NIH Akses Publik

penulis Naskah
Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
Diterbitkan dalam bentuk diedit akhir sebagai:
NIH-PA Penulis Naskah

Sel Mol Hidup Sci. 2015 Februari; 72 (4): 709-727. doi: 10,1007 / s00018-014-1771-4.

Iron transportasi melintasi penghalang darah-otak;

Pengembangan, regulasi neurovaskular dan angiopati
amiloid serebral

Abstrak
Ada dua hambatan untuk masuk besi ke otak: 1) otak-cerebrospinal fluid (CSF) penghalang dan
2) penghalang darah-otak (BBB). Di sini, kita meninjau literatur tentang akumulasi besi
perkembangan oleh otak, dengan fokus pada pengangkutan besi melalui sel-sel endotel
mikrovaskuler otak (BMVEC) dari BBB. Kami meninjau protein perdagangan besi yang
mungkin terlibat dalam fluks besi di BMVEC dan mendiskusikan mekanisme yang masuk akal
NIH-PA Penulis Naskah

dari penyerapan zat besi BMVEC dan penghabisan. Kami menyarankan model untuk bagaimana
penyerapan zat besi BMVEC dan penghabisan diatur dan mekanisme dimana mayoritas besi
diperdagangkan di seluruh BBB berkembang di bawah bimbingan langsung dari astrosit
tetangga. Dengan demikian, kita menempatkan penyerapan zat besi otak dalam konteks unit
neurovaskular dari otak orang dewasa. Terakhir,β peptida yang mengarah ke perkembangan
angiopati amiloid serebral yang sering terjadi sebelum demensia dan timbulnya penyakit
Alzheimer.

Kata kunci
Besi; Sawar darah otak; astrosit; transferin; protein prekursor amiloid

pengantar
Kemampuan bawaan dari besi untuk bertindak sebagai akseptor elektron dan donor elektron
NIH-PA Penulis Naskah

membuatnya penting untuk kehidupan. Persyaratan untuk besi meluas ke semua jenis sel
otak. Oligodendrocytes misalnya, menunjukkan kehausan intrinsik besi seperti yang
ditunjukkan oleh tingkat tinggi dari ferritin protein penyimpanan besi [1]; besi
oligodendrocyte berpartisipasi sebagai co-faktor dalam mielinasi akson seluruh
pembangunan [2]. Mengingat partisipasi besi sebagai kofaktor dalam mielinisasi,
pembangkit energi mitokondria, neurotransmisi, transportasi oksigen, dan divisi seluler,
gangguan pada perdagangan besi normal adalah merugikan fungsi normal otak [3, 4].
Selain itu, besi kemungkinan faktor di beberapa gangguan neurologis seperti penyakit
Parkinson, penyakit Alzheimer, dan aceruloplasminemia [4-7].

*
Sesuai Penulis: Dr. Daniel J Kosman, camkos@buffalo.edu.
 McCarthy dan Kosman Halaman 2

Ada dua hambatan untuk masuk besi ke otak: 1) otak-cerebrospinal fluid (CSF) penghalang
dan 2) penghalang darah-otak (BBB). BBB terdiri dari jenis sel yang berbeda bertindak
bersama-sama untuk membentuk penghalang ketat yang, dalam kondisi normal, bisa
NIH-PA Penulis Naskah

ditembus untuk molekul polar darah. Jenis sel yang merupakan BBB termasuk sel-sel otak
mikrovaskuler endotel (BMVEC), astrosit, dan pericytes [8, 9]. Di pinggiran, sel endotel
vaskular sering fenestrated dan kekurangan persimpangan ketat memungkinkan untuk fluks
paracellular molekul polar ke dalam jaringan di sekitarnya [8]. BMVEC kurang fenestrasi
dan memiliki persimpangan ketat, memaksa sebagian besar molekul untuk diperdagangkan
transcellularymelaluitranscytosis reseptor-mediated (insulin, ferritin), transcytosis serap
(albumin), atau transportasi protein (glukosa, asam amino) [8-11].

morfologi yang melekat BMVEC memungkinkan untuk pembentukan dua permukaan yang
berbeda; membran apikal (darah-side) dan membran basal (otak-side). Terletak basolateral
ke BMVEC adalah astrosit. Sel-sel glial diduga bertindak sebagai buffer dalam otak,
melindungi neuron dari bahan kimia berbahaya, ROS, dll [12, 13]. Baru-baru ini, lab kami
telah menunjukkan bahwa astrosit, yang akhirnya merangkum BMVEC [10], juga mengatur
penghabisan basolateral besi dari garis otak manusia sel mikrovaskulatur (hBMVEC) [14].
besi penghabisan hBMVEC ini diatur oleh agen astrosit-disekresikan yang baik
NIH-PA Penulis Naskah

meningkatkan (ceruloplasmin (Cp)) atau menekan (hepcidin) aktivitas [14]. Selain Cp,
protein endogen untuk astrosit yang juga dapat merangsang hBMVEC besi penghabisan
termasuk feritin dan amyloid-βprekursor protein (APP) [13, 15]. Ulasan ini menggabungkan
pengamatan baru-baru ini untuk mendukung model perkembangan kami mengusulkan
perdagangan besi astrosit-dimodulasi oleh hBMVEC.

Selain itu, kami mengusulkan besi perdagangan di seluruh BBB di mamalia dewasa
dimodulasi oleh persyaratan besi dinamis unit neurovaskular. Unit neurovaskular, terdiri
dari BMVEC, astrosit, dan neuron, adalah sebuah cluster integral dari sel-sel yang mampu
berkomunikasimelaluisignaling juxtacrine. Kami sarankan unit neurovaskular merespon
langsung dengan persyaratan substrat dari sel-sel dalam unit itu. Sebagai contoh, adaptasi
dinamis untuk neuronal kekurangan zat besi nutrisi mungkin melibatkan sinyal langsung
dari neuron ke astrosit untuk BMVEC, meningkatkan tingkat penyerapan zat besi otak di
BBB. Di sini, kita membahas mekanisme akumulasi besi otakmelaluiBBB di respon baik
kedekatan astrosit dan perubahan metabolisme dalam unit neurovaskular. Kami
menyimpulkan dengan menguraikan model untuk bagaimana besi dapat memperburuk
NIH-PA Penulis Naskah

amyloid-β (ASS) agregasi di sekitar BMVEC.

