UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE- ECAPMA

PROGRAMA DE INGENIERIA AGROFORESTAL

PRE INFORME LABORATORIO BIOQUIMICA

HOLMAN QUIÑONEZ ORDOÑEZ

CODIGO 76.327.515 POPAYAN

NOVIEMBRE 2013
 PRÁCTICA I

TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD UREÁSICA (AU) EN Reactivos a utilizar
SUELOS, PASTOS Y FORRAJES Reactivo Formula Concentracion
Ureasa Bufer 1%
INTRODUCCIÓN
Fosfato de ph 7
Dentro de la bioquímica metabolica el método de Urea CO(NH2)2 0,25M
determinación de carbohidratos, basado en el contenido
de almidones hidrolizables y azúcares solubles. cloruro de mercurio HgCl2 1%
Cloruro de Hidrogeno HClO 1N
Mentefacto ó diagrama conceptual Indicador de tashiro

1.3.1. EXTRACCIÓN Y SOLUBILIZACIÓN DE UREASA EN HARINAS ,

SUELOS ÓFORRAJE (MÉTODO “SALTING OUT”)
Alistar el montaje de titulación: lavar, purgar ,cargar y enrasar
la bureta con HCl0,1N
Colocar el erlenmeyer que contiene la solución blanco,
debajo la bureta y adicionar lentamente el HCl, hasta que
aparezca y permanezaca un color rosado-violáceo.
Esto indica que los equivalentes-gramo del hidróxido de
amonio fueron neutralizados por los equivalentes-gramo del
ácido clorhídrico.
Registrar en su tabla de datos, los mL de HCl gastados en
la titulación del blanco.
1. MATERIALES Y MÉTODOS Repetir el procedimiento anterior, con el tubo St y anotar los
1.1. Materiales y equipos requeridos mL empleados de HCl
MATERIALES EQUIPOS Continuar el proceso con los tubos 1, 2, 3 y 4 ; registrar los
mL gastados de HCl en la tabla de datos
Tubos de ensayo con Pinzas para bureta
gradilla
Matraz aforado de 100 Soporte Universal
mL
Beaker de 400 mL Baño de termostato
Bureta de 25 mL
Erlenmeyer de 125
Pipeta de 5 y 10 mL
 2. TABLA DE DATOS
1.3.2 En Laboratorio

Volúmenes de HCl 0,1N,empleados en la titulación del NH4OH

 PRÁCTICA II

3. RESULTADOS ESPERADOS: CAPACIDAD NAMORTIGUADORA Y POTENCIAL

Producir la hidrólisis de la urea por medio de la enzima
aminohidrolosa denominada ureasa.
Cuantificar la actividad ureásica (AU) en muestras de
origen biológico, mediante la técnica volumétrica de
Berthelot.
Verificar la presencia de ureasa en las muestras
seleccionadas para la realización del laboratorio
GLOSARIO:
Ureasa:e s u n a e n z i m a q u e c a t a l i z a l a h i d r ó l i s i s d e
ur ea a di óx i d o de c ar b o no y am oni ac o.
AMORTIGUADOR DE MUESTRAS BIOLOGICAS
INTRODUCCIÓN
Las soluciones amortiguadoras son mezclas de un acido débil y
su sal con una base débil y su sal, son aquellas soluciones cuya
concentración de hidrogeniones varía muy poco al añadirles
ácidos o bases fuertes, es decir su pH no cambia. La capacidad
reguladora de una solución es una medida de la resistencia al
campo del pH que se produciría por el agregado de pequeñas
cantidades de ácidos y/o bases fuertes.
Mentefacto ó diagrama conceptual

Hidrólisis: es una reacción química entre una molécula de

agua y otra molécula, en la cual la m oléc ul a de agua se
div ide y sus át om os pasan a formar parte de otra especie
química.

PH: es una m edida de la acidez o alcalinidad de una

disolución.

