PROYECTO DE AULA: ANTISEPTICOS Y DESINFECTANTES

MICROBIOLOGIA

OBJETIVOS

Objetivo general

Evaluar la sensibilidad de los microorganismos aislados de cada muestra para comprobar el

efecto potencial de los antisépticos y desinfectantes

Objetivos específicos

 Evaluar el efecto de desinfectantes utilizados de uso diario sobre el crecimiento

microbiano.

 Determinar los efectos de la sensibilidad microbiana en los desinfectantes y antisépticos

comparando distintas marcas comerciales.

 Evaluar el mecanismo de acción de desinfectantes y antisépticos para el control

microbiano bajo ciertos efectos.
 MATERIALES

 Agar nutritivo
 Solución salina
 Desinfectantes
 Antisépticos
 Hisopos o escobillones estériles
 Sensidiscos de papel filtro estériles
 Asa bacteriológica
 Mechero
 Guantes
 Pinzas estériles
 Incubadora

METODOLOGIA

Con un hisopo estéril se tomó la muestra frotis vaginal, frotis de garganta, herida tomada del
muslo grande que envuelve al fémur en la parte superior de la pierna y en superficies
inanimadas como la manija de un taxi, después se transportó la muestra al laboratorio mediante
un tubo con solución salina estéril. Luego, se encendió el mechero y se retiró la tapa de la caja de
Petri que contenía agar nutritivo. Seguidamente se sembró cada muestra con ayuda de un hisopo
mediante la técnica de siembra masiva. Para la muestra de piel, se pasaron las yemas de los
dedos sobre las superficies del agar. Después, con la ayuda de la pinza estéril se tomó uno de los
sensidisco de papel filtro estéril e impregnó en la solución de cada desinfectante y antiséptico. Se
colocó el sensidisco impregnado sobre la superficie del agar. Se incubaron las cajas de Petri en
posición invertida a 37°C durante 48 horas.

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 RESULTADOS

TABLAS

Antiséptico o Resultados
Medio de cultivo Muestra desinfectante macroscópicos
Frotis vaginal Jabón intimo Mayor Inhibición
Supragel vencido Sin Inhibición
Frotis de piel Supragel Mayor Inhibición
Agar nutritivo Gel antibacterial Poca Inhibición
Frotis de herida Isodine solución Mayor Inhibición
Frotis de garganta Isodine Bucofaríngea Mayor inhibición
Frotis de manija Hipoclorito de sodio Inhibición
Tabla 1. Efectos de los antisépticos y desinfectante sobre las muestras .

GRAFICAS

Ilustración 2. Sensibilidad de los microrganismos

presentes en la muestra de frotis vaginal con el
antiséptico jabón intimo por el anverso
Ilustración 1. Sensibilidad de los microrganismos
presentes en la muestra de frotis vaginal con el
antiséptico jabón intimo por el reverso.

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Ilustración 3. Sensibilidad de los microrganismos Ilustración 5. Sensibilidad de los microrganismos
presentes en la muestra de frotis inanimado con el presentes en la muestra de frotis de garganta con el
desinfectante por anverso antiséptico por anverso

Ilustración 4. Sensibilidad de los microrganismos Ilustración 6. Sensibilidad de los microrganismos

presentes en la muestra de frotis inanimado con el presentes en la muestra de frotis de garganta con el
desinfectante por reverso antiséptico por reverso

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Ilustración 7. Sensibilidad de los microrganismos
presentes en la muestra de frotis de piel con el
antiséptico supragel en las dos primeros sensidiscos
uno vencido y el otro normal y gel antibacterial por
anverso
Ilustración 9. Sensibilidad de los microrganismos
presentes en la muestra de frotis de herida con el
antiséptico isodine solución por anverso

Ilustración 8. Sensibilidad de los microrganismos

Ilustración 10. Sensibilidad de los microrganismos
presentes en la muestra de frotis de piel con el
presentes en la muestra de frotis de herida con el
antiséptico supragel en las dos primeros sensidiscos
antiséptico isodine solución por reverso
uno vencido y el otro normal y gel antibacterial por
reverso

