Hematologia

Escola Superior de Saúde
Politécnico do Porto
Relatório de Estágio
Hematologia
Sérgio José Pinto Teixeira

10120508
Análises Clínicas e Saúde Pública, 4º Ano
09 de janeiro a 03 de fevereiro de 2017
Índice Geral
ÍNDICE GERAL ....................................................................................................................................................... II
ÍNDICE DE FIGURAS ............................................................................................................................................. IV
ÍNDICE DE QUADROS............................................................................................................................................ V
SIGLAS E ABREVIATURAS..................................................................................................................................... VI
INTRODUÇÃO ....................................................................................................................................................... 1
CARATERIZAÇÃO DA INSTITUIÇÃO ACOLHEDORA – IPO PORTO.............................................................................................. 1
OBJETIVOS DE ESTÁGIO.................................................................................................................................................. 2
ENQUADRAMENTO TEÓRICO – HEMATOLOGIA ................................................................................................... 3
HEMATOPOIESE ........................................................................................................................................................... 3
MORFOLOGIA E FUNÇÃO DAS CÉLULAS SANGUÍNEAS............................................................................................................ 6
Eritrócito.............................................................................................................................................................. 6
Neutrófilo ............................................................................................................................................................ 6
Eosinófilo ............................................................................................................................................................. 6
Basófilo................................................................................................................................................................ 6
Linfócito............................................................................................................................................................... 7
Monócito ............................................................................................................................................................. 7
Plaqueta .............................................................................................................................................................. 7
AMOSTRAS .......................................................................................................................................................... 8
SANGUE PERIFÉRICO ..................................................................................................................................................... 8
Hemograma ........................................................................................................................................................ 8
ASPIRADO MEDULAR (MEDULA ÓSSEA) ........................................................................................................................... 10
FRAGMENTO DE MEDULA ÓSSEA.................................................................................................................................... 11
LÍQUIDOS BIOLÓGICOS ................................................................................................................................................ 12
EQUIPAMENTOS AUTOMÁTICOS ....................................................................................................................... 13
SYSMEX XN-9000TM.................................................................................................................................................. 13
Unidade SP-10 ................................................................................................................................................... 15
Unidade TS-500 ................................................................................................................................................. 15
IPU ..................................................................................................................................................................... 16
CELLAVISION® DM96 ................................................................................................................................................. 17
VES-MATIC 30/30 PLUS ......................................................................................................................................... 17
AEROSPRAY HEMATOLOGY SLIDE STAINER/CYTOCENTRIFUGE ............................................................................ 18
TÉCNICAS E ATIVIDADES DESENVOLVIDAS ......................................................................................................... 19
FÓRMULA LEUCOCITÁRIA ............................................................................................................................................. 19
ESFREGAÇO DE SANGUE PERIFÉRICO ...................................................................................................................... 20
Procedimento .................................................................................................................................................... 21
CONTAGEM DE RETICULÓCITOS ..................................................................................................................................... 22
Método manual................................................................................................................................................. 23
Método automático .......................................................................................................................................... 24
Valores de referência ........................................................................................................................................ 24
Causas de erro ................................................................................................................................................... 24
Valores patológicos ........................................................................................................................................... 24
HEMATÓCRITO .......................................................................................................................................................... 25
Microhematócrito ............................................................................................................................................. 25
PUNÇÃO DIGITAL........................................................................................................................................................ 25
ii
Relatório de estágio – Hematologia
VELOCIDADE DE SEDIMENTAÇÃO GLOBULAR..................................................................................................................... 27

Valores de referência da VSG (Quadro3) .......................................................................................................... 28
MIELOGRAMA ........................................................................................................................................................... 29
COLORAÇÕES CITOQUÍMICAS ........................................................................................................................................ 30
Ácido Periódico de Schiff (PAS) .......................................................................................................................... 30
Mieloperoxidase (MPO) .................................................................................................................................... 31
Fosfatase Alcalina de Leucócitos (LAP) ............................................................................................................. 31
Ferro (Perls) ....................................................................................................................................................... 32
Naftol AS-D Cloroaceteto Esterase .................................................................................................................... 32
α-Naftil Acetato Esterase .................................................................................................................................. 33
Fosfatase Ácida (FA) resistente ao tartarato .................................................................................................... 33
α-Naftil Butirato Esterase ................................................................................................................................. 33
CONTROLO DA QUALIDADE ............................................................................................................................... 34
CONTROLO DA QUALIDADE INTERNO (CQI) .................................................................................................................... 34
CONTROLO DA QUALIDADE EXTERNO (CQE) ................................................................................................................... 35
UK NEQAS .......................................................................................................................................................... 35
INSA ................................................................................................................................................................... 35
CONCLUSÃO ....................................................................................................................................................... 36
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................................................................... 37
iii
Índice de Figuras
Figura 1. Localização da hematopoiese ao longo dos anos de vida --------------------------------------------4
Figura 2. Modelo de linhagens celulares na hematopoiese ------------------------------------------------------4
Figura 3 Esquema representativo das células sanguíneas -------------------------------------------------------7
Figura 4. Representação esquemática da estrutura típica da medula óssea ----------------------------------10
Figura 5. Câmara de Neubauer ------------------------------------------------------------------------------------13
Figura 6. Equipamento automático Sysmex XN-9000TM -----------------------------------------------------13
Figura 7. Líquidos biológicos analisados pelo equipamento automático Sysmex XN 9000 --------------14
Figura 8. Equipamento CellaVision® DM96 --------------------------------------------------------------------17
Figura 9. Ves-Matic 30 ---------------------------------------------------------------------------------------------18
Figura 10. Tubos Diesse --------------------------------------------------------------------------------------------18
Figura 11. Equipamento Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge ----------------------------18
Figura 12. Representação esquemática da contagem diferencial de leucócitos, em castelo ---------------19
Figura 13. Representação esquemática dos diferentes subtipos leucocitários -------------------------------20
Figura 14. Ilustração da realização de um esfregaço sanguíneo -----------------------------------------------22
Figura 15. Reticulócitos, evidenciando a substância grânulofilamentosa, e eritrócitos maduros. -------23
Figura 16. Lancetas BD microtainer® para picada digital -----------------------------------------------------26
Figura 17. Exemplo de tubos microvette para punção digital -------------------------------------------------27
iv
Figura 18. Locais de colheita do aspirado medular -------------------------------------------------------------29
Figura 19. Exemplo de coloração PAS ---------------------------------------------------------------------------31
Figura 20. Exemplo de coloração MPO, em células mieloides ------------------------------------------------31
Figura 21. Exemplo de coloração de Perls em esfregaço de SP -----------------------------------------------32
Figura 22. Exemplo de coloração Naftol AS-D Cloroaceteto Esterase --------------------------------------33
Figura 23. Programas de CQE em que o laboratório de hematologia do IPO participa --------------------35
Índice de Quadros
Quadro 1. Valores de referencia dos parâmetros analíticos do hemograma (no IPOFG) -------------------9
Quadro 2. Metodologias usadas no funcionamento do analisador automático Sysmex XN 9000 --------14
Quadro 3. Distribuição dos parâmetros analisados no equipamento Sysmex XN-9000TM ---------------16
Quadro 4 Associação de algumas patologias com alterações leucocitárias ---------------------------------21
Quadro 5. Valores de referência da VSG ------------------------------------------------------------------------29
v
Siglas e abreviaturas
IPO – Instituto Português de Oncologia

IPOFG – Instituto Português de Oncologia Francisco Gentil
LCR – líquido cefalorraquidiano
VSG – velocidade de sedimentação globular
MO – medula óssea
SP – sangue periférico
FA – fosfatase ácida
MPO – mieloperoxidase
CQI – controlo da qualidade externo
CQI – controlo da qualidade interno
UK NEQAS - United Kingdom National External Quality Assessment Service
INSA – Instituto nacional de saúde Doutor Ricardo Jorge
VS – velocidade de sedimentação
vi
Introdução
Serve o presente relatório para descrever, sinteticamente, o trabalho realizado ao longo
do estágio da valência de hematologia, como parte integrante da Unidade Curricular de
Educação Clínica III, e relacioná-lo com os conhecimentos apreendidos.
A Educação Clínica III é uma unidade curricular de regime obrigatório e anual, inserida
no plano de estudos do 4º ano da Licenciatura de Análises Clínicas e Saúde Pública da Escola
Superior de Saúde do Porto (ESS) do Politécnico do Porto (P. Porto). O estágio proporciona ao
aluno, futuro profissional de Análises Clínicas, o contacto alargado com a prática profissional,
permitindo que este aprofunde e integre os conhecimentos adquiridos ao longo da sua formação
académica, no âmbito do exercício profissional, supervisionado. O presente estágio curricular
em contexto hospitalar foi realizado num período de quatro semanas, de 9 de janeiro a 3 de
fevereiro de 2017, no Serviço de Hematologia Laboratorial do Instituto Português de Oncologia
do Porto (IPO) Francisco Gentil, E.P.E. – Escola Portuguesa de Oncologia do Porto (EPOP).
Caraterização da Instituição Acolhedora – IPO Porto
O Centro do Porto do Instituto Português de Oncologia (IPO) Francisco Gentil iniciou as

suas funções em abril de 1974. Tem-se distinguido ao longo dos anos pelo dinamismo e lugar
cimeiro na qualidade com que acolhe e trata os doentes, pela atividade científica de alta
credibilidade que desenvolve e pela qualidade do ensino que realiza na área da oncologia(1). O
IPO foi fundado em 1923, com sede provisória no Hospital Escolar de Santa Marta em Lisboa.
Anos mais tarde, o IPO instala-se definitivamente na Palhavã, em Lisboa, adotando,
posteriormente, o nome do seu fundador, o Professor Francisco Gentil(2).
É uma instituição altamente diferenciada, pertencente ao SNS, prestadora de cuidados
específicos na área de Oncologia. Como instituição de “topo” para o Norte de Portugal, recebe
dos outros hospitais as patologias mais raras e as situações mais complexas(1).
A missão principal do IPO-Porto a prestação de cuidados de saúde hospitalares
oncológicos à população, com a máxima qualidade, humanismo e eficiência. Faz parte ainda da
sua missão desenvolver atividades de investigação, formação e ensino no domínio da oncologia.
O Serviço de Hematologia Laboratorial do IPO-Porto é composto por uma equipa
multidisciplinar, empenhada no diagnóstico hematológico de todos os doentes do IPO-Porto
e/ou qualquer outra instituição que solicite os seus serviços. Está integrado no Departamento de
1
Diagnóstico Laboratorial do IPO-Porto e é composto por duas áreas distintas que se

