Luciferina (molécula)

Un lampírido del grupo Lampyris noctiluca. Gracias a una reacción bioquímica con luciferinas
específicas de la especie obtiene luz.

Las luciferinas son proteínas que se utilizan para la obtención de luz en organismos
bioluminiscentes. Mediante la actividad catalítica de la enzima luciferasa correspondiente,
reaccionan con oxígeno (oxidación). Por el cambio, la mayoría de los grupos funcionales removidos
de la luciferina liberan energía en forma de luz. Tanto las luciferinas como las luciferasas son taxón
específica, es decir

características de

cada especie.

Índice

1 Historia

2 Propiedades

2.1 Definición

2.2 Principios

2.3 Eficiencia cuántica Q

3 Tipos de Luciferina

3.1 La luciferina de las luciérnagas, un benzotiazol

3.1.1 Reacción de bioluminiscencia

3.1.2 Mecanismo de reacción

3.1.3 Síntesis

3.1.4 Orígenes evolutivos

 3.1.5 Luminiscencia de otros insectos

3.1.6 Dehidroluciferina

3.2 Tetrapirrol, la luciferina de los dinoflagelados y Euphausiidae

3.2.1 Componente F en el krill

3.3 Flavina, una luciferina bacteriana

3.3.1 Gen-Lux

3.4 Coelenteracina, el componente químico de muchas especies bioluminiscentes marinas

3.4.1 Mecanismo de acción

3.4.2 Luciferina-Watasenia

3.4.3 Luciferina-Vargula

3.4.4 Dehidrocoelenteracina de Symplectoteuthis oualaniensis

4 Sistemas luciferina-luciferasa no clásicos

4.1 La luciferina-Latia

4.2 Luciferina de Diplocardia longa

4.3 Luciferina de Fridericia heliota

5 Aplicaciones

5.1 Diagnóstico

5.2 Técnica genética/biotecnología

6 Literatura

7 Referencias

8 Enlaces externos

9 Video

Historia
A comienzos del siglo XVIII René Réaumur observó que el polvo seco y molido de organismos
bioluminiscentes brillaba al ponerles en contacto con agua. Las primeras investigaciones sobre el
sistema de luciferina-luciferasa se le atribuyen al francés Raphaël Dubois, que en 1885 descubrió
mediante su trabajo con Luciérnagas y con el bivalvo Pholas_dactylus en 1887, que en el
fenómeno de la Bioluminiscencia existían un par de sustancias; una de ellas se consumía en
presencia de la otra, la cual actuaba como catalizador y cuya consecuencia era la emisión de luz
por parte de algunos organismos. Dicha sustancia que se consumía se denominó luciferina, la cual
no se destruye por el calor. El otro componente lábil al calor, descrito por Dubois se denominó
luciferasa. Hoy en día, la luciferasa es la enzima que convierte la luciferina en asociado reducido.1

Las siguientes investigaciones fueron realizadas por el estadounidense Edmund_Newton_Harvey a

principio del Siglo_XX.2 Él encontró que hay una especificidad del sistema luciferina-luciferasa
para diferentes especies. Así, luciferinas de una especie no pueden ser producida por otra especie.
Por último, cualquier sistema bioluminiscente requiere oxígeno, lo que ya había sido observado
por Robert_Boyle en el siglo XIX.

Propiedades

Al parecer los sistemas bioluminiscentes no guardan relación evolutiva entre ellos, es decir no son
homólogos. Dichos procesos se presentan en unos 17 grupos de insectos diferentes y en por lo
menos unas 700 especies adicionales, en su gran mayoría marinas.3 Se han desarrollado una gran
cantidad de estudios filogenéticos de los sistemas luciferina-luciferasa, y se han hallado más de 30
orígenes independientes.4

Definición

La definición clásica habla de que el complejo luciferasa-luciferina es el que proporciona la luz. La

luciferasa, mediante la utilización de oxígeno, modifica a la luciferina. En algunos casos se hace uso
de cofactores como ATP o iones. La luciferina oxidada pasa a un estado de transición I y después
alcanza frecuentemente una descarboxilación y muchos pasos intermedios hasta un sustrato P*
activos eléctricamente. Este se descompone rápidamente (pocos nanosegundos) en su sustrato
base P y emite durante este proceso fotones. Normalmente las luciferinas modificadas son
también fluoróforos, ya que al irradiarlos con luz pueden pasar a un estado activado.

La luciferina (L) se modifica mediante utilización de oxígeno por las luciferasas, ahí se forma un
intermediario I y por último en un sustrato activo eléctricamente P*. Después de un corto tiempo
de vida se emiten fotones y el sustrato base P se alcanza.

Principios
Para pasar al sustrato activado P*, se requiere bioquímicamente de mucha energía. La emisión de
fotones con una longitud de onda de 500nm (verde, energía de aproximadamente 2 eV/fotón) se
utiliza 250 kJ/mol- en comparación: la hidrólisis de ATP a ADP +P libera 30kJ/mol. Además sólo se
puede liberar energía en un paso.

El principio más recurrente es la creación de un tetra anillo de dioxetano, como por ejemplo
dioxetano (α-peroxilactona). Después de una exitosa descarboxilación se genera el sustrato
activado.

Un dioxetano es inestable y se descompone por separación de CO2. Esto da origen a una cetona
en estado activado.

