Clase Infecciones Genitales

Curso ABA
Infecciones genitales
Prof. Dra. Angela Famiglietti

Laboratorio de Bacteriología Clínica
Departamento de Bioquímica Clínica
Hospital de Clínicas “José de San Martín
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Sífilis
HPV
Úlceras
Inf. GENITALES Herpes genital
genitales
LGV
Chancroide
Secreciones Granuloma inguinal
UG-UNG-UPG
Cervicitis mucopurulenta (CMP) / Inf. Asintomática
Vulvovaginitis
Vaginosis Bacteriana
INFECCIONES DEL
TRACTO GENITAL FEMENINO
Microorganismos del TGI según
la edad de la paciente
Recién nacido Lactobacillus spp
Pocas semanas después Corynebacterium spp-ECN-
Hasta pubertad Peptostreptococcus
Anaerobios-enterobacterias-
Candida spp
Pubertad hasta menopausia Lactobacillus spp

Postmenopausia Alta prevalencia de BGN
Postmenopausia Lactobacillus spp
(con tratamiento estrogénico)
Establecimiento y mantenimiento
de los lactobacilos
Ovario
Estrógeno / Progesterona
Células vaginales con estrógeno
Adhesión de Lactobacillus spp
Producción de ácido láctico
pH 3.8 – 4.5
Establecimiento y mantenimiento
de la flora vaginal normal
pH 3.8 – 4.5
Lactobacillus spp Enterobacterias

(L. crispatus y L. jensenii)
Producción de H2O2
(anaerobios G. vaginalis,
Mobiluncus, Streptococcus spp)
Microorganismos predominantes en
el TGI de mujeres adultas normales
Microorganismo Incidencia (%)

Lactobacillus spp 68
Staphylococcus coag. Neg. 66
Prevotella spp 62
Peptostreptococcus spp 42
Streptococcus spp 38
Micoplasmas 78
BGN anaerobios pigm. 25
Enterococcus spp 25
Gardnerella vaginalis 45
Escherichia coli 21
Corynebacterium spp 19
Fusobacterium spp 18
Veillonella spp 15
Candida spp 12
Bacteroides grupo fragilis 11
Microbiota normal
Infecciones del tracto genital femenino
Endógenas
Vaginosis bacteriana Complejo GAMm
Candidiasis vulvovaginal: Candida spp.
Vaginitis microbiana inespecífica
Portación por S. agalactiae
Infección por Mycoplasma spp y/o
Ureaplasma urealyticum
Exógenas
Gonorrea: Neisseria gonorrhoeae
Sífilis: Treponema pallidum
Tricomonosis: Trichomonas vaginalis
Chlamydia trachomatis
Virales
Infecciones cervicovaginales
Vaginitis Candida spp (20 – 35%)

(Inflamación de Trichomonas vaginalis (< 5%)
Mucosa vaginal) Otros (VMI)
Vaginosis bacteriana Complejo GAMm (20 - 30%)
Cervicitis Neisseria gonorrhoeae

(Inflamación del Chlamydia trachomatis
Cuello uterino) Otros
Microorganismos aislados del TGI
según grupo etario y en embarazadas
( Hospital de Clínicas)
Microorganismo ≤ 10 años Adolescentes Adultos Embarazadas
(21) (29) (105) (138)
Lactobacillus spp 0% 55 % 59 % 67 %
Corynebacterium spp 76 % 31 % 18 % 8%
Candida spp 5% 21 % 13 % 26 %
VB 0% 10 % 21% 25%
T. vaginalis 0% 3.5 % 0% 0.7 %
S. agalactiae 10 % 10 % 10 % 1.5 %
F. enterica 5% 3.5 % 1% 0.7 %
Shigella spp 10 % 0% 0% 0%
H. influenzae 5% 0% 0% 0%
Diagnóstico Microbiológico de las Infecciones del TGF
(Pre-Analítica)
Indicaciones para la paciente
Preferentemente período ovulatorio.
No relaciones sexuales 48-72 hs. antes.
No tratamiento ATB local ni oral 48-72 hs. antes.
No usar duchas vaginales / tampones o cosméticos íntimos 4 a 5
días antes.
Mujer embarazada: asintomática (control) → 2°trimestre.

Diagnóstico de laboratorio
en infecciones del TGI
B Gram → bacterias (vaginosis bacteriana)
Examen microscópico
A MGG → Trichomonas vaginalis
C Trichomonas vaginalis
O 1 ml de solución fisiológica → Fresco
Candida spp
V
A
Para casos de desbalance
1 Stuart → cultivo agar sangre humana del contenido vaginal (VMI)
37°C 48 hs 5% CO 2 y candidiasis recurrente
Cultivo medio líquido T. vaginalis
Determinaciones accesorias
pH
Fresco → Candida spp
1 ml KOH 10%
Test de aminas → vaginosis bacteriana
Candidiasis vulvovaginal (CV)
Manifestaciones clinicas
Asintomática Manifestación florida
Infección aguda
- Prurito perivaginal
- Disuria vulvar
- Escoriaciones en labio
- Pared perivaginal eritematosa
- Espesa blanca casosa
- Secreción vaginal clásica (< 20%)
- Fluida
- pH vaginal variable (< 4.5)
Asintomática: 50% (portación en menor cantidad)
Candidiasis vulvovaginal
Consideraciones generales
75 % de mujeres: 1 episodio en curso de la vida
40 - 50 %: 20 o mas episodios
5 % CV recuerrente: (> 3 episodios por año)
Rara: premenarca y postmenopausia
Candida spp: parte de la flora vaginal normal en
pequeño número
CV: infección del TGI de origen endógeno
Factores de riesgo para
la infección por Candida spp.
Periodo premenstrual
Embarazo
Anticonceptivos orales
Ropa estrecha y aislante
Terapia con corticoides
Tratamiento antibiótico
Diabetes
Candida spp
Evaluación de los microorganismos del TGI
en embarazadas HIV +
50 mujeres embarazadas HIV +

