BIOMETRIK DARAH : OTENTIKASI PROFIL GENETIK BINTIK-BINTIK

DARAH UNTUK MENENTUKAN IDENTITAS PENDONOR ASLI SAMPEL

DARAH

Septian Adi Pratama, Tri Rizki Herlambang, Wenda Aditama

Abstrak: Biometrik (berasal dari bahasa Yunani bios yang artinya hidup dan metron yang
artinya mengukur) secara umum adalah studi tentang karakteristik biologi yang terukur.
Dalam dunia teknologi informasi, biometrik relevan dengan teknologi yang digunakan untuk
menganalisa fisik dan kelakuan manusia dalam autentifikasi. Identifikasi yang tidak dapat
diterima secara psikologis adalah analisa darah, yaitu dengan disediakannya satu jarum di
mana pemakai dapat mencobloskan jari sampai menetes darahnya. Kemudian darah tersebut
dianalisis dengan spektografi (blood spectographic analysis) untuk menentukan mengenai
pemilik darah tersebut. Pengidentifikasi biometrik sangat khas, karakteristik yang terukur
digunakan untuk mengidentifikasi individu. Dua kategori pengidentifikasi biometrik meliputi
karakteristik fisiologis dan perilaku. Karakteristik fisiologis berhubungan dengan bentuk
tubuh, dan termasuk tetapi tidak terbatas pada: sidik jari, pengenalan wajah, DNA, telapak
tangan, geometri tangan, pengenalan iris (yang sebagian besar telah diganti retina), dan
bau/aroma. Karakteristik perilaku terkait dengan perilaku seseorang, termasuk namun tidak
terbatas pada:Ritme mengetik, kiprah, dan suara.Bidang biobanking membutuhkan kerja
yang luas untuk menjaga ketertelusuran sampel. Namun, kadang-kadang timbul kebutuhan
untuk mengotentikasi sampel darah tersebut. Oleh karena itu, ada sebuah metode untuk
otentikasi turunan dengan menggunakan bintik-bintik darah dari setiap donor, yang melekat
pada bentuk otentikasi sampel, dengan cara profil genetik. Bintik-bintik darah dikumpulkan
pada saat sampel darah yang disumbangkan di pusat kesehatan dan sebelum memproses
sampel darah di Biobank itu. Untuk menguji validitas dari pendekatan dari waktu ke waktu,
sehingga dilakukan analisis 26 bercak darah yang disimpan pada suhu kamar dalam fasilitas
selama lebih dari 15 tahun. DNA berhasil diekstraksi dari tiga bahan penyimpanan diuji
dalam penelitian ini dan 15 STR penanda ditambah amelogenin yang kemudian dianalisis.
Penyimpanan tempat darah kecil yang melekat bentuk otentikasi sampel terbukti efisien
untuk profil genetik dan, karena itu, dapat merupakan biaya-efektif dan mudah pendekatan
tahan lama (minimal 15 tahun), untuk otentikasi genetik dari sampel di biobanks .

Kata kunci: biobanking, otentikasi ketelusuran, STR, mikrosatelit, profil genetik

PENGANTAR biobanking, tetapi ada sudut pandang yang

Pemindai biometrik adalah alat yang
menggunakan data biometrik untuk
mengidentifikasi individu berdasarkan
pengukuran karakteristik fisiologisnya.
Karakteristik fisiologis ini memberikan
kemampuan untuk mengontrol dan
melindungi integritas data sensitif yang
tersimpan dalam sistem informasi.
Biometrik merupakan suatu metode
komputerisasi yang menggunakan aspek-
aspek biologi terutama karakteristik unik
yang dimiliki oleh manusia.
Ketertelusuran sampel merupakan
salah satu pilar di bidang muncul dari
berbeda dalam komunitas ilmiah
mengenai cara untuk menerapkannya
secara efisien. Pengembangan prosedur
otomatis dan robotisasi telah sebagian
membantu untuk mengatasi kesulitan ini.
Namun, bahkan dengan bantuan prosedur
baru berteknologi tinggi, Biobank
mungkin pada kesempatan perlu
mengotentikasi asal sampel tertentu.
