AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA

GLUKOSIDASE OLEH EKSTRAK ETANOL DAUN UBI

JALAR UNGU (Ipomoea batatas L.)

SKRIPSI

Oleh:
INNA RAMADHANI PUSPITAYANTI
K100 130 052

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2017
 AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA
GLUKOSIDASE OLEH EKSTRAK ETANOL DAUN UBI
JALAR UNGU (Ipomoea batatas L)

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai

derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta

Oleh:

INNA RAMADHANI PUSPITAYANTI

K100 130 052

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMDIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2017

ii
 PENGESAHAN SKRIPSI

Berjudul:

AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA

GLUKOSIDASE OLEH EKSTRAK ETANOL DAUN UBI
JALAR UNGU (Ipomoea batatas L)

Oleh :
INNA RAMADHANI PUSPITAYANTI
K 100 130 052

Telah disetujui dan disahkan pada

Hari :
Tanggal :

Pembimbing Utama

(Dr. Muhtadi, M.Si)

iii
 PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul:

AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA

GLUKOSIDASE OLEH EKSTRAK ETANOL DAUN UBI
JALAR UNGU (Ipomoea batatas L.)

Oleh:
INNA RAMADHANI PUSPITAYANTI
K100130 052

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal : 19 Januari 2017

Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,

Azis Saifudin, Ph.D., Apt

Pembimbing

(Dr. Muhtadi, M.Si)

Penguji:
1. Ratna Yuliani, M.Biotech.St _______________

2. Azis Saifudin, Ph.D., Apt _______________

3. Dr. Muhtadi, M.Si _______________

iv
 DEKLARASI

Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka
Saya bersedia dan sanggup menerima sanksi sesuai peraturan yang berlaku
apabila terbukti melakukan tindakan pemalsuan data dan plagiasi.

Surakarta, 28 Desember 2016

Peneliti

(Inna Ramadhani Puspitayanti)

v
 KATA PENGANTAR

Bismillahirrohmanirrohim
Assalamualaikum warahmatullahi wabarakatuh
Puji syukur penulis panjatkan semata-mata hanya untuk Allah SWT, yang
telah melimpahkan karunia, taufik, dan hidayah-Nya kepada penulis, sehingga
penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Aktivitas Penghambatan
Enzim Alfa Glukosidase oleh Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar Ungu (Ipomoea
batatas L)” ini dengan baik.Penulisan skripsi ini diajukan untuk memenuhi salah
satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Selama dalam proses penulisan ini, penulis menyadari bahwa
terselesaikannya skripsi ini berkat dorongan, bimbingan, dan bantuan dari
berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis menyampaikan
ucapan terima kasih yang tiada terhingga kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt yang terhormat, selaku Dekan Fakultas
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta dan pembimbing akademik.
2. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si selaku pembimbing dalam menyusun naskah
skripsi.
3. Laboratorium Biologi Farmasi terutama Rela Religia selaku laboran yang
telah membantu dan memberikan bimbingan selama penelitian.
4. Laboratorium Kimia Farmasi terutama Bapak Rahmat dan Bapak Toni selaku
laboran yang telah membantu selama penelitian.
5. Bapak, Ibu dan Adik-adikku tercinta yang senantiasa memberi kasih sayang,
semangat, dukungan dan selalu mendoakan kesuksesanku untuk
menyelesaikan skripsi ini.
Semoga amal dan kebaikan Bapak, Ibu, dan teman-teman mendapat imbalan
dan balasan dari Allah SWT.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa kemampuan yang ada pada penulis
sangat terbatas. Untuk itu, dengan segala kerendahan hati, penulis mohon kepada

vi
pembaca untuk memberikan saran dan kritik yang membangun demi sempurnanya
skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat bagi para pembaca.

Surakarta, 28 Desember 2016

Penulis

vii
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN DEPAN ............................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................... ii
DEKLARASI ..................................................................................................... v
KATA PENGANTAR.........................................................................................vi
DAFTAR ISI......................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR...........................................................................................xi
DAFTAR TABEL...............................................................................................xii
DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................xiii
DAFTAR SINGKATAN....................................................................................xiv
ABSTRAK...........................................................................................................xv
ABSTRACT.........................................................................................................xvi
BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah................................................................................. 1
B. Rumusan Masalah .......................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka ............................................................................................ 3
1. Diabetes Mellitus....................................................................................... 3
a. Diabetes Mellitus Tipe 1 ..................................................................... 3
b. Diabetes Mellitus Tipe 2 ..................................................................... 3
c. Diabetes Mellitus Kehamilan .............................................................. 3
d. Diabetes Mellitus Tipe Lain ................................................................ 4
2. Pengobatan Diabetes Mellitus ................................................................... 4
a. Terapi Tanpa Obat ............................................................................... 4
b. Terapi Obat .......................................................................................... 4
1) Obat Hipoglikemik Oral ...................................................................... 4
2) Terapi Insulin ...................................................................................... 5
3. Ubi Jalar .................................................................................................... 5
a. Komponen Ubi Jalar............................................................................ 6

viii
 b. Kegunaan Ubi Jalar ............................................................................. 7
4. Enzim α-glukosidase ................................................................................. 7
5. Kinetika Penghambatan Enzim ................................................................. 8
E. Keterangan Empiris ....................................................................................... 10
BAB II METODOLOGI PENELITIAN .............................................................. 12
A. Kategori dan Rancangan Penelitian ............................................................... 12
B. Variabel Penelitian ......................................................................................... 12
C. Alat dan Bahan ............................................................................................... 12
1. Alat ........................................................................................................... 12
2. Bahan ......................................................................................................... 12
D. Tempat Penelitian .......................................................................................... 13
E. Jalannya Penelitian ......................................................................................... 13
1. Penyiapan Bahan ....................................................................................... 13
2. Ekstraksi .................................................................................................... 13
3. Penyiapan Bahan Uji ................................................................................. 13
a. Pembuatan Larutan BSA .................................................................... 13
b. Penyiapan Larutan Enzim .................................................................. 13
c. Penyiapan Larutan Na2CO3 200 mM.................................................. 13
d. Pambuatan Buffer pH 6,8 ................................................................... 14
e. Pembuatan Larutan Substrat pNPG.................................................... 14
f. Penyiapan Larutan Sampel ................................................................. 14
4. Uji Inhibisi Enzim α-glukosidase .............................................................. 14
5. Penyiapan Larutan Standar (Akarbosa)..................................................... 15
6. Analisis Kinetika Inhibisi α-glukosidase .................................................. 15
F. Analisis Data .................................................................................................. 15
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................... 17
A. Ekstraksi Simplisia......................................................................................... 17
B. Uji Penghambatan Enzim α-glukosidase ....................................................... 18
C. Kinetika Penghambatan Enzim α-glukosidase............................................... 20
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 23
A. KESIMPULAN .............................................................................................. 23

ix
B. SARAN .......................................................................................................... 23
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 24
LAMPIRAN .......................................................................................................... 28

x
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Grafik macam kinetika penghambatan ................................................ 10
Gambar 2. Eksrak daun ubi jalar ungu .................................................................. 18
Gambar 3. Persamaan reaksi enzimatik α-glukosidase ........................................ 18
Gambar 4. Grafik kinetika penghambatan enzim α-gukosidase ........................... 22

xi
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Sistem reaksi inhibisi enzim α-gukosidase ............................................. 14
Tabel 2. Sistem reaksi kinetika inhibisi enzim α-gukosidase .............................. 15
Tabel 3. Data % inhibisi dan IC50 ekstrak daun ubi jalar ungu ............................. 19
Tabel 4. Data % inhibisi dan IC50 akarbosa .......................................................... 19

xii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1. Perhitungan rendemen ...................................................................... 28
Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi ekstrak sampel .................................... 29
Lampiran 3. Perhitungan konversi akarbosa murni .............................................. 30
Lampiran 4. Hasil uji penghambatanenzim α-gukosidase .................................... 31
Lampiran 5. Hasil uji akarbosa terhadap aktivitas enzim α-gukosidae................. 32
Lampiran 6. Hasil uji kinetika inhibisi tanpa inhibitor ......................................... 33
Lampiran 7. Hasil uji kinetika inhibisi dengan inhibitor ...................................... 34
Lampiran 8. Grafik hasil uji inhibisi enzim α-gukosidase .................................... 35
Lampiran 9. Desain microplate uji aktivitas enzim α-gukosidase ........................ 36
Lampiran 10. Desain microplate uji kinetika inhibisi enzim α-gukosidase .......... 37

xiii
 DAFTAR SINGKATAN

BSA : Bovine Serum Albumin

DM : Diabetes Mellitus
DMSO : Dimetil Sulfoksida
ELISA : Enzim Linked Immunosorben Assay
HCl : Hidrogen Klorida
KH2PO4 : Kalium Dihidrogen Fosfat
mg : Miligram
Na2CO3 : Natrium Bikarbonat
NaOH : Natrium Hidroksida
p-NP : p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida

xiv
 ABSTRAK

Diabetes mellitus adalah penyakit yang menjadi sumber buruknya

kesehatan di seluruh dunia. Salah satu pengobatan diabetes mellitus adalah dengan
menghambat enzim α-glukosidase. Obat antidiabetes sudah banyak digunakan
untuk terapi, tetapi kebanyakan obat-obat antidiabetes dan insulin mempunyai
efek samping yang lebih besar dibandingkan dengan obat tradisional. Daun ubi
jalar sering dimanfaatkan sebagai obat antidiabetes tradisional. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh
ekstrak etanol daun ubi jalar ungu, nilai IC50 dan kinetika penghambatan enzim
tersebut.
Ekstrak etanol daun ubi jalar ungu diperoleh dengan cara maserasi serbuk
daun ubi jalar ungu menggunakan etanol 96%. Uji penghambatan dibedakan
menjadi reaksi dengan ekstrak dan reaksi tanpa ekstrak. Akarbosa menjadi kontrol
positif. Hasil IC50 diperoleh dari regresi linear absorbansi vs konsentrasi ekstrak.
Uji kinetika menggunakan reaksi inhibitor dan tanpa inhibitor. Konsentrasi
ekstrak yang digunakan untuk uji kinetika adalah konsentrasi yang dapat
menghambat enzim sebesar 50%. Absorbansi dari kedua uji tersebut dibaca pada
panjang gelombang 400 nm menggunakan ELISA reader.
Hasil penelitian diperoleh ekstrak etanol daun ubi jalar ungu dapat
menghambat aktivitas enzim α-glukosidase dengan nilai rata-rata IC50 22,39
μg/mL. Hasil uji kinetika diperoleh jenis penghambatan sampel ini termasuk
dalam tipe inhibisi campuran.