En algunos casos la fluorescencia no actúa como se espera, por ejemplo en estudios en vitro (en
tubos de ensayo). Para ello existen muchas causas. Así se emiten en el complejo enzima-luciferina
durante la oxidación diferencias que las luciferinas libres al estímulo de la luz. A veces la energía se
traslada a un segundo fluoróforo, como sucede por ejemplo con la aequorina a GFP en Aequorea
victoria.

Eficiencia cuántica Q

Si la transformación de una luciferina por su luciferasa correspondiente es eficiente, se determina

la eficiencia cuántica Q. Se le define como el número de fotones emitidos por molécula
transformada de luciferina.5 Debido a la definición, el punto máximo es Q=1, esto quiere decir,
que por cada molécula transformada de luciferina un fotón de luz se libera. La mayor eficiencia
cuántica que se ha comprobado es la de la luciérnaga Photinus pyralis con Q=0.41.

Tipos de Luciferina

Existen muchos tipos de sistemas luciferina-luciferasa. Hay cuatro clases principales de estos, en
los cuales la transformación de la luciferina por la luciferas pasa a un estado activado
electrónicamente y así se vuelve un proporcionador de luz.

La luciferina de las luciérnagas, un benzotiazol

Un gusano que brilla de la especie Lampyris noctiluca

Photinus pyralis en vuelo

Los insectos bioluminiscentes se encuentran presentes en los cuatro órdenes Collembola,
Hemiptera, Coleoptera y Diptera. Aunque sólo se investigan de los dos últimos para sistemas de
bioluminiscencia. En coleoptera (escarabajos) se encuentran representantes que emiten luz de las
familias: phengodidae, elateridae (elatéridos) así como Lampyridae (lampíridos).6

La luciérnaga photinus pyralis pertenece a la familia de lampyridae. Fue utilizada en los estudios
de Dubois sobre el complejo Luciferina-Luciferasa (comparar arriba). Los primeros estudios
científicos de reacciones de bioluminiscencia se realizaron en 1917 por Harvey. Aparte este
sistema de luciferina-luciferasa es el más estudiado.

Reacción de bioluminiscencia

Fórmula estructural de la D-Luciferin de la luciérnaga Photinus pyralis. Se le acorta como LH2

En la reacción, gracias a la luciferasa se transforma el sustrato D-Luciferina (LH2), un benzotiazol,

bajo consumo de oxígeno. Los trabajos de William D. McErloy a finales de 1940's enseñaron, que
para la reacción se utilizaban como cofactores ATP y iones de magnesio:6

\mathrm{LH_2 + O_2 + ATP \xrightarrow[Mg^{2+}]{Luciferase} \ oxy\text{-}L + CO_2 + AMP +

PP_i + h\nu}

En comparación a las luciferinas de otros sistemas, la lucferina de las luciérnagas es una unión
relativamente estable. El punto de fusión es de 205-210 ºC. Su absortividad es de 328nm y es ε =
18.200 M−1·cm−1. La luciferina fluoresce y tiene un máximo de emisión en λmax = 537 nm.

La luciferasa (EC 1.13.12.7) de la luciérnaga tiene un peso molecular de ca. 60-62 kDa, en la
P.pyralis exacto en 61kDa, y está conformada por 550 aminoácidos. Cataliza la descarboxilación
oxidativa de la luciferina a oxiluciferina (oxi-L, ver en esquema). La reacción corre en los
peroxisomas de las células del órgano lumínico.7 La estructura de la luciferasa de P. pyralis se
presentó por primera vez en 1956 con una resolución de 200 pm. Para el análisis se necesitaron
grandes cantidades de luciérnagas que obtuvieron gracias a niños, que por cada ejemplar se les
pagaba un centavo.
Sin sustrato unido, las luciferasas están en una conformación abierta; una región con un
aminoácido grande N-terminal y uno pequeño C-terminal forman un profundo surco. Con unión a
sustrato se produce un cambio conformacional para cerrar el surco.8 A mediados de 1980 se pudo
de manera exitosa introducir la luciferasa en el genoma de la bacteria E. coli y expresarse. Las
luciferasas de la familia lampyridae son están conformadas de manera similar entres si. Las
diferencias determinan el color de la luz emitida.9 10 De acuerdo a la especie el máximo de
emisión λmax de la luz liberada está entre 530 nm (verde) y 635 nm (roja).

La reacción corre en vitro de manera óptima en un pH de 7.8 y a una temperatura entre 23-25 ºC.
In vivo, el color de la luz emitida es amarillo-verde hasta amarillo (552-582 nm). En el laboratorio
la reacción puede tener un rango muy amplio de coloración. En medio ácido la luz toma un color
rojo (615 nm), en medio neutro amarrillo-verde.

Mecanismo de reacción

Mecanismo de reacción de la luciferina

El mecanismo de reacción específico es conocido. Mediante ATP ocurre una adenilicación del
grupo carboxilo de la D-Luciferina, donde el pirofosfato se libera (1, en el esquema). Gracias a esta
activación se puede extraer el protón del carbono C4, y se forma un carbanión (2). Por ello se
puede oxigenar la luciferina en el carbono C4 y se forma un peróxido orgánico lineal(3). Este forma
bajo ruptura de AMP un anillo de dioxetano (4). Por descarboxilación se forma la oxiluciferina, que
se puede presentar como monoanión (forma cetónica), 5) o como dianión (forma de enol). En
ambos casos la oxiluciferina se encuentra en un estado activado. Se descompone liberando
fotones (luz roja o luz amarilla-verde) volviendo a su estado basal. La oxiluciferina no se ha aislado
de forma pura debido a su extrema inestabilidad.

