CICLO DE KREBS

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA UNIDAD

IZTAPALAPA

ING. BIOQUIMICA INDUSTRIAL

¨RUTAS METABOLICAS¨

 ¿Dónde tiene lugar el C.K. en la célula?

En los eucariontes el ciclo de C.K. ocurre en la mitocondria. La mayor parte de las enzimas del C.K.
están presentes en la matriz mitocondrial, esta tiene una membrana interna y otra externa y entre estas
dos hay un espacio intermembranal. La membrana interna es una barrera fuerte entre la matriz y el
citosol y muy pocos compuestos pueden atravesarla sin contar con una proteína específica. Todas las
reacciones del C.K. suceden en la matriz, excepto aquella en la cual el aceptor intermediario de
electrones es el FAD. La enzima que cataliza la reacción en la que participa el FAD forma parte
integral de la membrana mitocondrial interna y se relaciona directamente con la cadena de transporte
de electrones.

 Características clave del C.K.

En condiciones aeróbicas el piruvato producido por la glucolisis se oxida aún más, y forma dióxido
de carbono y agua como productos finales. Primero el piruvato se oxida a una molécula de CO2 y un
grupo acetilo, el cual se une con un intermediario, coenzima A (coA). El acetil-coA entra al C.K., en el
cual dos moléculas de dióxido de carbono son producidas por cada molécula de acetil-coA y en el
proceso hay transferencia de electrones.
El aceptor intermediario de electrones en todos los casos, con excepción de uno es el NAD, que se
reduce a NADH. En el caso de que haya otro aceptor intermediario de electrones el FAD derivado de
la riboflavina capta dos electrones y dos iones hidrogeno para producir FADH2. Los electrones son
transferidos del NADH y FADH2 a través de varias etapas de la cadena de transporte electrónico.
El aceptor final del electrón es el oxígeno y el producto es el agua. El ciclo produce energía en
forma de equivalentes electrónicos reducidos (NADH y FADH2) pero los esqueletos de carbono en
realidad se pierden. El ciclo también produce un compuesto de alta energía, el GTP (guanosin
trifosfato).

 ¿Cómo se convierte el piruvato a acetil-coA?

El piruvato puede provenir de varias fuentes, incluida la glucolisis y se desplaza del citosol a la
mitocondria a través de un transportador especifico. Ahí un sistema enzimático llamado complejo
piruvato deshidrogenasa es el responsable de la conversión de piruvato a dióxido de carbono y la
porción acetilo de la coA. Una reacción de oxidación procede a la transferencia del grupo acetilo a la
coA, en el proceso complejo participan varias enzimas y todas ellas forman parte del complejo piruvato
deshidrogenasa. La reacción general:
PIRUVATO + CoA-SH + NAD ACETIL-CoA + CO2 + H + + NADH
-1 -1
Es exergonica ( G°= -33.4 KJmol = -8.0Kcalmol ) y el NADH puede utilizarse posteriormente
para generar ATP a través de la cadena de transporte de electrones.
Paso1. Formación de citrato
La primera reacción es del acetil-coA y oxalacetato para formar citrato y coA-SH. Esta reacción se
llama condensación porque se forma un nuevo enlace carbono-carbono. La reacción es catalizada por
la enzima citrato sintasa, no requiere de la alimentación directa de ATP. Es una reacción exergonica,
porque la hidrolisis del tioester libera energía.
-1
( G°= -32.8 KJmol = -7.8Kcalmol -1)

Paso 2 Isomerización del citrato a isocitrato.

La segunda reacción es catalizada por la enzima aconitasa, es la isomerización de citrato a isocitrato.
La enzima requiere Fe+. Una de las características más importantes de la reacción es que el citrato, un
compuesto simétrico (aquiral) se transforma en isocitrato, un compuesto quiral, es decir, una molécula
que no puede superponerse sobre su imagen en el espejo. El isocitrato tiene 4 isómeros posibles,
pero solo uno de ellos es producido en esta reacción. La aconitasa, elige un extremo de la molécula
de citrato de manera preferente al otro.
Este tipo de comportamiento implica que la enzima puede unirse con un sustrato simétrico en un sitio
de enlace asimétrico. La reacción procede por eliminación de una molécula de agua del citrato para
producir cis-aconitato y después el agua se agrega al cis-aconitato para dar isocitrato. El intermediario
cis-aconitato permanece enlazado con la enzima durante el curso den la reacción.