Protein yang terlibat dalam penyerapan zat besi BMVEC

Karena sifat ketat-persimpangan ketat dari BBB, harus ada mekanisme berbasis sel untuk
perdagangan besi di penghalang ini. Secara keseluruhan, mekanisme ini melibatkan dua
langkah transmembran: penyerapan zat besi ke dalam BMVEC di apikal (darah) permukaan
diikuti oleh penghabisan besi ke dalam interstitium otak di basolateral (otak) permukaan.
Ada dua kemungkinan mekanisme untuk penyerapan zat besi ke dalam BMVEC. Yang
pertama disebut besi transferin terikat (TBI) serapan melibatkan transferin (Tf) endositosis.
Yang kedua adalah penyerapan zat besi dari non-transferin terikat besi (NTBI), sebuah
proses yang melibatkan transporter besi di membran apikal. TBI besi bisa dilepaskan dalam
sel melalui endosomal kanonik

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 3

pengasaman, pengurangan besi besi dan penghabisan ke sitoplasma untuk memasuki kolam
besi yang juga mencakup NTBI besi terakumulasi oleh serapan pada membran plasma.
Proses lain yang mungkin adalah Tf transcytosis di mana besi tetap terikat dan holo-Tf
NIH-PA Penulis Naskah

dilepaskan pada permukaan basal oleh eksositosis; jalur ini akan memasok holo-Tf ke
interstitium otak, yang, Tf serapan akan sejajar penyerapan zat besi. Besi dilepaskan ke
sitoplasma, apakah dengan serapan langsung di membran apikal, atau melepaskan dari
endosomes, akan menjadi substrat untuk besi penghabisan protein (Gambar. 1). Kami akan
meninjau pertama protein terkait dengan jalur dari penyerapan zat besi di seluruh sistem
saraf pusat (SSP) (Tabel 1).

Transferin dan transferin reseptor

Transferin adalah mengikat glikoprotein 80 kDa besi bilobal. Sebuah atom besi tunggal ferri
~ 22
reversibel dapat mengikat baik lobus dari Tf (C- atau N-lobus) dengan afinitas tinggi ( 10
-1
M pada pH 7,4)
[16]. Pelepasan besi dari Tf dapat diperkuat melalui pH menurun, ligan eksogen, dan
pengikatan Tf ke reseptornya [17-19] (lihat “Transferrin dan transferin reseptor daur
ulang tergantung BMVEC jalur penyerapan zat besi” bagian untuk rincian). Di otak,
baik Tf transkrip dan protein telah diidentifikasi (Tabel 1). Berlimpah Tf mRNA ada di
NIH-PA Penulis Naskah

oligodendrocytes, neuron, dan astrosit. Sintesis dan sekresi protein Namun, hanya terjadi
dengan oligodendrocytes dan astrosit [20-22]. Tf telah diidentifikasi di BMVEC [23];
kemungkinan akibat dari endositosis reseptor-dimediasi Tf serum. Mayoritas besi serum
terikat dan diangkut dengan Tf ke sel mengekspresikan TFR. Ekspresi TFR adalah pasca-
transcriptionally diatur. TFR transkrip mengandung unsur besi 5-responsif (IRE) stem-loop
dalam 3 nya' diterjemahkan wilayah, yang bersama-sama membentuk unsur stabilitas IRE
[24-26]. Pengikatan besi responsif protein (IRP) ke TFR IRE dalam kondisi besi sitosol
rendah menurunkan omset nucleolytic dari transkrip memungkinkan untuk
meningkatkan produksi protein dan penyerapan Tf-besi [27].

Ada sekitar 100.000 TFR per sapi utama BMVEC [28]. Ekspresi TFR oleh BMVEC
menyesuaikan dengan perubahan usia dan status besi [29-34]. TFR telah diidentifikasi pada
tikus BMVEC di hari pascakelahiran 5, 10, dan 15 [34]; Sebaliknya, BMVEC tikus berusia
59
8 minggu yang habis dari TFR [33]. Fe masuk ke otak tikus intravena disuntik dengan
59 125
Fe- I-Tf mencapai maksimum pada hari 15 dan secara signifikan menurun setelahnya
NIH-PA Penulis Naskah

dengan akumulasi minimal diamati pada otak tikus berusia 8 minggu [35], yang
mencerminkan perubahan perkembangan dalam ekspresi BMVEC TFR. Iron disediakan
59
untuk hBMVECin vitro sebagai Fe-Tf adalah akumulasi lebih hampir lima kali lipat
59
menjadi Fe-sitrat [36]. Data ini menunjukkan bahwa besi Tf-terikat adalah substrat utama
untuk akumulasi besi otak melalui ontogenesis postnatal ketika TFR ekspresi di BMVEC
tertinggi, dan kurang begitu di masa dewasa ketika ekspresi BMVEC TFR rendah.

Metalloreductases dan ferri-pengurangan

Pertama kali diidentifikasi pada sel erythroid pada tahun 2005, enam transmembran epitel
antigen prostat 3 (Steap3) ditunjukkan untuk co-pelokalan dengan Tf, TFR, dan epitop-
tagged transporter logam divalen 1 (DMT1) [37]. Pengurangan Tf-besi membutuhkan
sumbangan elektron dari reduktor endogen; keluarga Steap dari ferrireductases bertindak
sebagai kurir untuk elektron ini. Setiap anggota keluarga Steap dari metalloreductases
(Steap 2-4) kecuali untuk Steap1 mengandung flavin-NAD (P) H mengikat domain unik
yang terletak di dekat sitosol mereka N-
S
e
l

M
o
l

H
i
d
u
p

S
c
i
.