El mecanismo de reacción con la formación de dioxietano fue estipulado a finales de 1970 gracias
a los trabajos de Shimomura.11 Utilizó isótopos marcados de 18O en la reacción (H218O
específicamente 18O2). Los resultados de estos trabajos derribaron la hipótesis de que la
oxiluciferina se formaba a partir del rompimiento de enlaces lineales.12 13 De ser así, el dióxido de
carbono liberado contendría un átomo de oxígeno proveniente del agua. En realidad viene del
oxígeno.

La eficacia luminosa de esta reacción es alta, ya que la eficacia cuántica Q en un pH de 8.5 está en
0.41.14

Síntesis
Dos mecanismos propuestos para la regeneración de D-luciferina a partir de oxiluciferina,
basados... Abreviaciones: LH2 Luciferina; HS-CoA Coenzima A; 2C6HB 2-Ciano-6-
hidroxibenzotiazol; L oxiluciferina; Cys Cisteína; TGA ácido tioglicólico.

No está muy claro la manera en la que se sintetiza la luciferina en los insectos. Se sabe que la D-
luciferina no se toma de forma directa de los escarabajos (los escarabajos hembra del género
Photuris, se comen a los machos del género Photinus).15

En la literatura se discuten dos caminos metabólicos para su síntesis:

Una posibilidad está en que después de la reacción lumínica la oxiluciferina se recicla a

luciferina. El paso clave es que a la oxiluciferina se le transforma en 2-ciano-6-hidroxibenzotiazol
(2C6HB), por la enzima regeneradora de luciferina (LRE).,16 por ejemplo en Photinus pyralis, se
cataliza: 2C6HB se condensa con D-cisteína a D-luciferina. Esta reacción de condensación también
se utiliza en la síntesis de luciferina (ver esquema camino de la derecha). Una ruta alternativa
sobre la 2C6HB está en que la L-cisteína forma L-luciferina. Acto seguido de pasos intermedios que
llegan a D-luciferina (ver esquema camino izquierdo).17

Las dos opciones de caminos de biosíntesis sobre 2C6HB todavía tienen problemas:

Así no se sobreproduce la enzima regeneradora de luciferina en los órganos productores de luz

de los escarabajos. Ya que la oxiluciferina en soluciones acuosas es inestable, se esperaría que ahí,
la LRE estuviera en gran cantidad. Además puede ser que el tan reactivo 2C6HB no solo reaccionar
con cisteína sino con muchos otros metabolitos. No se tiene claro, de donde está el origen de la D-
cisteína y como se podría discriminar entre la L-cisteína y la D-cisteína. La L-cisteína reacciona con
2C6HB produciendo L-luciferina, que puede ser tomada por la luciferasa pero inhibe la reacción
lumínica.18 Por otro lado la enzima no podría verificar si la isomerización se catalizó.

Por ello no se tiene en claro como los escarabajos (o simbiontes) podrían sintetizar el
benzotiazoleno.

Ruta biosintética propuesta para la luciferina de L. lateralis. El paradero del primer átomo de
carbono de la primera L-cisteína construido está en color.
 En la luciérnaga Luciola lateralis endémica de Japón se demostró por experimentos de marcado,
que la luciferina en ejemplares adultos se sintetizaba a partir de hidroquinona específicamente
1,4-benzoquinona.19 Una 1,4-benzoquinona se pega dos veces en la L-cisteína, así se genera la
forma L o D de la luciferina. La isomerización de L a D se sigue estudiando. Ya que la 1,4-
bezoquinona en grandes concentraciones es tóxica, se libera un poco antes de la síntesis. Aquí se
hipotetiza por científicos que la arbutina glucósida se dispone como conexión de hidroquinona,
que después se oxida a 1,4-benzoquinona.

Orígenes evolutivos

La conformación predilecta del ácido araquidónico (arriba) y luciferina de las luciérnagas (abajo)
presentan similitudes. Ambas pueden reaccionar con la Coenzyma A

Probablemente la reacción luciferina-luciferasa de las luciérnagas se originó de una función

biológica totalmente diferente. Se sospecha que la molécula de luciferina tuvo lugar en caminos
evolutivos posteriores y originó una reacción luminosa.9 Para ello también habla que la luciferasa
también condensa de manera eficiente a la coenzima A en la molécula de luciferina y así cumple la
función de una clásica CoA-ligasa de ácidos grasos largos.20 La luciferasa puede en esta relación
también utilizar ácidos grasos como el ácido araquidónico, que comparte características
estructurales con la luciferina.

Debido a esta actividad catalítica extra pudo ser la luciferasa primitiva una CoA-ligasa de ácidos
grasos largos. Debido al surgimiento de la luciferina y la reacción lumínica que se produce con ella
originó una ventaja selectiva: Con ello la reacción de adenilación con el paso el tiempo se cambió.
Esta tesis se demostró en el tenebrio molitor que no es luminiscente. Este no tiene luciferina, pero
sí CoA-ligasa de ácido grasos largos. Es interesante que al darle luciferina también se puede
observar una reacción lumínica. Pero sin muchos conocimientos sobre la biosíntesis de la luciferina
de las luciérnagas es difícil el análisis evolutivo.