complementam, a área da morfologia hematológica e a área da citometria de fluxo, cuja
incumbência é a realização de análises laboratoriais, incorporadas nos meios complementares de
diagnóstico e terapêutica. Estas tarefas são efetuadas segundo o estado de arte, em tempo útil e
adequadamente, tendo como destinatários todos os doentes em regime de internamento e/ou
ambulatório que escolheram o IPO para tratamento da sua patologia oncológica(3).
O espaço destinado ao laboratório de Hematologia encontra-se dividido em três áreas
distintas:
 receção e processamento de amostras;
 punção digital;
 interpretação e validação de resultados.
A rotina deste laboratório inicia-se na área de receção e processamento de amostras,
onde se recebem diversos produtos biológicos (sangue periférico, medula óssea, líquidos
biológicos), provenientes de outros serviços hospitalares (Serviço de Atendimento Não
Programado, Internamento, Pediatria, Bloco Operatório, Unidade de Transplante de Medula
Óssea, entre outros), através de um sistema de transporte de amostras por vácuo ou por
auxiliares de ação médica. Todas as amostras rececionadas estão identificados com uma
etiqueta contendo as seguintes informações de identificação da amostra e do doente:
 código de barras;
 nome e número de processo do doente;
 número de registo da amostra.
A entrada das amostras no laboratório de hematologia é dada no programa informático
e-DeiaLab. Consoante o tipo de análise a ser efetuada, os produtos biológicos recebidos são
encaminhados para os diferentes equipamentos existentes no laboratório de hematologia.
Objetivos de estágio
Os objetivos desta valência de estágio são os seguintes:
 aplicar, aperfeiçoar e consolidar os conhecimentos adquiridos nos anos letivos
precedentes;
 interagir com a equipa do laboratório de uma forma correta e coerente, com
consequente ajuda mútua, que permita o crescimento do estagiário enquanto
pessoa e futuro técnico de diagnóstico e terapêutica;
2
 contactar com os equipamentos usados em Hematologia (XN

9000/VesMatic/CellaVision/ ações EPU);
 compreender os princípios e o modo operatório dos equipamentos;
 realizar esfregaços sanguíneos e proceder à sua coloração;
 observar e executar a punção digital;
 observar a realização de mielogramas;
 efetuar contagens celulares: fórmula leucocitária e reticulócitos;
 observar e compreender as técnicas citoquímicas e citoenzimáticas;
 interpretar os resultados face ao método laboratorial e ao diagnóstico clínico;
 compreender os procedimentos adotados pelo laboratório para o Controlo da
Qualidade.
Enquadramento Teórico – Hematologia

A hematologia é a ciência que estuda o sangue em condições fisiológicas e
patológicas(4).
O sangue é um tecido fluido, formado por uma porção celular que circula em suspensão
num meio líquido, o plasma(5). Um ser humano adulto possui cerca de 5 litros de sangue no seu
organismo(6)(7)(8)(9).
O sangue é a amostra biológica mais utilizada no laboratório clínico. Na hematologia, as
análises são executadas em sangue total. Este é colhido com anticoagulantes específicos e não
há separação do plasma e elementos figurados.
Hematopoiese
A produção, desenvolvimento, diferenciação e maturação de todas as células sanguíneas
pode ser definida como o processo de hematopoiese. Este processo é regulado por diversos
fatores solúveis como as citocinas e fatores de crescimento hematopoiético. A hematopoiese
nem sempre ocorre no mesmo local, variando desde o desenvolvimento embrionário até à vida
adulta (Figura 1)(10) Durante o desenvolvimento embrionário, a hematopoiese tem lugar,
inicialmente na mesoderme do saco vitelino e durante o segundo até sete meses, no fígado e
baço. Só nos últimos dois meses do desenvolvimento fetal é que a medula óssea se torna o local
predominante para a hematopoiese. Em certas patologias, o fígado e o baço podem retomar as
suas funções(4). Na infância, a medula óssea nos ossos mais periféricos é gradualmente
substituída por gordura, até que na idade adulta mais de 70% da medula óssea está localizada na
3
região pélvica, vértebras e esterno (Figura 1). Daí se explica os locais escolhidos para a
realização dos mielogramas(11).
Figura 1 Localização da hematopoiese ao longo dos anos de vida(11).

A hematopoiese inicia-se em células estaminais pluripotentes, que são capazes de
originar as várias células sanguíneas através de divisões mitóticas. As células estaminais
produzem duas linhagens distintas: linhagem mielóide e linhagem linfóide(10).
Figura 2 Modelo de linhagens celulares na hematopoiese(10).

A linhagem mielóide origina as séries eritrocitária, granulocítica (neutrófilos, eosinófilos
e basófilos), monocítica e megacariocítica. A linhagem linfóide origina os diferentes tipos de
linfócitos (T, B e NK)(9).
4
Os eritrócitos são originados num processo que se denomina eritropoiese a partir da

diferenciação sucessiva dos seus precursores na seguinte ordem de maturação: pró-eritroblasto,
eritroblasto basófilo, eritroblasto policromático, eritroblasto ortocromático, reticulócito e
eritrócito. Os eritrócitos são células em forma de disco bicôncavo, anucleadas e cujo
constituinte principal é a hemoglobina, uma proteína que contém ferro, participa no transporte
de oxigénio e dióxido de carbono e é responsável pela cor vermelha do sangue(9). Os eritrócitos
têm um período de semi-vida de 120 dias(9).
A série granulocítica é constituída pelos neutrófilos, eosinófilos e basófilos.
Estas células têm origem num processo de diferenciação e maturação dos precursores, na
seguinte ordem crescente(12):
 mieloblasto;
 promielócito;
 mielócito;
 metamielócito;
 neutrófilo/eosinófilo/basófilo em banda;
 neutrófilo/eosinófilo/basófilo segmentado.
O processo que desencadeia a produção de plaquetas é a megacariopoiese pela seguinte
ordem crescente de diferenciação e maturação dos seus precursores(12):
 promegacarioblasto;
 megacarioblasto;
 promegacariócito;
 megacariócito;
 plaqueta.
As plaquetas são células que derivam da fragmentação dos megacariócitos, anucleadas e
contêm grânulos no citoplasma(13). Participam no processo de coagulação sanguínea e são
importantes na manutenção da hemostase(9).
Os monócitos têm origem num processo denominado de monocitopoiese, pela seguinte
ordem crescente de diferenciação e maturação celular dos seus precursores(12):
 monobasto;
 promonócito;
 monócito.
A linhagem linfoide, através da linfopoiese, dá origem aos linfócitos pela seguinte
ordem de diferenciação e maturação(12):
 linfoblasto;
5
 pró-linfócito;
 linfócito T;
 linfócito B.
Numa fase posterior, os linfócitos B diferenciam-se em plasmócitos (células produtoras
de imunoglobulinas).
Morfologia e função das células sanguíneas

Eritrócito
Os eritrócitos (figura 3) são células anucleadas em forma de disco bicôncavo, o seu

diâmetro varia entre 7 e 8 µm e a sua espessura é de 2 µm(9,14,15). O seu constituinte mais
numeroso é a hemoglobina, uma proteína que contém ferro e um pigmento que dá a cor
vermelha ao sangue. A sua principal função é transportar O2 dos pulmões para os tecidos e o
CO2 resultante da respiração celular para os pulmões (trocas gasosas). A quantidade de O2 que
chega aos tecidos depende do número de eritrócitos em circulação e da eficácia da sua
distribuição. Quando entram em circulação, demoram 2 a 4 dias a atingirem a maturação
denominando-se até então reticulócitos(5,9).
Neutrófilo
Os neutrófilos (figura 3) possuem núcleo segmentado (4 a 5 lóbulos). O seu citoplasma é

acidófilo, com grânulos cor de rosa a lilás. São células fagocíticas, constituindo a principal
defesa contra infeções bacterianas, e libertam várias substancias (ex: lisozima e agentes
oxidantes)(7)(16).
Eosinófilo
Os eosinófilos (figura 3) intervêm na regulação da reação inflamatória alérgica e

também estão envolvidos na resposta à invasão do organismo por parasitas. Têm um núcleo
bilobulado e o seu citoplasma é preenchido com grânulos rosa-alaranjado(16).
Basófilo
Os basófilos (figura 3) são responsáveis por libertar mediadores da inflamação (heparina

e histamina). O seu núcleo é trilobulado e o seu citoplasma é basófilo com granulações
grosseiras que coram fortemente com corantes básicos.
6
Linfócito
Os linfócitos (figura 3) têm um núcleo uniforme (esférico) que ocupa quase toda a célula
com coloração muito basófila (azul a lilás). O seu citoplasma é normalmente pouco abundante,
não tem grânulos e tem coloração basófila (lilás a azul claro). A sua função é imunorreguladora,
com os linfócitos T a atuarem diretamente nas infeções de células por vírus ou em células
tumorais e os linfócitos B sendo células produtoras de imunoglobulinas que são lançadas na
corrente sanguínea para ataque a agentes considerados “non self” e que representam uma
ameaça à normal homeostasia e funcionamento do organismo(7,16,17).
Monócito
Os monócitos têm um núcleo ovóide ou riniforme com coloração basófila (lilás).