P
e
n
u
l
i
s

n
a
s
k
a
h
;

t
e
r
s
e
d
i
a

d
i

P
M
C

2
0
1
6

F
e
b
r
u
a
r
i

1
.
 McCarthy dan Kosman halaman 4

terminus; ini saham domain homologi untuk archaea dan bakteri F 420H2:
+
NADP oksidoreduktase mengikat domain [38]. Reduktor endogen akan mengikat sitosol
NIH-PA Penulis Naskah

flavin-NAD (P) domain mengikat H dan memulai sumbangan elektron metalloreductase

tersebut. Dilestarikan sepanjang masing-masing anggota keluarga Steap adalah kelompok
heme tunggal dalam wilayah transmembran dari protein [37]. Kelompok heme putatively
terikat oleh dua residu histidin heme-mengikat. Setelah mutasi masing-masing residu
histidin untuk leusin, transfer elektron yang hilang seperti yang ditunjukkan oleh
penurunan aktivitas ferrireductase [37]. Data ini menunjukkan bahwa elektron dari
reduktor endogen adalah shuttled dari flavin-NAD (P) domain yang mengikat H, melalui
heme protein, dan kemudian ke besi endosomal.

Menggunakan kuantitatif real-time PCR pada sampel cDNA manusia, mRNA kelimpahan
relatif dari semua keluarga Steap dari metalloreductases telah dipetakan [38]. Setiap protein
Steap diwakili oleh kelimpahan relatif tinggi mRNA dalam prostat manusia dan / atau hati
janin, namun hanya STEAP2 mRNA berlimpah terdeteksi di otak [37-39].
imunofluoresensi tidak langsung telah mengidentifikasi Steap2 pada membran plasma dari
hBMVEC [40].
Epitop-tagged Steap2 transfected ke sel HEK293T menghasilkan co-lokalisasi yang kuat
NIH-PA Penulis Naskah

dengan kedua Tf dan TFR di endosome [38] menunjukkan bahwa Steap2 dapat
berpartisipasi dalam pengurangan besi Tf di endosome tersebut.

Sebelum karakterisasi keluarga Steap dari ferrireductases [38, 41], satu-satunya ferrireductase
mamalia dicirikan tinggal di duodenum. reduktase duodenum Ini adalah b-jenis sitokrom
ferrireductase askorbat-dependent (Dcytb) (juga dikenal sebagai Cybrd1) [42, 43]. Dcytb
mengkatalisis reduksi zat besi untuk penyerapan melalui DMT1 pada permukaan luminal dari sel
II
epitel usus [42, 44]; ada bukti bahwa Dcytb dapat bertindak untuk mengurangi Cu serta [43].
59 AKU AKU AKU
serapan Fe oleh sel-sel dalam budaya dirangsang pada transfeksi dengan
II
Dcytb. Efek ini diblokir oleh Fe chelator ferrozine menyarankan Dcytb bertindak untuk
AKU AKU AKU II
mengurangi Fe untuk Fe sebelum serapan [44]. Baru-baru ini, ekspresi Dcytb
telah dibuktikan dalam sel-sel epitel saluran napas dan hBMVEC [40, 45]. Transkrip yang
mengkodekan Dcytb telah diidentifikasi dalam astrosit dibiakkan dari tikus dan tikus [46, 47].
Pada tahun 2013, protein Dcytb ditunjukkan di hippocampus endfeet astrosit seputar BMVEC
AKU AKU AKU
NIH-PA Penulis Naskah

tikus, berpotensi menyediakan sumber ferrireduction untuk BMVEC dirilis Fe

[48].

Selain pengurangan besi ekstraseluler oleh metalloreductases, NTBI memiliki potensi untuk
menjadi berkurang asam askorbat sel-disekresikan yang akan bertindak langsung sebagai
ferri-reduktor. Mekanisme ini telah dibuktikan dalam K562 sel [49] dan dalam budaya
3+
utama dari astrosit tikus [50]. Dalam studi terakhir, data menunjukkan bahwa dengan Fe
~
sebagai sumber zat besi, 50% dari besi akumulasi adalahmelaluiDMT1 berikut ferri-
pengurangan oleh askorbat disekresikan oleh sel-sel. Apakah serum askorbat, atau askorbat
disekresi ke dalam ruang luminal oleh BMVEC, berperan dalam akumulasi zat besi oleh
sel-sel ini masih harus diselidiki, namun.

transporter divalen kation

AKU AKU AKU II
Berikut pengurangan Fe untuk Fe oleh reduktan ekstraseluler atau oleh
II
ferrireductase permukaan sel, Fe diserap melalui kation transporter divalen seperti DMT1.
DMT1 tinggal di sikat perbatasan duodenum mana aktif mengangkut besi nutrisi ke dalam
S
e
l

M
o
l

H
i
d
u
p

S
c
i
.

P
e
n
u
l
i
s

n
a
s
k
a
h
;

t
e
r
s
e
d
i
a

d
i

P
M
C

2
0
1
6

F
e
b
r
u
a
r
i

1
.
 McCarthy dan Kosman halaman 5

sel-sel epitel duodenum [51-54]. DMT1 pertama kali kloning dan ditandai oleh kelompok
Hediger pada tahun 1997 menggunakan mRNA duodenum tikus dipelihara pada diet zat
besi yang rendah [55]. Menggunakan dua-microelectrode tes tegangan klem, kelompok
NIH-PA Penulis Naskah

Hediger membangkitkan arus dariXenopus oosit mengekspresikan DMT1 menggunakan

II II II II II II II
berbagai substrat; substrat termasuk Fe , Zn , M N , Co , Cd , Ni , Dan Pb [55]
II II II
(Lihat Tabel 2 untuk kinetika terkait dengan Fe , M N , Dan Zn mengangkut).
Transportasi substrat ini dengan DMT1 telah dibuktikan dan diperluas untuk mencakup
saya II
tembaga [56, 57], meskipun apakah DMT1 mengangkut Cu atau Cu masih
merupakan misteri.