100 mujeres embarazadas HIV -
HIV – HIV +
Flora normal 52 % 18 %
Flora patógena 48 % 82 %
Candida spp 24% 52 %
G. vaginalis 19 % 20 %
T. vaginalis 5% 10 %
S. agalactiae 2% 4%
Mujeres embarazadas HIV + tienen mayor riesgo

de infección endógena por su inmunocompromiso
Tratamiento de Candidiasis Vaginal
(tópico y oral)
Nistatina (14 dias)
Imidazoles:
- Cotrimazol (7 dias)
- Ketoconazol (5 dias)
- Itraconazol (3 dias)
- Fluconazol (1 dia oral + 3 días tópico)
Infecciones recurrentes:
Azoles 10 - 14 dias + regimen de mantenimiento
por tres semanas
Prevalencia de distintas especies de Candida spp
en secreciones vaginales de mujeres embarazadas
y su sensibilidad frente a distintos antifúngicos
M. Garcia Heredia*, M. Tiraboschi**, S. Garcia, C. Vay, E. Coppolillo***, A. Famiglietti, De Torres R. A. RAM
En 139 / 493 (28 %) muestras estudiadas se
recuperó Candida spp. La edad promedio
de las pacientes fue 25 años.

Prevalencia de las distintas especies de
Candida spp
en exudados vaginales de mujeres embarazadas
N = 94
C. albicans
(90.4 %)
Candida spp
(1.1 %)
C. kefyr
C. glabrata (1.1 %)
(6.4 %)
C. parapsilosis
(1.1 %)
Identificación de las distintas especies de Candida
N° de Tubo Clamidosporo Chrom API Identificacion

muestras Germinativo Agar 32 C
61 Positivo Positivo NR NR C. albicans
11 Negativo Positivo Verde NR C. albicans
7 Positivo Negativo Verde NR C. albicans
6 Negativo Negativo Verde C. albicans C. albicans
6 Negativo Negativo Lila C. glabrata C. glabrata
1 Negativo Negativo Crema C. parapsilosis C. parapsilosis
1 Negativo Negativo Beige C. kefyr C. kefyr
1 Negativo Negativo Crema Candida spp Candida spp
NR: no realizado
Resistencia de los diferentes antiúngicos
en las especies de Candida
N° Resistencia / N° Total
Nistatina Fluconazol Ketoconazol Itraconazol
C. albicans (85) 0/85 0/85 0/85 0/85
C. glabrata (6) 0/6 1/6 1/6 1/6
C. kefyr (1) 0/1 0/1 0/1 0/1
Candida spp (1) 0/1 0/1 0/1 0/1
Total (94) 0/94 1/94 1/94 1/94
Conclusiones
C. albicans fue la especie predominante en las
secreciones genitales de mujeres embarazadas seguida de
C. glabrata
Todos los aislamientos de C. albicans fueron sensibles a
los antifúngicos probados.
C. glabrata mostró 16.6% de resistencia a fluconazol,

ketoconazol e itraconazol y no presentó resistencia a
nistatina
Se debe sospechar resistencia antifúngica si se recupera
C. glabrata
Vaginosis bacteriana (VB)
Desplazamiento flora normal
- Lactobacillus (productores de H2O2)
Reemplazada por el Complejo GAMm
- Gardnerella vaginalis
- Anaerobios (Prevotella, Porphyromonas, Peptostreptococcus)
- Mobiluncus (b - curvos)
- Mycoplasma hominis
Ausencia de RIV
Significado clínico
EPI, abortos
Partos prematuros (presencia de sialidasas, IL1-β)
RPM, corioamnionitis
Endometritis postparto
Fiebre puerperal
Sepsis neonatal
Factores de patogenicidad en VB
Proteasas (colagenasas, elastasas)
Fosfolipasas
Sialidasas
Factor quimiotáctico de PMN
Trimetilaminas
Raramente causa infección
Uretritis no gonocócica
Balanopostitis
Prostatitis
ITU
Diagnóstico de vaginosis bacteriana
Criterio clínico: presencia de 3 ó mas de los siguientes criterios:
- Flujo laxo y homogéneo
- pH ≥ 4.5
- Test de aminas positivo
- “Clue – cells”
Criterio de Nugent: evaluación microscópica en la coloración de Gram,
asignándose un score ≥ 7 cuando existe un predominio de flora cocobacilar y
ausencia de flora lactobacilar
Correccion de Lanzafame: Presencia de clue cells agrega 2 puntos al VN

Diagnóstico de VB
Interpretación del Gram (Nugent y col)
Morfotipos en el Gram “Score”

N°/campo de inmersión
0 1 2 3 4
Lactobacillus
30 5 a 30 1-4 <1 0
Gv y Bacteroides
0 <1 1-4 5 - 30 30
BGN curvos
Mobiluncus 0 1-4 5 - > 30 - -
Total de “Score” e interpretación (Nugent)
“Score” Interpretación
0- 3 Normal
Desbalance cont. vaginal