Paso 3. Formación de -cetoglutarato y CO2 primera oxidación

La tercera reacción es la descarboxilación oxidativa del isocitrato a alfa-glutarato y dióxido de carbono.
Esta reacción es la primera de dos descarboxilaciones oxidativas del CK. Y la enzima que la cataliza
es la isositrato deshidrogenasa. La reacción se realiza en dos pasos. Primero el sustrato se oxida a
oxalosuccinato, que permanece ligado a la enzima. Después el oxalosuccinato se descarboxila y libera
dióxido de carbono y alfa-cetoglutarato. Esta es la primera de las reacciones en que se produce NADH.
Se produce una molécula de NADH a partir de NAD + en esta etapa por la pérdida de dos electrones
en la oxidación, cada NADH producido conduce a la producción de 3 ATP en etapas posteriores del
metabolismo aeróbico.

Paso 4. Formación de la succinil-coA y CO2 segunda oxidación.

Esta reacción es similar a aquella en la que se forma aceti-coA a partir de piruvato, produciéndose
NADH a partir de NAD +. La reaccion ocurre en varias etapas y es catalizada por un sistema enzimático
llamado complejo alfa-cetoglutarato deshidrogenasa, el cual es muy semejante al complejo de la
piruvato deshidrogenasa. Esta reaccion es altamente exergonica( G°= -33.4 KJmol -1= - 8.0Kcalmol-1)
igual que la reaccion catalizada por la piruvato deshidrogenasa. En este punto se han producido dos
moleculas de CO2 por la descarboxilación oxidativa el el C.K. La eliminacion de CO2 ocaciona que el
C.K. sea irevercible in vivo, aunque in vitro cada reaccion por separado es reversible.

Paso 5.Formacion de succinato.

El enlace tioester succinil-CoAse hidroliza para producir succinato y CoA-SH; una reacción
acompañante en la fosforilacion de GDP a GTP. Toda reacción es catalizada por la enzima succinil-
CoA sintetasa. En el mecanismo de reacción, un grupo fosfato unido de manera covalente con la
enzima es transferida directamente al GDP. La fosforilacion de GDP a GTP es endergonica y también
la reacción correspondiente de ADT-ATP ( G°= -30.5 KJmol -1= 7.3 Kcalmol -1) La energía necesaria
para la fosforilacion de GDP a GTP es suministrada por la hidrolisis de la succinil-CoA para producir
succinato y CoA. La reacción general es ligeramente exergonica ( G°= - 3.3 KJmol -1= -8.0Kcalmol -1)
y como resultado no contribuye de manera considerable a la producción general de la energía en la
mitocondria. La succinil-CoA sintetasa producirá succinil-CoA a lo que daría un ATP y otro fosfato de
alta energia. Esta reacción es la opuesta de aquella. La enzima nucleosido difosfato cinasa cataliza la
transferencia de un grupo fosfato de GTP a ADP para dar GDP y ATP. Este paso de reacción se llama
fosforilacion a nivel sustrato para diferenciarlo del tipo de reacción para producir ATP que se acopla
en la cadena de transporte de electrones.

Paso 6. Formación de fumarato, oxidación ligada a FAD

El succinato se oxida a fumarato, reaccion catalizada por la enzima succinato deshidrogenasa. El
aceptador de protones que es el FAD en vez de NAD, esta unido covalentemente a esta enzima la
succinato deshidrogenasa, es una flavoproteina por la presencia de FAD. En la reaccion el FAD se
reduce a FADH2 y el succinato se oxida a Fumarato. El grupo FADH2 transfiere electrones a la cadena
de transporte electrónico y posteriormente al oxígeno y da lugar a a 2 ATP.
Paso 7. Formación de L-malato
Estar reacción catalizada por la enzima fumarasa, se agrega agua al doble enlace en una reacción de
hidratación para dar malato. De nuevo la reacción es estereoespecifica. El malato tiene dos
enantiomeros el L- malato y el D-malato pero solo se produce L-malato.