Transportasi kation divalen melalui DMT1 adalah pH-sensitif. PH optimum untuk

transportasi logam dengan DMT1 berkisar pH 5,5 [55, 58] untuk pH 6,75 [59]. Kondisi
optimal untuk transportasi besi melalui DMT1 ditemukan di sikat perbatasan duodenum (pH
6,0 [60] - 6.74 [61]) dan dalam endosome bersepeda (pH 5,6 [17]). Ada, bagaimanapun,
bukti bahwa transportasi logam melalui DMT1 dapat terjadi pada pH 7,4 [58, 59, 62, 63];
dengan tidak adanya gradien proton tidak jelas bagaimana DMT1 mengangkut kation
divalen.

DMT1 adalah co-lokal dengan TFR pada tikus BMVEC [29]. Ekspresi DMT1 oleh tikus
NIH-PA Penulis Naskah

BMVEC telah dikuatkan menggunakan probe imunohistokimia pada bagian otak tikus dari
berbagai titik waktu perkembangan [34]; perubahan dalam ekspresi relatif DMT1 oleh
BMVEC seluruh pembangunan tidak tercatat. Sementara beberapa baris bukti mendukung
ekspresi DMT1 oleh BMVEC [29, 34, 40], ekspresi seperti masih kontroversial [31, 64].

Peran DMT1 in vivomungkin terbaik diperiksa menggunakan tikus Belgrade. Belgrade tikus
berisi titik mutasi glisin-to-arginin pada residu 185 (G185R) yang dihasilkan dari mutasi
missense dariNramp2gen [65]. Sel dan jaringan dari tikus Belgrade fenotip telah berkurang
kemampuan akuisisi besi [66]. Selanjutnya, Belgrade tikus hadir dengan penurunan yang
59
signifikan dalam otak Fe serapan dibandingkan dengan tipe liar kontrol ketika diberikan
59 125
dosis Fe- I-Tf ke tail vena lateralis [66]. Belgrade tikus piramidal neuron, neuron
kortikal, oligodendrocytes, dan myelin, semua mengandung zat besi kurang dari tipe liar
tikus [67]. Astrosit, dan oligodendrocytes tetangga BMVEC tampak menumpuk besi dalam
tikus Belgrade [67] menunjukkan jenis sel memiliki kompensasi atau alternatif permeases
besi.
NIH-PA Penulis Naskah

Calon kemungkinan dikreditkan dengan kegiatan ini adalah transmembran Zrt- dan Irt-
seperti protein 14 (Zip14; SLC39A14). Sementara Zip14 awalnya ditandai sebagai Zn
II II
sebuah transporter [68], Fe Kegiatan permease telah dianggap berasal Zip14 serta [69,
~
70] (LihatTabel 2 untuk kinetika). Iron perembesan melalui Zip14 optimal pada pH 7.4
[70, 71]. Zip14 mRNA telah diidentifikasi dalam otak tikus, namun distribusi selular dari
protein diterjemahkan tetap tidak diketahui [72]. Pada tingkat sub-sel dalam sel HepG2,
Zip14 telah diterjemahkan ke awal dan akhir endosomes bersepeda sama TfR1 [71].
Selanjutnya, siRNA knockdown dari Zip14 dalam sel HepG2 berkurang secara signifikan
penyerapan zat besi dari Tf, menunjukkan bahwa Zip14 memiliki potensi untuk
mengekspor besi dari Tf dari endosome tersebut.

II
anggota lain dari keluarga Zrt- dan protein Irt-seperti, Zip8, juga mampu mengangkut Fe
[73] (LihatTabel 2 untuk kinetika). Seperti Zip14, Zip8 mRNA berlimpah

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 6

dinyatakan dalam jaringan otak [72]. Pada tingkat subselular, Zip8 terlokalisir ke membran
plasma dan vesikel intraseluler sel HEK293T transien transfeksi [73]. PH optimal
perembesan besi melalui Zip8 (pH 7,4) adalah setara dengan pH darah (pH 7,35-7,45) [73].
NIH-PA Penulis Naskah

Data ini menunjukkan bahwa Zip8 dan Zip14 berada dalam posisi yang optimal untuk
menyerap zat besi dari cairan ekstrasel untuk digunakan oleh sel. Sementara data
menunjukkan bahwa Zip14 ekspor besi dari endosome setelah penghapusan dari Tf, baik
Zip14 dan Zip8 memiliki potensi untuk mengangkut besi ke dalam pada permukaan sel.
Sampai saat ini, tidak Zip14 atau Zip8 telah diidentifikasi dalam BMVEC.

Transferin dan reseptor transferin daur ulang tergantung penyerapan zat besi BMVEC
AKU AKU AKU
Besi dalam sirkulasi perifer terutama terikat untuk Tf sebagai Fe , Negara
redoks besi nya. Pengurangan dan rilis berikutnya dari besi dari Tf mensyaratkan bahwa
potensi elektrokimia (E °) dari kompleks, yang secara intrinsik rendah (<-500 mV [74]),
adalah allosterically dibuat lebih positif daripada E ° dari reduktan endogen [ 75]. E ° besi
Tf-terikat dapat dibuat lebih positif melalui 1) asosiasi Tf dengan TFR, 2) pengikatan suatu
ligan eksogen (yaitu sitrat), atau 3) penurunan pH [17, 18, 74, 76] . Kondisi tersebut
bertemu di kanonik Tf-TFR bersepeda jalur. Dalam jalur ini, holo-Tf mengikat ke TFR di
permukaan sel; dua molekul holo-Tf akan mengikat reseptor mereka, dimer TFR, pada pH
NIH-PA Penulis Naskah

7,4. Acara yang mengikat ini memicu endositosis clathrin tergantung dari kompleks Tf-
+
TFR. Proton dipompa ke endosome yang dihasilkanmelalui aksi H ATPase [77],
kemudian menurunkan pH endosomal untuk ~5.6 [17]. Kombinasi pH rendah dan TFR
mengikat meningkatkanE °oleh> 200 mV [18]. Sebuah elektron diangkut dari reduktor
sitosol, seperti NADPH, ke kompartemen endosomalmelalui sebuah ferrireductase, efektif
AKU AKU AKU II
mengurangi Fe dalam Tf. Dari sini, para endosomal Fe akan lalu lintas
dari endosome ke sitosol melalui DMT1 (Gambar. 1) [29, 40].