Setiap kali keraguan terkait dengan
ketelusuran muncul di Biobank itu adalah
biasanya sangat sulit untuk memeriksa
apakah sampel memiliki donor tertentu
atau tidak. Dalam kasus seperti itu,
Biobank tidak akan dapat menyatakan
bahwa sampel yang benar dipasok ke
Biobanks lain atau kelompok penelitian.
Teknik identifikasi genetik yang
digunakan dalam bidang Genetika
Forensik mungkin berhasil diterapkan di
otentikasi sampel karena mereka
memberikan kekuatan yang sangat tinggi
(di urutan satu di beberapa ribu juta). Saat
ini, metode yang paling umum digunakan
untuk identifikasi genetik manusia
didasarkan pada mikrosatelit atau short
tandem repeat (STR). Dengan
menggunakan kurang dari 5ng DNA,
hingga 15 autosom STR lokus, ditambah
amelogenin gender menentukan penanda
dapat secara bersamaan diperkuat dengan
cara beberapa kit PCR multiplex
komersial dengan berlabel PCR primer,
termasuk 13 STR lokus dari sistem
CODIS, yang digunakan di seluruh dunia.
Kelemahan utama untuk sistem profil
genetik ini muncul jika diperlukan untuk
memproses sejumlah besar sampel karena
ini adalah teknik yang mahal, padat karya.
Dengan tujuan menghindari analisis
profil genetik dari setiap donor ketika
sampel masuk Biobank, maka DNA Bank
of Universitas Basque Country (UPV /
EHU) telah menemukan metode hemat
biaya dan dapat diandalkan untuk
otentikasi genetik sampel biologis melalui
koleksi bercak darah dari donor yang asli.
bintik-bintik darah ini tersedia untuk
analisis lebih lanjut jika otentikasi
diperlukan. Prosedur ini berlaku untuk
turunan apapun seperti koleksi sel, cairan
biologis atau DNA yang diperoleh dari
sampel darah di biobanks. Untuk kegiatan
pembelajaran hendaknya materi yang
benar-benar menunjang tercapainya
standar kompetensi dasar, serta
tercapainya indikator.
BAHAN DAN METODE
Prosedur yang disajikan di sini
didasarkan pada pelestarian bintik-bintik
darah kecil di 10 cakram mm dari bahan
penyimpanan. Tempat darah pertama
dikumpulkan untuk tujuan otentikasi
melekat bentuk otentikasi sampel oleh staf
kesehatan pada saat sampel darah yang
disumbangkan dan penjelasan persetujuan
ditandatangani. Setelah sampel darah dan
semua informasi terkait telah diterima di
Biobank itu, sebuah aliquot dikumpulkan
dari sampel darah untuk membuat tempat
darah kedua, yang juga melekat pada
bentuk otentikasi sampel yang akan
digunakan oleh Biobank sebagai
pengendalian internal. Untuk memastikan
privasi donor, setiap form otentikasi
sampel terkait dengan informasi yang
terkait dengan donor yang sesuai dan
setiap turunan dari sampel darah dengan
cara label barcode yang dihasilkan oleh
Sistem Informasi Manajemen
Laboratorium. Bintik-bintik darah, yang
sesuai dilindungi dari manipulasi dan /
atau kontaminasi, dapat disimpan pada
suhu ruang untuk jangka waktu yang
lama.
Gambar 1 spot darah yang melekat pada bentuk
otentikasi sampel ditutupi dengan pita bedah.
Koleksi spot darah pada saat sampel
disumbangkan memungkinkan untuk otentikasi
genetik dari sampel dari donor yang asli. Koleksi
ini disertifikasi oleh tanda tangan dari petugas
kesehatan. Tanda tangan dari anggota staf
Biobank memvalidasi koleksi spot darah kedua
ketika sampel memasuki Biobank tersebut; spot
darah ini akan digunakan untuk melacak
pengolahan sampel di laboratorium. Sebuah
 stempel memungkinkan deteksi lebih lanjut dari Holten, Allerød, Denmark) untuk
setiap manipulasi yang tidak terkontrol bintik- mendapatkan pellet kering. Akhirnya,
bintik darah.
sampel disuspensi dalam 20 ml air steril.