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 ANALISIS DE RESULTADOS
El agar nutritivo es un medio de
cultivo no selectivo utilizado para propósitos
generales, para el aislamiento
microorganismos con escasos requerimien-
tos nutricionales. El medio contiene una
formula en gramos por litro de extracto de
carne 3.0, pluripeptona 5.0, Cloruro de sodio
8.0 y agar 15.0 siendo una formula
suficiente para el desarrollo de
microrganismos. No contiene inhibidores del
desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la
fuente de desarrolló bacteriano y tiene un pH
final de 7.3± 0.2. (Britania)
El medio de cultivo en el cual se
sembraron las muestras de cada frotis fue
agar nutritivo. Se utilizó este medio de
cultivo con la intención de que los
microorganismos de aquella microbiota
transitoria o residente crecieran al tener los
nutrientes necesarios y no ser inhibidos ya
que este es un medio de cultivo no selectivo.
Los antisépticos son sustancias
empleadas en tejidos vivos, que previenen o
impiden el crecimiento o la acción de los
microorganismos por inhibición de su
actividad o por la destrucción de ellos.
Deben reunir suficiente actividad
antimicrobiana y poseer una buena
tolerancia local y general. Los desinfectantes
son agentes antimicrobianos que se emplean
solamente sobre objetos inanimados o
medios inertes. Algunos son tóxicos
celulares protoplasmáticos con capacidad
de para destruir tejidos vivos. (Microbiología
estomatológica)
Considerando que los antisépticos se
emplean en los tejidos vivos, se realizó la
prueba de sensibilidad de los
microorganismos de frotis vaginal, de piel,
los de garganta y de una herida con antisépticos
como el jabón íntimo, gel antibacterial,
supragel, isodine bucofaríngeo e isodine
solución. Al ser antisépticos comunes y
algunos de estos de uso diario con el fin de
comprobar su efectividad frente a los
microorganismos. Por otro lado, los
desinfectantes se emplean en objetos
inanimados por ello se decidió realizar una
muestra de frotis de manija de taxi para ser
evaluada con el desinfectante hipoclorito de
sodio, el cual es usado frecuentemente en los
hogares.
Hay que tener en cuenta que en el
proceso de desinfección no solo participan
los microorganismos y el agente químico
(desinfectante), sino que también intervienen
factores que afectan su actividad: el tipo de
agente microbiano o infeccioso, el tiempo de
contacto, la curva de muerte del agente
infeccioso, la temperatura, la concentración,

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el pH, la formulación o tipo de preparado y
la interferencia de sustancias en el medio
que actúen como barrera. (Microbiología
estomatológica)
De estos factores depende la potencia del
efecto de los antisépticos y desinfectantes
Evaluación de la sensibilidad de las
muestras a los antisépticos
 Frotis vaginal:
La muestra de frotis vaginal se inoculo en el
medio de cultivo agar nutritivo por la técnica
de siembra masiva. Macroscópicamente se
observaron colonias grandes de color crema
y pequeñas de color blanco, ambas de
consistencia cremosa. En cuanto a la
sensibilidad de los microorganismos al
antiséptico utilizado el cual fue jabón
íntimo, se apreció la formación de un
pequeño halo de inhibición alrededor del
sensidisco el cual se había impregnado con
el antiséptico.
El jabón intimo es un jabón especial para la
limpieza íntima que está conformado de
ácido láctico que favorece el crecimiento de
las células de defensa de la vagina llamados
lactobacilos y ayuda a mantener la acidez
normal de la vagina, ayuda a mantener el pH
acido óptimo para la zona intima, el pH es el
grado de acidez que defiende la zona intima
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de las agresiones externas, ayuda a controlar
los microorganismos que pueden causar
infecciones y malos olores, protege de
hongos o infecciones (Saba, 2014).
El antiséptico jabón íntimo utilizado para
analizar dicha muestra se realizó con la
intención de comprobar que efecto tenía
sobre los microorganismos de la microbiota
vaginal externa ya que es uno de los
antisépticos más usados por gran porcentaje
de las mujeres para su aseo personal.
se pudo observar un halo de inhibición en
los microorganismos formados, demos-
trando que el uso de este jabón en el
sensidisco ayudo a la inhibición de los
microorganismos. De esta manera mostran-
do la efectividad del jabón íntimo. Este
jabón favorece el crecimiento de
Lactobacillus spp, pero al parecer estos no
se encontraron en los microorganismos
aislados porque de otra forma estos hubiesen
crecido en el sensidisco o cerca a esta zona
 Frotis de piel:
La muestra de frotis de piel se inoculo con la
yema de los dedos pasándolos por el medio
de cultivo agar nutritivo. Macroscó-
picamente se observaron colonias de
diferente tamaño de color amarillo, naranja,
blanco y crema, todas de consistencia
cremosa. Los dos antisépticos utilizados En la práctica de laboratorio se
para evaluar la sensibilidad de los evaluó el efecto del antiséptico gel
microorganismos presentes en la muestra antibacterial con los microorganismos
frotis de piel fueron el supragel y el gel presentes en las manos, estos
antibacterial. Para evaluar los efectos de la microorganismos pueden pertenecer a la
duración del producto se utilizó un supragel microbiota normal o transitoria de la piel ya
vencido y otro en buenas condiciones. que las manos mantienen en constante
En cuanto a la sensibilidad de los contacto con superficies inanimadas. Como
microorganismos al gel antibacterial resultado de dicha evaluación se obtuvo
presento poca inhibición esto quiere decir poca inhibición de microorganismos en la
que tuvo un pequeño halo de inhibición. Con zona donde se encontraba el sensidisco en
respecto al antiséptico supragel que se comparación con los demás desinfectantes,
encontraba vencido en la zona donde se lo que evidencia que el gel antibacterial no
encontraba el sensidisco creció una colonia es tan eficaz con cierto tipo de
encima de este, mientras que en el supragel microrganismos y/o bacterias, pero, hay
de buenas condiciones se apreció la otras causa que puede provocar este
formación de un pequeño halo de inhibición resultado ya que según Cárdenas “Los
alrededor del sensidisco el cual se había geles antibacteriales que contienen menos
impregnado con el antiséptico. del 60% de alcohol no tienen mucha
Las personas utilizan el gel efectividad y algunos pueden llegar a
antibacterial, ya que es un compuesto estimular la propagación de bacterias”. El
químico portátil, el cual no necesita agua gel antibacterial usado tenía menos cantidad
para utilizarse y es muy práctico en de alcohol, al haber menos alcohol menor
cualquier caso cotidiano que se presente. será la inhibición por lo que el mecanismo
Este producto es un buen antiséptico ya que de acción del alcohol es disolver lípidos y
elimina en gran porcentaje las colonias de desnaturalizar las proteínas. Por lo tanto, si
bacterias que habitan en la piel, gracias a sus se hubiese utilizado un gel antibacterial con
activos que en su mayoría son alcoholes una concentración de alcohol (60-85%) se
“Los principios activos en la mayoría de los hubiese evidenciado un halo de inhibición
geles sanitizantes son alcohol isopropílico, mayor.
etílico o propílico” (Martínez, 2014).