Kata kunci : daun Ipomoea batatas L., enzim α-glukosidase, IC50, kinetika
penghambatan

xv
 ABSTRACT

Diabetes mellitus was a disease that was the source of the bad health on
the world. One of the diabetes mellitus treatment was by inhibiting the enzyme α-
glucosidase. Antidiabetic drug had been widely used for therapy, but most
antidiabetic and insulin drugs had the larger side effect than traditional drugs.
Sweet potato leaves often used as a traditional antidiabetic drugs. This study
aimed to determine the activity of α-glucosidase enzyme inhibition by ethanol
extract of purple sweet potato leaves, the IC50 value and the kinetisc of the
inhibition.
The ethanol extract of purple sweet potato leaves was obtained by
maceration of powder of plants using 96% ethanol. Inhibition test was divided into
reactions with extracts and reaction without extract. Acarbose be a positive
control. IC50 results obtained from linear regression of absorbance vs
concentration of the extract. Kinetics test was using the inhibitor reaction and
without inhibitor. The consentration extract used to kinetics test is the
concentration that could inhibit the enzyme by 50% . Absorbance of the both test
was read at wavelength 400 nm using ELISA reader.
The study results obtained that ethanol extract of purple sweet potato
leaves could inhibit enzyme activity α-glucosidase with an average IC50 value
22,39μg / mL. Result of kinetic test obtained that this inhibition sample type
belongs to mixed-type inhibiton.

Keywords : Ipomoea batatas L. leaves, enzyme α-glucosidase, IC50, inhibition

kinetic

xvi
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Diabetes melitus adalah gangguan metabolisme dari beberapa etiologi yang
ditandai dengan hiperglikemia kronis dan gangguan karbohidrat, lemak, dan
metabolisme protein, yang dihasilkan dari cacat pada sekresi insulin, kerja insulin,
atau keduanya. Efek diabetes mellitus meliputi kerusakan jangka panjang,
disfungsi, dan kegagalan berbagai organ (WHO, 1999). Diabetes melitus adalah
penyakit yang umum dijumpai di masyarakat. Buruknya kesehatan di seluruh
dunia bersumber dari diabetes mellitus. Menurut International Diabetes
Federation, terdapat 10 negara dengan tingkat penderita diabetes mellitus paling
tinggi yaitu China pada peringkat pertama, kemudian diikuti oleh India, USA,
Brazil, Rusia, Meksiko, Indonesia, Jerman, Mesir dan Jepang. Indonesia
menempati peringkat ke 7 dengan penderita diabetes melitus paling banyak
(International Diabetes Federation, 2013).
Berbagai upaya pengobatan diabetes mellitus sudah banyak dilakukan. Obat
hipoglikemik oral mempunyai berbagai macam mekanisme pengobatan, salah
satunya adalah sebagai inhibitor enzim α-glukosidase. Enzim α-glukosidase
adalah enzim yang berperan dalam pemecahan karbohidrat menjadi glukosa pada
saluran pencernaan (Subroto, 2006). Enzim ini dapat meningkatkan kadar gula
darah. Akarbosa adalah obat antidiabteik yang bekerja dengan cara menghambat
aktivitas enzim α-glukosidase (Dipiro et al., 2008). Penggunaan obat tradisional
antihiperglikemik juga dapat dijadikan terapi agar terhindar dari diabetes mellitus.
Obat tradisional mempunyai efek samping lebih kecil dibandingkan dengan
penggunaan insulin atau obat hipoglikemik oral yaitu overdosis selama
pengobatan (Niwa et al., 2011). Disisi lain, kebanyakan obat antidiabetes lebih
mahal dibandingkan dengan obat tradisional.

1
 2

Banyak tanaman obat yang sudah dimanfaatkan untuk pengobatan diabetes

mellitus. Allium cepa L (bawang merah), Allium sativum L (bawang putih), Aloe
vera (L) Burm adalah contoh obat herbal yang digunakan untuk pengobatan
diabetes mellitus (Bordoloi and Dutta, 2014). Spesies Ipomoea yang memiliki
efek sebagai antidiabetes adalah Ipomoea batatas dan Ipomoea aquatica (Meira et
al., 2011). Enzim alfa glukosidase dapat dihambat oleh berbagai macam
tumbuhan Indonesia dengan nilai IC50 rendah. Jambu mete, tapak dara, daun
sembung, mahoni, gadung (Mashita, 2011) dan daun ubi jalar (Sirvastava et al.,
2015) adalah contoh dari tumbuhan tersebut.
Penelitian antidiabetes pada daun ubi jalar masih kurang sehingga perlu
diadakan studi manfaat ekstrak daun ubi jalar ungu sebagai penghambat aktivitas
enzim α-glukosidase. Berdasarkan uraian diatas maka penelitian ini dilakukan
untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak
etanol daun ubi jalar ungu (Ipomoea batatas L).

B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut maka rumusan penelitian ini adalah :
1. Apakah ekstrak etanol daun ubi jalar ungu memiliki aktivitas penghambatan
enzim α-glukosidase?
2. Berapa nilai IC50 ekstrak daun ubi jalar ungu yang dapat menghambat aktivitas
enzim α-glukosidase?
3. Bagaimana kinetika penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak daun ubi
jalar ungu?

C. Tujuan penelitian
Berdasarkan latar belakang dan rumusan masalah tersebut maka tujuan
dilakukannya penelitian ini adalah :
1. Mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak etanol
daun ubi jalar ungu.
2. Mengetahui nilai IC50 ekstrak daun ubi jalar ungu yang dapat menghambat
aktivitas enzim α-glukosidase.
 3

3. Mengetahui kinetika penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak daun ubi

jalar ungu

D. Tinjauan Pustaka
1. Diabetes Melitus
Diabetes melitus adalah suatu penyakit yang ditandai dengan penurunan
sekresi dan atau resistensi insulin karena kelainan metabolik. Hal tersebut
menyebabkan kadar glukosa darah dalam tubuh naik (hiperglikemia) pada kondisi
normal akibat metabolisme glukosa di dalam darah tidak berjalan dengan baik
(Mun’im dan Hanami, 2011)
Diabetes melitus digolongkan menjadi beberapa macam, yaitu :
a. Diabetes melitus tipe 1 (Insulin Dependent Diabetes Melitus)
Pada diabetes tipe ini terjadi kekurangan insulin absolut yang disebabkan oleh
kerusakan sel beta pankreas. Penyebab IDDM belum begitu jelas, tetapi diduga
kuat disebabkan oleh infeksi virus dan dapat juga disebabkan oleh faktor
keturunan. Penderita IDDM tidak dianjurkan mengkonsumsi obat antidiabetika
oral, tetapi tergantung pada terapi insulin. Diabetes tipe ini tidak dapat
disembuhkan dan tergantung pada injeksi insulin selama hidupnya (Subroto,
2006)
b. Diabetes melitus tipe 2 (Non Insulin Dependent Diabetes Melitus)
Pada diabetes tipe ini terjadi gangguan sekresi insulin yang progresif karena
insulin mengalami resistensi. Penyebab NIDDM adalah faktor genetik dan pola
hidup yang tidak sehat. Terapi yang dilakukan untuk diabetes tipe ini adalah
dengan penggunaan obat antidiabetika oral dan diimbangi dengan perubahan gaya
hidup, seperti mengatur pola makan yang baik, olahraga secara teratur, tidak
merokok dan tidak mengkonsumsi minuman beralkohol (Subroto, 2006).
c. Diabetes melitus kehamilan
Diabetes tipe ini terjadi pada wanita hamil selama masa kehamilannya dan
dapat normal kembali setelah kehamilan. Penderita diabetes tipe ini harus
ditangani dan dikontrol dengan baik karena dapat berkembang lebih lanjut setelah
masa kehamilan serta dapat berakibat buruk pada janin (Subroto, 2006).
 4

d. Diabetes melitus tipe lain

Penyebab diabetes tipe ini adalah faktor lain seperti penyakit pankreas
eksokrin, efek genetis pada fungsi sel beta pankreas pada kerja insulin atau karena
penggunaan obat (Subroto, 2006).

