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PRACTICA 11
ANÁLISIS QUÍMICO
LABORATORIO 11. CROMATOGRAFÍA
OBJETIVOS
a) Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (C.C.D.), sus características y los
factores que en ella intervienen.
b) Determinar el solvente adecuado para separar una mezcla.
c) Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la selección
adecuada del eluyente y deducir la relación que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
c) Aplicar la técnica de cromatografÍa en capa fina como criterio de pureza e
identificación de sustancias.
ANTECEDENTES
La cromatografía se define como la técnica de separación de una mezcla de dos o
más compuestos en base a la diferencia de retención de dichos compuestos y por
distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil.
Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos
fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), líquido-líquido y gases-
líquido (fase vapor).
Reparto: es la distribución de una sustancia (soluto) entre dos fases líquidas inmiscibles
entre sí. La relación entre las cantidades de soluto disuelto en cada una de las dos fases
se denomina coeficiente de reparto de ese soluto en esa fase y se determina
corrientemente por la relación de las concentraciones de la sustancia en las dos fases.
K = CA / CB
CA = Concentración del soluto en fase A.
CB = Concentración del soluto en fase B.
Intercambio iónico: Es el desplazamiento de un ión desde una matriz, por otro que
puede ser retenido más fuertemente. La matriz está formada por una resina insoluble
que puede tener grupos cargados negativamente (intercambia cationes) o cargada
positivamente (intercambia aniones).
a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria
impregnada con un indicador fluorescente (F 254 ó F366), el número que aparece como
subíndice nos muestra Ia longitud de onda de excitación del indicador utilizado.
b) La introducción de la placa en vapores de yodo
c) El rocío con una solución de agua/H2SO4 a 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases). Después
calentar intensamente, por ejemplo, con una plancha de calentamiento hasta que
aparezcan los colores de las manchas de los compuestos en la placa.
d) Vainillina en ácido sulfúrico concentrado al 5% m/v.
e) Cloruro férrico (FeCl3) en ácido sulfúrico concentrado al 5% m/v
Materiales y reactivos:
Capilares alargados
Vaso de precipitado de 50 mL.
Probeta de 10 mL.
7 placas de tamaño portaobjeto preparada con sílica gel (SiO 2) /grupo
3 cámaras de saturación con tapa.
Mezcla de colorantes lipofílicos.
Solventes (éter de petróleo, benceno, tolueno, cloroformo y etanol, acetato de
etilo)
Prácticas Análisis Químico
Procedimiento
Selección del solvente. Siguiendo las indicaciones del profesor, cada grupo coloca
en una placa de cinco gotas separadas de la mezcla de colorantes con un capilar y
luego sobre cada mancha agrega con otro capilar un solvente diferente de manera
continua. El solvente que permita una mejor separación de los componentes de la
mezcla se selecciona como el solvente adecuado.
Efecto de la fase móvil. En una placa, aplique la mezcla de colorantes entregada por
el profesor y desarrolle la cromtografía con una fase móvil mixta (mezcla de dos
solventes) indicada por su profesor.
Se reportan en una tabla, los diferentes solventes utilizados y los valores de Rf de cada
mancha. Igualmente el efecto observado al aumentar la concentración en los diferentes
compuestos a separar de la mezcla y se diagraman las cromatoplacas. Igualmente debe
discutir el comportamiento de las diferentes manchas relacionado con los tipos de
eluyentes o fases móviles. Sus conclusiones deben nacer de lo observado.
BIBLIOGRAFIA