Atau, mekanisme menggambarkan transcytosis kompleks Tf-TFR di BMVEC telah

diusulkan (Gambar. 1) [64, 78, 79]. Dalam model ini, Tf mengikat ke TFR di luminal
(apikal) permukaan BMVEC. The endositosis berikutnya dari kompleks Tf-TFR diikuti oleh
pengasaman dan melepaskan / pengurangan besi Tf-terikat seperti yang dijelaskan untuk
II
bersepeda kanonik. Namun, dalam model transcytosis, Fe endosome -Mengandung
II
mengalami eksositosis di abluminal (basal) permukaan, melepaskan Fe ke otak cairan
interstitial. The apo-Tf-TFR kompleks kemudian retro-transcytosed ke permukaan luminal
NIH-PA Penulis Naskah

dari BMVEC mana, pada pH~7.4, apo-Tf dilepaskan ke dalam darah.

Model ini kontroversial. Pada pH otak cairan interstitial (~7.24) apo-Tf kemungkinan akan
melepaskan pada permukaan abluminal dari BMVEC [80]. Namun, fraksi tidak signifikan
Tf diangkut dari darah ke dalam interstitium otak dibandingkan dengan fraksi besi diangkut
[81, 82], membuat model transcytosis tidak mungkin. Mendukung kesimpulan ini adalah
percobaan menggunakan mouse TFR antibodi, 8D3, yang memicu respon reseptor
(yaituTFR endositosis). Namun, pewarnaan imunohistokimia bersama dengan pemodelan
3D jelas menunjukkan bahwa antibodi 8D3 dimasukkan ke otak tikus gagal mencapai
parenkim otak,yaitujuga tidak TFR [83]. Selanjutnya, data terbaru menunjukkan bahwa besi
hBMVEC berasal dari TBI diekspor dari hBMVECmelaluimekanisme yang melibatkan
FPN dan ferroxidase exocytoplasmic [36]. Penghapusan ferroxidase hBMVEC endogen

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 7

aktivitas, suatu peristiwa yang tidak akan mempengaruhi transcytosis, menghambat

penghabisan Tf-besi dari sel, membuat model transcytosis pernah lebih tidak mungkin [36].
NIH-PA Penulis Naskah

Selain pertanyaan-pertanyaan ini menyangkut Tf-transcytosis (apakah apo- atau holo),

transportasi molekul Tf besar melalui lamina basal yang dibentuk oleh BMVEC mungkin
tidak efisien. Lamina basal adalah sekresi fibronektin, jenis-4 kolagen, dan laminin sela
antara sel-sel endotel dan astrosit [84]. matriks ini dari protein seluler yaitu sekitar 150-200
nm tebal memberikan penghalang tambahan dalam hal akses Tf memiliki cairan interstitial
otak (ISF). Dengan demikian, data saat ini menunjukkan bahwa holo-Tf tidak transcytosed
II
seluruh BMVEC tapi itu besi TBI adalah reductively dirilis sebagai Fe sebelum diekspor
dari BMVEC melalui FPN. Apakah rilis reduktif ini melibatkan kanonik Tf-TFR bersepeda
atau penghapusan besi dari Tf pada membran plasma apikal masih harus ditentukan.

Mekanisme daur ulang-independen BMVEC penyerapan zat besi dari TBI

AKU AKU AKU
Sementara pengurangan Fe dari Tf umumnya diduga terjadi dalam endosome
bersepeda, sebagian kecil dari penurunan ini tampaknya terjadi pada sel-permukaan BMVEC.
Kesimpulan ini didukung oleh bukti-bukti akumulasi besi besi non-heme pada permukaan
luminal tikus BMVEC [85] dan oleh fakta bahwa hBMVEC mengurangi besi non Tf-terikat dan
NIH-PA Penulis Naskah

Tf-terikatmelaluia ferrireductase permukaan sel [40]. Pengurangan besi dari Tf pada pada
membran plasma telah diamati pada hepatosit serta [30]. Baru-baru ini, lab kami menunjukkan
bahwa pengurangan besi dari Tf, yang diukur dengan ferrozine uji kolorimetri [86],
membutuhkan pengikatan holo-Tf ke TFR pada permukaan sel hBMVEC [40]. Selain kontribusi
dari TFR, sebuah ligan eksogen akan meningkatkanE° dari besi Tf-terikat dan dengan demikian
meningkatkan potensi untuk pengurangan [18, 19]. Kehadiran ligan sitrat eksogen secara
fisiologis relevan dengan serum [81, 87-89] dan ISF [90]. Bila diterapkan dalam rasio fisiologis
yang tepat untuk holo-Tf, sitrat meningkat (2 kali lipat) pengurangan besi Tf-terikat oleh
hBMVEC [40]. Selain itu, pengurangan besi dari Tf pada permukaan sel BMVEC kemungkinan
akan membutuhkan kontribusi dari ferrireductase sel-permukaan; kontribusi dari Steap2 dan /
atau ferrireductases alternatif masih harus ditandai.

Setiap penurunan permukaan sel besi mungkin terjadi tanpa adanya gradien proton. Dalam
hal ini baik DMT1 mengangkut besi tanpa adanya gradien proton atau divalen kation
transporter alternatif mendukung penyerapan zat besi besi ini. Misalnya, Zip8 atau Zip14
akan mengkompensasi kurangnya aktivitas DMT1 dengan tidak adanya gradien proton
NIH-PA Penulis Naskah

sebanyak transporter ion logam divalen ini memiliki optima fungsional pada pH fisiologis
(di atas).