2. Pengobatan Diabetes Mellitus

Tujuan utama dari manajemen DM adalah untuk mengurangi risiko
mikrovaskuler dan komplikasi penyakit kardiovaskular, untuk memperbaiki
gejala, mengurangi angka kematian, dan untuk meningkatkan kualitas hidup.
a. Terapi tanpa obat
Pada individu dengan DM tipe 1, fokusnya adalah mengatur pemberian
insulin dengan diet seimbang untuk mencapai dan mempertahankan berat badan
yang sehat. Penderta DM tipe I dianjurkan konsumsi karbohidrat yang cukup dan
rendah lemak (<7% dari total kalori) dengan fokus pada makanan seimbang.
Pasien harus memahami hubungan antara asupan karbohidrat dan kontrol glukosa.
Selain itu, pasien dengan DM tipe 2 dengan obesitas sering membutuhkan
pembatasan kalori dan tidak makan makanan ringan saat menjelang tidur. Secara
umum, kebanyakan pasien dengan DM bisa mendapatkan keuntungan dari
peningkatan aktivitas. Hal-hal yang dapat dilakukan antara lain dengan latihan
aerobik untuk meningkatkan resistensi insulin dan kontrol glikemik, mengurangi
faktor risiko kardiovaskular, memberikan kontribusi untuk penurunan atau
pemeliharaan berat badan, dan meningkatkan kesejahteraan (Dipiro et al., 2008).
b. Terapi Obat
Pengobatan farmakologis yang tersedia untuk pasien diabetes adalah dengan
menggunakan obat hipoglikemik oral dan menggunakan insulin.
1) Obat hipoglikemik Oral
a) Sulfonilurea
Mekanisme utama dari aksi sulfonilurea adalah peningkatan sekresi insulin.
Obat-obat yang termasuk dalam golongan sulfonilurea adalah asetoheksamid,
klorpropamid, tolazamid, tolbutamit, glipizid, gliburid, glimepirid (Dipiro et al.,
2008).
 5

b) Biguanida
Metformin adalah obat golongan biguanida. Mekanisme kerja metformin
adalah meningkatkan sensitivitas insulin baik (otot) jaringan hati dan perifer. Hal
ini menyebabkan peningkatan penyerapan glukosa ke dalam jaringan (Dipiro et
al., 2008).
c) Tiazolidindion
Obat-obat yang termasuk dalam golongan tiazolidindion adalah pioglitazon
dan rosiglitazon. Mekanisme kerja obat golongan ini adalah meningkatkan
sensitivitas insulin pada jaringan otot, hati, dan lemak secara tidak langsung
(Dipiro et al., 2008).
d) α-glukosidase inhibitor
Mekanisme obat golongan α-glukosidase inhibitor adalah dengan
menghambat penguraian sukrosa dan kompleks karbohidrat di usus kecil. Obat ini
bekerja secara kompetitif menghambat enzim (maltase, isomaltase, sukrase, dan
glukoamilase) di usus kecil. Contoh obat dengan mekanisme penghambatan
enzim α-glukosidase adalah akarbosa dan miglitol (Dipiro et al., 2008).
e) DPP IV inhibitor
Mekanisme kerja DPP IV inhibitor adalah meningkatkan kadar GLP-1,
meningkatkan sekresi insulin serta menghambat pelepasan glukagon. Obat yang
termasuk dalam golongan DPP IV inhibitor adalah sitagliptin (Dipiro et al., 2008).
2) Terapi Insulin
Insulin diperlukan bagi penderita diabetes mellitus tipe 1. Pada penderita
diabetes mellitus tipe 2, penggunaan insulin diperlukan jika gula darahnya tidak
dapat dikendalikan dengan diet dan antidiabetik oral, diabetes mellitus pada
kondisi khusus misalnya pada kehamilan dan kompilasi akut (Sukandar et al,
2013).

3. Ubi Jalar
Ubi jalar merupakan salah satu tanaman yang mempunyai indeks glikemik
rendah. Indeks glikemik yang ada pada ubi jalar bermanfaat bagi pasien diabetes
 6

yang mengkonsumsi ubi jalar. Pengontrolan kadar glukosa darah dapat dilakukan
dengan memprediksi diet sehari-hari dengan menggunakan indeks glikemik. Serat
yang cukup tinggi dalam ubi jalar bermanfaat untuk saluran pencernaan (Allen et
al., 2012)
Taksonomi ubi jalar menurut Tjitrosoepomo (2004):
Kerajaan : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Solanales
Suku : Convolvulaceae
Marga : Ipomoea
Jenis : Ipomoea batatas L.
a. Komponen ubi jalar
Komponen antinutrisi pada tanaman ubi jalar diantaranya alkaloid, tanin,
saponin, antosianin, steroid, flavonoid, asam askorbat, glikosida jantung, fenolik
flavonoid, antrakuinon, kumarin, dan triterpenoid (Anbuselvi dan Muthumani,
2014). Empat komponen yang diisolasi dan teridentifikasi ada dalam ubi jalar
adalah sitrusin, asam kafeat, 3,4-di-O-caffeoylquinic acid, 1,2,3,4-tetrahydro-
beta-carboline-3-carboxylic acid (Yin et al., 2008). Daun merupakan bagian
tanaman dari ubi jalar yang memiliki komponen dasar kalsium, magnesium, besi,
seng, potasium, mangan, fosfor, garam, vitamin A dan vitamin C. Komponen lain
seperti sianida, tannin, oksalat juga terdapat di daun ubi jalar (Antia et al., 2006).
Enam komponen yang diisolasi dari ekstrak etanol 90% menghasilkan senyawa
yang teridentifikasi adalah tetrakosane, asam miristat, beta sitosterol, beta
karotene, daukosterol dan kuersetin (LY et al., 2009). Hasil isolasi fraksi metanol
dan butanol daun ubi jalar ungu teridentifikasi tiga senyawa flavonoid, yaitu
kuersetin 3-O-β-D-soforosida, kuersetin 3β-O-glukosida dan kuersetin, satu
derivat asam kafeat, yaitu asam 3,4-di-O-kafeoil isokuinik, tiga seskuiterpenes,
yaitu ananosmosida, kariolane-1,9β-diol, dan klovane-2β,9α-diol, satu iridoid
glukosida, yaitu 8-O-asetil-harpagide, satu monoterpenoid triol, dua
 7

fenilpropanoid, yaitu eugenil O-β-D-glukopiranosida dan eugenol, satu ligand,

yaitu finoresinol-β-d-glukosida, tiga derivat benzena, yaitu benzil β-D-glukosida,
4-hidroksi-3-metoksibenzaldehida dan metil 4-hidroksi-3-metoksibenzoat, satu
alkaloid, yaitu indole-3-aldehid, satu kumarin, yaitu 6-metoksi-7-hidroksikumarin,
satu amida, yaitu trans-N-feruloiltiramin, satu derivat isoprene yaitu 2-metil-
1,2,3,4-butanetetrol, satu diterpen yaitu andrografolid dan satu steroid, yaitu
sitosterol-3-β-D-glukosa (Lee et al., 2016). Ekstraksi daun ubi jalar menunjukkan
adanya total flavonoid dan total fenolik (Hue et al., 2012).
b. Kegunaan ubi jalar
Tanaman ubi jalar dalam masyarakat telah banyak digunakan sebagai obat
tradisional. Ubi jalar sering dimanfaatkan sebagai antioksidan, antikarsinogen,
antimutagen, antimikroba, antiinflamasi, antihipertensi, anti-HIV, antidiabetes,
mengatasi sembelit, mengurangi luka hati, dan efek perlindungan ultraviolet
(Subroto, 2006). Antioksidan yang tinggi terdapat dalam ubi jalar (Ji et al., 2015)
dan efek neuroinflamatori terdapat dalam ubi jalar ungu (Kang et al., 2014). Ubi
jalar memiliki efek antihiperglikemia pada tikus melalui penghambatan aktivitas
maltase (Matsui et al., 2002). Daun yang merupakan komponen dari ubi jalar
mempunyai berbagai manfaat.Kegunaan daun ubi jalar adalah untuk obat
antidiabetes, antioksidan, antimutagen antikarsinogen serta antibakteri (Islam,
2006). Efek hipoglikemik pada daun ubi jalar dengan cara merangsang sekresi
insulin (Lien et al., 2011) dan ekstrak daun ubi ungu mempunyai efek antioksidan
(Rahayu, 2014)

