Universidade Federal Do Rio De Janeiro

Autofagia
 Visualização da Autofagia

A autofagia é o processo no qual a célula é capaz de digerir seu próprio

conteúdo, de forma a remover componentes celulares danificados, promovendo um
mecanismo de limpeza e, principalmente, de "reciclagem". É um processo muito
importante, pois impede o acúmulo de resíduos e quando desregulado pode gerar
diversas patologias.

Para observar a ocorrência da autofagia celular foram preparados três poços

contendo em cada um 500 mil macrófagos. Cada uma dessas células foi modificada de
modo a expressarem a proteína LC3-1 ligada a GFP (LC3-GFP). A proteína LC3-1
encontra-se normalmente dispersa no citosol, entretanto com a indução autofágica ela
vai para a membrana do autofagossomo e assume uma distribuição pontual e passa a
se chamar LC3-2. A inclusão do GFP a essa proteína permite a visualização de
autofagossomos no microscópio de fluorescência porque o GFP funciona como um
marcador que quando excitado com luz azul produz uma emissão em verde.

O primeiro poço, o controle, continha somente as células, sem nenhuma droga

agregada. Foram visualizados alguns poucos pequenos pontos de coloração verde,
com bordas irregulares, em algumas células, que foram identificados como os
autofagossomos gerados. Isso mostra que a célula está constantemente realizando
autofagia basal.

No segundo poço, juntamente com as células foi acrescentada a droga

rapimicina, que induz a autofagia e consequentemente a quantidade de
autofagossomos visualizados nesse poço foi maior que no primeiro.

No terceiro poço foi acrescentado a droga cloroquina, que impede a acidificação

do lisossomo. Quando o autofagossomo é formado ele se une ao lisossomo formando
os vacúolos e ali o autofagossomo é digerido. Se o lisossomo não for acidificado ele
não consegue digerir o autofagossomo e com isso ocorre um acúmulo gerando
vacúolos enormes. Com a droga cloroquina acrescentada foi possível visualizar
enormes círculos nas células do terceiro poço que são os vacúolos de grandes
tamanho formados.