Protein yang terlibat dalam penghabisan besi dari BMVEC

Sebagai konsentrasi tinggi zat besi intraseluler mungkin beracun untuk sel-sel, vertebrata
telah mengembangkan mekanisme untuk mengekspor kelebihan zat besi dari sel mereka dan
masuk ke ruang ekstraselular mereka. Sel-sel endotel dari BBB adalah jenis sel terpolarisasi.
Mereka menyerap zat besi dari darah di permukaan apikal mereka dan melepaskan besi ke
otak di permukaan basolateral mereka. Berikutnya, kami akan memberikan gambaran
tentang protein yang terlibat dalam penghabisan besi seluler yang saat ini diketahui ada di
SSP. fungsi mereka, dan peran dalam perdagangan besi otak juga akan dibahas. Protein
terkait dengan penghabisan besi dari sel-sel SSP tercantum dalam Tabel 3.

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 8

ferroportin
Ferroportin (FPN / IREG1 / Slc40a1 / MTP1) adalah satu-satunya dikenal mamalia seluler
NIH-PA Penulis Naskah

eksportir besi. Perbedaan dalam nomenklatur adalah karena penemuan simultan FPN oleh
tiga laboratorium independen [91-93]. Donovanet al. menerbitkan penemuan
ferroportin1(Fpn1) Gen dalam ikan zebra pada awal tahun 2000 dan ditandai produk
diterjemahkan, FPN, sebagai eksportir besi di Xenopusoosit [91]. Kegiatan permease besi
II
ini dikonfirmasi tahun yang sama [92, 93]. fungsi ferroportin untuk mengekspor Fe dari sel
[91], meskipun transportasi Mn, Zn, dan Co oleh FPN telah ditunjukkan pada tingkat lebih
II II
rendah [94-96]. The penghabisan dari Fe dari FPN dikatalisis oleh oksidasi dari Fe untuk
AKU AKU AKU
Fe melaluiaksi dari ferroxidase exocytoplasmic [97]. FPN adalah dimer
protein yang melokalisasi ke membran plasma sel [98-100]; , Laporan bertentangan lainnya
telah menyimpulkan bahwa FPN ada sebagai monomer [101-103].

Transkrip FPN yang paling banyak mengandung IRE di 5 nya'diterjemahkan wilayah [93].
FPN adalah pasca-transcriptionally diaturmelalui pengikatan IRP1 ke Fpn1IRE dalam
kondisi besi yang rendah, efektif menekan inisiasi terjemahan dari transkrip [104]. Sebuah
fraksi minoritas FPN mRNA kekurangan 5'-KEMARAHAN; formulir ini, ditunjukFpn1b,
NIH-PA Penulis Naskah

Telah terdeteksi di duodenum mouse dan di erythroblasts dari kedua manusia dan tikus
[105]. Terjemahan dariFpn1b transkrip tidak sensitif terhadap kadar zat besi tetapi, seperti
Fpn1, Menunjukkan sensitivitas pasca-translasi ke hepcidin hormon peptida [105, 106].

Hepcidin disekresi oleh hati dalam menanggapi peningkatan besi hati dan mengikat
reseptor, FPN, merangsang FPN ubiquitination dan internalisasi berikutnya [107, 108].
melaporkan hepcidin mengikat motif pada FPN ada dalam loop ekstraseluler antara
transmembran domain VII dan VIII [109]. Situs-diarahkan tes mutagenesis telah
mengungkapkan bahwa setelah mengikat FPN, hepcidin menginduksi fosforilasi residu
tirosin 302 dan 303 serta ubiquitination residu lisin 253 menyebabkan FPN internalisasi dan
degradasi [109, 110]. Mekanisme yang tepat dari hepcidin diinduksi FPN internalisasi dan
degradasi tetap kontroversial [108, 111]. Setelah diinternalisasi, bagaimanapun, FPN dan
hepcidin diperdagangkan ke lisosom mana keduanya terdegradasi [112]. Khasiat peraturan
pasca-translasi dari FPN oleh hepcidin dapat dikurangi dengan mamalia ferroxidase
ceruloplasmin (Cp); efek ini dikaitkan dengan aktivitas ferroxidase enzim [113], tetapi
II
mungkin melibatkan interaksi protein-protein [47]. Perembesan Fe melalui FPN dapat
NIH-PA Penulis Naskah

mencegah FPN ubiquitination dan omset berikutnya [97]. Di otak, hepcidin diungkapkan
oleh astrosit bahwa tetangga BMVEC dan dilepaskan ke dalam celah yang terbentuk antara
jenis sel untuk secara efektif mempromosikan omset BMVEC FPN dan dengan demikian
mengurangi impor besi ke dalam otak [14, 114].

Mungkin pemeriksaan yang paling komprehensif FPN pada mamalia melibatkan permukaan
basolateral dari duodenum usus. Ada, FPN adalah colocalized dan kompleks fungsional
dengan ferroxidase hephaestin mamalia (Hp). Bersama-sama, FPN dan Hp bekerja untuk
mengekspor besi dari epitel duodenum ke dalam darah [115]. Di luar duodenum, FPN telah
diidentifikasi dalam beberapa jenis sel di SSP. Ini termasuk BMVEC [14, 33, 36, 116, 117],
neuron [116, 118, 119], oligodendrocytes [116, 118-120], astrosit [47, 116], dan pleksus
koroid sel ependymal [116, 118 ]. FPN transkrip dan protein telah diterjemahkan ke

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 9

tikus BMVEC ensheathed oleh endfeet astrocytic [116]. Selanjutnya, analisis dari tikus
BMVEC transcriptome mengungkapkan adanya SLC40A1 (FPN) [121]. Pemeriksaan
lokalisasi subselular dari FPN mengungkapkan kehadirannya pada kedua membran plasma
NIH-PA Penulis Naskah

apikal dan basolateral serta dalam sitosol dari hBMVEC [36]. Ini data terbaru mudah-
mudahan dikuburkan kontroversi mengenai FPN ekspresi oleh BMVEC [29, 64, 118, 119].