4. Enzim α-Glukosidase
Enzim yang berperan dalam saluran pencernaan untuk memecah karbohidrat
menjadi glukosa adalah enzim α-glukosidase. Nasi, kentang, dan pasta merupakan
contoh makanan sehari-hari yang dicerna oleh enzim di dalam mulut dan usus
yang diubah menjadi gula yang sederhana. Gula tersebut akan diserap oleh tubuh
sehingga mengakibatkan kadar gula dalam darah naik. Karbohidrat yang dicerna
menyebabkan lepasnya enzim α-amilase dari pankreas menuju ke dalam usus,
kemudian di dalam usus karbohidrat dicerna menjadi oligosakarida dan dirombak
 8

lagi menjadi glukosa oleh enzim α-glukosidase. Sel-sel usus kecil akan
mengeluarkan glukosa dan tubuh akan menyerap glukosa tersebut. Penghambatan
kerja enzim α-glukosidase dapat mengendalikan kadar glukosa darah dalam batas
yang normal (Subroto, 2006). Mempertahankan kadar glukosa darah dalam
kisaran yang normal adalah tujuan utama dari pengobatan diabetes melitus.
Tumbuhan obat mempunyai mekanisme yang hampir sama dengan obat
konvensional dalam mengontrol glukosa darah. Lebih dari satu mekanisme aksi
yang dimiliki oleh tumbuhan obat sehingga tumbuhan obat memiliki keunggulan.
Obat herbal dalam mengontrol kadar glukosa darah melalui beberapa mekanisme
yaitu dengan cara menghambat hidrolisis karbohidrat menjadi glukosa pada
saluran cerna yang mengakibatkan penurunan jumlah glukosa yang diserap ke
dalam darah, menghambat pembentukan gula di hati, dan meningkatkan sekresi
insulin dan sensitivitasnya (Mun’im dan Hanami, 2011)
α-glukosidase inhibitor kompetitif menghambat enzim (maltase, isomaltase,
sukrase, dan glukoamilase) di usus kecil, menunda pemecahan sukrosa dan
kompleks karbohidrat. α-glukosidase inhibitor tidak menyebabkan malabsorpsi
nutrisi. Efek dari mekanisme ini adalah untuk mengurangi kenaikan glukosa darah
postprandial. Contoh obat dengan mekanisme penghambatan enzim α-glukosidase
adalah akarbosa dan miglitol (Dipiro et al., 2008).
pNPG atau p-nitrofenil α-D-glukopiranosida adalah substrat yang digunakan
untuk pengujian α-glukosidase inhibitor. Uji penghambatan enzim α-glukosidase
dilakukan untuk mengetahui aktivitas antihiperglikemik dari ekstrak daun ubi jalar
ungu. Mekanisme inhibitor enzim α-glukosidase dengan cara menghidrolisis p-
nitrofenil α-D-glukopiranosida dan akan mengubahnya menjadi p-nitrofenol
dengan warna kuning dan glukosa. Pengukuran aktivitas enzim didasarkan pada
hasil absorbansi p-nitrofenil dalam warna kuning (Sugiwati et al., 2009).

5. Kinetika Penghambatan Enzim

Kinetika dilakukan untuk menentukan jenis penghambatan dari inhibisi enzim
α-glukosidase. Penentuan jenis penghambatan melalui plot Lineweaver-Burk
 9

dengan menggunakan persamaan regresi linear y = ax + b, y merupakan 1/v dan x

adalah 1/[S].
1 Km 1 1
= 𝑉𝑚𝑎𝑥 (𝑆) + 𝑉𝑚𝑎𝑥 (1)
𝑣

Ketika 1 / V diplotkan terhadap 1 / [S], akan diperoleh garis perpotongan Y =

1/Vmax; gradien = Km / Vmax; dan garis lurus perpotongan X = -1/Km. Plot
Lineweaver-Burk yang paling banyak digunakan untuk melinearkan data dan
memberikan perkiraan yang paling tepat untuk Km dan Vmax. Km menunjukkan
afinitas enzim untuk substrat. Vmax adalah kecepatan maksimum rekasi dalam
kondisi tertentu, V adalah kecepatan awal reaksi (Mohanet al., 2013). KAP dan
VAP adalah nilai Kmax dan Vmax pada sistem dengan inhibitor, sedangkan K dan V
adalah nilai Kmax dan Vmax pada sistem tanpa inhibitor (Illanes et al., 2008).
Klasifikasi inhibitor ada 2 macam yaitu reversibel dan irreversibel. Macam
inhibitor reversibel adalah adalah sebagai berikut :
a. Inhibitor Kompetitif
Inhibitor kompetitif biasanya memiliki kesamaan struktural dengan substrat
sehingga bersaing untuk menempati sisi aktif enzim. Inhibitor jenis ini hanya
dapat mengikat enzim bebas, bukan enzim yang berikatan dengan substrat. Oleh
karena itu penghambatan dapat diatasi dengan meningkatkan konsentrasi substrat
dalam campuran reaksi (Mohan et al., 2013).
b. Inhibitor Nonkompetitif
Inhibitor nonkompetitif, ikatan inhibitor dapat mengurangi aktivitas enzim, tetapi
tidak berpengaruh terhadap ikatan substrat. Oleh karena itu tingkat penghambatan
hanya tergantung pada konsentrasi inhibitor. Ikatan inhibitor bukan pada situs
enzim yang terikat substrat namun pada sisi yang lain. Oleh karena itu pengikatan
substrat dan inhibitor tidak berpengaruh satu sama lain dan penghambatan tidak
dapat diatasi dengan meningkatkan konsentrasi substrat. Vmax berkurang tetapi Km
tidak berpengaruh (Mohan et al., 2013).
c. Inhibitor tipe campuran (kompetitif dan nonkompetitif)
Inhibitor jenis ini dapat mengikat enzim bebas maupun enzim yang berikatan
dengan substrat. Inhibitor dapat dikurangi dengan menambahkan lebih banyak
substrat tetapi penambahan tersebut tidak benar-benar bisa mengatasi seperti
 10

dalam penghambatan kompetitif. Jenis inhibitor ini sebagian besar alosterik di

alam, dan inhibitor bekerja dengan mengikat ke situs selain sisi aktif enzim yang
menyebabkan konformasi perubahan struktur enzim, mengurangi afinitas substrat
untuk sisi aktif enzim. Oleh karena itu Km meningkat tetapi Vmax berkurang
(Mohan et al., 2013).

Kompetitif

Non Kompetitif

Tipe Campuran

Gambar 1. Grafik macam kinetika penghambatan (Illanes et al., 2008)

E. Keterangan Empiris
Daun ubi jalar telah digunakan sebagai obat tradisional diabetes mellitus tipe 2
ataudiabetes yang tidak tergantung pada insulin (Islam, 2006). Uji secara in vivo
 11

yang dilakukan oleh Li et al (2009) menjelaskan bahwa ekstrak daun ubi jalar
dapat menurunkan kadar gula darah pada tikus yang diinduksi dengan aloksan.
Penurunan kadar glukosa darah tikus yaitu sebesar 22,70±3,40 (hari ke 0),
17,20±2,34 (hari ke 7), 13,83±2,78 (hari ke 14), 9,72±2,22 (hari ke 28). Hasil
ekstrak daun ubi jalar menunjukkan aktivitas antidiabetes pada tikus yang
diinduksi dengan aloksan dan tidak ada tanda-tanda ketoksikan (Ogunrinola, et
al., 2015). Penelitian yang dilakukan oleh Lien et al (2011) menunjukkan bahwa
fraksi etil asetat daun ubi jalar mempunyai efek hipoglikemik dan mampu
merangsang sekresi insulin.
Penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan informasi ilmiah tentang
pengaruh ekstrak daun ubi jalar ungu terhadap aktivitas enzim α-glukosidase.
 BAB II
METODOLOGI PENELITIAN

A. Kategori dan Rancangan Penelitian

Penelitian yang dilakukan bersifat eksperimental yaitu untuk mengetahui
aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak etanol daun ubi jalar
ungu.

B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas : konsentrasi ekstrak etanol daun ubi jalar ungu
(Ipomoea batatas L)
2. Variabel tergantung : aktivitas penghambatan enzim alfa glukosidase
3. Variabel terkendali : suhu, waktu inkubasi, pH

C. Alat dan Bahan

1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari mikroplate 96 sumuran
(Iwaki), ELISA reader (ELX 800 Bio Tech), waterbath, mikropipet (Soccorex),
inkubator (Memmert), vortex (Genie), timbangan analitik (Sartorius), rotary
evaporator (Heidolp), pipet tetes, beker gelas (Pyrex), dan alat gelas lainnya.
2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya daun ubi jalar
ungu (Ipomoea batatas L) yang diperoleh dari desa Regaloh kecamatan
Tlogowungu kabupaten Pati, enzim α-glukosidase 10 unit/mL, buffer fosfat (pH
6,8), p-nitrofenil glukopiranosida (pNPG), Na2 CO3 200 mM, tablet acarbose®,
serum bovin albumin, dimetilsulfoksida (DMSO), etanol 96%, HCl 0,1 N, NaOH
0,1 N, KH2PO4 0,2 N, microtube, aqua pro injection.

12
 13

D. Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi dan Kimia Farmasi,
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

E. Jalanya Penelitian
1. Penyiapan bahan
Bagian tanaman yang digunakan yaitu daun, dipilih dan dibersihkan dari
kotoran dengan air. Daun yang sudah dicuci bersih dikeringkan dibawah sinar
matahari sambil ditutup dengan menggunakan kain hitam. Daun yang sudah
kering diserbukkan dengan cara diblender.
2. Ekstraksi
Serbuk simplisia sebanyak 350 gram diekstraksi dengan cara maserasi
menggunakan etanol 96%. Etanol 96% yang digunakan adalah 7,5 kali bobot
serbuk simplisia yaitu sebesar 2,625 liter. Maserasi dilakukan selama 3x24 jam
dengan pengadukan. Setelah itu maserat disaring dan dilakukan remaserasi
sebanyak 2 kali. Filtrat dipekatkan menggunakan rotary evaporator. Filtrat
diuapkan diatas waterbath dan didapatkan ekstrak kental.
3. Penyiapan bahan uji
a. Pembuatan larutan BSA (serum bovin albumin)
Larutan dibuat dengan menimbang 100 mg serum bovin albumin dan
dilarutkan hingga 50 mL buffer fosfat pH 6,8.
b. Penyiapan larutan enzim
Larutan enzim yang tersedia adalah 10 unit/mL, kemudian dari 10 unit/mL
tersebut diambil 50 μL dan ditambahkan larutan BSA hingga 10 mL. Konsentrasi
akhir enzim adalah 0,05 unit/mL.
c. Pembuatan larutan Na2CO3 200 mM
Larutan dibuat dengan melarutkan natrium karbonat sebanyak 1,06 gram
dalam akuades hingga 50 mL.
 14