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 El antiséptico supragel es utilizado
especialmente en hospitales tanto para
visitantes, enfermos, enfermeras y los
mismos médicos, para que los
microorganismos que existen no lleguen a
heridas abiertas y propaguen enfermedades.
Es un antiséptico en gel para manos que
combina el poder de los dos microbicidas
más usados y reconocidos en antisepsia de
manos, la Clorhexidina y el Alcohol
Isopropílico, junto con agentes emolientes y
humectantes para brindar eficacia
microbicida superior cuidando y 
manteniendo la integridad de la piel. su
mecanismo de acción se basa en la
destrucción y precipitación de la membrana
celular por su alto contenido de
Clorhexidina, por otro lado, también se basa
en la desnaturalización de proteínas
celulares y en la disolución de lípidos esto es
gracias al contenido de alcohol, por lo tanto,
es un bacteriostático (Cárdenas, 2014)
En el caso del antiséptico supragel en
buenas condiciones (aun no vencido) se
presentó un halo de inhibición, esto debido a
que el supragel tiene un rápido efecto del
espectro del antimicrobiano del alcohol
isopropilico, además del mecanismo de
acción de la clorhexidina, por ello se
evidencio la eficacia del antiséptico al
evaluarlo con el frotis de piel.
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Al evaluar el supragel vencido en
esta muestra, no se evidencio halo de
inhibición, ya que según (Universidad
Católica de Chile) Los desinfectantes y
antisépticos deben usarse respetando las
instrucciones del fabricante respecto a
duración del producto, condiciones de
conservación, tiempo de contacto y dilución.
Lo anterior quiere decir que el antibiótico
deja de tener sus efectos potenciales al pasar
la duración del producto por ello su
mecanismo de acción no se hace eficaz.
Frotis de herida:
La muestra de herida fue tomada de
un paciente en el hospital universitario con
un hisopo y se transportó con una solución
salina hacia el laboratorio. Esta muestra se
inoculo mediante la técnica de siembra
masiva en agar nutritivo luego se impregno
el sensidisco con isodine solución.
Macroscópicamente se observó viraje en el
medio de cultivo agar nutritivo cambio de
amarillo a verde grisáceo al igual que las
colonias. Mostrando una posible
Pseudomonas spp, la cual fue vista
microscópicamente mostrando como
resultado una (Gram Negativa). Al observar
la zona donde se encontraba el sensidisco
impregnado del antiséptico isodine solución,
se apreció que no había colonias cerca al
sensidisco, como tal no se observó un gran
halo.
Uso en piel o mucosa, (isodine
solución antiséptica iodopovidona) es un
microbicida de acción inmediata
prolongada contra bacterias, virus, hongos y
protozoarios. Es un microbicida universal de
acción inmediata que se inicia 15 segundos
después de haberse aplicado y destruye
bacterias (Gram positivas y gramnegativos)
(BOEHRINGER, S.A).
 Frotis de garganta:
La muestra de garganta se inoculo en
el medio de cultivo agar nutritivo por la
técnica de siembra masiva.
Macroscópicamente se observaron colonias
pequeñas de color amarillo. En cuanto a la
sensibilidad de los microorganismos
presentes en la muestra de frotis de garganta
al antiséptico isodine bucofaríngeo, se
apreció la formación de un gran halo de
inhibición alrededor de la gota
antiséptico. Hay que tener en cuenta que una
gota del antiséptico alcanzo a caer en el
medio de cultivo por ello se presentó un halo
de ese tamaño y no se utilizó el sensidisco,
por el exceso de antiséptico.
Isodine Bucofaingeo es auxiliar en la
desinfección de boca y garganta, causadas
por bacterias Gram positivas y Gram
negativas, algunos virus y hongos. Además,
brinda una acción antiséptica inmediata
como: auxiliar en aftas, higiene bucal y
y halitosis por alcohol o tabaco. Es una
solución microbicida de acción inmediata
que destruye por oxidación proteínas
estructurales y enzimáticas de células
microbianas. Y prolongada, auxiliar en la
desinfección de boca y garganta causada por
bacterias, algunos virus y hongos. Su acción
se inicia en 15 segundos y ayuda a destruir
los microorganismos que se encuentran
comúnmente en boca y garganta (Informed
S.A).
Teniendo en cuenta que se rego una
gota de isodine bucofaríngea en el medio de
cultivo agar nutritivo donde se encontraba la
muestra de frotis de garganta el resultado
obtenido es que presento un halo de
inhibición mayor que los demás antisépticos
y desinfectante usados. El isodine
bucofaríngeo cumplió con su efectividad de
del antiséptico frente a la muestra tomada de
una de las compañeras con problemas en la
garganta, cumplió su mecanismo de acción
oxidando las proteínas estructurales de los
microorganismos allí presentes y
destruyéndolos. La concentración y la
cantidad fueron un factor determinante para
presenciar un halo de este tamaño.
10