The Quant-iT PicoGreen dsDNA
Enam dari 26 sampel darah diawetkan
Assay Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA,
di atas kertas penyerap, delapan di
USA) digunakan untuk mengukur DNA
sepotong kain dan 12 disimpan pada kain
diekstraksi. Kami menambahkan 1 ml
katun non berwarna. Bintik-bintik darah
masing-masing sampel untuk 199 ml dari
yang dikumpulkan melekat pada
campuran kuantifikasi (1/400 PicoGreen
penjelasan persetujuan dari setiap donor
dan 1/20 Buffer TE 20) dan DNA
menggunakan pita bedah, seperti yang
konsentrasi diperoleh dalam fluorometer
dijelaskan oleh Rodrı'guez-Alarco'net al.6
VersaFluor (BioRad, Richmond, CA,
disimpan pada suhu kamar dalam kabinet
USA). profil genetik mikrosatelit lokus
keamanan, terlindung dari sinar matahari
untuk setiap sampel (termasuk sampel
dan pada tingkat kelembaban variabel,
referensi) diperoleh dengan cara PCR
menurut musim.
amplifikasi dalam GeneAmp 9700 Emas
Sampel bintik-bintik darah yang
(Applied Biosystems, Foster City, CA,
diambil untuk ekstraksi. Bagian ini
USA) menggunakan dua kit komersial:
kemudian dipotong kecil-kecil
AmpFlSTR Identifiler PCR Amplifikasi
menggunakan gunting steril. Sampel
Kit dan AmpFlSTR SGM Ditambah PCR
diinkubasi semalam pada 561C dalam 500
Amplifikasi Kit (Applied Biosystems).
ml larutan lisis (NaCl 0,2 M, EDTA 10
Hanya 2 ng DNA digunakan untuk setiap
mM, Tris 10 mM, SDS 2%, DTT 40
reaksi amplifikasi. analisis fragmen
mMdan 0,8 mg / ml proteinase K sebagai
produk PCR dilakukan dengan
konsentrasi akhir). ekstraksi DNA
elektroforesis kapiler menggunakan
dilakukan dengan menggunakan prosedur
Genetic Analyzer ABI3130 (Applied
fenol-kloroform standar. Pertama, 200 ml
Biosystems). Akhirnya, kami melakukan
fenol / alkohol kloroform-isoamil dalam
analisis satu arah varians (ANOVA)
proporsi 25: 24: 1 ditambahkan ke
diikuti oleh Tukey-Kramer multiple-
masing-masing tabung. Setelah
perbandingan post hoc uji untuk
sentrifugasi dan pemulihan dari fase air,
menentukan apakah konsentrasi DNA rata
dua mencuci tambahan kloroform-isoamil
yang diperoleh untuk tiga bahan
alkohol dilakukan untuk lebih
penyimpanan yang berbeda menunjukkan
memurnikan sampel. Setelah fase berair
perbedaan yang signifikan.
pulih, kami menambahkan NaAc 2 M
dalam proporsi 1/10 dengan volume fasa
HASIL
air, 1 ml glikogen (10 mg / ml) dan dua
Bintik-bintik darah yang disimpan di
volume etanol absolut dingin (201C).
tiga media dukungan yang berbeda (absor-
Untuk memfasilitasi curah hujan DNA,
membungkuk kertas, benang atau kain
tabung sampel yang mengandung
katun non berwarna) tidak menunjukkan
campuran curah hujan disimpan pada
tanda-tanda degradasi penting, terlepas
201C selama 2 jam. Berikutnya
dari bahan yang digunakan. Demikian
sentrifugasi pada 14 000 g dilakukan
pula, oscilla-tions tingkat kelembaban
untuk mendapatkan pelet DNA; pelet ini
selama bertahun-tahun tampaknya tidak
sering tidak terlihat ketika mengekstrak
mempengaruhi konservasi spot darah,
DNA dari bercak darah tua. Setelah
karena tidak ada pertumbuhan jamur
mencuci final dengan EtOH (70%),
diamati pada salah satu sampel.
sampel diperkenalkan ke dalam
Ekstraksi DNA dari bercak darah
evaporator sentrifugal (DNA Mini; Heto
berhasil dalam tiga jenis bahan
penyimpanan diuji dalam penelitian kami.