d. Pembuatan buffer pH 6,8

KH2PO4 0,2 N sebesar 1,361 gram dilarutkan dalam akuades hingga 50 mL.
Larutan tersebut ditambahkan NaOH 0,1 N sedikit demi sedikit hingga pH
mencapai 6,8 dan ditambahkan air bebas CO2 hingga 200 mL.
e. Pembuatan larutan substrat pNPG
Sebanyak 60,3 mg p-nitrofenilglukopiranosida ditambahkan dengan aqua pro
injection sampai 10 mL untuk membuat larutan pNPG 20 mM.
f. Penyiapan larutan sampel
Larutan stok 4% dibuat dengan menimbang 200 mg sampel ekstrak yang
dilarutkan dengan DMSO hingga 5 mL. Seri konsentrasi yang dibuat yaitu 12,5,
25, 50, 75, dan 100 ppm yang diambil dari larutan stok.
4. Uji inhibisi α-glukosidase
Pada pengujian terhadap daya inhibisi aktivitas enzim α-glukosidase,
campuran berisi 1 uL ekstrak daun ubi jalar, 25uL p-nitrofenil glukopiranosida
(pNPG) (20 mM) sebagai substrat, buffer fosfat pH 6,8 sebanyak 49 uL dan 1 uL
DMSO. Campuran tersebut diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37℃, kemudian
ditambahkan larutan enzim sebanyak 25 uL dan diinkubasi selama 15 menit.
Reaksi dihentikan dengan menambahkan Na2 CO3 200 mM sebanyak 100 uL,
kemudian absorbansi p-nitrofenol dibaca pada panjang gelombang 400 nm
menggunakan ELISA reader (Purwatresna, 2012).
Tabel 1. Sistem reaksi inhibisi α-glukosidase
Blanko C S0 S1
Ekstrak (µL) - - 1 1
DMSO (µL) 1 1 - -
Buffer (µL) 49 49 49 49
Substrat 25 25 25 25
Inkubasi 37°C selama 5 menit
Buffer 25 - 25 -
Enzim - 25 - 25
Inkubasi 37°C selama 15 menit
Na2CO3 (µL) 100 100 100 100
Keterangan :
Blanko = Sistem reaksi tanpa adanya ekstrak dan enzim
C = Campuran tanpa ekstrak
S0 = Campuran tanpa enzim namun dengan ekstrak
S1 = Campuran dengan enzim dan ekstrak
 15

5. Penyiapan larutan standar (akarbosa)

Tablet acarbose® sebanyak 4 digerus dan ditimbang 200 mg. Kemudian
dilarutkan ke dalam buffer dan HCl 0,1 N dengan perbandingan 1:1 hingga 5 mL
dan disentrifuse. Berat akarbosa murni yang digunakan adalah 78,62 mg.
Konsentrasi larutan stok akarbosa murni yaitu 1,5724%. Sistem reaksi
penghambatan enzim α-glukosidase oleh akarbosa sama dengan sistem reaksi
penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak.
6. Kinetika penghambatan α-glukosidase
Cara mengetahui kinetika inhibisi α-glukosidase adalah dengan 2 sistem
reaksi, yaitu sistem reaksi tanpa inhibitor dan sistem reaksi dengan inhibitor
berupa ekstrak etanol daun ubi jalar ungu. Konsentrasi substrat p-NPG yang
digunakanuntuk pengujian yaitu 0,625; 1,25; 2,5; 5; 10 μM, kemudian dibaca
absorbansi dengan ELISA reader pada panjang gelombang 400 nm.
Tabel 2. Sistem reaksi kinetika inhibisi enzim α-gukosidase
S0 (tanpa ekstrak dengan enzim) S1 (ekstrak dengan ekstrak)
Ekstrak (µL) - 1
Buffer (µL) 49 49
Substrat 25 25
Inkubasi 37℃ selama 5 menit
Enzim 25 25
Inkubasi 37℃ selama 15 menit
Na2CO3 (µL) 100 100

F. Analisis data
1. Uji Inhibisi Enzim α-glukosidase
Analisis data dilakukan dengan cara menghitung persentase inhibisi α-
glukosidase. Data yang diperoleh dari hasil pengukuran absorbansi dapat dihitung
menggunakan persamaan :
(𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙)− (𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑢𝑗𝑖)
% Penghambatan = X 100 % (2)
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙

Keterangan :
Absorbansi kontrol (DMSO) = tanpa sampel (kontrol-blanko)
Absorbansi sampel uji = S1-S0
S1 = Absorbansi sampel dengan penambahan enzim
 16

S0 = Absorbansi sampel tanpa penambahan enzim

Perhitungan IC50 menggunakan pesamaan regresi linier, konsentrasi sampel
sebagai sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y. Nilai IC50 dapat dihitung dari
persamaan y = bx + a dengan menggunakan rumus:
50−𝑎
IC50 = (3)
𝑏

(Sugiwati et al., 2009)

2. Uji Kinetika Penghambatan Enzim α-glukosidase
Analisis data dilakukan dengan menghitung p-NP kemudian dari hasil p-NP
digunakan untuk menghitung aktivitas enzim. Sistem reaksi dengan inhibitor dan
tanpa inhibitor dihitung dengan rumus yang sama.
𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 −𝑎
Rumus perhitungan p-NP = (4)
𝑏

Keterangan :
Nilai a dan b didapatkan dari regresi linear pada kurva baku p-NP
𝑝−𝑁𝑃
Rumus perhitungan aktivitas enzim = (5)
𝑉𝑥𝑡

Keterangan :
V = volume enzim yang digunakan untuk sistem reaksi
T = waktu inkubasi
 BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Ekstraksi Simplisia

Pada penelitian ini digunakan daun ubi jalar ungu yang diperoleh dari desa
Regaloh kecamatan Tlogowungu Kabupaten Pati. Daun ubi jalar ungu yang sudah
dibersihkan, kemudian dikeringkan melalui proses penjemuran dibawah sinar
matahari. Tujuan dari pengeringan adalah agar kadar air yang ada pada simplisia
berkurang sehingga dapat menghindari pembusukan yang mengakibatkan
penurunan mutu simplisia dan membunuh jaringan tumbuhan untuk menghindari
terhidrolisinya kandungan senyawa simplisia yang berpengaruh terhadap enzim
(Harbone, 1987). Daun ubi jalar ungu yang sudah kering kemudian diblender
untuk mendapatkan simplisia daun ubi jalar ungu. Metode yang digunakan untuk
ekstraksi pada penelitan ini adalah dengan cara maserasi. Maserasi adalah metode
untuk pembuatan ekstrak dengan menggunakan pelarut yang disertai dengan
pengadukan atau pengocokan yang dilakukan pada suhu ruang (Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, 2000). Simplisia yang digunakan untuk maserasi
adalah sebanyak 350 gram dengan membutuhkan etanol 96% sebanyak 2,625
liter. Etanol 96% dipilih karena senyawa kimia yang diperoleh lebih banyak,
sehingga etanol 96% terpilih sebagai pelarut untuk mengekstraksi bahan baku
berupa sediaan herbal medicine (Arifianti et al., 2014). Perendaman simplisia
selama 3x24 jam dan sesekali dilakukan pengadukan. Filtrat yang dihasilkan dari
penyaringan maserat kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator.
Hasil evaporasi diuapkan diatas waterbath untuk mendapatkan ekstrak kental
daun ubi jalar ungu. Remaserasi dilakukan sebanyak 2x agar ekstrak yang
didapatkan banyak. Bobot akhir ekstrak kental daun ubi jalar ungu yang diperoleh
sebanyak 11,59%, yakni sebanyak 40,553 gram.

17
 18

Gambar 2. Ekstrak etanol daun ubi jalar ungu

B. Uji Penghambatan Enzim α-glukosidase

Uji penghambatan enzim α-glukosidase dilakukan dengan menggunakan

beberapa konsentrasi ekstrak daun ubi jalar ungu. Konsentrasi ekstrak yang
digunakan dalam pengujian ini yaitu 12,5, 25, 50, 75, dan 100 ppm. Pengujian ini
dilakukan dengan cara mengukur absorbansi p-nitrofenol yang dibaca
menggunakan ELISA reader pada panjang gelombang 400 nm. Konsentrasi
ekstrak yang bervariasi dimaksudkan untuk melihat pengaruh besarnya
penghambatan dari peningkatan konsentrasi ekstrak. Konsentrasi yang semakin
meningkat maka daya inhibisi juga semakin meningkat. Persamaan regresi linear
antara konsentrasi ektsrak dan daya inhibisi akan digunakan untuk menentukan
nilai IC50. Aktivitas enzim α-glukosidase yang dapat dihambat sebesar 50% oleh
konsentrasi inhibitor disebut dengan IC50. Potensi inhibitor akan semakin kuat jika
nilai IC50 semakin kecil (Mohan et al., 2013).