Possuem citoplasma abundante, com vacúolos, menos basófilo que o dos linfócitos e a
membrana citoplasmática tem forma irregular. Estas células surgem em processo inflamatórios
invadindo os tecidos por diapedese transformando-se em macrófagos com propriedades
fagocitárias(16,17).
Plaqueta
As plaquetas (figura 3) são corpúsculos anucleados com forma discoide e diâmetro 1,5 -
3,0 µm. Possuem citoplasma azul claro e grânulos azurófilos (muitas vezes difíceis de
distinguir). Derivam de células gigantes e poliploides da MO – megacariócitos. Intervêm no
processo da coagulação sanguínea e auxiliam a reparar a parede dos vasos sanguíneos, quando
estes sofrem qualquer dano(9,18,19).
Figura 3 Esquema representativo das células sanguíneas(20).
7
Amostras
Sangue Periférico
As amostras de sangue periférico são colhidas por punção venosa ou capilar para tubos
com anticoagulante EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético) ou citrato de sódio e enviadas ao
laboratório de Hematologia, onde os técnicos verificam o seu estado geral e se a proporção
amostra/anticoagulante está correta, antes de as colocarem no equipamento Sysmex XN-9000TM,
em modo automático (nos racks) ou manual.
Hemograma
O hemograma é um exame complementar de diagnóstico que permite estudar a função
hematológica pela quantificação dos componentes celulares do sangue e avaliação qualitativa da
sua morfologia(21).
O hemograma pode ser dividido em três partes:
 leucograma (avaliação do grau de severidade de uma doença):
 doenças infeciosas
 leucemias
 síndromes mielodisplásicos
 síndromes mieloproliferativos
 tumores metastásicos
 etc.
 eritrograma (avaliação de anemias e policitemias e investigação de doenças
hematológicas);
 plaquetograma (avaliação de alteração plaquetária).
A primeira parte consiste na contagem total e diferencial de leucócitos, enquanto a
segunda se baseia no estudo das alterações dos eritrócitos, da hemoglobina e dos seus índices e
a terceira na contagem e no estudo morfológico das plaquetas(9).
Os resultados dos hemogramas são transmitidos, automaticamente, pelo sistema
informático do equipamento Sysmex XN-9000TM, de forma a serem interpretados e validados
pelo médico patologista. No entanto, durante a interpretação de um hemograma, é necessário ter
em atenção os possíveis erros ocorridos, desde a colheita da amostra até à sua análise (ex.:
amostra com coágulo ou volume insuficiente).
8
Caso o MCHC apresente valores superiores a 37,5g/dL, deve-se colocar a amostra na

estufa, a 37ºC, durante 30 minutos, e repetir a análise, em modo manual, tendo em conta que
esse valor pode ser indicativo da presença de crioaglutininas.
Os valores de referência do hemograma estão representados no quadro 1:
Quadro 1 Valores de referencia dos parâmetros analíticos do hemograma (no IPOFG) (22).
Hemograma Parâmetros Valores de Referência
WBC 4,00 – 11,00 x 103/µL
NEUT# 2,00 – 7,50 x 103/µL
NEUT% 40,0 – 75,0 %
LYMPH# 1,50 – 4,00 x 103/ µL
LYMPH% 20,0 – 45,0 %
MONO# 0,20 – 0,80 x 103/µL
Leucograma
MONO% 2,0 – 10,0 %
EO# 0,04 – 0,40 x 103/µL
EO% 1,0 – 6,0 %
BASO# 0,02 – 0,10 x 103/µL
BASO% 0,0 – 1,0 %
IG 0%
RBC 3,8 – 4,8 x 106/µL
HGB 12 – 16g/dL (M) | 13 – 18g/dL (H)
HCT 36,0 – 46,0 % (M) | 40,0 – 50,0 % (H)
MCV 83 – 101 fL
Eritrograma MCH 27,0 – 32,0 pg
MCHC 31,5 – 34,5 pg
RDW-SD/RDW-CV 11,5 – 14,5 %
NRBC# 0,0 x 103/µL
NRBC% 0,0/100 WBC
Plaquetas (PLT) 150 – 400 x 103/µL
Volume Plaquetário Médio 7,2 – 11,1 fL
(MPV)
Plaquetograma
PDW 25,0 – 65,0 %
PLCR 0%
PCT 0,12 – 0,36 %
Quando a contagem de plaquetas apresenta um valor muito baixo, este pode ser
confirmado pela repetição da análise com amostra de sangue periférico colhida em tubo com
citrato de sódio. A explicação para este acontecimento pode ser o facto de o EDTA provocar
agregação plaquetária, sem que esta esteja associada a distúrbios da coagulação ou alterações da
função plaquetária. Neste caso, o resultado da contagem de plaquetas (sem efeito de
anticoagulante) é obtido pela fórmula:
RBC em EDTA x PLT em citrato
RBC em citrato
9
Aspirado medular (medula óssea)

A medula óssea é a substância que se encontra no interior dos ossos longos(5). É
constituída por um conjunto de vasos, nervos, células hematopoiéticas indiferenciadas, células
do estroma reticuloendotelial e tecido adiposo(22) (figura 4). As células precursoras
hematopoiéticas estão em estrita proximidade com as células do estroma da medula e após a sua
proliferação e a maturação, entram na circulação sanguínea(11).
Figura 4 Representação esquemática da estrutura típica da medula óssea(23).

A avaliação semi-quantitativa e qualitativa das diferentes séries hematopoéticas requer
que seja efetuado o exame da medula óssea. A amostra de medula óssea pode ser obtida por
aspiração ou por biópsia. Os locais de escolha para se proceder à colheita do aspirado medular
são as cristas ilíacas anterior e posterior e o esterno.
A decisão para uma colheita de aspirado medular é feita por se tratar de uma técnica
geralmente de fácil execução, segura e barata, e que ao mesmo tempo é capaz de fornecer ao
clínico informações importantes para o diagnóstico de doenças hereditárias e adquiridas
(benignas ou malignas)(22).
A presença de alterações hematológicas não é por si só indicação da necessidade da
realização de um aspirado medular, a decisão deve ser sempre ponderada para cada caso
individual.
Dependendo da suspeita clínica ou do diagnóstico, podem-se efetuar colheita de
aspirado medular para:
 mielogramas;
 imunofenotipagem;
 citogenética;
 genética molecular;
10
 doença residual mínima;

 microbiologia;
 cultura celular.
É importante no diagnóstico de:
 anemias;
 pancitopenias;
 leucemias agudas;
 trombocitopenias e trombocitoses;
 síndromes mieloplásicos;
 síndromes mieloproliferativos;
 gamapatias monoclonais;
 aplasia medular;
 suspeita de invasão medular por células metastáticas;
 doenças metabólicas.
No entanto, o procedimento médico da colheita de aspirado medular não é isento de
contra-indicações. Assim, apresenta as seguintes limitações:
 hemofilia – contra-indicação absoluta;
 acesso difícil ao local de colheita;
 trombocitopenia – plaquetas abaixo de 50 x 109/L(22).
Fragmento de medula óssea

A medula óssea é um tecido muito celular e vascularizado, que consiste em dois
compartimentos: um compartimento hematopoiético e o estroma muito bem organizado que
serve de suporte das células hematopoiéticas.
Um bebé recém-nascido tem todas as cavidades ósseas preenchidas com tecido
hematopoiético. À medida que o organismo vai envelhecendo, o tecido hematopoiético vai
sendo substituído por tecido adiposo(15,17,22).
O fragmento colhido na biopsia óssea destina-se ao estudo histológico da MO.
O exame da MO está indicado quando a história clínica, os resultados laboratoriais e a
morfologia do sangue periférico do doente sugerirem a possibilidade de uma doença
hematológica primária ou secundária, para a qual, uma avaliação qualitativa, semi-quantitativa
ou outros estudos da MO sejam importantes para o seu diagnóstico(22).
As indicações clínicas da biópsia óssea são:
Avaliação quantitativa da celularidade;
11
Aspirado branco, normalmente em patologias associadas a fibrose:

 leucemia de “hairy cells”;
 mielofibrose
 LMA – M7
 doenças mieloproliferativas e granulomatosas;
 síndromes mielodisplásicos;
 suspeita de invasão medular por carcinomas.
Líquidos Biológicos
Os líquidos biológicos são fluídos corporais que preenchem determinados espaços e
cavidades do organismo. Este líquidos têm funções protetoras, de transporte, de excreção de
metabolitos e de manutenção da homeostasia(7,9). Estas amostras são requisitadas pelo clínico
para estudar e avaliar certos estados patológicos e ajudar na decisão da escolha da terapêutica
adequada para cada caso. Os líquidos biológicos normalmente analisados no laboratório de
hematologia, são:
 líquido cefalorraquidiano
 líquido pleural
 líquido ascítico
 liquido peritoneal
 líquido pericárdico
 outros
O processamento destes espécimes é efetuado em duas etapas:
 contagem em câmara de Neubauer (figura 5)
 citologia (contagem diferencial) em lâmina corada – citoesfregaço
Procedimento:
 com uma pipeta Pasteur retirar uma amostra do líquido e encher a câmara, com
cuidado para não formar bolhas de ar;
 colocar em câmara húmida durante 5 minutos;
 findo o tempo, proceder à contagem das células encontradas na totalidade dos
retículos.
O resultado é dado em unidade/μl, uma vez que a câmara tem um volume de 1 μl.
12
Figura 5 Câmara de Neubauer(24).
Equipamentos Automáticos
A automatização é cada vez mais um ponto forte nos laboratórios permitindo
melhorar a qualidade dos ensaios, dar resposta ao aumento do volume de trabalho
aumentando a produtividade e diminuindo o tempo de resposta e ao mesmo tempo é
possível uma redução de custos.
Sysmex XN-9000TM
O Serviço de Hematologia Laboratorial do IPO, possui um sistema robotizado de análise
automática que desempenha uma panóplia de funções sem a intervenção do técnico – Sysmex
XN 9000TM. Este sistema foi projetado e otimizado especificamente para gerar elevados fluxos
de trabalho e mais complexos(25). Esse analisador automático é robusto e utiliza uma
metodologia que inclui lise celular específica e coloração fluorescente, permitindo a avaliação
da morfologia celular de forma detalhada. Com este sistema, é possível executar hemogramas e
esfregaços automaticamente a partir do mesmo tubo(26). Associado ao sistema Sysmex XN
9000TM existe um software de gestão desenvolvido pela Sysmex, o SIS, que permite a integração
de todos os analisadores de hematologia Sysmex(22).
Figura 6 Equipamento automático Sysmex XN-9000TM(25).

Este equipamento permite executar hemogramas de modo manual ou automático e é
constituído pelas seguintes unidades:
 3 analisadores automáticos: XN 10.1, XN 10.2, e XN 20;
 1 corador e preparador automático de lâminas SP 10;
13
 1 unidade distribuidora de tubos TS-500: arquiva e separa os tubos de acordo

com os pedidos pendentes.
Todas estas unidades se encontram interligadas por um sistema de transporte – CT-
90(22). A sua unidade de processamento de informação é denominada IPU, o “cérebro” do
analisador que armazena regras de decisão clínica e que é capaz de analisar essas regras e gerar
ações reflexivas e de reanálise.
Assim, este equipamento opera tecnologias avançadas que permitem identificar,
quantificar e avaliar morfologicamente os componentes celulares de amostras de sangue
periférico, da MO e líquidos biológicos (ex: líquido cefalorraquidiano (LCR), pleural,
peritoneal, ascítico e sinovial) (figura 7)(26).
Figura 7 Líquidos biológicos passíveis de ser analisados

pelo equipamento automático Sysmex XN 9000TM.(26)
As metodologias utilizadas pelo equipamento Sysmex XN 9000TM encontram-se

sumariadas no quadro 2:
Quadro 2. Metodologias usadas no funcionamento do analisador automático Sysmex XN 9000T M(26).