BIBLIOGRAFIA

 Modulo de Bioquímica Metabólica

 Protocolo de Prácticas de Laboratorio de
Bioquímica Metabólica de la escuela
1.MATERIALES Y MÉTODOS

1.1. Materiales y equipos requeridos

Materiales Equipos
concentrado

Orina, sangre y forraje Soporte Universal

Beaker de 250 ml Potenciómetro

Bureta de 25 ml Equipo de titulación

Erlenmeyer de 125 Balanza digital

Pipeta de 10 ml
Espátula metálica

Agitador de vidrio
Probeta por 100 ml
 1.2 Reactivos a utilizar 2.TABLA DE DATOS
Datos volumétricos para capacidad amortiguadora de
Reactivo Formula concen muestras biológicas
tración
Hidróxido de NaOH 0.1N
sodio
fenolftaleína (C20H14O4)
Ro de m etilo c15h15n3o2
Agua destilada H2O
Solución buffer KH2PO4 + NaOH.
fosf ato Datos potencio métricos para capacidad
HCl 0,1 N amortiguadora de muestras biológicas
acido clorhídrico
agua destilada H2 O Tabla de Resultados: al final se registraran los resultados en la
tabla que mostraremos a continuación:

1.3.1. En campo:
LAS MUESTRAS A ANALIZAR (FORRAJE, HARINA,
ORINA, CONCENTRADO Y SANGRE)

1.3.2 En Laboratorio
Alistar 5 beakers ó erlenmeyers y rotularlos del 1 al 5
Al primer frasco , adicionar +/-5 gramos (W m ) de concentrado pulverizado y
100 mL de agua destilada , agitar con varillad de vidrio ó en agitador magnético
por
5min ,filtrar y medir el pH de este filtrado ,registrar como pH1 . Posteriormente
,agregar 5 mL de HCl 0,1N , agitar de nuevo por un minuto y volver a medir el
pH2
En el segundo y tercer beakers , repetir el procedimiento con las muestras de
harina y forraje picado , respectivamente.
En el cuarto vaso, Agregar 1mL de sangre y 19 mL de agua destilada , agitar
por 30 segundos y medir pH1 , luego, adicionar 5mL de NaOH 0,1N , agitar por
un
minuto y volver a observar el pH final (pH2)
En el quinto frasco, colocar 20mL de orina junto con 20mL de agua destilada, 3. Resultados Esperados
agitar por 30 segundos y registrar el pH1 , luego , adicionar 5mL de NaOH 0,1N ,
agitar nuevamente por 1min y evaluar el pH final (pH2). Determinar la capacidad amortiguadora
1.3.3. Diagrama de Flujo
Capacidad amortiguadora de todas las muestras
biológicas seleccionadas con respecto a HCL y
NaOH.
GLOSARIO:
Soluciones amortiguadoras: son aquellas soluciones cuya
concentración de hidrogeniones varía muy poco al añadirles ácidos
o bases fuertes.
Ácido débil: es aquel ácido que no está totalmente disociado en
una disolución acuosa. Aporta iones H^+ al medio, pero también es
capaz de aceptarlos
base fuerte: es aquella que se disocia cuantitativamente en
disolución acuosa, en condiciones de presión y temperatura
constantes

BIBLIOGRAFIA

 Modulo de Bioquímica Metabólica

 Protocolo de Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
Metabólica de la escuela
 1.MATERIALES Y MÉTODOS
1.1.Materiales y equipos requeridos
Materiales Equipos
Vaso de precipitado Balanza analítica
Varilla de vidrio espectrofotómetro
Beaker de 250 mL
Papel filtro
Tubo de ensayo
Manzana
zanahoria
concentrado
orina
sangre

1.2 Reactivos a u

Hidróxido de NaOH 0.6 N

sodio
Acido HCl 0.6 n
clorhídrico
fenol 5%
PRACTICA DE LABORATORIO III 1.3.1. En campo:
PROCEDENCIA DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR (FORRAJE,
DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS NO VERDURAS Y FRUTAS, CONCENTRADO Y SANGRE
ESTRUCTURALES (CNE) POR EL METODO DE Para esta experiencia tomaremos muestra de sangre que será
FENOL – ACIDO SULFURICO. proporcionada por el laboratorio de la universidad, concentrado
que será provisto por los alumnos participantes, frutas que
también aportaran los estudiantes y muestra de verduras que será
INTRODUCCIÓN aportada por los alumnos del curso.