Luminiscencia de otros insectos

Bioluminiscencia de Arachnocampa luminosa en una cueva de Nueva Zelanda.

También en insectos con luminiscencia de las otras familias Phenogodidae y Elateridae se presenta
la luciferina de las luciérnagas.6 Así los sistemas de bioluminiscencia de los Phenogodidae (por
ejemplo Phrixothrix, en inglés „railroad worm") los Elateridae (por ejemplo el escarabajo click
Pyrophorus noctilucus) con los de las luciérnagas son idénticos. En los primeros sólo las larvas
presentan bioluminiscencia, los ejemplares adultos no.

Por el contrario los Diptera (Arachnocampa o Orfelia) no tienen ninguna característica igual a la
luciferina de las luciérnagas. Las de la larva norteamericana de la familia mycetophilidae emanan
luz azul (λmax = 460 nm), generada en el insecto. Estos viven por ejemplo en las cuevas de
Waitomo.

Dehidroluciferina

Se vio in vitro que la D-Luciferina adenilada (D-LH2·AMP) pegada a una enzima puede hacerse
reaccionar en una reacción. Aquí reacciona sin luz con oxígeno a peróxido de hidrógeno y
dehidroluciferina (L·AMP). Al final se libera de la luciferasa pirofosfato generando ATP.

La L·AMP es un potencial inhibidor de la luciferasa. Si la generación de dehidroluciferina también

se presenta bajo condiciones fisiológicas, no se sabe. Por lo menos se puede rápidamente cambiar
el peróxido dañino en los peroxisomas.21

Tetrapirrol, la luciferina de los dinoflagelados y Euphausiidae

Bioluminiscencia de dinoflagelados por el rompimiento de las olas

Playa en la cercanía de Manasquan (Nueva Jersey, Estados Unidos)

Toma parecida (Manasquan)

Toma en la cercanía de Aufnahme in der Nähe von Carlsbad (California, Estados Unidos)

Toma en la playa Seal Beach (California, Estados Unidos)

La Luciferina en este grupo recae en la base química de un tetrapirrol lineal y abierto y que se
encuentra en los dinoflagelados (Noctiluca, Gonyaulax, Pyrocystis). Los mares de ardora, los cuales
antes de manera errónea se les categorizaba como fosforescentes, se debe gracias a estas algas
microscópicas.22 Las investigaciones del sistema lucifeina-luciferas comenzaron en los finales de
1950 en los dinoflagelados Lingulodinium polyedrum por J.Woodland y sus cooperadores.

La luciferina de los dinoflagelados (R= H). de los Euphausiidae (R = OH). Abajo se marca como
componente F

Para las emisiones de luz están junto a la luciferina y sus correspondiente luciferasa (LCF) cerca de
135kDa de grande se necesita también las proteínas llamadas luciferina-porteínas de unión
(LBP).23 24 Las LBD son un homodímero (75kDa). La luciferina de esta familia es extremadamente
inestable en valores de pH menores a cuatro y grandes concentraciones de sal y oxígeno. Se pudo
demostrar que las LBD en pH 8 se unen a la luciferina de los dinoflagelatos, pero no pudieron en
pH de 6.3.25 Con ello se debe de proteger al sustrato hasta la reacción, que se lleva a cabo en un
pH óptimo de 6.3, especialmente es inactiva en pH alcalinos (pH 8).26 Para la transformación de la
luciferina con oxígeno se propuso que corre en muchos pasos intermedios por radicales.22 La
reacción se lleva a cabo en orgánulos especiales, llamados Scintillone.27 Estos son en promedio
0.4 µm de grande y tienen principalmente luciferasa, luciferina y las proteínas de unión.10 La luz
en esta reacción se ve entre azul y verde (con punto máximo de exitación en λmax = 390 nm, y
máximo de emisión cerca de λmax = 470 nm).22 Como proporcionador de luz sirve un
intermediario pegado a la enzima de la luciferina transformada.10

Reacción de bioluminiscencia de la luciferina de dinoflagelados. En la reacción llamada "lumínica"

(abajo) se libera luz bajo oxidación (λmax ≈ 470 nm). Mediante la autooxidación se puede producir
una "reacción sin luz" sin luciferasa (arriba), con la que no se emiten fotones.28

Bioluminiscencia de Euphausia superba, krill antártico.

Hoy en día no se tiene claro si la luciferina se deriva de la clorofila a por la relación que tiene con
ella o se debe de construir paso a paso por muchos aminoácidos (glicinas y ácido glutámico).29
Además es paradójico que en la reacción lumínica la oxi-luciferina resultante no es un
fluoróforo.28

Componente F en el krill

Una luciferina con estructura casi idéntica se encontró en Euphausiidae (krill), por ejemplo en
Meganyctiphanes norvegica o Euphausia pacifica. Ahí se les denomina como componente F, que
se obtiene por su alimentación.30 El mecanismo de reacción es como el de los dinoflagelados.
Flavina, una luciferina bacteriana

Luciferina bacteriana, de una flavín mononucléotida (riboflavina-5-fosfato) reducida.