Gambar 3. Persamaan reaksi enzimatik α-glukosidase dan p-NPG

Uji penghambatan ini menggunakan dua reaksi yaitu reaksi dengan

menggunakan ekstrak (Si) dan reaksi tanpa mengguankan ekstrak (S0) dengan
 19

tujuan untuk membandingkan aktivitas enzim alfa glukosidase yang diberi ekstrak
dengan yang tidak diberi ekstrak. Kontrol positif yang digunakan adalah akarbosa
karena akarbosa mempunyai mekanisme dapat menghambat aktivitas enzim α-
glukosidase. Rata-rata nilai IC50 akarbosa dari pengujian ini adalah 36,25 μg/mL,
sedangkan rata-rata nilai IC50 ekstrak daun ubi jalar ungu yaitu 22,39 μg/mL. Jika
dilihat besarnya IC50 pada ekstrak daun ubi jalar ungu memiliki potensi untuk
menghambat enzim α-glukosidase.
Tabel 4. Data % inhibisi dan IC50 ekstrak daun ubi jalar ungu
Ekstrak % inhibisi % inhibisi % inhibisi IC50 IC50 IC50
(ppm) Replikasi I Replikasi II Replikasi Replikasi I Replikasi Replikasi
III II III
12,5 44,99 % 46,31% 45,32 %
25 50,60 % 50,74 % 50,49 %
23,25 21,09 22,71
50 60,48 % 60,08 % 60,39 %
μg/mL μg/mL μg/mL
75 64,75 % 62,88 % 65,12 %
100 69,01 % 67,55 % 68,50 %

Tabel 5. Data % inhibisi dan IC50 akarbosa

Akarbosa % inhibisi % inhibisi % inhibisi IC50 IC50 IC50
(ppm) Replikasi I Replikasi II Replikasi Replikasi I Replikasi Replikasi
III II III
4,91 32,33 % 34,74% 30,65%
9,83 37,33 % 40,26 % 37,58 %
37,35 35,58 35,81
19,65 43,01 % 44,09 % 42,13 %
μg/mL μg/mL μg/mL
29,48 46,64 % 46,85 % 45,17 %
39,31 49,82 % 51,32 % 52,10 %

Beberapa penelitian telah dilakukan mengenai daun ubi jalar sebagai

inhibitor enzim α-glukosidase menghasilkan beberapa variasi nilai IC50. Penelitian
yang dilakukan oleh Sirvastava (2015) menjelaskan bahwa fraksi air daun ubi
jalar pada konsentrasi 100 μg/mL dapat menghambat enzim α-glukosidase sebesar
62,9% dan memiliki IC50 sebesar 53,00±1,20 μg/mL. Nilai IC50 tersebut lebih
besar dibandingkan dengan nilai IC50 pada penelitian ini dikarenakan pada ekstrak
lebih banyak senyawa yang terkandung di dalamnya. Pada jurnal tersebut tidak
menjelaskan jenis daun ubi jalar apa yang dipakai. Nilai % inhibisi enzim α-
glukosidase fraksi alkaloid kasar daun ubi jalar ungu pada konsentrasi 2% adalah
61,88% (Pamungkas et al., 2016). Hasil tersebut tidak berbeda jauh dengan
penelitian ini pada konsentrasi 2% ekstrak daun ubi jalar ungu memiliki rata-rata
 20

% inhibisi sebesar 68,354 %. Menurut berbagai penelitian, bagian tanaman ubi

jalar lain seperti umbi dan akar dapat digunakan sebagai terapi antidiabetes.
Ekstrak antosianin dari umbi ubi jalar ungu memiliki potensi sebagai inhibitor
maltase yang memiliki nilai IC50 sebesar 0,36 mg/mL (Matsui et al., 2002).
Ekstrak antosianin dari umbi ubi jalar memiliki potensi lebih besar dalam
menghambat aktivitas enzim α-glukosidase dibandingkan dengan ekstrak daun
pada penelitian ini. Ekstrak akar ubi jalar memiliki nilai IC50 sebesar 200 ± 4,1
μM (Kumar et al., 2011).
Pada penelitian ini tidak dilakukan uji identifikasi senyawa karena pada
penelitian ini hanya berfokus sesuai dengan tujuan yaitu melihat aktivitas
penghambatan enzim α-glukosidase. Flavonoid diketahui dapat menghambat
aktivitas enzim α-glukosidase (Gu et al., 2015) dan terkandung dalam daun ubi
jalar (Li et al., 2009). Menurut Zhang et al (2016) pada penelitiannya
menunjukkan bahwa kuersetin-3-O-glikosida yang merupakan flavonoid terdapat
dalam daun ubi jalar orange mempunyai nilai IC50 sebanyak 22,38 ± 1,73 μM
yang nilinya hampir sama dengan rata-rata IC50 pada penelitian ini. Senyawa
tersebut dihasilkan dari fraksi etil asetat dan dapat berpotensi sebagai antidiabetes
(Zhang et al., 2016). Flavonoid juga terdapat dalam daun ubi jalar ungu. Hasil
isolasi fraksi metanol dan butanol daun ubi jalar ungu teridentifikasi tiga senyawa
flavonoid, yaitu kuersetin 3-O-β-D-sophoroside, kuersetin 3β-O-glukoside dan
kuersetin (Lee et al., 2016). Namun, karena penelitian ini tidak dilakukan
identifikasi senyawa, sehingga tidak diketahui jenis flavonoid apa yang dapat
menghambat enzim α-glukosidase.

C. Kinetika Penghambatan Enzim α-glukosidase

Uji kinetika dilakukan untuk menentukan jenis penghambatan dari inhibisi

enzim α-glukosidase.Cara untuk menentukan jenis penghambatan melalui plot
Lineweaver-Burk dengan menggunakan persamaan regresi linear y = ax + b,
dimana y = 1/v dan x = 1/[S] (Rodwell et al, 2015). Inhibitor tidak mempengaruhi
 21

kecepatan maksimum rekasi (Vmax) jika1/[S] mendekati nol. Maka saat substrat
pada konsentrasi yang tinggi, Vmax pada sistem dengan inhibitor.
Pengujian ini dilakukan dengan membuat seri konsentrasi dari substrat
pNPG. Seri konsentrasi yang digunakan yaitu 0,625; 1,25; 2,5; 5; 10 μM yang
diuji dengan dua sistem reaksi menggunakan inhibitor atau tanpa inhibitor.
Konsentrasi ekstrak yang digunakan untuk menentukan kinetika inhibisi adalah
pada konsentrasi 0,5% ekstrak daun ubi jalar ungu karena pada konsentrasi
tersebut dapat menghambat sebesar 50,61% aktivitas enzim α-glukosidase. Secara
umum terdapat tiga macam jenis penghambatan, yaitu inhibitor kompetitif, non
kompetitif dan tipe campuran. Inhibitor kompetitif adalah inhibitor yang
mempengaruhi katalisis langkah pertama, yaitu pengikatan substrat pada sisi aktif
enzim tanpa mengganggu pengolahan substrat di dalamnya (Illanes et al., 2008).
Inhibitor jenis ini berkompetisi dengan substrat untuk menduduki sisi enzim
(Champe et al.,2005). Inhibitor nonkompetitif jarang terjadi, inhibitor ini
mempengaruhi kedua langkah katalisis yang mengikat pada sisi aktif enzim
dengan tidak mengganggu pengolahan substrat. Sedangkan inhibitor campuran
adalah inhibitor yang mengganggu kedua langkah katalisis yaitu enzim yang
bebas dan enzim yang berikatan dengan substrat (Illanes et al., 2008). Jika titik
potong antara garis inhibitor dan garis tanpa inhibitor berada di garis y, maka jenis
inhibisi tersebut adalah inhibitor kompetitif, dan jika titik potong berada di garis
x, maka disebut inhibitor nonkompetitif.
Pada penelitian ini ekstrak daun ubi jalar ungu dalam menghambat
aktivitas enzim α-glukosidase mempunyai tipe inhibisi campuran. Hal tersebut
dapat dilihat dari kurva perpotongan garis antara inhibitor dan tanpa inhibitor
yaitu berada diantara x dan y. Selain itu dapat dilihat dari nilai KAP, VAP, K dan V.
KAP dan VAP adalah nilai Kmax dan Vmax pada sistem dengan inhibitor, sedangkan
K dan V adalah nilai Kmax dan Vmax pada sistem tanpa inhibitor. Nilai KAP pada
penelitian ini adalah 2,5 dan VAP 500, sedangkan nilai K adalah 1,62dan V adalah
1250. Dari data tersebut dapat dilihat bahwa KAP > K, VAP < V (Illanes et al.,
2008). Inhibisi tipe campuran pada penelitian ini dapat terjadi karena di dalam
ekstak masih terdapat banyak senyawa kimia sehingga mekanisme penghambatan
 22

belum berfokus pada satu senyawa saja. Contoh inhibisi tipe campuran adalah
inhibisi xantin oksidase oleh ion palladium (Mohanet al., 2013)

0.0120
y = 0.0053x + 0.0021
0.0100 R² = 0.9922
0.0080

0.0060
1/V

y = 0.0013x + 0.0008
0.0040 dengan
R² = 0.975
inhibitor
0.0020
tanpa
0.0000 inhibitor
-1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2
-0.0020
1/S

Gambar 4. Grafik kinetika penghambatan enzim alfa glukosidase

Penelitian ini masih memiliki kekurangan yaitu belum dilakukan isolasi

dan identifikasi kandungan senyawa ekstrak etanol daun ubi jalar ungu yang
dapat menghambat aktivitas enzim α-glukosidase.
 BAB IV
KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka dapat ditarik kesimpulan
bahwa :
1. Ekstrak etanol daun ubi jalar ungu dapat menghambat aktivitas enzim α-
glukosidase dengan nilai IC50 lebih kecil dibandingkan akarbosa.
2. Rata-rata nilai IC50 ekstrak etanol daun ubu jalar ungu adalah 22,39 μg/mL
dan rata-rata IC50 akarbosa adalah 36,25 μg/mL.
3. Tipe penghambatan enzim alfa glukosidase oleh ekstrak etanol daun ubi jalar
ungu adalah inhibisi campuran.