Metodologia Parâmetros
Contagem diferencial leucocitária
Contagem de granulócitos imaturos
Eritroblastos
Citometria de fluxo fluorescente Reticulócitos
Fração imatura de reticulócitos (IRF)
Plaquetas fluorescentes (PLT-F)
Fração imatura de plaquetas (IPF)
14
Hematócrito
Impedância e foco hidrodinâmico Contagem de eritrócitos

Contagem de plaquetas
(plaquetas de impedância)
Método de Sulfato Lauril de Sódio, Hemoglobina

livre de cianeto
Unidade SP-10
Após o processamento dos hemogramas as “racks” com as amostras são encaminhadas

para a unidade SP-10 do equipamento Sysmex 9000TM, onde são efetuados esfregaços das
amostras que apresentem algum valor patológico ou que necessitem de confirmação por exame
microscópico(22).
Esta unidade foi concebida para preparar e corar esfregaços sanguíneos (e de MO), em
modo automático e manual. Os parâmetros de produção do esfregaço são ajustados (ângulo,
velocidade da deslocação da lâmina espalhadora e a quantidade de sangue utilizado), em função
do valor do hematócrito fornecido pelo analisador hematológico do sistema Sysmex 9000TM (25).
Para a coloração das lâminas é utilizada uma mistura de corantes Giemsa e
Maygrunwald. Para além destes reagentes o processo necessita de água destilada, uma diluição
de solução tampão SP buffer e o reagente Cellpack DCL(22,25).
Unidade TS-500
Esta unidade arquiva ou separa os tubos com as amostras de sangue periférico, de

acordo com os pedidos pendentes ou erros detetados. Quando o equipamento deteta algum tipo
de erro, requer a intervenção humana para a sua resolução. Alguns tipos de erros apresentados
podem ser:
 erro no SP-10;
 repetição de análise;
 homogeneização ou aquecimento da amostra;
 erro de função;
 amostra não registada;
 presença de coágulo;
 confirmação da identificação da amostra.
15
IPU
Unidade que armazena as regras de decisão clínica e gera ações manuais, de forma a
auxiliar na organização dos pedidos pendentes. Assim, algumas tarefas que se encontrem
suspensas, poderão avançar manualmente, como por exemplo:
 transferência de laminas para o equipamento CellaVision® DM96;
 execução de esfregaços sanguíneos manualmente;
 verificação de presença de coágulo na amostra;
 pedido de nova amostra.
Os parâmetros analisados no equipamento Sysmex 9000TM são os seguintes(Quadro3):
Quadro 3 Distribuição dos parâmetros analisados no equipamento Sysmex XN-9000TM(22).

Módulo Sangue total/MO Líquidos biológicos
Leucócitos (WBC) Leucócitos (WBC-BF)
Eritrócitos (RBC) Eritrócitos (RBC-BF)
Hemoglobina (Hgb) Células mononucleares
(MN) # e %
Hematócrito (Hct) Células polimorfonucleares
Volume corpuscular médio (MCV) (PMN) # e %
Contagem total de células
Hemoglobina corpuscular média (MCH) Nucleadas (TC-BF#)
XN-10.1/ Concentração de hemoglobina corpuscular média (MCHC)
XN-10.2/ Plaquetas (PLT)
XN-20 Distribuição de tamanho dos eritrócitos (RDW-SD/RDW-CV)
Distribuição de tamanho das plaquetas (PDW)
Líquidos Volume plaquetário médio (MPV)
biológicos Índice de plaquetas gigantes (PLCR)
apenas no Plaquetócrito (PCT)
XN-10.1 Eritroblastos (NRBC) # e %
Neutrófilos (NEUT) # e %
Linfócitos (LYMPH) # e %
Monócitos (MONO) # e %
Eosinófilos (EO) # e %
Basófilos (BASO) # e %
Granulócitos imaturos (IG) # e %
Reticulócitos (RET)
Fração de reticulócitos imaturos (IRF)
XN-20 Fração de plaquetas imaturas (IPF)
Índices de baixa, média e alta frequência (LFR, MFR e HFR)
Conteúdo de hemoglobina nos reticulócitos (RET-He)
# Contagem absoluta
% percentagem
16
CellaVision® DM96
O equipamento hematológico CellaVision® DM96 (figura 8) é um dispositivo
automático que localiza automaticamente as células num esfregaço de sangue periférico, realiza
a pré-classificação leucocitária, avalia morfologicamente a série eritrocitária e realiza uma
contagem estimada das plaquetas(27). É constituído numa unidade alimentadora de lâminas,
uma unidade ótica constituída por um microscópio e uma câmara (designada como scanner de
lâminas), bem como um sistema informático contendo o software de obtenção de classificação
CellaVision® Blood Diferential, para o diferencial de células sanguíneas. Este sistema permite
ainda confirmar ou modificar a classificação atribuída a leucócitos (contagem diferencial),
eritrócitos (caracterização morfológica) e plaquetas(28–31).
Figura 8 Equipamento CellaVision® DM96(28)
Ves-Matic 30/30 Plus

O equipamento Ves-Matic 30/30 Plus é (figura 9) um analisador automático concebido
para a determinação da velocidade de sedimentação globular (VSG). A amostra é colhida em
tubo Diesse (figura 10) com citrato de sódio, na proporção 1:4, até à marca de 200 mm. O Ves-
Matic 30 é composto por um sistema de leitura de códigos de barras interno, que lê a
identificação das amostras e envia os resultados automaticamente para um sistema informático.
O sistema de leitura é composto por um sensor de luz infravermelha, que mede o nível de
opacidade da coluna de eritrócitos. A primeira leitura é feita ao fim de 2 minutos (no método
manual corresponde à 1ª hora) e a segunda é feita ao fim de 17 minutos após a primeira leitura
(que no método manual corresponde à 2ª hora). Quando se introduzem os tubos no
equipamento, deve ter-se sempre em atenção o volume da amostra (que nem sempre é o
suficiente) e a posição do código de barras para que o equipamento consiga realizar uma leitura
correta(32).
17
Figura 9 Ves-Matic 30(32).
Figura 10 Tubos Diesse(33).
Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge

O equipamento Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge (figura 11) permite
realizar citoesfregaços de líquidos biológicos e corar esfregaços de sangue periférico, MO ou
citoesfregaços, utilizando a coloração de Wright. Tem capacidade para 12 lâminas e tem de ser
sempre tarado, à semelhança das centrífugas. Utiliza rotores específicos para cada
procedimento(34).
Figura 11 Equipamento Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge (34)
18
Técnicas e atividades desenvolvidas
Fórmula leucocitária
A fórmula leucocitária consiste num exame microscópico do esfregaço sanguíneo que
permite avaliar de modo qualitativo e quantitativo as diferentes celulares(17,19,35,36).
Quando as populações leucocitárias não são bem definidas e, em muitos casos, o
analisador automático não consegue definir a respetiva contagem diferencial, deve-se então
realizar um esfregaço de sangue periférico e fazer a contagem diferencial de leucócitos
manualmente, de modo a serem estabelecidas as respetivas percentagens.
Os eritrócitos e as plaquetas podem ser avaliados qualitativamente:
 eritrócitos:
 anisocitose
 anisocromia
 poiquilocitose
 plaquetas:
 anisocitose
 agregações plaquetárias importantes na avaliação de falsas
trombocitopenias)
A avaliação quantitativa é realizada relativamente aos leucócitos. A contagem
diferencial dos leucócitos tem elevada relevância no diagnóstico hematológico por ser
importante ferramenta na definição de perfis patológicos. A diferenciação dos diferentes
leucócitos é possível graças às características particulares e funções de cada uma destas
células(4,9).
A contagem efetuada para a fórmula leucocitária é feita através de observação de duas
lâminas de esfregaço sanguíneo coradas pela técnica de Wright. Percorre-se o esfregaço em
duas zonas: da franja para a cabeça e no centro. Contam-se 200 (100 + 100) células de
leucócitos, em linha ou em castelo (figura 12), e determina-se percentagem dos diferentes
subtipos leucocitários (figura 13).
Figura 12 Representação esquemática da contagem diferencial de leucócitos, em castelo(37).
19
Figura 13 Representação esquemática dos diferentes subtipos leucocitários(38).
Procedimento:
 Realizar o esfregaço e respetiva coloração;
 Colocar o esfregaço no microscópio e focar inicialmente com a objetiva de 10x,
passando posteriormente para a de 40x;
 Observar de forma geral o esfregaço;
 Observar com a objetiva de 100x e efetuar a contagem de 200 células (da franja para a
cabeça e no centro);
 Estabelecer as percentagens de cada leucócito(16).
Cálculo do resultado:
% obtida = (nº leucócito específico contado/nº total de leucócitos contados) x 100(16)
Esfregaço de sangue periférico

O esfregaço sanguíneo é uma preparação citológica que consiste no espalhamento de
uma camada de sangue periférico (amostra colhida em tubo com EDTA) sobre uma lâmina de
vidro, com posterior coloração e observação microscópica. Trata-se de um exame que
complementa as informações obtidas no hemograma que permite estudar a morfologia de
eritrócitos, leucócitos e plaquetas, assim como realizar a contagem diferencial de leucócitos
(fórmula leucocitária) e pesquisar parasitas.
20
Para uma visualização microscópica com qualidade, o esfregaço de sangue periférico

deve:
 ser fino, de forma que as células se encontrem espalhadas e não sobrepostas;
 ser regular, para que as células se distribuam de forma correta, de acordo com o
seu tamanho e peso;
 ter margens paralelas aos bordos da lâmina;
 ter uma extremidade arredondada ou em franja;
 não possuir estrias nem lacunas(17,36).
A observação microscópica de um esfregaço sanguíneo é muito importante na avaliação
das doenças hematológicas, visto que existem diversos casos em que a contagem
celular se encontra normal, mas a morfologia se apresenta anormal. É através da visualização do
esfregaço que situações como a anisocitose, poiquilocitose e anisocromia, bem como
microagregações plaquetárias são descobertas e avaliadas (Quadro 4). Contudo, é importante
não esquecer que a análise morfológica pode ser influenciada pela preparação e/ou coloração
incorreta doesfregaço e pela inexperiência do observador(39).
A análise do esfregaço deve-se iniciar com uma ampliação baixa (objetiva de
10x e/ou 40x), para que se possa avaliar a qualidade do esfregaço, seguida de uma ampliação
elevada (objetiva de imersão – 100x), de forma a selecionar uma região adequada para efetuar a
contagem diferencial dos leucócitos e detetar possíveis alterações morfológicas.
Quadro 4 Associação de algumas patologias com alterações leucocitárias(12,40,41).

