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MICROBIOLOGÍA
DOCENTE:
- Elio Fernando Avila Vereau
INTEGRANTES:
-Alfaro Araujo, Olenka Xiomara
-Salas Sosa, Diana Carolina
-Mercado Castillo, Natalia
- Segura Miranda, Daniel
-Ulloa Vela, Jeancarlo Daniel
TURNO: Jueves 2 pm a 6 pm
2018-01
1. Título: AISLAMIENTO DE CAMPYLOBACTER JEJUNI EN VISERAS DE
GALLUS GALLUS DOMESTIC EN MERCADOS
2. Antecedentes:
El primer artículo analizado fue: Infección por Campylobacter y Shigella como causa
de diarrea aguda acuosa en niños menores de dos años en el distrito de La Victoria,
Lima - Perú
El 16% de las canales fueron positivas a Campylobacter donde el 60% fue con C.
Jejuni y 40% con C. Coli. Además, el 26% de muestras de ciego fueron positivas,
siendo el 72% a C. Jejuni y 27% a C. Coli, de lo cual se puede confirmar por segunda
vez que Campylobacter Jejuni es mucho más frecuente que otras especies
bacterianas.
3. REALIDAD PROBLEMÁTICA
4. OBJETIVOS
GENERAL:
ESPECÍFICOS:
5. JUSTIFICACIÓN
A) MATERIAL:
- 10 muestras de vísceras de pollo. (0 – 20 S/.)
- 1 cooler/ refrigerante.(40 S/.)
- Placas Petri descartables. (8 S/. x 10 unid.)
- Jarra GasPak. (35 S/)
- Velas. (2 S/.)
- Perlas de Vidrio.
- Coloración Gram. (55 S/.)
B) MÉTODOS DE AISLAMIENTO:
- Agar Sangre:
APLICACIÓN Y USO:
Para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la
adición de sangre, es útil para microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, así
como para la observación de reacciones de hemólisis.
PROCEDIMIENTO:
El medio de cultivo preparado debe retirarse de su empaque plástico, y
debe ser atemperado unos 30 minutos a temperatura ambiente antes de
su uso, nunca flamearlo. Antes de usarlo, siempre debe ser marcado o
identificado apropiadamente en su parte posterior, con los detalles de la
muestra de manera que no tape la parte del fondo del medio de cultivo
para visualizar si se presenta contaminación. A partir del material en
estudio, Inocule el medio usando une técnica aséptica y apropiada de
acuerdo a lo requerido, e incube bajo condiciones apropiadas de
temperatura y humedad, ambiente de aerobiosis, durante 24-48 horas,
entre 35 y 37 °C. Algunos patógenos necesitan condiciones especiales
de incubación para lo cual necesitan dióxido de carbono para su
aislamiento primario; esto se logra incubando la placa en una atmósfera
que contenga 3-10% de CO 2. Incubar a 35ºC +/- 2ºC durante 18 24
horas. Examine el medio de cultivo después de la incubación para
observar evidencia de crecimiento y realice las técnicas apropiadas de
identificación, de acuerdo a los protocolos establecidos.
- Agar Columbia:
USO PREVISTO:
Agar Columbia es un medio muy nutritivo de uso general para el
aislamiento y el cultivo de microorganismos exigentes y no exigentes a
partir de muestras clínicas.
COMPONENTES X LITRO :
Digerido pancreático de caseína 12,0 g.
Digerido péptico de tejido animal 5,0 g.
Extracto de levadura 3,0 g.
Extracto de carne bovina 3,0 g.
Almidón de maíz 1,0 g.
Cloruro sódico 5,0 g.
Agar 13,5 g.
Sangre de carnero, desfibrinada 5%
(pH 7,3 ± 0,2)
PROCEDIMIENTO:
Una vez recibida la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como
sea posible. La placa de extendido se emplea sobre todo para aislar
cultivos puros en muestras que contengan flora microbiana mixta. Si por
el contrario el material se cultiva directamente empleando una torunda,
hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo
luego para hacer el aislamiento a partir de esta área inoculada. Para la
detección de patógenos específicos se deben incluir medios selectivos
apropiados. Dado que muchos patógenos requieren dióxido de carbono
durante el aislamiento primario, las placas de Columbia Agar with 5 %
Sheep Blood se deben incubar en un ambiente aeróbico con
aproximadamente 3 a 10% de CO2. Incubar las placas a una temperatura
de 35 ± 2 °C durante un período de 18 a 72 h. Tomar una lectura
inicialmente después de 18 a 24 horas e incubar de nuevo si es necesario.
- Agar Skirrow:
USO:
Campylobacter Agar (Skirrow) son medios selectivos para el aislamiento
de las especies Campylobacter a partir de muestras clínicas y de otras
clases.
COMPONENTES X LITRO:
Músculo cardíaco, infusión de (sólidos) 2,0 g.
Digerido pancreático de caseína 13,0 g.
Extracto de levadura 5,0 g.
Cloruro sódico 5,0 g.
Vancomicina 0,01 g.
Trimetoprima 0,005 g.
Polimixina B 2500 UI.
Agar 15,0 g
Sangre de caballo, desfibrinada y lisada 7%
(pH 7,3 +/- 0,2)
PROCEDIMIENTO:
Tan pronto como sea posible después de recibirla en el laboratorio,
extender la muestra para dilución en BD Campylobacter Agar (Skirrow).
La carne y otros alimentos primero deben triturarse u homogeneizarse
para luego inocularse directamente o después de su suspensión en una
pequeña cantidad de caldo de peptona en el medio. Si el material se
cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección
pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área
inoculada. Se ha descrito la aplicación de una técnica de filtrado especial
para el procesamiento de muestras seguido de la inoculación de los
medios selectivos y no selectivos1. Incubar las placas inoculadas,
protegidas de la luz, a una temperatura de 35 ± 2 o 42 ± 2 °C en una
atmósfera en la que se ha reducido la concentración de oxígeno, y
aumentado la de dióxido de carbono (=microaerobia). La incubación a 42
°C proporciona resultados con mejor selectividad, pero inhibe
Campylobacter jejuni subesp. doylei y otras especies diversas. La
atmósfera microaerobia se puede crear empleando sobres desechables
generadores de gas en frascos GasPak. Otra posibilidad es crearla
evacuando primero la atmósfera de los frascos ventilados GasPak y
reponiéndola con gases provenientes de cilindros. Por lo general es
suficiente un período de incubación de 2 a 3 días, pero se ha demostrado
que 5 a 7 días de incubación aumentan la proporción de aislamiento.
7. BIBLIOGRAFÍA