B. Saran
Perlu dilakukan isolasi dan identifikasi kandungan senyawa ekstrak etanol
daun ubi jalar ungu yang dapat menghambat aktivitas enzim alfa glukosidase.

23
 24

DAFTAR PUSTAKA

Allen J.C., Corbitt A.D., Maloney K.P., Butt M.S. and Truong V., 2012, Glycemic
Index of Sweet Potato as Affected by Cooking Methods, Open Nutrition
Journal, 6, 1–11.

Anbuselvi S. and Muthumani S., 2014, Phytochemical and Antinutritional

Constituents of Sweet Potato, Journal of Chemical and Pharmaceutical
Research, 6 (2), 380–383.

Antia B.., Akpan E.., Okon P.. and Umoren I.., 2006, Nutritive and Anti-Nutritive
Evaluation of Sweet Potatoes (Ipomoea batatas) Leaf, Pakistan Journal of
Nutrition, 5 (6), 166–168.

Arifianti L., Oktarina R.D. and Kusumawati I., 2014, Pengaruh Jenis Pelarut
Pengektraksi Terhadap Kadar Sinensetin Dalam Ekstrak Daun Orthosiphon
stamineus Benth, E-Journal Planta Husada, 2 (1).

Bordoloi R. and Dutta K.N., 2014, Review Article A Review on Herbs Used in
the Treatment of Diabetes mellitus, Journal of Pharmaceutical, Chemical,
and Biological Science, 2 (August), 86–92.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2005, Pharmaceutical Care untuk

Penyakit Diabetes Mellitus, Departemen Kesehatan Republik Indoneisa.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000, Simplisia dan Ekstrak, Dalam

Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Jakarta.

Dipiro J.T., Talbert R.L., Yee G.C., Matzke G.R., Wells B.G. and Posey L.M.,
2008, Pharmacotherapy : A Pathophysiologic Approach Seventh Edition,
The Mc Graw Hill Companies.

Gu C., Zhang H., Putri C.Y. and Ng K., 2015, Evaluation of α-Amylase and α-
Glucosidase Inhibitory Activity of Flavonoids, International Journal of Food
and Nutritional Science, 2 (6), 1–6.

Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia: Penentuan Cara Modern Mengekstraksi

Tumbuhan, Diterjemahkan oleh Padmawinata, K., dan Soediro I., Penerbit
ITB, Bandung.

Hue S., Boyce A.N. and Somasundram C., 2012, Antioxidant Activity , Phenolic
and Flavonoid Contents in The Leaves of Different Varieties of Sweet Potato
( Ipomoea batatas ), Australian Journal of Crop Science, 6 (3), 375–380.

IDF, 2013, International Diabetes Federation Sixth Edition, Terdapat di:

 25

www.idf.org/diabetesatlas.

Illanes A., Altamirano C. and Wilson L., 2008, Homogeneous Enzyme Kinetics,
Dalam Enzyme Biocatalysis : Principles and Applicatioons, Springer.

Islam S., 2006, Sweetpotato ( Ipomoea batatas L .) Leaf : Its Potential Effect on
Human Health and Nutrition, Journal of Food Science, 71

Ji H., Zhang H., Li H. and Li Y., 2015, Analysis on the Nutrition Composition
and Antioxidant Activity of Different Types of Sweet Potato Cultivars, Food
and Nutrition Science, 6 (January), 161–167.

Kang H., Kwak Y. and Koppula S., 2014, Protective Effect of Purple Sweet
Potato ( Ipomoea batatas Linn , Convolvulaceae ) on Neuroinflammatory
Responses in Lipopolysaccharide-Stimulated Microglial Cells, Journal of
Pharmaceutical Research, 13 (August), 1257–1263.

Kumar S., Narwal S., Kumar V. and Prakash O., 2011, α-glucosidase Inhibitors
from Plants : A Natural Approach to Treat Diabetes, Pharmacognosy
Reviews, 5 (9), 19–30.

Lee C., Lee S., Chen C., Chen H., Kao M., Liu C., Chen J., Lai Y. and Wu Y.,
2016, Characterization of Secondary Metabolites from Purple Ipomoea
batatas Leaves and Their Effects on Glucose Uptake, Journal Molecules, 21,
1–14.

Li F., Li Q., Gao D., Peng Y., Science A., Zhan J. and Zone D., 2009, The
Optimal Extraction Parameters and Anti-Diabetic Activity of Flavonoids
from Ipomoea batatas Leaf, Afr. J. Traditional. CAM, 6 (2), 195–202.

Lien D.N., Phuc D. Van, Lien P.Q., Trang N.T., Kien T.T., Lien T.T.P. and Tien
K.D., 2011, Effect of Sweet potato ( Ipomoea batatas ( L . ) Lam ) Leaf
Extract on Hypoglycaemia , Blood Insulin Secretion , and Key Carbohydrate
Metabolic Enzymes in Expermentally Obese and STZ-induced Diabetic
Mice, Journal of Science, Natural Science and Technology, 27, 118–124.

LY, Lv., Shi GF., Li CL., Han XZ., Lv QN., 2009, Study on The Chemical
Constituents of The Leaves of Ipomoea batatas, Zong Yao Cai, 32 (6),
Terdapat di: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19230398

Mashita, Maya, Skrining Aktivitas Penghambatan Enzim α-Glukosidase dan

Penapisan Fitokimia dari Beberapa Tanaman Obat Yang Digunakan Sebagai
Antidiabetes di Indonesia, Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia, Depok.

Matsui T., Ebuchi S., Kobayashi M., Fukui K., Sugita K., Terahara N. and
 26

Matsumoto K., 2002, Antihyperglycemic Effect of Diacylated Anthocyanin

Derived from Ipomoea batatas Cultivar Ayamurasaki Can Be Achieved
through the alpha-Glucosidase Inhibitory Action, J. Agric Food Chem, 50,
7244–7248.

Meira, M., Eliezer Pereira de Silva, Jorge M.D., Juceni P.D., 2012, Review of The
Genus Ipomoea : Traditional Uses, Chemistry and Biological Activities,
Brazilian Journal of Pharmacognosy, 22 (3), 682-713.

Mohan C., Long K.D. and Mutneja M., 2013, Enzyme Inhibitors, Dalam An
Introduction to Inhibitors and Their Biological Applications, EMD
Millipore.

Mun’im A. and Hanami E., 2011, Fitoterapi Dasar, PT. Dian Rakyat, Jakarta.

Niwa A., Tajiri T. and Higashino H., 2011, Ipomoea batatas and Agarics blazei
Ameliorate Diabetic Disorders with Therapeutic Antioxidant Potential in
Streptozotocin Induced Diabetic Rats, J. Clin. Biochem. Nutr, 48 (3), 194–
202.

Ogunrinola O.O., Fajana O.O., Olaitan S.N., Adu O.B. and Akinola M.O., 2015,
Anti-Diabetic Activity of Ipomoea batatas Leaves Extract : Effects on
Hepatic Enzymes in Alloxan-Induced Diabetic Rats, Research Journal of
Medicinal Plant, 9 (5), 227–233. Terdapat di:
http://dx.doi.org/10.3923/rjmp.2015.227.233.

Pamungkas D.D.A., Irmanida B. and Suparto I.H., 2016, Fraksi Alkaloid Daun
Ubi Jalar Ungu (Ipomoea batatas var Ayumurasaki) Sebagai Inhibitor α-
Glukosidase, Acta Pharmaciae Indonesia, 4 (1), 1–6.

Purwatresna, E., 2012, Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Air dan Metanol Daun
Sirsak Secara In Vitro Melalui Inhibisi Enzim α-Glukosidase, Skripsi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor,
Bogor.

Rahayu, T., 2014, Uji Antioksidan, Kandungan Fenolat dan Flavonoid Total
Ekstrak Etanol Dari Daun Ubi Ungu (Ipomoea batatas L.) Yang Dikeringkan
Menggunakan Freeze Drying, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas
Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.

Sirvastava A.K., Pal S., Gautam S., Mishra A. and Maurya R., 2015,
Antihyperglycemic and Antidyslipidemic Potential of Ipomoea batatas
Leaves in Validated Diabetic Animal Models, International Journal of
Pharmacy and Pharmaceutical Science, 7 (7)

Subroto A., 2006, Ramuan Herbal untuk Diabetes Melitus, Penebar Swadaya,
 27

Depok.

Sugiwati S., Setiasih S. and Afifah E., 2009, Antihiperglycemic Activity of The
Mahkota Dewa [ Phaleria macrocarpa ( Scheff .) Boerl .] Leaf Extracts as an
Alpha-Glucosidase Inhibitor, Makara, Kesehatan, 13 (2), 74–78.

Sukandar, E.Y., Retnosari A., Joseph I.S., Ketut A., Adji P.S., Kusnandar, 2013,
ISo Farmakoterapi Buku I, ISFI Penerbitan, Jakarta.

Tjitrosoepomo G., 2004, Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta), Gadjah Mada

University Press, Yogyakarta.

WHO, 1999, Definition, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus and Its
Complications, Department of Noncommunicable Disease Surveillance.