Alterações dos leucócitos Patologias associadas
Granulações tóxicas Infeção/sepsis
Corpos de Dohle Doença inflamatória ou infeciosa, síndrome
mieloproliferativo, leucemia mieloide
Hipersegmentação nuclear Anemia megaloblástica
Corpos de Auer Leucemias mieloblástica ou mielomonocítica agudas
Linfócitos atípicos Mononucleose infeciosa, citomegalovírus, hepatite viral,
SIDA
Manchas de Gumprecht Leucemia linfocítica crónica
Procedimento
A realização de um esfregaço sanguíneo requer as seguintes etapas (figura 14):
 identificar o esfregaço com o número de registo da amostra, na extremidade
fosca da lâmina de vidro;
 colocar uma gota de sangue, com cerca de 2mm de diâmetro, no centro da
lâmina, a 1cm da extremidade fosca;
21
 encostar a extremidade da lâmina espalhadora à anterior, num ângulo de 35º,

aproximadamente, e fazê-la deslizar até encontrar a gota (o sangue espalhar-
se-á por capilaridade);
 estender a gota com um movimento firme e contínuo da mão, deslizando a
lâmina espalhadora em direção à extremidade livre;
 deixar secar e corar no equipamento Aerospray Hematology Slide
Stainer/Cytocentrifuge.
Figura 14 Ilustração da realização de um esfregaço sanguíneo (6).
Contagem de reticulócitos
Os reticulócitos são células jovens que representam uma fase intermédia entre os
eritroblastos da medula óssea e os eritrócitos maduros. Estes eritrócitos jovens, de maiores
dimensões relativamente aos eritrócitos maduros, caracterizam-se pela presença de ribossomas e
RNA (ácido ribonucleico) no seu citoplasma(22). Estas células imaturas são libertadas da MO
para a circulação sanguínea e demoram cerca de 24 horas até se tornarem eritrócitos maduros.
A contagem de reticulócitos é um método que avalia a atividade eritropoética da MO,
sendo também útil para diagnosticar e monitorizar o tratamento de algumas anemias, quando
associada aos valores do hematócrito e da concentração de hemoglobina(22).
22
Quando o número de eritrócitos é baixo há uma estimulação da MO para aumentar a sua

produção, assim observa-se uma libertação de um número elevado de reticulócitos para a
corrente sanguínea. Assim, uma baixa contagem de reticulócitos (reticulopenia) indica baixa
actividade eritropoiética, enquanto que um aumento dos reticulócitos significa uma atividade
eritropoiética aumentada como resposta da medula óssea para compensar a anemia(12).
Método manual
O princípio da contagem de reticulócitos, através do método manual, consiste na
determinação do nº de reticulócitos presentes no sangue periférico com a ajuda de
corantes vitais que precipitam os ribossomas evidenciando a substância granulofilamentosa
visível ao microscópio. Esta substância apresenta uma cor azul-acizentada devido à presença de
material nuclear residual (de cor azulada) associado à cor avermelhada da hemoglobina(22,36)
(figura 15).
Procedimento:
 filtrar o corante Azul de cresil e preparar o material necessário;
 colocar num tubo de ensaio X gotas de corante e X gotas de sangue,
consoante o valor de hemoglobina da amostra. Para valores elevados a
quantidade de corante deverá ser o dobro da quantidade de sangue; para
valores diminuídos de hemoglobina deve-se colocar o dobro da quantidade
sangue relativamente ao corante. Para hemoglobinas normais as quantidades
são iguais;
 homogeneizar a mistura e deixar repousar durante 20 minutos;
 Findo o tempo de incubação, realizar dois esfregaços (não devem ser muito
espessos para que a visualização das células ao microscópio seja correta);
 Utilizando a objetiva de imersão, contar os reticulócitos presentes em 1000
eritrócitos e estabelecer a percentagem(36).
Figura 15 Reticulócitos, evidenciando a substância grânulofilamentosa, e eritrócitos maduros(42).
23
A contagem realiza-se da seguinte forma: em cada lâmina contam-se os reticulócitos

existentes em 5 campos aleatórios com cerca de 100 eritrócitos cada (mín 95 – máx 105). No
total contam-se 10 campos e estabelece-se a respetiva percentagem.
Ret % = (nº total de reticulócitos nas 2 lâminas / nº total de eritrócitos nas 2
lâminas) x 100
Método automático
A contagem dos reticulócitos pelo método automático é efetuada através da técnica de
citometria de fluxo, sendo os reticulócitos agrupados em:
 Índices de baixa frequência – LFR;
 Índices de média frequência – MFR;
 Índices de alta frequência – HFR,
consoante o eu conteúdo em RNA(22).
Valores de referência
O número normal de reticulócitos na circulação periférica de um adulto varia entre 0.2 a

2%. No recém-nascido o valor normal varia entre 2 a 6%(22,36).
Causas de erro
 Alteração do corante;
 Mistura inadequada do sangue e do corante;
 Incubação excessivamente prolongada;
 Precipitados do corante sobre o esfregaço(36).
Valores patológicos
O aumento dos reticulócitos indica:

 anemias hemolíticas;
 anemia ferropénica após tratamento com ferro;
 anemia de Biermer, após tratamento com vitamina B12.
A diminuição dos reticulócitos indica:
 aplasia e hipoplasia da MO;
 Tratamento de diversas neoplasias, através de quimioterapia e radioterapia(22).
24
Hematócrito
O hematócrito pode-se definir como a percentagem de eritrócitos presentes num
determinado volume de sangue total. A determinação deste analito pode ser executada por
métodos diretos [macrométodo (Wintrobe) e micrométodo (Adams – tubos capilares)] ou
indiretos (nos equipamentos automáticos), conhecendo-se o volume globular médio e o número
de eritrócitos:
Hematócrito = (eritrócitos x VGM)
Microhematócrito
O microhematócrito consiste na separação dos eritrócitos do plasma, através do
processo de centrifugação de uma amostra de sangue total, durante um período de tempo
determinado. É o método direto mais utilizado atualmente (é o método utilizado no laboratório
de hematologia do IPO), devido a ser uma análise muito precisa, com uma reprodutibilidade de
aproximadamente 100%, e de rápida execução, devido ao pouco tempo de centrifugação e ao
baixo volume de amostra utilizado(9,22,36).
Para a determinação do hematócrito de uma amostra são utilizados dois tubos capilares
de 75 mm de comprimento e 1 mm de diâmetro. Preenche-se cada tudo com sangue da amostra,
por capilaridade, até 15 mm da extremidade. Sela-se a extremidade inferior com plasticina e
centrifuga-se a 12000 rpm durante 2 minutos.
Após a centrifugação os eritrócitos sedimentam no fundo do tubo, seguidos de uma fina
camada de leucócitos e outra de plaquetas (buffy coat), acima da qual se encontra o plasma.
A leitura do valor do hematócrito é efetuada com a utilização de uma régua de leitura
própria (Heraeus Christ)(22,36).
O valor de hematócrito encontrado deve ser expresso em termos de percentagem (L/L),
por se tratar de uma relação entre dois volumes, como já foi referido. A partir desse valor é
possível calcular o valor da hemoglobina:
Hemoglobina = hematócrito / 3
Os resultados podem ser afetados por diversos fatores (ex.: má homogeneização da
amostra, uso incorreto de anticoagulante, danos nos tubos capilares)(36).
Punção digital
A colheita de sangue por punção digital é um método de microcolheita capilar muito
utilizado para doentes pediátricos. Este tipo de colheita assume um papel importante nesses
casos na medida em que permite obter amostras adequadas com um volume pequeno. Este
25
procedimento permite evitar a colheita de sangue por catéter ou punção venosa em crianças, já
que nestas o procedimento pode ser de difícil execução ou o apresentar risco elevado de
infeção(22).
O sangue capilar é composto por uma mistura de sangue proveniente de arteríolas e
vénulas, bem como por fluídos intercelulares e intersticiais. Como a pressão nas arteríolas é
mais elevada, a proporção de sangue arterial é maior do que de sangue venoso(22).
O procedimento da punção digital consiste na perfuração com a lanceta (figura 16) na
face palmar interna da falange distal (extremidade) dos dedos médio ou anelar em crianças
maiores de um ano ou em adultos, preferencialmente da mão não dominante por esta ser menos
calejada.
O aquecimento do local de colheita aumenta o fluxo do sangue até 7x, facilitando a
obtenção de maiores volumes de amostra.
Figura 16 Lancetas BD microtainer® para picada digital(35).
O procedimento para a realização da punção digital obedece aos seguintes passos:

 preparas as lâminas, as lancetas, um pedaço de algodão, o microvette (figura 17)
e material absorvente;
 lavar as mãos e calçar luvas;
 verificar se a etiqueta com o nº da amostra corresponde ao doente em questão;
 identificar duas lâminas e a microvette com o nº de registo da amostra;
 friccionar o dedo do doente, num movimento de baixo para cima, de modo a
aumentar o fluxo sanguíneo;
 desinfetar o dedo do doente com algodão embebido numa solução desinfetante
(ex: Cutasept);
 pressionar a ponta da lanceta contra o dedo, picando-o;
 rejeitar a lanceta no contentor de risco biológico;
 desprezar a primeira gota de sangue, devido à elevada quantidade de
componentes celulares e fluídos;
26
 colocar o microvette junto ao local da punção, para que haja absorção de sangue
por capilaridade (deve-se ir limpando o dedo, de vez em quando, de forma a
impedir a formação do tampão plaquetária);
 homogeneizar muito bem o microvette para evitar a formação de coágulo;
 pressionar o local de punção, para promover a formação do tampão plaquetário;
 desinfetar novamente o dedo e colocar um penso rápido.
 Aproveitar duas gotas do microvette, antes de o fechar, para efetuar os esfregaços
nas duas lâminas.
Figura 17 Exemplo de tubos microvette para punção digital(35).
Velocidade de sedimentação globular