Namun demikian, ekstraksi DNA dari
serat terbukti agak rumit karena itu agak
sulit untuk memanipulasi jenis bahan,
terutama ketika kita berusaha untuk
memotong menjadi potongan-potongan
yang lebih kecil untuk memudahkan
prosedur ekstraksi. Selanjutnya DNA
kuantifikasi dengan PicoGreen
dikonfirmasi isolasi DNA. Semua sampel
diberikan konsentrasi yang bervariasi
antara 1,5 dan 28 ng / ml DNA untai
ganda. Berarti DNA con-centrations
(±SE) yang diperoleh untuk serat,
penyerap kertas dan kain katun 7,3±1,6,
14,8±3.1 dan 13.2±1,8 ng / ml, masing-
masing. perbedaan yang signifikan antara
konsentrasi DNA yang diperoleh dalam
setiap materi yang diungkapkan oleh hasil
konsentrasi dari kain katun dan kertas
penyerap, yang pada gilirannya berbeda
dari konsentrasi yang diperoleh di serat
(po0,05).
Dalam memperoleh profil STR, 2ng
DNA per sampel dan kit komersial
dipekerjakan. Hasil menunjukkan profil
genetik diperoleh untuk setiap sampel
dengan kedua kit komersial dan compar-
Ison dengan profil referensi yang sesuai.
profil genetik lengkap dan dapat
diandalkan diperoleh untuk masing-
masing dari 26 titik darah dimasukkan
dalam analisis. profil alel genotip yang
diperoleh untuk setiap sampel dengan dua
kit komersial yang berbeda yang
digunakan adalah bertepatan untuk semua
penanda STR umum, seperti yang
ditunjukkan pada Tambahan Gambar S2
untuk sampel S01. sistem double-
checking ini merupakan langkah validasi
penting dari metode yang diusulkan di
sini. Dalam hal ini, tidak ada alel drop-out
karena degradasi DNA terdeteksi di
sampel 15 tahun diperiksa, dan bahkan
fragmen penanda STR dengan ukuran
terbesar yang benar diperkuat.
PEMBAHASAN
prosedur otentikasi yang mendasar
untuk layanan biobanking, karena mereka
harus memastikan bahwa sampel atau set
sampel tertentu berasal dari donor tertentu
sebelum memasok mereka ke komunitas
ilmiah. Oleh karena itu, biobanks
diperlukan untuk mencegah dan
mengidentifikasi-ing kesalahan, seperti
sampel salah penempatan. Bahkan,
penekanan pada standar yang tinggi dalam
ketertelusuran direkomendasikan oleh
banyak Eropa initia-tives untuk jaringan
internasional biobanking.8-10 profil
genetik tampaknya menjadi pendekatan
yang efisien untuk otentikasi sampel.
Menariknya, ada sedikit penelitian yang
berfokus pada prosedur otentikasi di
biobanks dengan cara profil genetik,
sebagian besar dari mereka berpusat pada
otentikasi cell line.11-14 Memang,
mendapatkan profil genetik untuk seluruh
koleksi Biobank mungkin sangat mahal
dan melelahkan. Untuk mengatasi
keterbatasan ini, kami telah merancang
sebuah sistem yang didasarkan pada
konservasi bercak darah yang
memungkinkan Biobank sebuah resor
untuk menggunakan profil genetik dari
donor hanya ketika benar-benar
diperlukan. Pengumpulan tempat darah
pertama pada saat sampel darah yang
disumbangkan di pusat kesehatan sangat
penting untuk melaksanakan metode kami
otentikasi. Dengan demikian, tempat
darah ini akan memungkinkan otentikasi
dari setiap turunan untuk donor asli,
sedangkan spot darah kedua akan
digunakan untuk melacak pengolahan
sampel di Biobank sebagai semacam
pengendalian internal.
Ada berbagai sistem komersial untuk
penyimpanan cairan pada suhu kamar,
seperti kartu FTA (Whatman) atau matriks
IsoCode DNA (Schleicher & Schuell
Bioscience Inc.). Namun, biobanks sering
harus beroperasi dalam anggaran yang
terbatas di bidang yang relatif mahal dan,
karena itu, menerapkan sistem murah
mungkin menjadi alternatif yang valid.
Dalam hal ini, semua bahan penyimpanan
diuji dalam penelitian ini terbukti efektif
untuk konservasi bercak darah pada suhu
kamar untuk jangka waktu yang lama.