Yin, YQ., Shen ZB., Kong LY., 2008, Studies on Chemical Constituents From
Ipomoea batatas, Zhong Yao Cai, 31(10). Terdapat di:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov /pubmed/19230398

Zhang L., Tu Z., Yuan T., Wang H., Xie X. and Fu Z., 2016, Antioxidants and a -
glucosidase inhibitors from Ipomoea batatas leaves identified by bioassay-
guided approach and structure-activity relationships, FOOD CHEMISTRY,
208, 61–67. Terdapat di: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.03.079.
 28

Lampiran 1. Perhitungan rendemen

Cawan kosong = 75,214
Cawan kososng + isi = 115,7677 gram
Zat = 40,553 gram
Berat ekstrak 40,553 gram
Rendemen = Berat simplisia x 100% = 350 gram x 100% = 11,59%
 29

Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi ekstrak sampel

Pembuatan larutan stok 4%
4% = 4 gram/100 mL
= 4000 mg/100 mL
= 200 mg/5 mL
Konsentrasi 2%
M1 x V1 = M2 x V2
4% x V1 = 2% x 1 mL
V1 = 0,5 mL
= 500 μL ekstrak
DMSO = 1000 μL – 500 μL
= 500 μL

Konsentrasi 1,5%
M1 x V1 = M2 x V2
4% x V1 = 1,5% x 1 mL
V1 = 0,375 mL
= 375 μL ekstrak
DMSO = 1000 μL – 375 μL
= 625 μL

Konsentrasi 1%
M1 x V1 = M2 x V2
4% x V1 = 1% x 1 mL
V1 = 0,25 mL
= 250 μL ekstrak
DMSO = 1000 μL – 250 μL
= 750 μL

Konsentrasi 0,5%
M1 x V1 = M2 x V2
4% x V1 = 0,5% x 1 mL
V1 = 0,125 mL
= 125 μL ekstrak
DMSO = 1000 μL – 125 μL
= 875 μL

Konsentrasi 0,25%
M1 x V1 = M2 x V2
4% x V1 = 0,25% x 1 mL
V1 = 0,0625 mL
= 62,5 μL ekstrak
DMSO = 1000 μL – 62,5 μL
= 500 μL
 30

Lampiran 3. Perhitungan konversi akarbosa murni

Jumlah zat aktif 1 tablet = 50 mg
Berat 1 tablet akarbosa = 127,2 mg
Penimbangan = 200 mg ( diambil dari 4 tablet )
( 50 mg x 4 )x 200 mg
Berat zat aktif ( akarbosa ) = 127,2 mg x 4
200 mgx 200 mg
= 508,8 mg
= 78,62 mg
Perhitungan konsentrasi larutan stok
78,62 mg/5 mL = 1572,4 mg / 100 mL
= 1,5724 g / 100 mL
= 1,5724 %
Konsentrasi 0,7862 %
M1 x V1 = M2 x V2
1,5724% x 0,5 mL = M2 x 1 mL
M2 = 0,7862 %

Konsentrasi 0,5897 %
M1 x V1 = M2 x V2
1,5724% x 0,375 mL= M2 x 1 mL
M2 = 0,5897 %

Konsentrasi 0,3931 %
M1 x V1 = M2 x V2
1,5724% x 0,25 mL = M2 x 1 mL
M2 = 0,3931 %

Konsentrasi 0,1966 %
M1 x V1 = M2 x V2
1,5724% x 0,125 mL= M2 x 1 mL
M2 = 0,1966 %

Konsentrasi 0,0983 %
M1 x V1 = M2 x V2
1,5724% x 0,0625 mL= M2 x 1 mL
M2 = 0,0983 %
Lampiran 4. Hasil uji penghambatan enzim alfa glukosidase oleh ekstrak
Rata-
Rerat rata(µg/
Ekstrak Larutan Absorbansi p-NP (μM) Daya inhibisi (%) IC 50 (µg/mL) mL)
a
ppm
1 2 3 1 2 3 1 2 3
Kontrol 0,528 0,511 0,527 294,76 283,51 294,09 0,00 0,00 0,00 0,00 1 2 4

12,5 S₀ 0,130 0,152 0,135 31,36 45,92 34,67 44,99 46,31 45,32 45,54
S₁ 0,375 0,382 0,378 193,50 198,13 195,49

25 S₀ 0,187 0,193 0,198 69,08 73,05 76,36 50,60 50,74 50,49 50,61
S₁ 0,407 0,404 0,418 214,68 212,69 221,96

50 S₀ 0,273 0,271 0,257 125,99 124,67 115,41 60,48 60,08 60,39 60,32 23,25 21,09 22,71 22,39
S₁ 0,449 0,442 0,433 242,48 237,84 231,89

75 S₀ 0,307 0,318 0,329 148,49 155,78 163,06 64,75 62,88 65,12 64,25
S₁ 0,464 0,477 0,484 252,40 261,01 265,64

100 S₀ 0,384 0,370 0,378 199,46 190,19 195,49 69,01 67,55 68,49 68,35
S₁ 0,522 0,509 0,518 290,79 282,18 288,14

31
Lampiran 5. Hasil uji akarbosa terhadap aktivitas enzim alfa glukosidase
Rata-
rata- rata(µg/
larutan absorbansi p-NP (μM) daya inhibisi (%) IC 50 (µg/mL) mL)
Akarbosa rata
ppm 1 2 3 1 2 3 1 2 3
kontrol
1 2 3
(C) 0,523 0,553 0,544 293,6 313,6 307,6 0 0 0 0

4,91 S₀ 0,109 0,106 0,109 17,60 15,60 17,60 32,33 34,74 30,65 32,57
S₁ 0,407 0,413 0,429 216,27 220,27 230,93

9,83 S₀ 0,118 0,118 0,115 23,60 23,60 21,60 37,33 40,26 37,58 38,39
S₁ 0,394 0,399 0,403 207,60 210.93 213,60

19,65 S₀ 0,119 0,116 0,120 24,27 22,27 24,93 43,01 44,09 42,13 43,07 37,35 35,58 35,81 36,25
191,60
0,370 0,379 0,387
S₁ 0 197,60 202,93

29,48 S₀ 0,121 0,118 0,117 25,60 23,60 22,93 46,64 46,85 45,17 46,22
S₁ 0,356 0,368 0,370 182,27 190,27 191,60

39,31 S₀ 0,125 0,125 0,129 28,27 28,27 30,93 49,82 51,32 52,10 51,08
S₁ 0,346 0,354 0,350 175,60 180,93 178,27

32
Lampiran 6. Hasil uji kinetika inhibisi enzim alfa glukosidase (tanpa inhibitor)
[pNP]1 [pNP]2 Rerata
[S] (μM) A1 A2 A3 (μM) (μM) [pNP]3(μM) Aktivitas1 Aktivitas2 Aktivitas3 aktvitas 1/S 1/V
0,625 0,275 0,277 0,277 128,267 129,600 129,600 342,044 345,600 345,600 344,415 1,600 0,002903
1,25 0,348 0,351 0,359 176,933 178,933 184,267 471,822 477,156 491,378 480,119 0,800 0,002083
2,5 0,458 0,462 0,449 250,267 252,933 244,267 667,378 674,489 651,378 664,415 0,400 0,001505
5 0,551 0,547 0,527 312,267 309,600 296,267 832,711 825,600 790,044 816,119 0,200 0,001225
10 0,557 0,558 0,559 316,267 316,933 317,600 843,378 845,156 846,933 845,156 0,100 0,001183

33
Lampiran 7. Hasil uji kinetika inhibisi enzim alfa glukosidase (dengan inhibitor)
[pNP]1 [pNP]2 Rerata
[S] (μM) A1 A2 A3 (μM) (μM) [pNP]3(μM) Aktivitas1 Aktivitas2 Aktivitas3 aktvitas 1/S 1/V
0,625 0,142 0,144 0,127 39,600 40,933 29,600 105,600 109,156 78,933 97,896 1,600 0,0102
1.25 0,167 0,170 0,166 56,267 58,267 55,600 150,044 155,378 148,267 151,230 0,800 0,0066
2.5 0,215 0,195 0,214 88,267 74,933 87,600 235,378 199,822 233,600 222,933 0,400 0,0045
5 0,263 0,237 0,249 120,267 102,933 110,933 320,711 274,489 295,822 297,007 0,200 0,0034
10 0,298 0,297 0,288 143,600 142,933 136,933 382,933 381,156 365,156 376,415 0,100 0,0027

34
 35

Lampiran 8. Grafik hasil uji inhibsi enzim α-glukosidase

80
70
60
akarbosa I
50
% inhibisi

akarbosa II
40
akarbosa III
30
ekstrak I
20
ekstrak II
10 ekstrak III
0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi
 36

Lampiran 9. Desain microplate uji aktivitas enzim α-gukosidase

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A S0 S0 S0 S0 S0 Blangko Kontrol
0,25 0,5 1% 1,5 2%
% % %
B

C S1 S1 S1 S1 S1
0,25 0,5 1% 1,5 2%
% % %
D

E S0 S0 S0 S0 S0
0,25 0,5 1% 1,5 2%
% % %
F

G S1 S1 S1 S1 S1
0,25 0,5 1% 1,5 2%
% % %
H
 37

Lampiran 10. Desain micoplate uji kinetika inhibisi enzim α-Gukosidase

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A 0,625 1,25 2,5 5 10
μM μM μM μM μM
B

E 0,625 1,25 2,5 5 10

μM μM μM μM μM
F

H
Keterangan : A-D = tanpa inhibitor
E-H = dengan inhibitor