Paso 8. Regeneración de oxalacetato pasó final de oxidación.

El malato se oxida a oxalacetato y otra molécula de NAD+ se reduce a NADH. Esta reacción es
catalizada por la enzima malato deshidrogenasa, después el oxalacetato puede reaccionar con otra
molécula de acetil-coA e iniciar otra ronda del ciclo. La oxidación del piruvato por el complejo de
piruvato deshidrogenasa y el C.K. dan lugar a la producción de tres moléculas de GDP se fosforila a
GTP, una molécula de FAD se reduce a FADH2 y cuatro moléculas de NAD se reducen a NADH. De
las cuatro moléculas de NADH producidas, tres provienen del C.K. y una de la reacción del complejo
piruvato deshidrogenasa.
  Control del C.K.
El control del C.K. se ejerce en tres puntos: es decir tres enzimas del ciclo desempeñan funciones
reguladoras. También hay control de acceso al acido a través de la piruvato deshidrogenas
 ¿Cómo controla la reacción de piruvato deshidrogenasa al C.K.?
La reacción general forma parte de una vía que libera energía. No resulta sorprendente que la enzima
que la inicia sea inhibida por ATP y NADH porque ambos compuestos abundan cuando la célula cuenta
con suficiente energía fácilmente accesible. Los productos finales de una serie de reacciones inhiben
a la primera reacción de la serio, y las reacciones intermedias no se llevan a cabo cuando sus
productos no se necesitan. De manera consistente con este cuadro, el complejo de piruvato
deshidrogenasa (PDH) es activado por ADP, el cual abunda cuando la célula necesita energía. En los
mamíferos, el mecanismo real por el cual se lleva a cabo esta inhibición es la fosforilación de la piruvato
deshidrogenasa. Un grupo fosfato se une covalentemente con la enzima en una reacción catalizada
por la enzima piruvato deshidrogenasa cinasa. Cuando es necesario que se active la piruvato
deshidrogenasa, la hidrolisis del enlace estérico del fosfato (desfosforilacion) es catalizada por otra
enzima, la fosfoproteína fosfatosa. Esta última es activada a su vez por Ca 2+. Ambas encimas se
asocian con el complejo de la
piruvato deshidrogenasa en los
mamíferos, lo que permite un
control eficaz de la reacción general
de piruvato a acetil-coA. La PDH
cinasa y la PDH fosfatosa se
encuentran sobre la misma cadena
poli peptídica. La cinasa es activada
por niveles altos de ATP, la piruvato
deshidrogenasa también es inhida
por niveles altos de acetil-coA; esto
tiene mucho sentido desde el punto
de vista metabólico. Cuando las
grasas abundan y se degradan para la obtención de energía, su producto es acetil-coA. De modo que
cuando la acetil-coA abunda no hay motivo para enviar carbohidratos al C.K. La piruvato
deshidrogenasa se inhibe y la acetil-coA para el ciclo TCA proviene de otras fuentes.

 ¿Cómo se ejerce el control dentro del C.K.

