Practica N° 11

Sistema in-vivo para la propagación de virus:

Modelo del huevo embrionario

1. Introducción

Los métodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden clasificarse en
directos e indirectos, según persigan demostrar la presencia del virus o de alguno de sus
constituyentes (antígeno o genoma viral) o bien la respuesta de anticuerpos específicos por parte
del huésped en el curso de la infección.

Gran parte de las técnicas utilizadas en el diagnóstico clínico se basan en pruebas serológicas que
identifican anticuerpos específicos frente a diversas proteínas antigénicas. Sin embargo, existen
circunstancias en las cuales son necesarias pruebas que detecten precozmente la infección viral.

Con la necesidad de replicar algunos virus en particular, se han desarrollado técnicas de

inoculación en el embrión de gallina de cinco a once días de edad, útiles para el diagnóstico,
aislamiento, propagación y caracterización de los virus, así como para la producción de vacunas
virales. Esto se logra gracias a las características propias del embrión y de sus tejidos que
proporcionan un medio favorable y libre de patógenos específicos (SPF), para el cultivo de
diferentes virus.

Para obtener óptimos resultados en el aislamiento y propagación de los virus, se deben considerar
los siguientes aspectos: Vía de inoculación; edad del embrión, la cual depende del virus que se va a
inocular; temperatura de incubación; tiempo de incubación; volumen y dilución del inóculo.

En el momento actual, la tendencia en el diagnóstico virológico consiste en emplear nuevas y más

sensibles tecnologías de detección de antígenos y de investigación de ácidos nucleicos con el
propósito de lograr un diagnóstico viral más rápido. El desarrollo de quimioterapia antiviral
efectiva es responsable de esta tendencia que hace de la identificación rápida, sensible y
específica de los virus, una necesidad.

En el presente trabajo se darán a conocer algunas de las vías de inoculación más usuales en
huevos embrionado para el cultivo de algunos virus y su importancia.
2. Desarrollo experimental
 Se colocó el huevo embrionado de gallina de 7 – 10 días sobre el ovoscopio y con
la ayuda de la casaca de una compañera, como cubierta, se procedió a localizar el
saco de aire y marcarla.
 Una vez delimitado el saco de aire, de cada uno de los huevos, se los empezó a
abrir por dicha zona con ligeros golpes con una pinza punta fina.

 Seguido, se procedió a vaciar el contenido del huevo a una placa de Petri, del que
se identificaron las vías de inoculación (cavidad alantoidea, saco amniótico, saco
vitelino y la membrana corioalantoidea).
 De las rutas de inoculación localizadas, tan solo se emplearon 2, saco amniótico y
cavidad alantoidea, para inocular los colorantes verde de malaquita y fucsina
básica, respectivamente.
 Haciendo uso jeringas hipodérmicas, se procedió a inocular 0.3 mL de verde de
malaquita dentro del saco amniótico.
 De la misma forma para la cavidad alantoidea, se le inoculo 0.3 mL de fucsina
básica.

3. Resultados y discusión

 Se identificaron satisfactoriamente 2 vías de inoculación (saco amniótico y cavidad

alantoidea), tras 2 intentos fallidos, por contrastes de color. En el primero (saco
amniótico), verde de malaquita y en el segundo (cavidad alantoidea), fucsina básica.
 4. Cuestionario
I. ¿Por qué se deben utilizar embriones vivos para cultivar virus? ¿Por qué se
siguen usando en la actualidad?

Un recurso para cultivar un virus es su cultivo, pero los virus no se cultivan artificialmente como las
bacterias. Solo lo hacen en tejidos vivos, por lo que en el laboratorio los métodos utilizados son
los embriones de pollo y de pato, el cerebro de ratón lactante o el cultivo de células.

Este método se sigue empleando, en la actualidad, debido a que además de ser un medio sensible
para el aislamiento de virus, es un medio estéril y poco costoso para trabajos rutinarios de
laboratorio.

II. En la actualidad, ¿Qué alternativas hay para el aislamiento y cultivo de virus en

condiciones de laboratorio?
 Aislamiento Viral - Cultivos Celulares

Son los biosustratos más corrientemente empleados para la propagación de los virus.

 Detección de Antígenos - Técnicas Inmunológicas

Estos ensayos se basan en la detección de anticuerpos (Ac) específicos que permiten señalar a un
determinado microorganismo presente en una infección.

La otra posibilidad es la detección de antígenos (Ag) soluble en los materiales a estudiar. Todas son
reacciones de tipo antígeno anticuerpo (Ag-Ac).

 Técnicas de Biología Molecular

 Microscopía Electrónica

III. Mencione algunas de las lesiones que pueden estar presentes en el embrión,
como resultado de la replicación viral.

Las más importantes lesiones que pueden estar presentes en el embrión, pueden ser:

La presencia de hemorragias, congestión, enrollamiento, enanismo, presencia de pústulas,

engrosamiento, fibrosis y edema de la membrana amniótica y de la membrana corioalantoidea;
disminución del líquido amniótico; desarrollo anormal de las plumas; depósito de uratos en el
estroma renal y presencia de cuerpos de inclusión.

5. Bibliografía
 Embriología básica de Patten. B.M. Carlson, Interamericana-McGraw-Ill, 1990.
 “Transplantation in avian embryos” C.D. Stern, from Essential developmental biology: a
practical approach, IRL Press at Oxford University Press, 1993.
 Atlas y guía de laboratorio de embriología de vertebrados. S. Wischnitzer, Ed. Omega,
1980.