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PRACTICA 3
INTRODUCCIÓN
Teniendo en cuenta que los microorganismos son ubicuos es decir que se encuentran en
cualquier ambiente, pueden aislarse igualmente de diversos substratos, la decisión para elegir un
substrato de muestreo depende del grupo de Microorganismos de interés.
Los cultivos puros están formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables
para conocer las características morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica,
patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.
Algunas veces los microorganismos se han adaptado a condiciones muy específicas y podrán
requerir procedimientos de trabajo para aislamiento y siembra especiales como es el caso de
microorganismos anaerobios, autótrofos, etc.
OBJETIVOS
1. Que el alumno aprenda las diferentes técnicas de siembra microbiana existentes para
cultivos bacterianos.
2. Que el alumno indentifique las características del crecimiento bacteriano en los
diferentes medios de cultivo.
MATERIALES
Placas Petri con Agar nutritivo
Placas con agar sangre
Placas con agar McConkey
Tubo con agua destilada estéril
Tubos con BHI
Tubos con Manitol
Mecheros
Asa de inoculación
Incubadora
Muestras
Autoclave
METODOLOGIA
A.- SIEMBRA
2. Cuál es la información que se obtiene de las siembras de cultivos bacterianos en tubos con
agar inclinado y en tubos con agar solidificado en forma recta?
3. Indique cuales son los componentes del Agar Mc Conkey, BHI, TSI, Agar sangre, Agar
nutritivo y sus características para el desarrollo de bacterias.
4. Definir los siguientes términos relacionados a la microbiología:
a. Agar
b. Azúcares
c. Extractos
d. Sistemas amortiguadores
e. Peptonas
f. Agentes reductores
g. Indicadores de pH
5. Recopilar la información de la caracterización colonial de cada cepa en el cuadro siguiente:
Morfología colonial de cultivos bacterianos
3
Aislamiento por
Estría cruzada
Forma:
Color:
Tamaño (mm):
Borde:
Superficie:
Aspecto:
Elevación:
Luz trasmitida:
Luz reflejada:
Consistencia:
4. Por calor: Pasar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos.
Dejar enfriar el porta entre los pases.
Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser
observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el
proceso de tinción.
5. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que
indique el protocolo de cada tinción concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En
ocasiones el colorante tiñe sólo en caliente, por lo que el tiempo que dure su
actuación se deberá sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del
mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no
llegue a hervir ya que se produciría la destrucción de las células.
6. Lavar la preparación con agua para eliminar el colorante. Esta operación se realiza
inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de
manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre él,
pues podría arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la máxima cantidad de agua
de los portaobjetos golpeándolos por su canto con cuidado contra la superficie de la
mesa de trabajo.
7. Secar el porta: en ningún caso se debe frotar el porta.
a Alcohol de 70º
b Alcohol de 95º
c Acetona pura
d Acetona-xilol (1:1)
e Xilol