Bacterias luminiscientes utilizan la flavín mononucleótido (FMNH2, también llamada riboflavina-5-

fosfato) para una reacción que libera luz. Pueden ser terrestres (vibrio y xenorhabdus)31 o
marítimas (Beneckea, Vibrio). A parte, son responsables de bioluminiscencia. Muchos peces de
profundidad se encuentran como simbiontes en los fotóforos (photobacterium), que son órganos
especiales. Todas las bacterias bioluminiscentes identificadas hasta ahora son Gram-negativas. La
más conocida aliivibrio fischeri.

La investigación en bacterias bioluminiscentes tuvo grandes avances en 1950. Los investigadores

Milton J. Cormier y Bernard L. Strehler descubrieron que para la reacción se requiere de cuatro
factores: a lado de la FMNH2 está una luciferasa, oxígeno molecular y un aldehído de cadena larga
de carbono saturada. El aldehído, hexadecanal denominado por su identificación química como
factor de corteza de riñón, ya que fue aislado de la corteza de las glándulas suprarrenales de cerdo
funciona. Para la reacción se pueden utilizar otros aldheídos como el decanal o el dodecanal. La
siguiente tabla muestra una composición de 40g de bacteria aislada. Se presupone que
principalmente se transforma tetradecanal.

Aldehído P. phosphoreum A. fischerii

Átomo 10 C (decanal) < 1 nmol < 1 nmol

Átomo 11C < 1 nmol < 1 nmol

Átomo 12C (dodecanal) 30 nmol 32 nmol

Átomo 13 C 6 nmol 2 nmol

Átomo 14 C (tetradecanal) 380 nmol 29 nmol

Átomo 15 C 6 nmol 6 nmol

Átomo 16 C (hexadecanal) 180 nmol 18 nmol

Átomo 17 C < 1 nmol 2 nmol

Átomo 18 C < 1 nmol < 1 nmol

La FMNH2 y el aldehído son transformados en dependencia de oxígeno en FMN y un ácido

carboxílico, (comparar con esquema):
 \mathrm{FMNH_2 + O_2 + R\text{-}CHO \longrightarrow FMN + H_2O + R\text{-}COOH + h\nu}

Esta reacción es catalizada por la luciferasa bacteriana, una mono-oxigenasa dependiente de

flavina. Debido a que ésta oxida de forma simultánea el aldehído a ácido carboxílico, se trata de
una oxidasa con función mixta. En todas estas bacterias es la luciferasa un heterodímero con 76±4
kDa. Se compone de una subunidad α y una β (40-42 kDa; 37-39 kDa, respectivamente), que por
separadas casi no tienen actividad.32 El sitio catalítico se encuentra probablemente en la
subunidad α. La luciferasa es activa en un rango de pH de 6 a 8.5 (Photobacterium phosphorerum,
V. fischeri) o 6 a 9.5 (Benecka harveyi), pero no en temperaturas sobre 30-35 ºC.31 Una
crsitalografía de Vibrio harveyi con resolución de 150 pm se llevó a cabo.33

Transformación de luciferina bacteriana (FMNH2) bajo el uso de tetradecanal, en un aldehído de

cadena larga. R: resto de D-ribosa, que en el átomo 5’-C está fosforilizado.

FMNH2 en soluciones libres es inestable y se oxida fácilmente. Sin embargo al estar unida a la
enzima se mejora la estabilidad y por medio de oxígeno sufre en la posición C4a un ataque
nucleofílico. con ello se genera 4a-peróxido orgánico, que está presente de manera inusualmente
inestable.31 Este reacciona con el aldehído a peroxihemiacetal, que se descompone a su vez en un
ácido graso y 4a-hidroxiflavina. Por último se encuentra en un estado activado y liberando luz se
descompone nuevamente en su estado base. Por ello es la 4a-hidroxiflavina el que proporciona la
luz. En su estado base se le hidroliza a FMN.

Fotófero del pez de profundidad Photostomias guernei (atrás del ojo).

La reacción catalizada por luciferasa libera luz verdi-azul, que in vitro tiene un máximo de emisión
de λmax = 490 nm. In vivo lo presentó en una longitud de onda de 472 hasta 545 nm. El motivo de
ello recae en la transportación de la energía de excitación a la proteína fluorescente vía FRET.31 Se
identificaron dos clases de proteínas: proteína Lumazina (LumPs) fluorescente azul con lumazina
como chromóforo (P. phosphoreum, P. fischeri). La segunda clase la conforman las proteínas
fluorescentes amarillas (YFPs), que se presentan como chromóforo FMN o riboflavina (P. fischeri
Stamm Y-1). Con las LumPs se alcanza el máximo de emisión entre 490nm y 476nm, en las YFPs
entre 484nm hasta 534nm. Para la transferencia de energía vía FRET se necesita que en el
complejo luciferina-luciferasa estén unidas proteínas fluorescentes. La eficiencia cuántica está
entre 0.1-0.16.31
LA FMNH2 se gana mediante la riboflavinakinasa con uso de ATP de la riboflavina (vitamina B2).
Después de la reacción se regenera la FMNH2 de la FMN por medio de la catálisis una
flavinareductasa34 bajo consumo de NAD(P)H. Debido a que la cantidad de aldehídos en la célula
bacteriana (ver tabla de arriba) sólo alcanza para poca bioluminiscencia, se regeneran los
aldehídos de manera continua.31 Se ganan de vuelta de los ácidos grasos productos de la
reacción, por el así llamado complejo ácido graso-reductasa35 bajo consumo de ATP y NAD(P)H.