Baru-baru ini, lab kami diidentifikasi FPN di hBMVEC dan menunjukkan penghabisan
besi dari sel-sel ini hanya ketika FPN terlokalisasi ke membran plasma [36]. Dengan tidak
adanya suatu ferroxidase exocytoplasmic FPN diserahkan dan hBMVEC besi penghabisan
hilang [36]. Kedua hBMVEC FPN dan aktivitas besi penghabisan dapat
dipulihkanmelaluipenambahan ferroxidase eksogen untuk media penghabisan [36]. Yanget
al.diidentifikasi baik transkrip dan protein FPN di pembuluh darah tikus [33]; FPN
ekspresi dalam BMVEC menurun pengembangan berkembang, terutama di sekitar P14.
Penipisan BMVEC FPN di P14 dimodulasi oleh hepcidin disekresi ke dalam ruang
interstitial antara BMVEC dan astrosit [14]. Apakah mayoritas hepcidin ini disediakan oleh
BMVEC atau astrosit telah belum ditentukan. Dalam kondisi penipisan FPN, hBMVEC
menunjukkan penurunan kemampuan penghabisan besi [14, 36]. BMVEC FPN dan
kemampuan penghabisan besi dapat dikembalikan dengan adanya astrositmelalui
NIH-PA Penulis Naskah

penambahan hepcidin antagonis fursultiamine [14, 122]. Secara keseluruhan, literatur

terbaru menyarankan bahwa FPN sangat penting untuk transportasi besi di BBB, proses
diatur secara ketat oleh astrosit tetangga.

oksidase Multi-tembaga - seruloplasmin, hephaestin dan zyklopen

II
Ekspor Fe dari FPN memerlukan tindakan dari ferroxidase exocytoplasmic. Mamalia
mengungkapkan dua dikenal oksidase multi-tembaga, Hp dan Cp, yang keduanya memiliki
aktivitas ferroxidase. Biosintesis kedua Hp dan Cp melibatkan penggabungan tembaga ke
dalam struktur mereka [123-127]. Pertama mengkristal pada tahun 1996, Cp ditemukan
mengandung enam atom tembaga; tiga tipe I Cu terletak di domain 2, 4 dan 6, sedangkan
satu jenis II Cu dan dua tipe III Cu membentuk cluster trinuclear pada antarmuka domain 1
dan 6 [127]. Di Cp, tipe I Cu atom dalam domain 4 dan 6 adalah katalis aktif dan terlibat
dalam mengkatalisis transfer elektron yang disumbangkan oleh besi melalui protein untuk
cluster trinuclear mana oksigen direduksi menjadi H2O. Hp, homolog Cp, juga memiliki
kemampuan untuk mengoksidasi besi melalui siklus katalitik yang sama [124].
NIH-PA Penulis Naskah

Baru-baru ini, sebuah oksidase multi-tembaga ketiga, bernama zyklopen (Zp), telah
diidentifikasi pada mamalia [128]. saham Zp urutan tinggi dan fungsional (aktivitas
ferroxidase) identitas dengan Hp dan Cp [128]. Masing-masing situs tembaga mengikat
(tipe I, II, dan III) ditemukan di Cp dilestarikan di Zp [128]. Pertama kali diidentifikasi
pada plasenta [129, 130], Zp baru-baru ini menunjukkan akan sangat disajikan dalam
pleksus koroid dari otak tikus [128], meskipun distribusi seluler Zp di otak saat ini tidak
terdefinisi. peran, jika ada, Zp bermain di metabolisme besi otak belum direalisasikan.

Hephaestin, menunjukkan sebagai co-lokal dan di kompleks fungsional dengan FPN pada
permukaan basolateral sel epitel duodenum [115, 131, 132], telah baru-baru ini telah
diidentifikasi pada otak mamalia [133]. Pemeriksaan korteks tikus, hippocampus, striatum,
dan substantia nigra mengungkapkan bahwa kedua Hp transkrip dan protein yang hadir dari

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 10

minggu 1-28 pembangunan, meskipun kelimpahan relatif mereka bervariasi dengan

perkembangan dan tingkat zat besi [133]. protein hp telah diidentifikasi dalam astrosit,
oligodendrocytes, mikroglia, dan neuron dari substantia nigra [134]. Analisis
NIH-PA Penulis Naskah

imunohistokimia Hp menggunakan otak dari Cp tikus nol telah menunjukkan ekspresi

dalam pleksus koroid, sel-sel yang melapisi ependymal ventrikel lateral, sel-sel endotel
ventrikel lateral, dan BMVEC [135]. Ekspresi Hp oleh BMVEC telah dikuatkan dan citra
resolusi tinggi telah diterjemahkan Hp ke permukaan basolateral dari hBMVEC [33, 36].
Pada tahun 2010 laboratorium Kim menunjukkan bahwa Hp itu habis dari BMVEC dari
otak tikus berkembang dari hari ke hari postnatal 14 [33].

Hp mungkin terlibat dalam penghabisan besi dari sel-sel SSP. Contoh ini telah dibuktikan
dengan menggunakan tikus lesi oleh 6-hydroxydopamine (6-OHDA). Perlakuan 6-OHDA
adalah model untuk penyakit Parkinson, dan tikus yang telah menjalani pengobatan ini
hadir dengan akumulasi besi dalam substansia nigra karena hilangnya FPN dan Hp
transkrip hanya dalam satu posting hari pengobatan [134]. Selain itu, budaya
oligodendrocyte dari tikus neonatal dengan mutasi padahephaestin gen (tikus anemia
55
terkait seks (sla)) Telah terganggu kemampuan penghabisan Fe dibandingkan dengan
oligodendrocytes dari tipe liar neonatus [120]. Oligodendrocytes dari materi putih
NIH-PA Penulis Naskah

memiliki mekanisme kompensasi untuk deplesi Hp dislamouse; dalamsla mouse, Cp

ekspresi dalam materi putih dan sumsum tulang belakang secara signifikan diregulasi,
menunjukkan bahwa Cp mengisi peran kompensasi ini
[120]. Penghapusan Hp dari hBMVEC melalui menipisnya bioavailabilitas tembaga benar-benar
59
menghapuskan kemampuan sel untuk penghabisan Fe [36]. Secara keseluruhan,
data terakhir dari literatur menyarankan bahwa Hp terlibat dalam penghabisan besi
dari sel-sel SSP.