A determinação da velocidade de sedimentação globular (VSG) baseia-se na medição da
altura da coluna de plasma livre de eritrócitos, num período de tempo específico(4). Findo esse
tempo, os glóbulos vermelhos separam-se do plasma e sedimentam no fundo do recipiente (43).
A velocidade com que os eritrócitos se depositam pode ser afetada por vários fatores:
 volume e forma dos eritrócitos e das proteínas do plasma;
 fibrinogénio plasmático;
 nível plasmático de globulinas;
 condições mecânicas e técnicas;
 anticoagulante utilizado(16)(4).
Existem três métodos para a determinação da VSG:
 método automático;
27
 wintrobe;
 westergreen(43).
O método automático é operacionalizado na rotina laboratorial do IPO através do
equipamento Ves-Matic 30. O método de Westergreen é o método de referência e consiste em
deixar um tubo de sangue exatamente na vertical e em repouso durante 1h. Findo esse tempo lê-
se a altura dacoluna de plasma (no limite de separação do plasma dos eritrócitos
sedimentados).Posteriormente, ao fim de duas horas (passada 1 hora da primeira determinação)
realiza-se outra leitura(43)(4).
A determinação da VSG engloba as seguintes etapas:
 formação de aglomerados de eritrócitos;
 queda destes aglomerados a uma velocidade constante definida pela dimensão
dos eritrócitos e do tubo utilizado;
 agregação dos eritrócitos na coluna de sedimentação.
A VSG encontra-se alterada em várias situações:
 processos inflamatórios;
 gravidez;
 idade avançada;
 tumores.
A forma como se processa a sedimentação dos glóbulos parece ser afetada por três
fatores: glóbulos vermelhos, plasma e pelos fatores mecânicos que os envolve, ou seja, depende
da diferença de densidade entre as células e o plasma. É, no entanto, um exame bastante
inespecífico no diagnóstico de patologias, usado apenas como auxiliar de diagnóstico,
tratamento e acompanhamento de diversas condições clínicas, tais como:
 mieloma múltiplo
 leucemias
 doenças inflamatórias ou infeciosas
 artrite reumatoide(22).
Valores de referência da VSG (Quadro 5)

Os valores para a primeira hora são normalmente entre:
 1 a 10 para o homem
 1 a 15 para as mulheres
Em condições patológicas, estes valores podem aumentar até 100 ou um valor
superior(22).
28
Quadro 5 Valores de referência da VSG(22)
Sexo Valores de referência

1ª hora: 1-10 mm
Masculino
2ª hora: 1-20 mm
1ª hora: 1-15 mm
Feminino
2ª hora: 1-30 mm
Mielograma
O aspirado medular é conseguido com a colheita de células da MO através de uma

punção óssea. Este procedimento médico é efetuado normalmente no externo ou na crista ilíaca
(figura 18). O local da punção é desinfetado com um antissético local (solução alcoólica
corada), e é administrado um anestésico local (lidocaína). Quando a anestesia está completa, o
médico retira a amostra de aspirado medular através de uma agulha e seringa próprias.
Figura 18 Locais de colheita do aspirado medular(44).
O mielograma é um exame que avalia e quantifica as células hematopoiéticas na medula

óssea (células produtoras das células sanguíneas: eritrócitos, leucócitos e plaquetas), A obtenção
de medula óssea em pacientes pediátricos realiza-se em colaboração com o serviço de
Anestesia.
Após a obtenção do aspirado medular, os esfregaços de medula óssea realizados no ato
da colheita e os respetivos tubos com a medula óssea são enviados até ao laboratório de
29
Hematologia. Prepara-se um envelope para cada requisição devidamente identificado com o

número de IPO do paciente e o nome. Escolhem-se as duas lâminas de melhor qualidade para
serem coradas pela coloração de Wright enquanto que as restantes são colocadas logo no
envelope. As lâminas escolhidas são coradas duas vezes (pela unidade SP-10 do Sysmex XN-
9000TM e pelo Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge) e posteriormente colocadas
no envelope juntamente com as outras não coradas. À amostra de MO presente no tubo que
chega juntamente com as lâminas é feita uma diluição de 1:7 com o reagente CellPack CFL e
processada no módulo XN-20 do equipamento XN-9000TM, no modo pre-dilution.
É importante também referir que sempre que for justificável, podem-se efetuar
colorações citoquímicas e/ou citoenzimáticas nas lâminas disponíveis do doente (envelope).
Após a análise do mielogramas, os esfregaços da MO são arquivados (por data de
realização do aspirado medular e nº do processo do doente) e posteriormente é realizada uma
montagem com o meio fixador e preservador de células Entellan. Os relatórios (em papel e
eletrónicos) dos mielogramas são arquivados, para posterior consulta, caso seja necessário.
Colorações citoquímicas
A finalidade da coloração é dar cor a diferentes estruturas que compõem os tecidos(45).
As técnicas de coloração citoquímica e citoenzimática permitem que se obtenham informações
relevantes para uma correta distinção das várias linhagens celulares, de bastante utilidade para o
diagnóstico das doenças hemato oncológicas(12,17,44).
Ácido Periódico de Schiff (PAS)
A técnica de coloração Ácido Periódico de Schiff é muito útil para a identificação de

hidratos de carbono, particularmente o glicogénio, frequentemente encontrado em células
hematopoiéticas(46). O principal objetivo desta coloração é auxiliar no diagnóstico diferencial de
leucemias da linhagem linfoide e eritroleucemias(47). Quando tratados com ácido periódico, os
glicóis são oxidados a aldeídos. Esta reação com o reagente de Schiff leva à libertação de um
composto, que cora de vermelho todos os componentes celulares que contenham glicol(48). Os
linfoblastos e os granulócitos (principalmente os neutrófilos) possuem níveis elevados de
glicogénio, sendo considerados PAS positivos(49,50) (figura 19).
30
Figura 19 Exemplo de coloração PAS(46).
Mieloperoxidase (MPO)
A mieloperoxidase é uma enzima (peroxidase) que catalisa oxidação de substratos pelo

H2O2. Quando se incuba esta enzima com H2O2, p-fenilenodiamina e catecol, forma-se um
produto castanho-negro insolúvel(figura 20)(45). A coloração de mieloperoxidase baseia-se
precisamente nessa reação, pondo assim em evidência as peroxidases existentes nos grânulos
dos neutrófilos, eosinófilos e precursores de basófilos(51). Deste modo, este tipo de coloração é
útil no diagnóstico de leucemias da linhagem mieloide. As granulações das células mieloides
apresentam-se coradas de castanho-negro. As células linfoides, como os linfoblastos, são
mieloperoxidase negativas(48).
Figura 20 Exemplo de coloração MPO, em células mieloides(52).
Fosfatase Alcalina de Leucócitos (LAP)
A fosfatase alcalina dos leucócitos está presente nos grânulos dos neutrófilos. Esta
enzima hidrolisa substratos contendo fosfato em produtos com capacidade de se ligar
fortemente aos corantes usados nesta técnica de coloração. Assim, a atividade da enzima esta
diretamente relacionada com o tamanho e intensidade da cor dos grânulos observados no
esfregaço (SP ou MO), ao microscópio ótico.
31
Esta técnica de coloração assume um papel importante no diagnostico dos síndromes

mieloproliferativos, especialmente na diferenciação da leucemia mieloide cronica das reações
leucemóides, onde a atividade da LAP é alta.
Ferro (Perls)
Esta técnica de coloração baseia-se na reação de azul da Prússia em que o ferrocianeto

ácido reage com o ferro iónico da hemossiderina, originando ferrocianeto férrico que cora
intensamente de azul. No laboratório de hematologia, o seu principal objetivo é detetar os
sideroblastos (eritroblastos com grânulos de ferro que coram de azul à volta do núcleo (figura 8)
e siderócitos (eritrócitos anucleados contendo pelo menos um grânulo corado de azul, ferro e
retículo endotelial) nos esfregaços de SP e MO(4,8,50). A prática laboratorial desta técnica auxilia
no diagnóstico de anemias sideroblásticas, megaloblásticas e talassemias major(9,45). A anemia
sideroblástica é definida pela presença de sideroblastos patológicos, sideroblastos em anel, na
medula óssea(47,49).
Figura 21 Exemplo de coloração de Perls em esfregaço de SP(53).
Naftol AS-D Cloroaceteto Esterase
A coloração de Naftol AS-D Cloraceteto Esterase (figura 22) põe em evidência esterases
celulares típicas dos granulócitos (principalmente neutrófilos e dos seus precursores). Nos
linfócitos e monócitos estas enzimas encontram-se praticamente ausentes(7,8,17). A técnica
baseia-se na incubação de esfregaços sanguíneos com a enzima, na presença de um sal diazónio
estável, havendo hidrólise enzimática das ligações éster, com libertação de compostos de naftol
livres. Estes compostos, quando ligados ao sal diazónio, originam precipitados com coloração
vermelha. A sua utilidade no diagnóstico consiste em distinguir granulócitos de agranulócitos e
efetuar uma caracterização rápida de leucemias agudas.
32
Figura 22 Exemplo de coloração Naftol AS-D Cloroaceteto Esterase(54).
α-Naftil Acetato Esterase
A coloração de α-Naftil Acetato Esterase põe em evidência esterases celulares típicas de

monócitos, macrófagos e megacariócitos, as quais se encontram praticamente ausentes em
granulócitos. A mesma baseia-se na incubação de esfregaços sanguíneos com a enzima, na
presença de um sal diazónio estável, e na hidrólise enzimática das ligações de éster, responsável
pela libertação de compostos de naftil livres. Estes compostos, quando acoplados ao sal
diazónio,
originam precipitados granulares com coloração negra, permitindo distinguir agranulócitos de
granulócitos e efetuar uma caracterização rápida de leucemias agudas.
Fosfatase Ácida (FA) resistente ao tartarato
A coloração de FA demonstra a atividade desta enzima em diversas células