Namun, dengan mempertimbangkan
konsentrasi DNA diperoleh untuk setiap
substrat, non-berwarna kain katun dan
kertas penyerap tampaknya paling efektif
untuk konservasi jangka panjang. Sangat
mungkin bahwa helai kapas di serat
membentuk jaring berlebihan terbuka, di
mana DNA lebih mudah diakses oleh
setiap agen level rendah. Mungkin
dianjurkan untuk menganalisis sampel
yang lebih besar diatur untuk meniru hasil
ini. Namun, meskipun DNA Bank UPV /
EHU terakumulasi jumlah yang sangat
besar sampel, hanya bintik-bintik darah
dari 12 orang termasuk dalam penelitian
ini disimpan persis dalam kondisi yang
disajikan di sini dan untuk jangka waktu
lebih dari 15 tahun.
Metode profil genetik yang disajikan
di sini melibatkan penggunaan dua kit
komersial. Dua alasan utama mendorong
kami untuk memilih kit ini: (1) SGM
Ditambah Kit saham 10 STR-nya spidol
dengan 10 dari 15 penanda mikrosatelit
dari Kit Identifiler PCR Amplifikasi. Ada-
kedepan, profil genetik dari setiap sampel
sebagian dua kali diperiksa, sehingga
menghindari potensi kesalahan dalam
penunjukan alel yang disebabkan oleh alel
drop-out karena degradasi DNA dan, pada
saat yang sama, meningkatkan kualitas
dan keandalan hasil ; dan (2) penggunaan
kit komersial standar dan divalidasi untuk
STR genotip memberikan kemungkinan
pengelolaan data yang sebanding15 antara
biobanks dan melakukan kontrol kualitas
antar-laboratorium. Dalam addi-tion,
langkah profil genetik akan tidak rutin
dilakukan, sehingga kenaikan biaya
diperkirakan tidak akan tinggi.
Dalam kasus di mana salah
penempatan terdeteksi, pendekatan kami
akan memungkinkan Biobank untuk
mengkonfirmasi kesenjangan traceability
diduga dan, sekali con-menguat, untuk
melakukan tindakan koreksi yang tepat.
Ini akan dianjurkan untuk menganalisis
semua turunan yang terkait dengan sampel
yang terkena (plasma, DNA, baris sel, dll).
Dengan demikian, konfirmasi dari
ketidakcocokan akan melibatkan,
setidaknya, membuang 'yatim piatu'
turunan dari koleksi Biobank dan, oleh
karena itu, menghentikan pasokan turunan
tidak benar disimpan.
Mengenai aspek hukum dan etika
yang melibatkan sampel genotyping untuk
tujuan otentikasi, setiap Biobank harus
mengikuti hukum yang mengatur di
negara yang sesuai.16 Darah metode
preserva-tion yang disajikan di sini sesuai
baik dengan Spanyol biomedis hukum
penelitian 14/200717 pada ketertelusuran
data dan sampel biologis dan Hukum
Organik 15/199918 tentang perlindungan
data pribadi. Menurut undang-undang ini,
semua informasi yang terkait dengan
masing-masing sampel harus disimpan di
Biobank informasi diklasifikasikan.
Sesuai dengan undang-undang ini, kami
telah mengembangkan bentuk otentikasi
sampel khusus dirancang untuk
menyimpan bintik-bintik darah untuk
jangka waktu yang lama. Metode ini
memungkinkan untuk mempertahankan
anonimitas donor dan, pada saat yang
sama, menggunakan tempat darah dari
sampel asli untuk tujuan otentikasi. Untuk
lebih mematuhi rekomendasi etis tentang
informasi kepada donor, pemberitahuan
tentang pengumpulan dan penyimpanan
bintik-bintik darah untuk otentikasi
sampel harus dimasukkan sebagai bagian
dari perjelasan persetujuan.
Selanjutnya, data genetik yang
dihasilkan selama proses otentikasi harus
disimpan pada biobanks, mengingat
bahwa mereka bertanggung jawab untuk
semua data yang dihasilkan dari
pengumpulan, penyimpanan, pengolahan
dan pengiriman masing-masing sampel.
Namun, sesuai dengan hukum yang
mengatur di banyak negara seperti
Spanyol, atas permintaan donor, sebuah
Biobank wajib untuk menghancurkan
sampel dan semua turunannya.
Pendekatan kami sesuai dengan
persyaratan hukum sebagai label barcode
yang dihasilkan selama pengolahan
sampel memungkinkan kita untuk
mengidentifikasi dan membuang semua
komponen sampel apapun, termasuk
bentuk authentica-tion.