Evaluación de la sensibilidad de la
muestra al desinfectante
 Frotis de manija de taxi:
La muestra del objeto inanimado (manija de
la puerta de taxi) se inoculo en el medio de
cultivo agar nutritivo por la técnica de
siembra masiva. Macroscópicamente se
observaron colonias de color amarillo,
naranja y crema, todas de consistencia
cremosa. Para evaluar la sensibilidad de los
microorganismos presentes en la muestra del
objeto inanimado se utilizó el desinfectante
hipoclorito de sodio. A pesar de que no se
vio un halo de inhibición, se evidencio en la
placa que las colonias no crecieron alrededor
del sensidisco lo que quiere decir que el
hipoclorito hizo efecto.
Según una investigación realizada
por la ONU las manos son la parte del
cuerpo más contaminada, y estas entran en
contacto con las perillas a diario, lo que
provoca que se localicen bacterias
transitorias, la mayoría de personas utilizan
el hipoclorito para desinfectarlas, pero, ¿que
permite al hipoclorito ser tan eficaz? Según
el microbiólogo Láñez “El efecto
desinfectante se debe a la liberación de cloro
libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el
agua para dar ácido hipocloroso, que a pH
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ácido o neutro es un oxidante fuerte y
destruye a las bacterias” (Láñes, 1998).
En la práctica del laboratorio se
evaluó el hipoclorito de sodio sobre los
microorganismos presentes en esta muestra
de frotis de manija de la puerta de un taxi;
como sabemos este objeto inanimado
mantiene en constante contacto tanto con la
piel como polvo, etc. Lo que da a lugar que
en él se encuentre microbiota transitoria y
por ello en el agar se halla observado
crecimiento de colonias.
Según Estrela y Cols “las acciones
del hipoclorito de sodio operan mediante
tres mecanismos: saponificación, donde
actúa como un solvente orgánico que
degrada los ácidos grasos hacia sales ácidas
grasosas (jabón) y glicerol (alcohol), reduce
la tensión superficial de la solución
remanente. Neutralización, donde el
hipoclorito de sodio neutraliza aminoácidos
formando agua y sal. Cloraminación, la
reacción entre el cloro y el grupo amino
forma cloraminas que interfieren en el
metabolismo celular. El cloro posee una
acción antimicrobiana inhibiendo enzimas
esenciales de las bacterias por medio de
oxidación.
Al evaluar el efecto del desinfectante
hipoclorito de sodio comúnmente llamado
cloro sobre la muestra se observó que no se la siembra de frotis de manija de taxi se hizo
hizo un halo de inhibición, simplemente las por la técnica de siembra masiva.
colonias no crecieron cerca al sensidisco. La
presencia de cloro en el ácido hipocloroso
interfiere en el metabolismo celular siendo
responsable de la acción bactericida que se
evidencio al no crecer colonias cerca de la
zona del sensidisco teniendo en cuenta que

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