La reacción tiene un consumo energético alto, para a la regeneración de componentes se utilizan

dos moléculas de NAD(P)H y una molécula de ATP. Para ello la reacción debe de ser controlada.32
La flavinareductas tiene un mayor número de recambio que la luciferas. Con una actividad no
controlada se produce demasiada FMNH2. Que por su rápida oxidación se usaría demasiado
NAD(P)H. Esto acentúa el por qué de la regulación.

Gen-Lux

Todas las proteínas, que tienen alguna relación con la bioluminiscencia son codificadas por así
llamado gen-lux. (latín lux: luz). Las subunidades de la luciferasa por los genes luxA y luxB, dónde el
gen' luxB 'probablemente se originó de una duplicación del gen' luxA.'28 Estos genes se lograron
clonar de manaera exitosa como marcadores. LuxC,D y E codifican para el complejo ácido graso-
reductasa.

Coelenteracina, el componente químico de muchas especies bioluminiscentes marinas

Estructura de la Coelenteracina.

Mediante el trabajo de Milton J. Cormier con la pennatulacea Renilla reniformis y de Frank H.

Johnson en la medusa A. victoria se descubrió la luciferina coelentracina. Está presente en
especies bioluminiscentes marinas, por ejemplo con integrantes de Cnidaria, Ctenophora,
Mollusca, Arthropoda y Chordata.'''36 37 38

La coelenteracina no se descubrió en animales terrestres. En algunos casos está presente en

organismos que no producen luz, pero en pequeñas cantidades como en Microcina prolifera, pero
tampoco tiene luciferasa.

La coeleneteracina presenta una estructura básica de aminopiracina y como componente de las

emisiones de luz como bona fide luciferina. Recurrentemente está unido como cromóforo en
fotoproteínas como la aequorina, obelina o la simplectina. Sus derivados también son utilizados
por múltiples organismos marinos.

Transformación general de una coelenteracina por su respectiva luciferasa a una coelenteramida.

La coelenteracina sin modificar no es estable en soluciones acuosas neutrales, se oxida fácilmente

por el oxígeno del aire. En metanol es más estable, ahí brilla de forma amarilla (ε = 9800
M−1·cm−1, λmax = 435 nm). De manera generar reacciona con el aire a coelenteramidas. Aquí se
presenta una descarboxilación y se forma el anión de una coelenteramida. Este también
proporciona luz de color azul. Esta reacción puede ser catalizada (bioluminiscencia), pero puede
originarse de manera espontánea (quimioluminiscencia). La reacción de bioluminiscencia se da
como se muestra en la parte inferior.

Mecanismo de acción

Mecanismo de la bioluminiscencia de Aequorin.

En 1962 se aisló la fotoproteína aequorina de Aequorea victoria y con ello en 1974 se identificó a
la coelenteracina como luciferina.39 40 Cómo corre el mecanismo del sistema luciferina-luciferasa
con imidasolpriacininas, se demostró en el 2000 con A. victoria.41 Aquí juega un papel muy
importante la aequorina. Es una fotoproteína y se encuentra en el margen de la pantalla de la
medusa. En ella se une la coelenteracina por un puente de peróxido con la parte protéica. Como
resultado lleva la fotoproteína consigo al agente O2. En la forma unida a enzima la coelenteracina
puede ser guardada por mucho tiempo. La aequorina tiene tres sitios de unión para iones de
calcio. Cuando se unen los iones se cambia la conformación de la proteína de tal manera que una
reacción intramolecular se activa con la coelenteracina. Esta reacciona a una anillo de dioxetano
insetable, que al liberar CO2 se forma el anión de coelenteramida. Después de relajación de la
estructura base se liberan fotones con longitud de onda de λmax = 465 nm. Debido a esta luz azul
se le conoces a esta proteína como( proteína azul fluorescente) (BFP).42 La fotoproteína se
regenerará de la coelenteracina y oxígeno molecular.

Sin embargo la Aequorea victoria no fluoresce, sino verde. Esto se debe a que la BFP transporta la
energía de la reacción a una proteína verde fluorescente (GFP).

Luciferina-Watasenia

Parte inferior de W. scintillans.

El calamara bioluminiscente de profundidades marítimas Watasenia scintillans se describió por
primera vez en 1905 (ahí todavía como Abraliopsis scintillans).43 Presenta muchos fotóforos en el
cuerpo, que brilan como estrellas azules. Para la reacción es necesaria una coelenteracina
modificada. Ésta es un disulfato de coelenteracina y fue aislada en 1976 del calamar vivo.44 Se le
conoce como luciferina-Watasenia. En soluciones acuosas neutrales es inestable y lleva a la auto-
oxidación (quimioluminiscencia), lo que es inducido por peróxido de hidrógeno e iones de hierro
(II). En soluciones acuosas fluoresce de manera fuerte (λmax = 400 nm).45

La luciferina watasenia es transformada por una luciferasa membranal, que no se ha asilado y que
libera su luz azul (λmax = 470 nm). La reacción tiene un pH óptimo de 8.8 y una temperatura
óptima de 5 ºC y utiliza oxígeno molecular, ATP, Mg2+.46 La eficiencia cuántica es de 0.36. Para el
mecanismo de acción se propuso que la luciferina por medio de ATP se adeniliza y así se puede
unir la luciferasa. La reacción continúa hacia un anillo de dioxetanón y finalmente se forma el
anión de coelenteramida.45 Se genera luz entre 400 bis 580 nm (λmax = 470 nm).47

Luciferina-Vargula

Los crustáceos Ostracoda de la especieVargula hilgendorfii (también hasta 196248 señalados como
Cypridina hilgendorfii) cortan un fluido luminiscente en el agua del mar cuando se sienten
amenazados. Invesitgaciones bioquímicas sobre el sistema luciferina-luciferasa se condujeron a
principios de siglo 20 por Harvey.