4–6
Vaginosis bacteriana
7 - 10
Criterio de Nugent
97 % Sensibilidad
100 % Especificidad
Vaginosis bacteriana (clue cells)
Tratamiento de vaginosis bacteriana
Metronidazol (curación 90%)
Clindamicina (embarazada)
DIAGNOSIS OF BACTERIAL VAGINOSIS
DURING PREGNANCY
Enrique Coppolillo, Beatriz Perazzi, Angela Famiglietti, Martha Cora Eliseht, Carlos Vay, Avelino Barata.
Journal of Lower Genital Tract Disease volume 7, Number 7, 2003; 117-121
Score de Nugent en la VB
% IC 95%
Sensibilidad 97 84 - 100
Especificidad 98 94 - 99
Valor predictivo posiivo 92 78 - 98
Valor predictivo negativo 99 96 - 100

pH en el diagnóstico de VB
% IC 95%

Prueba de aminas en la VB
% IC 95%

Presencia de ¨clue-cells¨ em la VB
% IC 95%

CONCLUSIONES
El método de Nugent resultó un método alternativo para el

diagnóstico de vaginosis bacteriana.
De todos los parámetros del criterio clínico, la

observación de ¨clue-cells¨ resultó el mejor parámetro
para el diangóstico de vaginosis bacteriana
Donders (2002) ¨vaginitis aeróbica¨

Características:
- ↓ Lactobacillus spp - ↑ pH - ausencia clue-cells
- abundantes neutrófilos (RIV) >10/Campo
- microorganismos múltiple: cocos / bacilos (microbiota endógena: intestino,
boca, piel ambiente)
- Estado previo de vaginosis favorece la colonización
- Requiere cultivo
- presencia de células parabasales
Citoquinas
- ↑ IL-1b en fluido vaginal ≅ VB
- ↑ IL-8 proinflamatorias ≠ VB
- ↑ IL-6 (reclutan neutrófilos)
Microorganismos involucrados
- E. coli
- S. agalactiae
- S. aureus
- Enterococcus spp
- T. vaginalis asociada
Tricomonosis
PATOLOGÍAS ASOCIADAS EN LA MUJER
-Vaginitis, uretritis, cervicitis
- Enfermedad inflamatoria pélvica (EPI)
- Infertilidad tubarica
COMPLICACIONES MATERNAS Y PERINATOLÓGICAS
- Rotura prematura de membrana
- Labor pretérmino
- Bajo peso al nacer
INCREMENTA TRANSMISIÓN DE HIV
Tricomonosis
HOMBRE: Infección Asintomática, UNG.
MUJER: Manifestaciones agudas, crónicas o infección asintomática
AGUDA
Vulvitis, leucorrea, descarga vaginal mucopurulenta amarillo verdosa
punteado hemorrágico mucosa cervical o vaginal (2%)
CRÓNICA (Síntomas moderados)
- Prurito / dispareunia
- Secreción vaginal mucosa y escasa
ASINTOMATICA (10-50%)
- 50% síntomas 6 meses posteriores
- pH > 4.5
- Microbiota normal (Lactobacilos)
Punteado
Punteado hemorr ágico sobre
hemorrágico sobre el
el exocervix
exocervix en
en Vulvovaginitis por
una
una paciente
paciente con
con vulvovaginitis
vulvovaginitis por
por Trichomonas vaginalis
Trichomonas
Trichomonas vaginalis
vaginalis (exocevicitis)
(exocevicitis)
Tricomonosis
Diagnóstico de Laboratorio
Exámenes microscópicos
Amplificación génica (PCR)
Cultivo en medio líquido

Tricomonosis
Tratamiento
Metronidazol
θ Tasa de curación: 95%
θ Local y oral
θ Pareja
θ Resistencias hasta 5% (E.E.U.U.)
Tricomonosis
1. Examenes microscópicos
θ Fresco con solución fisiológica: movilidad característica.
θ Coloración de May-Grunwald Giemsa prolongado.
θ Fresco con fijador SAF con azul de metileno.
θ Limitación: baja sensibilidad (35 - 80%)
- Asintomáticas
- Experiencia observador
- Rapidez en transporte y procesamiento
θ Especificidad: 99 - 100%
Examen en fresco con Giemsa prolongado
solución fisiológica
Examen en fresco con SAF/

Azul de metileno
Tricomonosis
Amplificación génica (PCR)

θ Sensibilidad: 80% (presencia falsos negativos)
θ Especificidad: 95%
Cultivo en medio líquido (Método de Referencia)

θ Método de mayor precisión
θ Detección > 95% de los casos
θ Diamond (Método de Referencia)
θ Tioglicolato modificado (observación diaria)
ANEXO 1
Tioglicolato modificado para cultivo de T. vaginalis
Este medio contiene cada 1000 ml: Peptona de caseína digerida 15 g (Laboratorios
Britania, Bs. As., Argentina), extracto de levadura 12 g (Oxoid Ltd., Hampshire,
England), glucosa 5.5 g (Merck, Darnstadt, Germany), cloruro de sodio 2.5 g (Biopack,
Bs. As., Argentina), L-cystina 0.5 g (Biochemical BDH, Poole, England), tioglicolato de
sodio 0.5 g (Bióchemical BDH, Poole, England), agar 0.75 g (Biokar Diagnostic, Zac de
Ther, Allonne, France), resazurina 1 mg (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA). El medio
se autoclava y posteriormente se agrega asépticamente suero equino inactivado 120
ml (Laboratorio Gutierrez, Bs. As., Argentina), anfotericina B 2 mg (Gibco BRL Life
Technologies, Paisley, Scotland), penicilina G 1.000.000 U (Gibco BRL Life
Technologies, Paisley, Scotland) y gentamicina 80 mg (Gibco BRL Life Technologies,
Paisley, Scotland). Se ajusta a pH de 7 0.2. Se colocan 5 ml de medio en tubos de
hemólisis con tapa a rosca.
(Examen en fresco del cultivo de Tioglicolato)
Prevalence and comparison of diagnostic methods for
infection in pregnant women in Argentina
Perazzi, B y col. Korean J Parasitol. 2010 ; 48(1):61-5.
T. vaginalis
Examen en Giemsa o SAF Cultivo en medio Cultivo en medio
fresco con SF con azul de sólido líquido
metileno
n % n % n % n %
Positivos 11 1.8 14 2.3 12 2.0 24 4.0
Negativos 586 98.2 583 97.7 585 98.0 573 96.0
Total 597 100 597 100 597 100 597 100