hematopoiéticas, granulócitos e seus precursores, monócitos e megacariócitos. As duas
aplicações desta reação no diagnóstico são:
 diagnóstico de tricoleucemias (Hairy Cell Leukemia);
 leucemias da linhagem T (particularmente a LLA de linhagem T).
A FA das “hairy cells” é caracteristicamente resistente ao tartarato, enquanto que a FA
das outras leucemias é sensível à inibição pelo tartarato.
A atividade da FA geralmente é mais forte nas leucemias agudas e crónicas da linhagem
T do que nas da linhagem B, nas quais é frequentemente negativa(45,55,19).
α-Naftil Butirato Esterase
A esterase não específica, α-naftil butirato esterase, é usada para identificar células da
linhagem monocítica. Esta enzima é detetada principalmente nos monócitos e seus percursores,
e os locais onde apresenta elevada atividade apresentam grânulos de cor castanha-escura. As
esterases constituem uma referência conveniente para o diagnóstico diferencial de LMA, uma
33
vez que permitem distinguir células da linhagem granulocítica da linhagem monocítica.
Controlo da Qualidade
O laboratório de análises clínicas deve assegurar que os resultados produzidos reflitam,
de forma fidedigna e consistente, a situação clínica apresentada pelos pacientes, assegurando
que não representem o resultado de alguma interferência no processo.
O Programa de Controlo de Qualidade é o conjunto de técnicas e procedimentos que
permitem, de modo contínuo, avaliar o desempenho laboratorial. Compreende técnicas
quantitativas que monitorizam fontes de erro, avaliam a magnitude desses erros e alertam o
laboratório sempre que se verifica uma deterioração da qualidade dos resultados.
A validação dos resultados analíticos implica o cumprimento de determinados princípios
de boas práticas laboratoriais. O laboratório de hematologia do IPO Porto possui um sistema de
qualidade que engloba um conjunto de procedimentos de controlo de qualidade interno e está
também inserido em programas de controlo de qualidade externo.
Controlo da Qualidade Interno (CQI)
O CQI é um conjunto de procedimentos realizados no laboratório de forma a assegurar

uma avaliação contínua do seu trabalho analítico. O seu principal objetivo é garantir a
consistência dos resultados diários e a sua conformidade com os critérios definidos. Este tipo de
controlo é necessário para mitigar ou eliminar ou interferências, monitorizar, controlar, corrigir,
melhorar e normalizar os processos de análise operados no laboratório.
No serviço de Hematologia do IPO existem três níveis de CQI:
 Baixo
 Médio/Normal
 Alto.
Estes controlos são processados diariamente, no início e a meio da rotina laboratorial. A
verificação dos seus resultados é feita através das cartas de controlo (cartas de Levey-Jennings),
e as regras de Westgard devem ser sempre cumpridas para se poder prosseguir com a análise
das amostras.
34
Controlo da Qualidade Externo (CQE)
O CQE é um programa de avaliação interlaboratorial em que é necessária a intervenção

de terceiros, entidades exteriores ao laboratório, para avaliar os resultados fornecidos pelo
laboratório após a análise de um espécime enviado pela entidade exterior.
O laboratório de Hematologia do IPO participa em dois programas de avaliação externa
da qualidade (figura 23):
 UK NEQAS (United Kingdom National External Quality Assessment Service)
 INSA (Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge)
Figura 23 Programas de CQE em que o laboratório de hematologia do IPO participa(56,57).
UK NEQAS
É um projeto internacional supervisionado pela instituição britânica UK NEQAS. Neste

programa são enviadas amostras, com uma frequência programada, aos laboratórios
participantes. Cada laboratório procede as análises e envia os respetivos resultados à instituição
organizadora. Os resultados dos diferentes laboratórios são então comparados e são enviados
relatórios objetivos e imparciais sobre o desempenho do laboratório, permitindo-lhe tomar
consciência de determinados erros e assim adotar medidas corretivas adequadas(58).
INSA
O laboratório de Hematologia do IPO também participa no Programa Nacional de

Avaliação Externa da Qualidade organizado e supervisionado pelo INSA. Este programa
funciona de forma semelhante ao anterior e os seus principais objetivos são:
 melhorar a performance do laboratório;
 comparar o estado da arte a nível nacional;
 aumentar o nível da qualidade laboratorial;
 Permitir o cálculo do erro total admissível;
 Aumentar o nível técnico na área da hematologia(59).
35
Conclusão
O estágio em Hematologia laboratorial no IPOFG foi uma experiência muito gratificante

uma vez que me permitiu estar em contacto com profissionais competentes e sempre
disponíveis, que muito contribuíram para a minha integração no ambiente de trabalho do
laboratório, apoiando-me na execução das tarefas que me foram confiadas, e esclarecendo
sempre pedagógica e atenciosamente todas as dúvidas colocadas. A estes profissionais quero,
portanto, agradecer por todos os motivos já referidos e ainda pelo facto de sempre me terem
incutido uma boa conduta profissional assim como sentido de responsabilidade e
consciencialização que muito se exige num laboratório de análises clínicas ao nível hospitalar.
Os objetivos inicialmente propostos foram atingidos. Os conhecimentos adquiridos nas
aulas puderam ser aplicados e aprofundados, outros conhecimentos novos foram adquiridos e
inúmeros casos práticos puderam ser presenciados e seguidos.
De um modo geral, considero o estágio que realizei muito positivo, uma vez que tive a
oportunidade de continuar a aprender, adquirir competências e aplicar os conhecimentos
adquiridos ao longo do percurso académico.
36
Referências Bibliográficas
1. IPO-Porto. IPO-Porto Uma Instituição de Topo. http://www.ipoporto.pt/.
2. IPO. IPO-Porto História [Internet]. http://www.ipoporto.pt/. [cited 2017 Jan 15]. Available from:
http://www.ipoporto.pt/sobre/historia/
3. Serviço de Hematologia Laboratorial | IPO-PORTO [Internet]. [cited 2017 Feb 21]. Available
from: http://www.ipoporto.pt/servico/hematologia-laboratorial/
4. Ciesla B. Hematology in Practice. Philadelphia: F. A. Davis Company; 2007.
5. Lorenzi T. Manual de Hematologia: Propedêutica e Clínica. 4th ed. Guanabara Koogan; 2006.
6. Ridley J. Essencials of Clinical Laboratory Science. New York: Delmar Cengage Learning; 2011.
7. Hoffbrand A, Moss P, Pettit J. Essencial Haematology. 5th ed. Blackwell Publishing; 2006.
8. Beck N. Diagnostic Hematology. London: Springer-Verlag; 2009.
9. Greer JP, Arber DA, Glader B, List AF, Means RT, Paraskevas F, et al. Wintrobe’s Clinical
Hematology. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 2004.
10. Theml H, Diem H, Haferlach T. Color atlas of hematology: practical microscopic and clinical
diagnosis. 2nd ed. Stuttgart: Thieme; 2004.
11. Howard M, Hamilton P. Haematology: An Illustrated Colour Text. 4th ed. Churchill Livingstone
Elsevier; 2013.
12. Tkachuk D, Hirschmann J. Wintrobe’s Atlas of Clinical Hematology. Lippincott Williams &
Wilkins; 2007.
13. Hillyer C, Shaz B, Zimring J, Abshire T. Transfusion Medicine and Hemostasis: Clinical and
Laboratory Aspects. Elsevier; 2009.
14. Hoffbrand V, Moss P, Pettit J. Essential Haematology. Blackwell Publishing Ltd; 2006.
15. Reizenstein P. Atlas of clinical hematology [Internet]. Vol. 16, Leukemia Research. 1992. 1133-
1134 p. Available from: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/014521269290055C
16. Serra C. Apontamentos aulas práticas hematologia.
17. Hughes-Jones NC, Wickramasinghe SN. Lecture Notes on Haematology. 1996. 277 p.
37
18. Transfusion medicine and hemostase.
19. Saxema R, Pati H, Mahapatra M. Atlas of Hematology. New Delhi: Jaypee Brothers Medical
Publishers (P) Ltd; 2012.
20. Wilson J. Hematology [Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available from:
https://pt.pinterest.com/joycewilson09/hematology/
21. Hoffbrand A, Catovsky D, Tuddenham E. Postgraduate Haematology Hoffbrand. 5th ed.

Blackwell Publishing Ltd; 2005.
22. Serviço de Hematologia Laboratorial. Manual de Procedimentos. IPO-Porto;
23. Νormal Bone Marrow: Anatomy, Function, Conversion, and Reconversion | Radiology Key
[Internet]. [cited 2017 Jan 27]. Available from: http://radiologykey.com/νormal-bone-marrow-
anatomy-function-conversion-and-reconversion/
24. Gizmo Supply Professional Neubauer Hemocytometer Blood Count with Doub | Gizmo Supply
Co. [Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available from:
https://www.gizmosupplyco.com/products/gizmo-supply-professional-neubauer-hemacytometer-
blood-count-with-double-counting-chamber
25. Roche Diagnóstica Brasil Ltda. Analisadores Hematológicos Automatizados Sysmex Série-
XNTM: Novo Design. Novas Possibilidades. São Paulo: Roche Diagnóstica Brasil Ltda.; 2014.
26. Sysmex. Tecnologia e Parâmetros Clínicos Avançados: Analisadores Hematológicos