La luciferina, vargulina se asiló en 1957 y en 1966 se identificó como un componente de

imidazolpiracina. Es soluble en agua, metanol y en soluciones alcohólicas. La vargulina tiene en
soluciones neutrales un color amarillo y en metanol presenta un máximo de absorción en λmax =
432 nm con un coeficiente de extinción molar de ε = 9000 M−1·cm−1. En soluciones acuosas es
fácil de fluorescer (máximo de excitación en λmax = 540 nm). Es muy inestable y se oxida por
oxígeno del aire, pero también por plomo (IV). Por ello se puede enviar luz para que en medios
orgánicos como diglime se produzca la quimioluminiscencia.

La luciferina de Vargula hilgendorfii está confromada por tripófano (A), una arginina (B) y así como
unidades de isoleucina (C). En la literatura se propuso que en lugar de „Cipridina-Luciferina“ se le
llamara „Cipridinida-Luciferin“ o „Vargula-Luciferina“48

En los curstáceos se transforma la vargulina por la luciferasa en coelenteramida, la oxiluciferina,

donde luz azul se libera (λmax = 463 nm). La luciferasa es un monómero de 60-70 kDa de grande
con 555amino ácidos. Contiene muchas cisteínas y es una proteína ácida (punto isolélectrioco de
4.35).

Etioluciferina, un producto de la hidrólisis de vargulina. De la cual no se obtiene luz.

En la reacción de bioluminiscencia la vargilina se une a la luciferasa y se oxigena en el átomo C2.

Así se genera peroxidanión, que se cicla en un anillo de dioxetanón. Éste se descarboxila de
manera espontánea y forma la coelenteramida, que se encuentra en un estado activado. Después
de liberar fotones se descompone en la su forma base de oxiluciferina. El que proporciona la luz es
la oxiluciferina unida a la luciferasa. La eficiencia cuántica es de Q=0.30.49 Como reacción
secundaria se forma de 10 a 15% de etiolucifeirina, de la cual no se genera luz.

En 1966 se sospechaba que la luciferina se conformaba de L-arginina, L-isoleucina y L-triptófano.

Cada vez se tiene más evidencia de ello.50 51

Dehidrocoelenteracina de Symplectoteuthis oualaniensis

Dehidrocelenteracina, que se utiliza en algunos calamares como luciferina.

El Symplectoteuthis oualaniensis (nombre japonés Tobi-ika) es un calamar ampliamente

distribuido en los océanos pacífico e índico. Los primeros estudios sobre bioluminiscencia se
abrieron en 1981.52 El calamar establece dehidrocoelenteracina a través de una fotoproteína
especial, que se le conoce como "simplectina". Ahí está unida covalentemente sobre la cisteína
como otras proteína chromófras (aequorina, obelina). Que por la descoposición emanan luz azul,
se obtuvieron diferentes máximos de emisión (456 nm, 470 nm, 480 nm). Como en los casos
anteriores la dehidrocoelenteracina unida se oxigena en el átomo C2, después de la reacción
lumínica se genera coelenteramida y Apo-"simplectina". Finalmente se regenera a simplectina por
la molécula dehidrocoelenteracina.

El calamar relacionado Symplectoteuthis luminosa (nombre japonés Suji-ika) presenta también

bioluminiscencia. Los componentes de mecanismo son iguales. Del hígado del calamar se pueden
asilar grandes cantidades de dehidrocoelenteracina.

Sistemas luciferina-luciferasa no clásicos

La luciferina-Latia
En el caracol de agua dulce neocelandés (Latia neritoides) se presenta luciferina,53 la cual es un
aldehído terpenoide y se le llama luciferina-Latia.54 55 La luciferina es un fluido muy hidrofóbico,
soluble en grasas e incoloro. Su máximo de absorción es de λmax = 207 nm, su coeficiente de
extinción molar es de bei 13,700 M−1.56 Como es inestable puede hidrolisarse en aminoáciods y
un aldehído. Sin embargo para la última reacción de bioluminiscencia no está activo. Si el grupo
enol-formil es reemplazado por un grupo enol-eter, la luciferina no estaría activa.