Los carbohidratos no estructurales son compuestos orgánicos

extremadamente importante en la alimentación de equinos por 2.TABLA DE DATOS
que proporcionan una gran cantidad de energía además una Mezcla de reactivos para lectura espectrofotométrica
reciente investigación ha demostrado que la fuente alimenticia
de los carbohidratos tiene un efecto directo en el rendimiento
del caballo y juega un papel importante en la etiología de
algunas enfermedades.

Mentefacto ó diagrama conceptual

Datos para la cuantificación de CNE
PRACTICA DE LABORATORIO IV

ACTIVIDAD CAT ALICA DE LA CAT ALAZA.

INTRODUCCIÓN

En esta práctica, la actividad de catalasa se determinará por el

método permanganométrico, en el cual se titula el peróxido
residual, es decir , el que no participó en la RBE, con una solución
de permanganato de potasio (KMnO4) de concentración
Conocida. La catalasa como biocatalizador de origen proteico, es
una enzima óxido-reductasa que participa en la degradación del
4.RESULT ADOS ESPERADOS peróxido de hidrógeno (H2O2),hasta Oxígeno molecular (O2) y
Con esta práctica esperamos determinar la cantidad agua(H2O).
de carbohidratos no estructurales contenidos en las
muestras seleccionadas. Mentefacto ó diagrama conceptual
Determinar el grado de transmitancia y absorbencia
en las muestras
Datos para la cuantificación de CNE

GLOSARIO

Carbohidratos no estructurales: son compuestos orgánicos

extremadamente importantes en la dieta del caballo por que
proporcionan una gran cantidad de energía.

Compuesto orgánico o molécula orgánica es una sustancia

química que contiene carbono, formando enlaces carbono-
carbono y carbono-hidrógeno.

Carbohidratos Hidrolizables (CHO-H): producen azúcares

(principalmente, glucosa) para el metabolismo. Este grupo
incluye azúcares simples, sacarosa y algunos almidones que
son fácilmente digeridos en el intestino delgado y producen
fluctuaciones en la glucosa en sangre después de ingerirlos

BIBLIOGRAFIA

 Modulo de Bioquímica Metabólica

 Protocolo de Practicas de Laboratorio de
Bioquímica Metabólica de la escuela
 http://www.gaqsa.com/Muestro
 %20Forrajes.htm
1.MATERIALES Y MÉTODOS 2.TABLA DE DATOS
1.1. Materiales y equipos requeridos Mezcla de reactivos para lectura espectrofotométrica
Materiales Equipos

soporte universal, pinzas

bureta centrifuga
erlenmeyer
pipeta graduada
probeta graduada
beaker de 400Ml;
tubos de ensayo con
gradilla;
tubo de centrifuga

1.2 Reactivos a utilizar

peróxido de H2O2 0,05M

hidrógeno
ácido H2SO4 2N
sulfúrico
Para actividad catalítica de catalasa (ACAT)
permangan KMnO4 0,01M
ato de
potasio
Extractos (ECAT)
de
catalasa

PROCEDENCIA DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

(MANZANA, VERDURA, CONCENTRADO PARA PERRO )

Esta experiencia comprende dos secciones una que

comprende al programa de zootecnia y otra al programa de
agronomía del cual nos ocuparemos nosotros; para esto
tomaremos como muestra una fruta (manzana) que donaran
los alumnos, participantes, concentrado para perro que lo
aportara una alumna del programa de zootecnia y una
verdura, que también traeremos los alumnos participantes. 3. RESULTADOS ESPERADOS

Con esta práctica pretendemos identificar la importancia

de la función que desempeñan las enzimas como
catalizadores biológicos;
Como las reacciones de hidrólisis rompen las
biomolécula con moléculas de agua; a este tipo
pertenecen las enzimas digestivas.
Determinar la actividad de la catalasa por método
permanganométrico (Ulrich.,1980)
Cuantificar la actividad enzimática de la catalasa en
muestras de origen vegetal y animal
 GLOSARIO Mentefacto ó diagrama conceptual

Biocatalizador: es un catalizador de las reacciones

biomolécula de los seres vivos. Se consideran
biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas.