Automatizados Série-XN. Sysmex América Latina & Caribe; 2012.
27. Sysmex. Cell Image Analysis [Internet]. www.sysmex.com. 2017 [cited 2017 Jan 21]. Available
from: https://www.sysmex.com/la/pt/Products/Hematology/CellImageAnalysis/Pages/Cell-
Image-Analysis.aspx
28. CORNET E, PEROL J-P, TROUSSARD X. Performance evaluation and relevance of the
CellaVisionTM DM96 system in routine analysis and in patients with malignant hematological
diseases. Int J Lab Hematol [Internet]. 2007 Dec 7 [cited 2017 Jan 22];30(6):536–42. Available
from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18983307
29. Surcouf C, Delaune D, Samson T, Foissaud V. Analyse d’image en cytologie hématologique :

automate CellaVision DM96TM. Ann Biol Clin (Paris). 2009;67(4):419–24.
30. Naugler C, Wood B, Lee L, Mansoor A, Nelson H, Higa D. Performance of CellaVision DM96
38
in leukocyte classification. J Pathol Inform [Internet]. 2013 [cited 2017 Jan 22];4(1):14.
Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23858389
31. Horn CL, Mansoor A, Wood B, Nelson H, Higa D, Lee LH, et al. Performance of the
CellaVision(®) DM96 system for detecting red blood cell morphologic abnormalities. J Pathol
Inform [Internet]. 2015 [cited 2017 Jan 22];6:11. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25774322
32. Vyttra Diagnósticos. Ves matic 30 [Internet]. [cited 2017 Jan 28]. Available from:
http://www.vyttra.com.br/equipamento/vhs/ves-matic-30
33. Diesse. Instruments - Diesse Diagnostica Senese Spa [Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available
from: http://www.diesse.it/en/Instruments/linea:43/
34. MedWrech. Wescor - Aerospray 7120 Community, Manuals and Specifications | MedWrench
[Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available from:
https://www.medwrench.com/equipment/1476/wescor-aerospray-7120
35. Microvette. Capillary blood collection tube / conical / polypropylene / with clot activator -
Microvette® 200 Z, Microvette® 100 Z - Sarstedt [Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available
from: http://www.medicalexpo.com/prod/sarstedt/product-69921-644751.html
36. Carla Serra. Protocolos da disciplina de Hematologia Prática.
37. Centro de Ensino e Aperfeiçoamento Profissional - CENAPRO [Internet]. [cited 2017 Feb 24].
Available from: http://cenapro.com.br/noticias-detalhes.asp?codigo=333
38. The McGraw-Hill Companies I. Chapter 18 Anatomy & Phisiology [Internet]. [cited 2017 Feb
24]. Available from: http://slideplayer.com/slide/4494539/
39. Hopkins T. Lab Notes: Guide to Lab and Diagnostic Tests. Philadelphia: F.A. Davis; 2005.
40. Morphology of Blood Disorders.
41. H. Franklin Bunn M, Jon C. Aster, MD P. Pathophysiology of Blood Disorders. The McGraw-
Hill Companies, Inc; 2011.
42. Retikulozyt - Definition - gesundheit.de [Internet]. [cited 2017 Feb 24]. Available from:
https://www.gesundheit.de/lexika/medizin-lexikon/retikulozyt
43. Santos V. dos, Cunha SF de C da, Cunha D. da. Velocidade de sedimentação das hemácias :
39
utilidade e limitações. Rev Assoc Med Bras. 2000;46(3):232–6.
44. Turgeon ML. Clinical Hematology Procedures. 2005. 82 p.
45. Técnicas de Coloração - Laboratório Online - FCiências [Internet]. [cited 2017 Feb 22].
Available from: http://www.fciencias.com/2014/06/26/tecnicas-de-coloracao/
46. Boold Online: Stains [Internet]. [cited 2017 Feb 22]. Available from:
http://www.new.bloodline.net/imageatlas/stains/
47. Smith MD. Clinical haematology. Vol. 1, Lancet. 1969. 1156-1157 p.
48. Fischbach FT, Dunning MB. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests. Vol. 40. 2015. 1280
p.
49. Provan D. Oxford Handbook of Clinical Haematology [Internet]. Vol. 98, Medicine. 2009. 920 p.
Available from: http://ohclhaem.oxfordmedicine.com/
50. Erber W. Diagnostic Techniques in Hematological Malignancies [Internet]. Vol. 11. Cambridge
University Press; 2010. Available from:
https://books.google.com/books?id=4kyLvR96I3MC&pgis=1
51. Kottke-Marchant K, Davis B. Laboratory Hematology Practice. Blackwell Publishing ; 2012.
52. High power histological slide showing pleomorphic cells with... - Figure 5 of 6 [Internet]. [cited
2017 Feb 23]. Available from: https://www.researchgate.net/figure/265095962_fig3_Figure-5-
High-power-histological-slide-showing-pleomorphic-cells-with-scanty-cytoplasm
53. Bacal NS, Guerra JCC, Lázaro RJ, Ioshida MR, Takihi IY, Rosenfeld LGM, et al. Avaliação da
importância da coloração de Perls na rotina de mielogramas de pacientes com anemia associada a
uma ou mais citopenias em sangue periférico. Rev Bras Hematol Hemoter [Internet]. 2005 Jun
[cited 2017 Feb 23];27(2):91–3. Available from:
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-
84842005000200007&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt
54. Naphthol AS-D Chloroacetate (Specific Esterase) Kit | Sigma-Aldrich [Internet]. [cited 2017 Feb
23]. Available from:
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/91c?lang=pt&region=PT&cm_sp=Insite-_-
prodRecCold_xviews-_-prodRecCold10-3
55. McKenzie S. Clinical Laboratory Hematology. 2nd ed. Pearson;
40
56. INSA - Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge [Internet]. [cited 2017 Feb 23].
Available from: http://www.insa.pt/
57. United Kingdom National External Quality Assessment Service (UK NEQAS) - Group Website
http://www.ukneqas.org.uk/content/Pageserver.asp
58. United Kingdom National External Quality Assessment Service (UK NEQAS) - Group Website
http://www.ukneqas.org.uk/content/PageServer.asp?S=937057617&C=1252&AID=16&IID=4
59. Avaliação Externa da Qualidade Categoria - INSA [Internet]. [cited 2017 Feb 23]. Available
from: http://www.insa.min-saude.pt/category/servicos/avaliacao-externa-da-qualidade/
41

Hematologia

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Escola Superior de Saúde

Sérgio José Pinto Teixeira

ÍNDICE GERAL ....................................................................................................................................................... II

ÍNDICE DE FIGURAS ............................................................................................................................................. IV

VELOCIDADE DE SEDIMENTAÇÃO GLOBULAR..................................................................................................................... 27

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................................................................... 37

Figura 1. Localização da hematopoiese ao longo dos anos de vida --------------------------------------------4

Figura 2. Modelo de linhagens celulares na hematopoiese ------------------------------------------------------4

Figura 3 Esquema representativo das células sanguíneas -------------------------------------------------------7

Figura 4. Representação esquemática da estrutura típica da medula óssea ----------------------------------10

Figura 5. Câmara de Neubauer ------------------------------------------------------------------------------------13

Figura 6. Equipamento automático Sysmex XN-9000TM -----------------------------------------------------13

Figura 8. Equipamento CellaVision® DM96 --------------------------------------------------------------------17

Figura 9. Ves-Matic 30 ---------------------------------------------------------------------------------------------18

Figura 10. Tubos Diesse --------------------------------------------------------------------------------------------18

Figura 11. Equipamento Aerospray Hematology Slide Stainer/Cytocentrifuge ----------------------------18

Figura 12. Representação esquemática da contagem diferencial de leucócitos, em castelo ---------------19

Figura 13. Representação esquemática dos diferentes subtipos leucocitários -------------------------------20

Figura 14. Ilustração da realização de um esfregaço sanguíneo -----------------------------------------------22

Figura 15. Reticulócitos, evidenciando a substância grânulofilamentosa, e eritrócitos maduros. -------23

Figura 16. Lancetas BD microtainer® para picada digital -----------------------------------------------------26

Figura 17. Exemplo de tubos microvette para punção digital -------------------------------------------------27

Figura 18. Locais de colheita do aspirado medular -------------------------------------------------------------29

Figura 19. Exemplo de coloração PAS ---------------------------------------------------------------------------31

Figura 20. Exemplo de coloração MPO, em células mieloides ------------------------------------------------31

Figura 21. Exemplo de coloração de Perls em esfregaço de SP -----------------------------------------------32

Figura 22. Exemplo de coloração Naftol AS-D Cloroaceteto Esterase --------------------------------------33

Quadro 2. Metodologias usadas no funcionamento do analisador automático Sysmex XN 9000 --------14

Quadro 3. Distribuição dos parâmetros analisados no equipamento Sysmex XN-9000TM ---------------16

Quadro 4 Associação de algumas patologias com alterações leucocitárias ---------------------------------21

Quadro 5. Valores de referência da VSG ------------------------------------------------------------------------29

IPO – Instituto Português de Oncologia

Caraterização da Instituição Acolhedora – IPO Porto

O Centro do Porto do Instituto Português de Oncologia (IPO) Francisco Gentil iniciou as

Diagnóstico Laboratorial do IPO-Porto e é composto por duas áreas distintas que se

 contactar com os equipamentos usados em Hematologia (XN

Enquadramento Teórico – Hematologia

Figura 1 Localização da hematopoiese ao longo dos anos de vida(11).

Figura 2 Modelo de linhagens celulares na hematopoiese(10).

Os eritrócitos são originados num processo que se denomina eritropoiese a partir da

Morfologia e função das células sanguíneas

Os eritrócitos (figura 3) são células anucleadas em forma de disco bicôncavo, o seu

Os neutrófilos (figura 3) possuem núcleo segmentado (4 a 5 lóbulos). O seu citoplasma é

Os eosinófilos (figura 3) intervêm na regulação da reação inflamatória alérgica e

Os basófilos (figura 3) são responsáveis por libertar mediadores da inflamação (heparina

Os monócitos têm um núcleo ovóide ou riniforme com coloração basófila (lilás).

Figura 3 Esquema representativo das células sanguíneas(20).

Caso o MCHC apresente valores superiores a 37,5g/dL, deve-se colocar a amostra na

Aspirado medular (medula óssea)

Figura 4 Representação esquemática da estrutura típica da medula óssea(23).

 doença residual mínima;

Fragmento de medula óssea

Aspirado branco, normalmente em patologias associadas a fibrose:

Figura 5 Câmara de Neubauer(24).

Figura 6 Equipamento automático Sysmex XN-9000TM(25).

 1 unidade distribuidora de tubos TS-500: arquiva e separa os tubos de acordo

Figura 7 Líquidos biológicos passíveis de ser analisados

As metodologias utilizadas pelo equipamento Sysmex XN 9000TM encontram-se

Quadro 2. Metodologias usadas no funcionamento do analisador automático Sysmex XN 9000T M(26).

Impedância e foco hidrodinâmico Contagem de eritrócitos

Método de Sulfato Lauril de Sódio, Hemoglobina

Após o processamento dos hemogramas as “racks” com as amostras são encaminhadas

Esta unidade arquiva ou separa os tubos com as amostras de sangue periférico, de

Quadro 3 Distribuição dos parâmetros analisados no equipamento Sysmex XN-9000TM(22).

29. Surcouf C, Delaune D, Samson T, Foissaud V. Analyse d’image en cytologie hématologique :