Prevalence and comparison of diagnostic methods for
infection in pregnant women in Argentina
Perazzi, B y col. Korean J Parasitol. 2010 ; 48(1):61-5.
Método Sensibilidad Especificidad VPP VPN

(%) (%) (%) (%)
Fresco con SF 45.8 100 100 97.8
Giemsa 58.3 100 100 98.3
SAF / azul de 58.3 100 100 98.3

metileno
SF+Giemsa+SAF 66.7 100 100 98.6

Características de las pacientes con tricomonosis y los
hallazgos microbiológicos.
Pac Sem. de Presencia pH Prueba Ex. en Giemsa SAF/azul de Cultivo Microbiota vaginal
N° gestació
gestación de de fresco metileno asociada
síntomas aminas con SF Medio Medio
líquido * sólido
1 32 - 4.0 - - + + + (2°
(2°) + Lactobacillus sp
2 30 - 4.0 - - - - + (2°
(2°) - Lactobacillus sp
3 35 - 4.0 - - - - + (3°
4 24 - 4.0 - - - - + (4°
5 20 - 4.0 - + + + + (1°
6 37 - 4.0 - + + + + (2°
7 32 - 4.0 - - - - + (7°
8 7 - 4.0 - - + + + (2°
9 35 - 5.0 - - - + + (1°
(1°) + Corynebacterium sp
10 17 + 5.0 + + + + + (1°
(1°) + VB
11 24 + 6.5 + + + + + (1°
(1°) + Flora compatible con
anaerobiosis
12 11 + 4.0 - + + - + (1°
13 28 + 5.0 - + + + + (2°
(2°) - Candida albicans
14 9 + 5.5 + + + + + (1°
(1°) + VB
15 33 + (1) 5.0 + - - - + (7°
(7°) - VB
16 24 + (1) 4.0 - - - - + (5°
17 32 + (1) 4.0 - - + + + (3°
(1) No relacionados con trichomoniasis; * dí
día de positividad
FRECUENCIA DE INFECCION POR
Trichomonas vaginalis EN EMBARAZADAS
MEDIANTE EL EMPLEO DE CULTIVO Y PCR
Testardini y col. Presentación Poster VII Congreso SADEBAC 2012
Frecuencia de infección por T. vaginalis

en el embarazo aumentó al
6,2% por cultivo más PCR
PCR para Trichomonas vaginalis
300
pb
Muestra Muestras Muestra PM Control Control

negativa positivas negativa positivo Negativo
RESULTADOS
Trichomonas vaginalis: CONCENTRACIÓN INHIBITORIA Y LETAL
MÍNIMA (CIM Y CLM) DE METRONIDAZOL UTILIZANDO
Valores de CIM obtenidos con las
DIFERENTES ATM
distintas atmóÓsferas
SFERASde
DE incubaci
INCUBACIÓ
óNn
n
20
9
10
6
8 8
5 2
3
0
5 3 4
1 1
anaerobiosis
0 5% CO2
0,063 0,125 025 0,5 1 2 4 CIM (µg/ml)
CIM = CLM
Control -NYH 280 (S): CIM (5% CO2 y ana): 0.,063 µg/ml
-CDC 085 (R): CIM (5% CO2): 64; CIM (ana): 32 µg/ml
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Inóculo 1 28 6 4 3 2 1 6 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125

Inóculo
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Inóculo 1 28 6 4 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125

0.125
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Inóculo 1 28 6 4 3 2 1 6 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125

0. 25
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Inóculo 1 28 6 4 3 2 1 6 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125
CIM
Sin Movimiento
1
CIM
Sin Movimiento
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Inóculo 1 28 6 4 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125

32
CONCLUSIONES
Los valores de CIM obtenidos a metronidazol (0.063-2 ug/ml)
hacen sospechar que se trate de cepas sensibles a dicha droga, ya

que las concentraciones alcanzadas en vagina son superiores a las
CIM obtenidas.
Los valores de CLM se correlacionaron con los valores de CIM,

mostrando la droga actividad microbicida
CONCLUSIONES GENERALES
Se detectó una prevalencia de T. vaginalis de 6,2% por cultivo

más PCR en embarazadas sintomáticas y asintomáticas
Los exámenes microscopicos mostraron baja sensibilidad

(<50%) principalmente en embarazadas asintomáticas
Se recomienda la utilización de métodos más sensibles, tales

como el cultivo y la PCR en embarazadas asintomáticas para
prevenir las complicaciones maternas y perinatológicas
CONCLUSIONES GENERALES
Frente a fracasos de tratamiento realizar estudios de sensibilidad
in vitro a metronidazol para asegurar que las infecciones recurrentes
por T. vaginalis sean realmente causadas por una cepa no sensible
y que no se trate de una recurrencia de la infección.
Antes de sospechar una tricomonosis resistente se debe

comprobar el cumplimiento del tratamiento por parte de los dos
miembros de la pareja o descartar reinfección.
CLASE: Mollicutes
ORDEN: Mycoplasmatales
FAMILIA: Mycoplasmataceae
GÉNEROS: - Mycoplasma (105 spp)
- Ureaplasma (7 spp)
MICOPLASMAS
Microorganismos complejos, ignorados previamente,
por sus requerimientos nutricionales (fastidiosos), falta

de medios comerciales para su aislamiento y de
métodos rápidos de diagnóstico
Cuestionable rol patógeno en algunas circunstancias