La luciferina-Latia se cataliza a una cetona (oxy-luciferina) por una luciferasa (EC 1.14.99.21) de
173 kDa, incolora y no fluorescente.57 Es un homohexámero, cuyas subunidades están cerca de 30
kDa.56

Para la reacción se utiliza junto con la luciferina, la luciferasa y oxígeno un cofactor, la proteína
púrpura fluorescente.54 55 Esta brilla de color rojo aparenta ser una especie de activador para la
reacción lumínica.56 Para ello no es indispensable57 ya que se le puede sustituir por ascorbato y
NADH. También sin la proteína púrpura puede correr la reacción. Con la reacción se forma de por
molécula de luciferina, agua y oxígeno una molécula oxidada de luciferina y dos moléculas de
ácido fórmico:

\mathrm{Ln + O_2 + H_2O \longrightarrow ox\text{-}Ln + 2\ HCOOH + h\nu}

Con ello se libera luz, con máximo de emisión en λmax = 536 nm.58 Por consiguiente la mucosidad
del caracol, que por ejemplo es secretada por estímulos mecánicos, brilla con tono verde oscuro.
La eficiencia de la reacción es muy pequeña ya que la eficiencia cuántica es Q=0.003 /25ºC) y
0.0068 (8ºC).57 56 Para elevarlos se le puede añadir a la reacción ascorbato (1mM) y NADH
(0.25mM) para incrementarlo a 0.009 (25º). Aunque también se generan subproductos como lo
estipula la ecuación siguiente:

\mathrm{Ln + 2\ O_2 + XH_2 \xrightarrow{NADH, Ascorbat} ox\text{-}Ln + HCOOH + CO_2 + X +

H_2O + h\nu}

Si en la reacción se forma como intermediario el anillo de dioxetano todavía se discute. La oxy-

luciferina que se genera no es un fluoróforo en comparación con la que se forma en las
luciérnagas. Se sospecha que en esta reacción energía libre se transfiere al emsisor real, una
flavina unida a proteína o a un grupo parecido a la flavina.57 59
La reacción de la luciferina de Latia neritoides. El componente reducido X así como el
proporcionador de luz real de la reacción se desconocen.

Luciferina de Diplocardia longa

La luciferina del gusano Diplocardia longa es un aldehído simple, el N-isovaleril-3aminopropanal.

Es soluble en soluciones polares (metanol, etanol, acetona, metilacetato), pero no en no polares
como el hexano o cloruro de carbono (IV).60 Lo particular de la reacción bioluminiscentes es que
en lugar de oxígeno molecular se utiliza peróxido de hidrógeno. La luciferasa correspondiente es
de 300kDa, la enzima fuertemente asimétrica es la forma activa, un auducto de peróxido. La
luciferas utiliza seguramente cobre, se emana luz verdi-azul (λmax = 507 nm). No se sabe cual es el
propósito de la bioluminiscencia en los guasnos de manera general.61 62 También aquí falta
identificar al verdadero emanador de luz.

La eficiencia cuántica de la reacción es Q=0.002, bastante baja.60

Contrario a la mayoría de las luciferinas, la del gusano Diplocardia longa utiliza peróxido de
hidrógeno para oxidarse y transformarse por la lucifersa, en presencia o no de oxígeno.

Luciferina de Fridericia heliota

Estructura de la luciferina de Fridericia heliota.

En Siberia se descubrió en un Oligochaeta, Fridericia heliota, 'un pequeño gusano de tierra (15mm
de largo y 0.5 mm de ancho, 2mg de peso), una bioluminiscencia azul(λmax = 478 nm). 63 Esta
ocurre por contacto o irritación mecánica en las células epidermales. El sistema luciferina-
luciferasa es único, no reacciona como los otros sistemas conocidos. Para la reacción se necesita a
parte de oxígeno, ATP y Mg2+.

Aplicaciones

Diagnóstico

Con la ayuda de los sistema luciferina-luciferasa de las luciérnagas se puede probar la ausencia de
ATP de manera rápida.64 Esto se utiliza principalmente en la industria alimentaria, para detectar
contaminaciones bacterianas,65 ya que el ATP sólo está presente en organismos vivos que se
pueden ver por bioluminiscnencia en los alimentos.
 Debido a que la reacción de aequorina es dependiente de cálico, se puede medir la concentración
de calcio. Esto se utilizó por primera vez en 1967, para detectar con ayuda de aequorinas cambios
en las concentraciones de calcio intracelulares de células musculares. Después de la clonación de
aequorina en bacterias se pudo medir la concentración de calcio en la citosol bacteriano.66 A
parte es posible, clonar la aequorina en células eucarióntes.67 Así se puede por ejemplo medir la
concentración en el citosol de calcio en plantas transgénicas después de un contacto con la planta
o después de un shock de frío.68

Técnica genética/biotecnología

Las luciferasas se utilizan en biología molecular como marcadores: organismos que obtuvieron el
gen y que lo introdujeron en su genoma, brillan al administrarles luciferina. De este modo se
puede comprobar si la introducción de los genes al organismo fue exitosa. Se une el gen de interés
con uno que codifica para luciferasa, así con un gen reportero se pueden identificar regiones
promotoras del genoma. De manera comercial se utiliza más el gen que codifica para la luciferasa
de Photinus pyralis y para Renilla reniformis. Ambas enzimas vienen con el mismo enfoque de uso
("Dual-luciferase-assay").69 70 71

A través de la reacción lumínica, es posible medir interacciones proteína-proteína, señales en

procesos de transducción de señal y la actividad de receptores celulares.21

Para organismos modelo con animales vivos (Bioimaging), se utilizan reporteros de luciferasa. En el
campo de investigación oncológica con ayuda de marcadores se puede ver el crecimiento tumoral o
seguir el desarrollo de metástasis.72 También se puede visualizar en animales vivos la expresión de
proteínas por los sistemas de luciferina-luciferasa.73