe la luz a cada longitud de
onda.
Instrumento
Fuentes Selector Dispositivo
Muestra
de de Fotodetector de
diluida
radiación λ salida

Determinación precisa: separar la radiación en sus diferentes componentes


Ley fundamental de Lambert – Beer:

A= ε l C

A = - log T = - log (I / I0) = log (I0 / I)


TRANSMITANCIA
Transmitancia: fracción de radiación incidente
transmitida por la disolución.

PO potencia del haz de radiación


PT
T
inicial.
PT potencia del haz de radiación
PO transmitida.

ABSORBANCIA
La absorbancia de una disolución aumenta a medida que aumenta la
atenuación del haz.

PO A  2  log %T
A   log T  log
PT
Determinación precisa: separar la radiación en sus diferentes componentes
Ley fundamental de Lambert – Beer: A= ε l C
LIMITACIONES LEY DE LAMBERT-BEER
LIMITACIONES LEY DE LAMBERT-BEER
1. Convierta los siguientes valores de absorbancia a porcentaje de transmitancia:
a) 0,278 b) 1,499 c) 0,039.
2. Convierta los siguientes valores de porcentaje de transmitancia absorbancia :
a) 29,9 b) 86,1 c) 2,97
3. La absortividad molar de un compuesto es de 3,03 x 103 L cm-1 mol-1. ¿Qué concentración
del compuesto se requiere para producir una solución que tenga una transmitancia de 9,53%
en una celda de 2,50 cm?
4. Las aminas forman sales con ácido pícrico, y todos aminopicratos formados exhiben un
máximo de absorción a 539nm con un coeficiente de extinción de 1,25 x 104 L cm-1 mol-1. Una
muestra de 0,200 g de anilina impura (C6H5NH2) se disuelve en 500mL de agua. Una alícuota
de 25mL de esa solución se hace reaccionar con ácido pícrico en un matraz volumétrico de
250mL diluyendo hasta el aforo. Una alícuota de 10 mL de esa solución es diluida a 100 mL y
su absorbancia es de 0,425, empleando una celda de 1,0 cm de espesor. ¿Cuál es el % de
pureza de la anilina?
5. Una muestra de 500mg que contiene un compuesto coloreado X se disuelve y se diluye a
500mL. La absorbancia de una alícuota de esta solución medida a 400nm en una celda de
1,00cm es 0,900. 10mg de X puro se disuelven a 1 (L) del mismo solvente y la absorbancia
medida en una celda de 0,100 cm a la misma longitud de onda es de 0,300. ¿Cuál es el % de
X en la muestra original?
 DEFINICIÓN DEL PROBLEMA ANÁLITICO

Problema Problema analítico

Identificación y determinación de
Contaminación de un río
contaminantes orgánicos e inorgánicos

Determinación de anfetaminas,
“Doping “en los Juegos Olímpicos
hormonas, ect, en muestras de orina

Adulteración de aceite de oliva con otras Determinación de grasas vegetales y


grasas animales en el aceite
Determinación de Cd en pinturas
Toxicidad en juguetes
amarillas

Antigüedad de un zircón (mineral de Th Determinación de las relaciones


y U) isotópicas de Pb en el mineral
CRITERIOS
NUMÉRICOS PARA
SELECCIONAR UN
MÉTODO ANALÍTICO
Según la ISO (International Estándar Office),
la CALIBRACIÓN se define como el conjunto
de operaciones que permiten establecer, en
determinadas condiciones experimentales, la
relación existente entre los valores indicados
por el aparato, con los valores obtenidos en
la medida de un valor conocido.
CURVAS DE CALIBRACIÓN (Patrón externo)

MÉTODO DE ADICIÓN ESTÁNDAR

MÉTODO DE ESTÁNDAR O PATRÓN INTERNO


CURVAS DE CALIBRACIÓN
Una curva de calibración es una representación gráfica de la señal vs
la cantidad conocida de un compuesto (estándar o patrón) o
propiedad medida.
CURVAS DE CALIBRACIÓN

http://www.youtube.com/watch?v=cgbkGHXPnXE
Cuantificación colorimétrica

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
Cuantificación colorimétrica

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
Cuantificación colorimétrica

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
Cuantificación colorimétrica

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
DESCRIPCIÓN DE LA APLICACIÓN DE LA
TÉCNICA
Análisis espectrofotométrico en el rango UV – Visible de una
muestra.

1. Selección de la longitud de onda máximo de absorción.

2. Variables que influyen en la absorbancia  pH.


 Disolvente.
 Temperatura.
 Concentración electrolito.
 Sustancias interferentes.

3. Determinación de la relación entre la absorbancia y la concentración

recta de calibración
¿[Fe] en ppm de una muestra de agua?