Mayores avances con técnicas moleculares

MICOPLASMAS
Bacterias procariotas: 0,1 - 0,5 µm

U2
Carecen de pared celular: Gram
Gram β-Lactámicos
β-Lactámicos
Membrana celular trilaminar (requieren esterol)
Casi todos son aerobios
Desarrollan en medios artificiales (exigentes)
Extracelulares (excepto
excepto M.
M. fermentans,
fermentans, M.
M. penetrans genitalium)
penetrans yy genitalium
Parásitos de membrana

Diapositiva 74
U2 Usuario; 23/09/2010
Mycoplasmas Genitales
M. hominis
M. fermentans
M. primatum
M.pirum
M. genitalium
M. penetrans
M. spermatophilum
Ureaplasma spp
Sitio Primario de
Colonización
Microorganismo Patogenicidad
Tracto
Orofaringe
Genitourinario
M. hominis + + +
M. genitalium + +? +
M. fermentans + + +
M. penetrans + - ?
M. pneumoniae - + +
Ureaplasma spp + + +
Prevalencia de Uu y Mh según grupo etario
Grupos Uu Mh
(n= 374) (%) (%)

Neonatos
(0-7 días) 48.0 4.0
(8-30 días) 28.6 4.8
Niñas prepúberes 5.0 0
Mujere sexual/.activas (no emb) 67.0 10.0
embarazadas
≤ 35 sem. 70.0 13.0
≥ 36 sem. 82.0 14.0
Púerperas (0-7 días) 68.0 15.0
Post menopáusicas
con útero y anexos 36.0 7.0
sin “ “ 10.0 0
Ureaplasma urealyticum
Uretritis / Prostatitis / Epididimitis

Cervicitis / Endometritis / EPI ⇒ Infertilidad

Sind. uretral femenino / Litiasis renal

Embarazo
RPM / Abortos
Neonato
Neumonía / Meningitis

Mycoplasma hominis
Salpingitis, EPI
Pielonefritis
Fiebre postparto
Inf. neonatal
Inf. extragenital
Mycoplasma genitalium
Uretritis
Cervicitis, EPI
Artritis
Cofactor HIV ( idem M. fermentans,

M. penetrans y M.pirum)
Mycoplasma genitalium
Hombres con UNG y C. trachomatis negativa: Prevalencia 18% - 46%.
Mujeres: cervicitis y uretritis
Mujeres con EPI: se detectó en endometrio
M. genitalium y Ureaplasma urealyticum: se unen a los espermatozoides y potencia
la llegada al tracto genital femenino.
Diagnóstico: Cultivo (muy dificultoso)
Técnica Moleculares
Especimenes clínicos:
• Hisopado uretral
• Flujo vaginal e Hisopado endocervical
• Hisopado anal
• Orina de 1º chorro miccional.
DIAGNÓSTICO
Carecen de pared celular

Crecen en medios CULTIVO!!
artificiales
Métodos moleculares PCR

TOMA DE MUESTRA
MYCOPLASMAS
MYCOPLASMAS UROGENITALES
UROGENITALES
Sospecha clínica Muestra

U.N.G. Secreción uretral y/o 1° chorro miccional
Prostatitis Secreción prostática
Cervicitis Cervix
EPI. Material tomado por aspiración a través de
catéter protegido por laparoscopía o
culdocentesis
Fiebre post-parto y/o aborto Hemocultivos, endocervix y/o endometrio
Abortos a repetición Endocérvix. Fruto aborto
Pielonefritis. Sindrome uretral Orina: punción suprapúbica
Infertilidad femenina Endocervix y/o endometrio.
Líquido peritoneal
Infertilidad masculina 1° chorro y esperma
Tipos de Muestra Medio de Transporte
Hisopados
- Uretral Suspensión
- Cervical
Líquidos
- Semen
- Orina Dilución 1/10
- Secreción Prostática
- Líquidos de punción
Biopsias, Tejidos Macerar y Diluír 1/10
Sangre (sin anticoagulante) Medio de Cultivo Especial
CONSERVACIÓN
Medio de Transporte con la muestra
Temperatura Tiempo
4°C 24 hs.
-20º C 1 semana
- 70°C Años
Características de Micoplasmas
urogenitales
Marcadores
pH Atmósfera Tpo. formación
metabólicos
Especies
óptimo
ARG UREA GLU Aerob. Ana. colonias (días)
U. urealyticum - + - 5,5-6,5 ++ ++ 1-4
M. hominis + - - 5,5-8,8 ++ ++ 1-4
M. fermentans + - + 7,0 + ++ 3 - 20
M. genitalium - - + 7,0 + - lento

