Определение полифенольных соединений

Принцип метода

Суммарное содержание фенольных соединений определяют

модифицированным методом Фолина - Чокальтеу. Полифенольные
соединения окисляются реактивом Фолина - Чокальтеу, состоящим из
смеси фосфорно-вольфрамовой H2PW12O40 и фосфорно-молибденовой
H3PMo12O40 кислот, который, в свою очередь, восстанавливается в
смесь окислов вольфрама (W8O23) голубого цвета и молибдена
(Mo8O23). Абсорбция раствора при 750 нм пропорциональна содержанию
фенольных соединений. В качестве полифенольного стандарта
используют галловую кислоту.

Приборы и реактивы

Спектрофотометр СФ-26, СФ-46 или подобный, позволяющий

проводить измерения при длинах волн 200 - 350 нм, с допустимой
абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не
более 1%.
Колориметр фотоэлектрический лабораторный КФК-2 (или
аналогичный), ГОСТ 12083.
Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С, ТУ 64-1-2451-78.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с пределом
взвешивания 200 г и погрешностью +/- 0,0001 г.
pH-метр лабораторный ЭВ-74 (или аналогичный) по ТУ 25-05-27-57.
Дистиллятор.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по
ГОСТ 1770.
Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-10 или 5-2-10, 4-2-25 или 5-2-25
по ГОСТ 29227.
Стакан мерный В-1-500ТС вместимостью 500 куб. см по ГОСТ 25336.
Цилиндры 2-1000 и 2-100 по ГОСТ 1770.
Натрия вольфрамат по ГОСТ 18289.
Натрия молибдат по ГОСТ 10931.
Кислота ортофосфорная 85%-ная по ГОСТ 6552.
Кислота соляная конц. по ГОСТ 3118.
Литий сернокислый (сульфат лития).
Натрий углекислый (карбонат натрия) по ГОСТ 83.
Водорода перекись по ГОСТ 177.
Бром по ГОСТ 4109.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Галловая кислота по действующей нормативно-технической
документации.

Подготовка к выполнению измерений

Приготовление реактива Фолина - Чокальтеу

100 г вольфрамовокислого натрия и 25 г молибденовокислого

натрия растворяют в 700 куб. см дистиллированной воды. Добавляют
50 куб. см 85%-ной фосфорной кислоты (d = 1,71 г/куб. см), 100
куб. см концентрированной соляной кислоты (d = 1,19 г/куб. см) и
кипятят на водяной бане в колбе с обратным холодильником под тягой
в течение 10 ч. Добавляют 150 г сернокислого лития, несколько
капель брома и снова кипятят в течение 15 мин. Смесь охлаждают до
комнатной температуры, переносят в мерную колбу вместимостью 1
куб. дм и доводят объем до метки дистиллированной водой. Хранят
реактив в темной бутылке со шлифом в холодильнике.

Приготовление раствора карбоната натрия

В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм наливают около 500 куб.

см дистиллированной воды и растворяют 200 г карбоната натрия при
встряхивании. Доводят до метки дистиллированной водой и
перемешивают. Получают раствор карбоната натрия с концентрацией
20%.
 Раствор галловой кислоты

В мерный стакан вместимостью 500 куб. см помещают 50 куб. см

этилового спирта, доводят до метки 400 куб. см дистиллированной
водой. Погружают в стакан электроды pH-метра и добавляют соляную
кислоту до значения pH 3,2 - 3,25. Переносят полученный раствор в
мерную колбу вместимостью 500 куб. см, при встряхивании растворяют
15 мг галловой кислоты и доводят дистиллированной водой до метки.
Концентрация галловой кислоты 0,03 мг/куб. см.

Построение градуировочной кривой

1, 2, 5, 10, 20 куб. см раствора галловой кислоты помещают в 5

мерных колб вместимостью 100 куб. см. В шестую колбу вносят 1 куб.
см дистиллированной воды - контрольный раствор.
В каждую мерную колбу добавляют по 1 куб. см реактива Фолина -
Чокальтеу, по 10 куб. см раствора карбоната натрия, доводят
дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Через 20 - 30 мин. измеряют оптическую плотность растворов в
кювете 10 мм при длине волны 750 нм против контрольного раствора.
По полученным данным строят градуировочную кривую, откладывая
по оси абсцисс массовую концентрацию галловой кислоты, а по оси
ординат - оптическую плотность.

Выполнение измерений

БАД на растительной и фруктовой основе (таблетки, капсулы)

растирают в ступке, навеску 1 - 2 г помещают в мерную колбу
вместимостью 100 куб. см, заполненную до половины дистиллированной
водой, нагретой до 40 -С, и встряхивают на аппарате для
встряхивания в течение 45 - 60 мин., периодически подогревая
колбу.
Сокосодержащие БАД (растворы, сиропы) разбавляют в 5 - 10 раз
дистиллированной водой.
1 куб. см полученных растворов помещают в мерные колбы
вместимостью 100 куб. см и далее выполняют действия как в разделе
"Построение градуировочной кривой".

Вычисление результатов определения

Значение массовой концентрации фенольных веществ (С) в мг/куб.

дм по галловой кислоте определяют по градуировочной кривой.
Полученную величину умножают на коэффициент разведения - 100, если
экстракт разбавляли в 5 раз, или вычисляют по формуле:

С = А x ОП,

где:
А - коэффициент разбавления;
ОП - оптическая плотность.
Вычисления проводят до первого десятичного знака и округляют до
целого числа. За окончательный результат принимают среднее
арифметическое результатов двух параллельных определений.

Характеристика погрешности измерений

Допустимое значение погрешности измерений массовой концентрации

фенольных соединений в БАД на растительной основе или
сокосодержащих БАД не должно превышать:
для диапазона концентраций в экстракте или растворе 100 - 600
мг/куб. дм - +/- 8 мг/куб. дм;
для диапазона концентраций в экстракте или растворе 600 - 3000
мг/куб. дм - +/- 33 мг/куб. дм.