Untuk meringkas, hasil penelitian ini
diperoleh dari sampel yang berusia tahun
menunjukkan bahwa penyimpanan bintik-
bintik kecil dari darah kering diawetkan
pada suhu kamar di 10 cakram mm dari
bahan katun non-berwarna atau kertas
penyerap, yang melekat pada otentikasi
sampel bentuk dan nyaman dilindungi dari
kesalahan penanganan dan / atau contam-
ination, bisa menjadi tahan lama (minimal
15 tahun), hemat biaya dan pendekatan
mudah untuk otentikasi genetik
selanjutnya sampel Biobank. Selain itu,
setiap analisis profil genetik melalui
penggunaan komersial, kit standar untuk
STR mengetik menyediakan untuk
persyaratan kualitas dari Biobank, yang
merupakan masalah penting di bidang up-
dan-datang dari jaringan Biobank.
DAFTAR RUJUKAN
[1] Go´mez J, Carracedo A: The 1998–
1999 collaborative exercises and
proficiency testing program on DNA
typing of the Spanish and Portuguese
Working Group of the International
Society for Forensic Genetics (GEP-
ISFG). Forensic Sci Int 2000; 114:
21–30.
[2] Butler JM (eds): Forensic DNA
Typing: Biology, Technology, and
Genetics of STR Markers. Academic
Press: New York, 2005, 2nd edn.
[3] Butler JM: Genetics and genomics of
core short tandem repeat loci used in
human identity testing. J Forensic Sci
2006; 51: pp 253–265.
[4] Wallin JM, Holt CL, Lazaruk KD,
Nguyen TH, Walsh PS: Constructing
universal multiplex PCR systems for
comparative genotyping. J Forensic
Sci 2002; 47: 52–65.
[5] Miller KW, Brown BL, Budowle B
(eds): The Combined DNA Index
System; in International Congress
Series 1239. Elsevier, Amsterdam,
New York, 2003, pp 617–620.
[6] Rodrı´guez-Alarcon J, de Pancorbo
MM, Santillana L et al: La Huella De
ADN En Lugar
[7] De La Huella Plantar En La
Identificacion Neonatal. Medicina
Clinica 1996; 107: 121–123.
[8] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T:
Molecular cloning: A laboratory
manual. Cold Spring Harbor
Laboratory Press: Cold Spring
Harbor, 1989, 2nd edn.
[9] Asslaber M, Zatloukal K: Biobanks:
transnational, European and global
networks. Brief Funct Genomic
Proteomic 2007; 6: 193–201.
[10] Yuille M, van Ommen GJ, Bre ´chot
C et al: Biobanking for Europe. Brief
Bioinform 2008; 9: 14–24. Public
Population Project in Genomics
(P3G).
[11] Gilbert DA, Reid YA, Gail MH et al:
Application of DNA fingerprints for
cell-line individualization. Am J Hum
Genet 1990; 47: 499–514.
[12] Stacey GN, Bolton BJ, Doyle A: DNA
fingerprinting transforms the art of
cell authentication. Nature 1992; 357:
261–262.
[13] Masters JR, Thomson JA, Daly-Burns
B et al: Short tandem repeat profiling
provides an international reference
standard for human cell lines. Proc
Natl Acad Sci 2001; 98: 7656–7658.
[14] Azari S, Ahmadi N, Tehrani MJ,
Shokri F: Profiling and authentication
of human cell lines using short tandem
repeat (STR) loci: Report from the
National Cell Bank of Iran.
Biologicals 2007; 35: 195–202.
[15] Chakraborty R, Stivers DN, Su B,
Zhong Y, Budowle B: The utility of
short tandem repeat loci beyond
human identification: Implications for
development of new DNA typing
systems. Electrophoresis 1999; 20:
1682–1696.
[16] Wallace S, Be ´dard K, Kent A,
Knoppers BM: Governance
mechanisms and population biobanks:
Building a framework for trust.
GenEdit 2008; 6: 1–11.
[17] Ley de Investigacio ´n Biome ´dica
BOE no. 159; 4 July 2007, pp 28826–
28848 [www.boe.es/diario_boe/].
[18] Ley Orga ´nica 15/1999 de Proteccio
´n de Datos de Cara ´cter Personal
BOE no. 298 14 December 1999, pp
43088–43099
[www.boe.es/diario_boe/]