Materiales Recuento Significativo
Urogenitales ≥ 104 UCC/ml

Estériles No realizar
cuantificación
0.1 ml
Agar A7
Agar PPLO
A3
Desarrollo de
colonias típicas
Mycoplasma hominis Ureaplasma urealyticum
(10X) (10X)
Mycoplasma hominis
Medios Comerciales
SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Antibióticos M. hominis U. urealyticum
SXT R R
Macrólidos R S
Lincosaminas S R
Tetraciclinas* S S
Quinolonas fluoradas* S S
Quinupristin-Dalfopristin S S
* cepas resistentes
INVESTIGACIÓN MICOPLASMAS
Mujeres
Muestra: cervico-vaginal
%
% Positivo: Rto. ≥ 1044 UCC/ml
Posit.
Posit.
12
12
11
11
10
10
9,2
9,2
88 9,0
9,0 Asociaciones:
Asociaciones:
Candida
Candida sp
sp (5%)
(5%)
66
6,3
6,3 VB
VB (17%)
(17%)
44
1,8
1,8
22 00
0,3
0,3
00 2,1
2,1 2003
2003 (n=109)
(n=109)
Total
Total
Ureaplasma 2000
2000 (n=332)
Positivas Ureaplasma
Positivas (n=332)
urealyticum M
urealyticum ycoplasma
Mycoplasma
(Uu) hominis Uu+Mh
Uu+Mh
(Uu) hominis Hospital
Hospital de
de Cl ínicas. UBA.
Clínicas. UBA.
(Mh)
(Mh)
INVESTIGACIÓN MICOPLASMAS
Hombres
Muestra:
Muestra: Semen
Semen oo Hisopado
Hisopado Uretral
Uretral
%% Positivo: Rto. ≥≥ 10
Positivo: Rto. 1044 UCC/ml
UCC/ml
Posit.
Posit.
66 5,8
5,8 5,8
5,8
55
5,0
5,0 5,0
5,0
44 Asociaciones:
Asociaciones:
33 Chlamydia
Chlamydia
trachomatis
trachomatis (5%)
(5%)
22
11 00 00
00 00
00 2003
2003 (n=104)
(n=104)
Total
Total
Ureaplasma
Positivas Ureaplasma
Positivas 2000
2000 (n=253)
(n=253)
urealyticum Mycoplasma
urealyticum Mycoplasma
(Uu) hominis Uu+Mh
Uu+Mh
(Uu) hominis
(Mh)
(Mh) Hospital
Hospital de
de Clínicas.
Clínicas. UBA.
UBA.
URETRITIS
Uretritis
Hombre
Gonocócica No Gonocócica
C. trachomatis serov D → K 50 %
N. gonorrhoeae
U. urealyticum
Habitualm. no se investiga
M. hominis
M. genitalium No cambia el Tto.
Trichomonas vaginalis Pareja c/trichomoniasis

Herpes simplex virus o herpes genital
Desconocida 20-30%
Irritación espermicidas
traumatismo
Secreción uretral
Diagnóstico de uretritis
Hombre
Secreción purulenta
serofibrinosa
Disuria
Prurito uretral
Coloración de Gram
PMN PMN
dc - Negativo
Gonorrea Investigar C. trachomatis

Cervicitis (Mujer)
Cervicitis
Gonocócica No Gonocócica
N. gonorrhoeae C. trachomatis serov D → K
U. urealyticum
M. hominis
M. genitalium
CMP: más de 10 PMN /cpo

(1000 x)
Cervicitis
Cervicitis mucopurulenta
mucopurulenta antes
antes yy despu és de
después de tratamiento
tratamiento con
con
doxiciclina
doxiciclina
Neisseria gonorrhoeae
Examen microscópico: coloración de Gram
Diplococos gram negativos intra y extracelulares

Presencia de polimorfonucleares
SENSIBILIDAD
Hombre Uretritis (HU) 96 %
Mujer Cervicitis (HE) 40-60%
Ambos HA ↓↓↓ salvo proctitis
sexos HF ↓↓↓
Coloracion de Gram
(exudado uretral)
Tratamiento empírico e identificación de los contactos

Desarrollo de Neisseria gonorrhoeae
en medio TMM
Incubación: 48 horas
ESPECÍMEN
ESPECÍMEN
GRAM
GRAM CULTIVO
CULTIVO
TMM/Achoc/
TMM/Achoc/AS
AS
IDENTIFICACI ÓN
IDENTIFICACIÓN
OXID.
OXID.HC
HC(CTA)
(CTA)
Glucosa
Glucosa ENZIMAS
ENZIMAS
GRAM
GRAM maltosa
maltosa Prolil
Prolilaminopep.
aminopep..
aminopep
OXIDASA
OXIDASA lactosa
lactosa Glutamil aminop
γγGlutamil aminop
SUPEROXOL
SUPEROXOL sacarosa
sacarosa ββ-galactosidasa
-galactosidasa
fructosa
fructosa
Detección de enzimas
(sustratos cromogénicos)
Prolil- γ-glutamilami- ß-
OHprolilNH2
nopeptidasa galactos.
peptidasa
N. gonorrhoeae + - -
N. meningitidis -* + -
N. lactamica - - +
Utilización de Hidratos de Carbono
(CTA, con 1% del azúcar correspondiente)
Diferenciación de diplococos gram- negativos
que pueden desarrollar en agar TMM
Utilización de H de C
Catalasa GLU MAL LAC SAC FRU
N. gonorrhoeae + + - - - -
N. meningitidis + + + - - -
N. lactamica + + + + - -
N. cinerea + -ó+ - - - -
N. polysaccharea + + + - - -
N. subflava + + + - V V
M. catarrhalis + - - - - -
K. denitrificans - + - - - -
Neisseria
gonorrhoeae
Adquirió resistencia a la mayoría de

los ATM utilizados para su
tratamiento.
Emergencia de Resistencia:
Fluorquinolonas, Macrolidos
Sensib. Dismin a CRO y Cefixima
Sensibilidad a los Antibióticos
ß – lactamasa
NITROCEFIN
NGPP
Antibiograma Difusión
Antibiograma (Mét. Difusión)
Medio: GC agar base / isovitalex 1 %

Inóculo: 0.5 Mc Farland
Incubación: 35°C 5 % CO2, 20 - 24 hs
Antibiótico:
- Penicilina 10 U
- Tetraciclina 30 µg
- Cefotaxima - ceftriaxona 30 µg
- Cefixima 5 µg
- Cefoxitina 30 µg
- Ciprofloxacina 5 µg
- Espectinomicina 100 µg
ATB a Ensayar: PEN, CRO, FOX, CFI, TET, CIP, ESP
Penicilina (10 UI) Halo ≤ 19 mm ßLsa +
Halo 20-26 mm o CIM: 1- 2 µg/ml Blsa – NGCMR
Tetraciclina (30 µg) Halo ≤ 19 mm
ó TRNG Plasmídica
CIM ≥16 µg/ml
Ceftriaxona (30 µg) Halo ≤ 34 mm ó CIM ≥ 0,125 µg/ml (Sensibilidad disminuída)
Enviar a Centro de referencia