[Fe(H2O)5(SCN)]2+
forma un complejo con
Fe (III) el ión tiocianato (SCN-)
λ = 480 nm

Señal del equipo


(absorbancia)
Según la ley de Relación lineal directa
Lambert - Beer
Concentración
metal
EJEMPLO …. Reacción para la Determinación de Hierro

[Fe(H2O)6]3+ + SCN-  [Fe(H2O)5(SCN)]2+ + H2O

Disoluciones Absorbancia
Recta de calibrado y = 0,2531x - 0,0515
patrón
R2 = 0,9971
1,4
Disolución blanco 0,000
1,2

A(Absorbancia)
1
1 ppm 0,177
0,8
2 ppm 0,469 0,6

3 ppm 0,735 0,4


0,2
4 ppm 0,962
0
5 ppm 1,196 0 1 2 3 4 5 6
Concentración de Fe(III)

Alícuotas Absorbancia [Fe3+ ] (ppm)

1 0,421 3,926

2 0,419 3,909 3,94 ± 0,03 ppm


3 0,427 3,976
EJERCICIO
En la determinación de una especie X por un método instrumental en el
que la señal analítica se define como P = kCx, se obtuvieron los
siguientes datos de calibración:

a) Representa y calcula la ecuación de la curva de calibrado.


b) Calcular la concentración molar de X en una muestra, si al medir la
intensidad de la señal analítica se obtiene un valor de P = 0,532.
c) Sabiendo que la desviación estándar absoluta del blanco es Sb =
0.0079, calcula el límite de detección y de cuantificación del compuesto
X usando éste método instrumental.
d) Define la sensibilidad del calibrado y calcula la sensibilidad analítica
del método propuesto.
http://www.youtube.com/watch?v=6vADXu-6nYo
http://www.youtube.com/watch?v=T_5e96vd21E
EJERCICIO
Para determinar la concentración de una solución desconocida de sulfato de cobre un
estudiante decidió utilizar la colorimetría, para lo cual se construyó una curva de
calibración con soluciones de sulfato de cobre de concentración conocida y
posteriormente a cada una de las soluciones se les determinó su absorbancia, cuyos
resultados fueron:
C (M) A
0,0200 0,120
0,0508 0,200
0,0614 0,250
0,1032 0,500
0,1507 0,700
0,2312 1,010

La solución de sulfato de cobre de concentración desconocida es bastante


concentrada dando valores de absorbancia muy altos que se salen del rango de la
curva de calibración. Por lo que se decidió realizar una dilución de esta, para lo cual se
tomó una alícuota de 10,0 mL y se diluyó 5 veces. A la solución resultante se le
determinó su absorbancia dando como resultado 0,657 (la longitud de celda es de 1
cm). Teniendo en cuenta lo mencionado anteriormente calcule la concentración de la
solución de sulfato de cobre.
Este método implica la adición a una muestra de cantidades crecientes
de un estándar o patrón para determinar la concentración por
extrapolación.

A cada uno de los estándares se le agrega


un volumen o cantidad conocido de
analito
¿Cómo se obtiene la cantidad de analito en la muestra?
EJERCICIO
Se llevó a cabo la determinación de un metal M en vinos mediante absorción
atómica. Para ello, en 5 matraces aforados de 50 mL se pusieron 10 mL de vino y
se le añadieron a cada uno de ellos 0, 5, 10, 15 y 20 mL de una disolución patrón
de M de concentración 10 mg L-1. Seguidamente, los matraces se enrasaron con
agua desionizada y se midió la absorbancia de cada una de ellas obteniendo los
siguientes valores: 0.040, 0.062, 0.081, 0.102, 0.135. Realice un esquema del
experimento propuesto y explica brevemente que tipo de método de calibración
se ha usado para la determinación del M. Finalmente calcula la ecuación de la
recta de regresión y obtén la concentración del M en el vino (mg L-1).
EJERCICIO
Se determinó el contenido de cromo en una matriz acuosa al tomar cinco
muestras de 10,0 mL de la solución problema con determinados volúmenes de
una solución patrón que contenía 12,2 ppm de Cr diluyéndolos con agua
destilada en balones volumétricos de 50,0 mL.

a) Determine la concentración de Cr en ppm de la muestra empleando el


método gráfico.
b) Determine la concentración de Cr en ppm de la muestra empleando el
método matemático (analítico).
EJERCICIO
Una muestra de 5.12 g de un pesticida se descompuso mediante un
proceso de digestión. Posteriormente la solución tratada se diluyó
hasta 200.0 mL en un balón aforado. El análisis se completó
adicionando a esta disolución los siguientes reactivos, como se indica a
continuación. Calcule el porcentaje de cobre en la muestra.
•El estándar interno (IS) puede
compensar distintos tipos de
errores indeterminados y
sistemáticos.
•Si el IS y el analito responden
proporcionalmente a los errores
instrumentales y fluctuaciones
del método, la razón entre las
señales es independiente de las
fluctuaciones.
•La mayor dificultad es encontrar
un IS adecuado, con señal
reproducible y que genere una
señal similar a la del analito
La calibración supone representar la razón entre la señal del analito y la
del estándar interno como una función de la concentración del analito.