Dentro del C.K. los tres puntos de control son las reacciones catalizadas por la citratocintas, la
sisositrato deshidrogenasa y el complejo alfa-cetoglutarato deshidrogenasa.
 La reaccion de la isositrato deshidrogenasa
En este caso el ADP y NAD+ son activadores alosterico de la enzima. Ya se ha mencionado el patrón
recurrente por el cual el ATP y el NADH son enzimas inhibidoras de la ruta, el ADP y el NAD+ activan
estas enzimas.
 La alfa-cetoglutarato deshidrogenasa
Es el tercer sitio regulatorio como antes el ATP y el NADH son inhibidores. La succinil-coA es inhibidora
de esta reacción. Este recurrente es el metabolismo refleja la manera por la cual la célula se ajusta
para pasar de estado activa a estado de estacionaria. Cuando la célula se encuentra metabólicamente
activa, emplea ATP y NADH a mayor velocidad, lo que produce grandes cantidades de ATP y NAD +,
en otras palabras, cuando la producción de ATP/ADP es baja, la célula está utilizando energía y
necesita liberar energía de los nutrientes almacenados. La porción baja de NADH/NAD también es
caracterizada de un estado metabólico activo. Por otra parte una célula en reposo tiene altos niveles
de ATP y NADH. Las proporciones de ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas en las células en reposo,
porque no necesitan mantener un alto nivel de oxidación para producir energía. Cuando las células
tienen bajos requerimientos de energía (tienen carga energética alta) con proporciones altas de ATP
/ADP Y NADH/NAD, la presencia de ATP y como de NADH sirve como señal para que las enzimas
responsables de las reacción oxidativas ¨dejen de funcionar¨. Cuando las células tienen una carga de
energía baja, que se caracteriza por proporciones bajas de ATP/ADP y NADH/NAD la necesidad de
liberar más energía y generar más ATP sirve de señal para que las enzimas oxidativas funcionen.

 El ciclo del glioxilato: una via relacionada

En las plantas y en algunas Bacterias, pero no en animales, la acetil-CoA puede servir como material
inicial para la biosíntesis de carbohidratos. Los animales pueden transformar los carbohidratos en
grasa, pero no las grasas en carbohidratos (la acetil-CoA es producida en el catabolismo de los ácidos
grasos). Dos encimas dan lugar a la capacidad de las bacterias y plantas puedan producir glucosa a
partir de los ácidos grasos: la isocitrato liasa actúa sobre el isocitrarto y produce glioxalato y succinato,
la malatosintosa cataliza la reaccion del glioxilato con acetil-CoA para producir malato.
 Estas dos reacciones sucesivas pasan
por altos pasos de descarboxilacion
oxidativa del ciclo de Krebs y el
resultado neto es una vía alterna, el
ciclo del glioxilato. Dos moléculas de
acetil-CoA entran al ciclo de glioxalato
y dan lugar a una molécula de malato y
eventualmente a una molécula de
oxalacetato. Las dos unidades de dos
carbonos ( los grupos acetilo de la
acetil-CoA) dan lugar a una unidad de
cuatro carbonos (el malato) que
después se convierte en oxalacetato (
que también es un compuesto de
cuatro carbonos) Asi se produce
glucosa a partir del oxalacetato por
gluconeogenesis esta es una
diferencia sutil, pero muy importante durante el ciclo del glioxalato y el ciclo de krebs. Los esqueletos
de carbono que entran al ciclo de C.K. en forma de acetil-CoA se pierden eficazmente en los pasos de
descarboxilacion. Esto significa que cuando el oxalacetato (OOA) se emplea para fabricar glucasa, no
queda OOA para que el ciclo continúe. Por este motivo, las grasas no pueden conducir a una
producción neta de glucosa. En el ciclo de glioxilato, las reacciones de derivación evitan la
descarboxilación y crean un compuesto adicional de 4 carbonos que pueden emplearse para fabricar
glucosa sin agotar el compuesto inicial del C.K. Los orgánelos especializados de las plantas, llamados
gleoxisomas, son los sitios donde se efectúa el citio del glioxilato. Esta vía es particularmente
importante para la germinación de las semillas. Los acidos grasos almacenados en las semillas se
descomponen para obtener energía durante la germinación. Primero los acidos grasos dan lugar a la
acetil-coA, la cual puede entrar al C.K. y conducir la liberación de energía de las maneras descritas
con anteoridad. El C.K. y el ciclo del glioxilato pueden funcionar de manera simultánea. La acetil-coA
también sirve como punto inicial para la síntesis de glucosa y cualquier otro compuesto necesario para
la semilla en crecimiento.
BIBLIOGRAFIAS
 Campelle, Mary K. , Shaw o. Farrell; Bioquimica volumen II -8ª-edición.
Cen age Learning (2015)
 Garrido Amando, Teijon Jose Maria. Fundamentos de Bioquimica
Metabolica -2ª-edición- Editorial TEBAR Madrid (2006)