Neisseria
gonorrhoeae
Vigilancia
Vigilancia de
de la
la Resistencia
Resistencia
aa los
los Antimicrobianos
Antimicrobianos desde
desde 1985
1985
2000
2000 -- 2011
2011
Incidencia anual de gonorrea
(1985-2008)
20
17,6
18
15,9 15,5
16
14,6 14,9 15,2
14 13,4
% de casos positivos
12,2
11,7
12
10,7
10 9,2 9,5
8,6 8,3 8,9 8,9
8 7,2
6,3 6.0
6 5,3 5,5
4,8
4,3
4 2,9
0
1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008
Años
Resistencia a penicilina
en los diferentes períodos analizados
40
NGRM NGPP
35
35,1 p < 0,001 p < 0,001
30
% de cepas
25
20
15 19 19,7
10
5 6,5
5,2 3,3
0
1985-91 1992-99 2000-05
Año
Resistencia a ciprofloxacina
14
14
12
8
% Resistencia
10
4
1,2
2
0
2000/04 2005 2006
(195) (47) (45)
H. de Clínicas. UBA
Resistencia a ciprofloxacina
60
52
48 HSH
50
HET
% de Aislamientos
43
40
31
30 25
23
19
20
10
10 4
6
0
2005 2006 2007 2008 2009
Años
Aislamientos anuales de NG con SD a CRO
(CIM: 0.125-0.25 µg/ml)
8
8
n = 14
N° de Aislamientos
4
2 2
2 1 1
0
0
2004 2005 2006 2007 2008 2009
Años
NG con SD a CRO
Resistencia simultánea
n=14
10 9 9
10
N° de Aislamientos
8
6
6 5
(R+I)
4
2 2
2
0
PEN TET ERI AZI CIP ESP
NGRCM
NGPP
Infección Gonocócica No Complicada
Dosis única / Pareja
Ceftriaxona 250 mg IM
Cefixima 400 - 800 mg VO Puede Seleccionar R//
Ciprofloxacina 500 mg VO No Usar en poblaciones

↑ R// FQ
Azitromicina 2 g VO Util UNG y CNG
Espectinomicina 2 g IM No en localización faringea

Infección Gonocócica
Recomendaciones Alternativas
Gonorrea no Ceftriaxona 250 mg IM* Cefpodoxima 400 mg VO
complicada Dosis única ó
(uretra, recto y ó Cefuroxima axetil 1g VO
cervix) Cefixima 400 mg VO ó
Única dosis Espectinomicina
ó
Si no puede descartarse infección Azitromicina 2g VO
por C. trachomatis o M.genitalium,
agregar
Azitromicina 1g VO
Única dosis
ó
Doxiciclina 100 mg VO c/12 h.
Durante 7 días
Ceftriaxona 250 mg IM Cefixima

Gonorrea no Dosis única Eficacia Clínica
complicada Si sospecha co-infección con 92.3% (95% IC: 74.9%-99.1%)
(Faringe) C. trachomatis Cefpodoxime
Eficacia Clínica es pobre 70.3% (95%
Más IC: 53.0%)
Azitromicina 1g VO Cefuroxima axetil
Única dosis Eficacia clínica
ó 56.9% (95% IC: 42.2%-70.7%)
Doxiciclina 100 mg VO c/12 h. Espectinomicina
Durante 7 días Eficacia clínica
51,8% (95% IC: 38.7%-64.9%)
* Dosis de 250 mg de ceftriaxona (CRO) proveen altos niveles bactericidas en sangre, es segura y efectiva
en todos los sitios anatómicos. Cura el 99.2% de las infecciones urogenitales y rectales y el 98.9% de las
faríngeas. No se recomiendan regimenes de 125 mg por los hallazgos de N. gonorrhoeae con SD CRO “in
Vitro” y fracasos de tratamiento.
Resistencia a Tetraciclina
25
20,4
20,4
20
% de Asilamientos
13,6 13
15
10
1,3
5 2,2
0 2,3
0 HSH
CMTR
TRNG HET
CMTR
TRNG
2000-04
2005-09
Resistencia a ERI y AZI
39,8
HSH
40 HET
35
30 20,8 21,2 25,0

%R
25
15 6,5
8,0
10
6,8
0
5
0 AZI
2000-04 ERI
Eritro para HSH entre los dos perí

períodos p < 0.05 2005-09
Eritro para HET entre los dos perí
períodos p > 0.05
Resistencia a Macrólidos
Nº = 97 aislamientos
Resistencia a macrólidos (2000-09)
100%
100%
80%
60%
40%
19%
20%
0%
eritromicina azitromicina
Lab. Bacteriología y PETS, Hospital de Clínicas “José de San Martín”

URETRITIS PERSISTENTE y RECURRENTE
Reinfecciones (pareja no tratada)
Fallas de tratamientos
Co-infección → Investigar:
Mycoplasma genitalium R// DOXI
Urealplama urealyticum
LOCALIZACIÓN •Hombre Uretritis Prostatitis

GENITAL Epididimitis
•Mujer Cervicitis Endometritis
SUA Salpingitis
EPI
Ambos sexos: Portación Asintomática
LOCALIZACIÓN
EXTRAGENITAL •Anorrectal Proctitis
(hombre y mujer)
NEONATOS •Conjuntivitis
•Neumonia
(serotipo D → K)
Diagnóstico de laboratorio
• Cultivo en línea celular
(revelado: IF, lugol)

IFD (LPS)
• Detección de Ag
EIA óptico (LPS)
• Detección de ác. nucleico
PCR, LCR (plásmido críptico)

(serotipo D → K)
Sensibilidad y especificidad
de los métodos de diagnóstico
Molec. Cultivo IFD IEA ópt.