Catalizadores biológicos: un catalizador es aquel que

acelera una reacción química. Los catalizadores
biológicos también hacen esto, y son las enzimas

Hidrólisis: es una reacción química entre una molécula de

agua y otra molécula, en la cual la molécula de agua se divide
y sus átomos pasan a formar parte de otra especie química.
Esta reacción es importante por el gran número de contextos
en los que el agua actúa como disolvente.

BIBLIOGRAFIA

 Modulo de Bioquímica Metabólica 1.MATERIALES Y MÉTODOS

 Protocolo de Prácticas de Laboratorio 1.1.Materiales y equipos requeridos
de Bioquímica Metabólica de la escuela Materiales Equipos
Vaso de precipitado balanza analítica
Papel foltro horno
PRACTICA DE LABORATORIO V tubo de ensayo espectrofotómetro
cápsula de
CUANTIFICACIÓN DE NITRÓGENO NO PROTEICO porcelana
(NNP) (Fracción A de Van Soest ) tubos de ensayo,

INTRODUCCIÓN
1.2. Reactivos a utilizar
El 10 % de éste corresponde a nitrógeno amoniacal (NNP), y
el restante, es una mezcla entre aminoácidos libres y Reactivo Formul concentraci
péptidos. El amoníaco (NH3) se encuentra en una a ón
concentración que oscila entre 2 y 50 mg /dL, dependiendo de Acido
la ración y del tiempo transcurrido desde la ingesta y es Cl3-C- 10%
Tricloroacét ico
máxima generalmente unas dos horas después de la ingesta COOH
(ATA)
de los alimentos que aportan proteína peróxido de H2O2 0,05M
hidrógeno

PROCEDENCIA DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR (FORRAJE

Y CONCENTRADO PARA PERRO )

Para la realización de esta experiencia extraeremos el acido

Tricloroacético (ATA) de la muestra de forrajes y concentrados
que aportaremos nosotros los estudiantes, después de triturada la
pesaremos en una balanza analítica, la colocaremos en un vaso
de precipitado, le adicionaremos 30 ml de agua destilada y
dejaremos en reposo por 15 minutos, luego le adicionaremos 20
mL de agua destilada fría, agitar por 1min, dejaremos en reposo
la mezcla por 15 min, adicionaremos 20 mL de solución de ATA, y
agitar por 1min,

dejaremos en reposo a temperatura ambiente por 15 min,
filtramos con papel filtro en la probeta, después mediremos el
volumen del filtrado(Vf), recogemos 5 mL del filtrado y lo
colocamos en un tubo de ensayo rotulado como FNNP (
filtrado para nitrógeno no proteico), colocamos el papel filtro
con el residuo, en una cápsula de porcelana y secamos en el
horno por 30min a 105°C, luego procederemos hacer la
cuantificación.
Producto de reacción que se forma, por unidad de tiempo.
1.3.2 En Laboratorio
1.3.3. Diagrama de Flujo
GLOSARIO
Cinética química: Es el estudio de la rapidez d e r e ac c i ó n,
c óm o c am bi a l a r a p i d e z d e reacción baj o condiciones
v ariables y qué eventos moleculares se efectúan mediante la
reacción general.
V elo cidad d e rea cci ón: la c o nc ent ración m ol a r de r
e a c t iv o q u e d e s a p a r e c e , o l a concentración molar de
Energía de activación: Es la energía que necesita un
sistema antes de poder iniciar un determinado proceso.

2.TABLA DE DATOS
BIBLIOGRAFIA

Mezcla de reactivos para lectura Modulo de Bioquimica Metabolica

espectrofotométrica Protocolo de Prácticas de Laboratorio de

Datos para Nitrógeno no proteico (NNP)

3.RESULT ADOS ESPERADOS

Cuantificación del nitrógeno no proteico (NNP) que

también vamos a denominar fracción A de Van Soest
, mediante el reactivo específico, ácido Tricloroacético
(ATA) ;
Determinar el contenido de NNP y proteínas
verdaderas ( PV) en forrajes y concentrados..
Aplicación de técnicas instrumentales analíticas
de Kjeldhal y espectrofotométricas.