Sensibilidad 90-98% 40-60% 60-75% 65-75%
Especificidad 98-99% 100 % 90-97% 90-95%
Investigación de Chlamydia trachomatis
Enfermedad/sindrome Localizació
Localización Ensayo Comentarios
Uretritis Hisopado uretral Todos los métodos

1• chorro orina PCR- EIA
Cervicitis Hisopado de endocervix Todos los métodos
Orina 1• chorro PCR-LCR
Conjuntivitis Conjuntiva Cultivo celular,
sonda DNA, IFD, EIA
EPI Endocervix Todos los métodos

1• chorro orina PCR-LCR
Biopsia trompa de Cultivo celular, PCR
Fallopio
Líquidom peritoneal Todos los métodos
Proctitis Hisopado rectal Cultivo celular Obtenido con
proctoscopio
Prevalencia de Chlamydia trachomatis
Año 2005
% 3,6
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5 0,5
1,0
0,5
0,0
Hombres Mujeres
(139) (194)
Hombres: 2/5 UNG 3/5 Desconocidos
Mujeres: 1/1 SUA
H. de Clí
Clínicas. UBA
Antimicrobianos
Resistencia
• ß-lactámicos - Vancomicina
• Aminoglucósidos
Sensible
• Tetraciclina (doxiciclina)
• Macrólidos (eritromicina)
• Azálidos (azitromicina)
• Fluorquinolonas (ofloxacina)
Infección No Gonocócica
Recomendaciones Alternativas
Uretritis no Azitromicina 1g VO Eritromicina base 500mg VO

gonocóccicas Única dosis c/ 6h. durante 7 días
ó ó
Infecciones Doxiciclina 100 mg VO c/12 h. Levofloxacina 500 mg VO
sospechosas o Durante 7 días c/24h. Durante 7 días
confirmadas por u
C. trachomatis Con ambos tratamientos se observó Ofloxacina 300 mg VO
M. genitalium 97%-98% de cura bacteriológica c/12h. Durante 7 días
Metronidazol 2g VO monododis
Infecciones ó
sospechosas o Tinidazol 2 g monodosis
confirmadas por
T. vaginalis Más
Azitromicina 1g VO monodosis
(si no ha sido utilizada inicialmente)

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Curso ABA

Prof. Dra. Angela Famiglietti

Pubertad hasta menopausia Lactobacillus spp

Células vaginales con estrógeno

Adhesión de Lactobacillus spp

Producción de ácido láctico

Lactobacillus spp Enterobacterias

Microorganismo Incidencia (%)

Vaginitis Candida spp (20 – 35%)

Vaginosis bacteriana Complejo GAMm (20 - 30%)

Cervicitis Neisseria gonorrhoeae

Preferentemente período ovulatorio.

No relaciones sexuales 48-72 hs. antes.

No tratamiento ATB local ni oral 48-72 hs. antes.

No usar duchas vaginales / tampones o cosméticos íntimos 4 a 5

Mujer embarazada: asintomática (control) → 2°trimestre.

Cultivo medio líquido T. vaginalis

50 mujeres embarazadas HIV +

Mujeres embarazadas HIV + tienen mayor riesgo

En 139 / 493 (28 %) muestras estudiadas se

recuperó Candida spp. La edad promedio

de las pacientes fue 25 años.

N° de Tubo Clamidosporo Chrom API Identificacion

C. glabrata mostró 16.6% de resistencia a fluconazol,

Desplazamiento flora normal

- Lactobacillus (productores de H2O2)

Reemplazada por el Complejo GAMm

- Anaerobios (Prevotella, Porphyromonas, Peptostreptococcus)

Partos prematuros (presencia de sialidasas, IL1-β)

Proteasas (colagenasas, elastasas)

Factor quimiotáctico de PMN

Criterio clínico: presencia de 3 ó mas de los siguientes criterios:

- Flujo laxo y homogéneo

- Test de aminas positivo

Criterio de Nugent: evaluación microscópica en la coloración de Gram,

asignándose un score ≥ 7 cuando existe un predominio de flora cocobacilar y

ausencia de flora lactobacilar

Correccion de Lanzafame: Presencia de clue cells agrega 2 puntos al VN

Morfotipos en el Gram “Score”

Desbalance cont. vaginal

Metronidazol (curación 90%)

Valor predictivo posiivo 92 78 - 98

Valor predictivo negativo 99 96 - 100

Valor predictivo posiivo 28 20 - 37

Valor predictivo negativo 93 84 - 97

Valor predictivo posiivo 94 78 - 99

Valor predictivo negativo 96 91 - 98

Valor predictivo posiivo 89 74 - 97

Valor predictivo negativo 98 94 - 99

El método de Nugent resultó un método alternativo para el

De todos los parámetros del criterio clínico, la

Donders (2002) ¨vaginitis aeróbica¨

Amplificación génica (PCR)

Cultivo en medio líquido

Examen en fresco con SAF/

Amplificación génica (PCR)

Cultivo en medio líquido (Método de Referencia)

Positivos 11 1.8 14 2.3 12 2.0 24 4.0

Negativos 586 98.2 583 97.7 585 98.0 573 96.0

Total 597 100 597 100 597 100 597 100

Método Sensibilidad Especificidad VPP VPN

Fresco con SF 45.8 100 100 97.8

Giemsa 58.3 100 100 98.3

SAF / azul de 58.3 100 100 98.3