Cp secara luas dikenal karena perannya dalam oksidasi besi serum mana itu ada sebagai serum
larut berlimpah α2-glycoprotein; Cp mengandung> 95% dari tembaga yang ditemukan di
plasma [136]. Di pinggiran, Cp transkrip kebanyakan ditemukan di hati dan paru-paru dengan
ekspresi halus terlihat di limpa, testis, dan ginjal tikus [137]. Di CNS, transkrip Cp telah
diidentifikasi di korteks, otak kecil, otak tengah, hippocampus, striatum, substantia nigra, dan
sejumlah kuat transkrip ada di mata [137, 138]; dalam beberapa kasus, Cp transkrip kelimpahan
di wilayah ini berubah sebagai akibat dari usia dan status besi
[138]. Pada tingkat sel, Cp mRNA dapat ditemukan dalam sel-sel epitel dari pia-arachnoid,
NIH-PA Penulis Naskah

hBMVEC, dan sel-sel ependymal pleksus koroid [36, 137]. Selanjutnya, subpopulasi
tertentu astrosit, yaitu mereka yang ensheath yang mikrovaskulatur otak, mengungkapkan
Cp transkrip [14, 137, 139], menunjukkan bahwa Cp mungkin memainkan peran penting di
BBB.

Astrosit mengekspresikan bentuk Cp yang ditambatkan ke membran plasma melaluia

glycosylphosphatidylinositol-anchor (GPI) [140]. Ini GPI-anchor adalah hasil dari suatu
peristiwa RNA splicing alternatif di C-terminus dari Cp; asam amino 5 C-terminal Cp
digantikan oleh 30 asam amino GPI-anchor sinyal [141]. Interaksi antara astrosit GPI-Cp
dan FPN telah ditunjukkan [47]. Astrosit berbudaya dari Cp tikus nol tidak memiliki
kemampuan untuk penghabisan besi [47]. Data ini menunjukkan bahwa astrosit GPI-Cp
bertindak untuk ekspor besi melalui FPN, meskipun keterlibatan Cp dalam penyerapan zat
besi selular juga telah diusulkan [142, 143].

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 11

Seiring dengan GPI-Cp, SSP juga berisi disekresikan (larut) bentuk Cp. Konsentrasi SCP di
CSF telah diukur pada 5,8-6,8 nM [81, 144]. Kuantitatif proteomik MS berbasis telah
mengungkapkan pengayaan signifikan dari SCP di mouse utama astrosit secretome [15].
NIH-PA Penulis Naskah

Astrosit-disekresikan SCP telah diidentifikasimelaluiWestern blotting dan protein ini

ferroxidase aktif [14]. Astrosit aktif merangsang hBMVEC besi penghabisan melalui sekresi
SCP ke dalam lingkungan mikro lokal sekitarnya hBMVEC [14]. Sementara astrosit-
disekresikan feritin juga mungkin memainkan peran dalam hBMVEC besi penghabisan,
percobaan immunodepletion menunjukkan bahwa SCP adalah pemain utama dalam
hBMVEC besi penghabisan [14, 15, 145, 146]. Data ini sangat menyarankan bahwa astrosit-
disekresikan SCP sangat penting untuk akumulasi besi otak yang tepat.

feritin
Feritin adalah 24-subunit transportasi besi dan penyimpanan protein yang mengandung
berbagai proporsi dari dua jenis subunit, berat (FHC; 21 kDa) dan ringan (FLC; 19 kDa)
rantai [147-150]. Proporsi subunit dikendalikan pada tingkat transkripsi, yang mengarah ke
variasi jaringan tergantung [150, 151]. Bukti menunjukkan bahwa FHC, yang berisi pusat
II
ferroxidase, mengoksidasi Fe untuk FLC yang, pada gilirannya, mineralizes dan toko
NIH-PA Penulis Naskah

AKU AKU AKU

Fe [152, 153]. Di otak, feritin ditemukan dalam pleksus koroid [154],
astrosit [155], oligodendrocytes, neuron piramidal, mikroglia, dan BMVEC [1]. Feritin yang
diperdagangkan di seluruh BMVECmelaluitranscytosis dari P1-P7; Metode ini perdagangan
secara signifikan berkurang setelah ensheathment lengkap dari BMVEC oleh endfeet
astrocytic di P14 [10]. molekul feritin diperdagangkan melintasi BBB dapat diasingkan oleh
oligodendrocytes yang menumpuk feritin selama ontogenesis postnatal [1].
Oligodendrocytes, yang sebagian besar memanfaatkan FHC [156], dapat menggunakan
feritin-besi untuk sintesis myelin [2]. Puncak mielinisasi oleh oligodendrocytes terjadi di
P15, tak lama setelah ferritin perdagangan di seluruh BBB berhenti [10, 157]. Ada
kemungkinan bahwa dua peristiwa ini, otak feritin impor dan puncak mielinisasi, terkait.

Amiloid-β prekursor protein (APP)

amyloid- Theβprotein prekursor diungkapkan oleh neuron, astrosit, dan BMVEC [13, 145,
158], dan telah terbukti secara fisik berinteraksi dengan FPN [159]. Pada tahun 2010,
Duceet al. menunjukkan retensi meningkat secara signifikan dari besi dalam neuron kortikal
-/-
NIH-PA Penulis Naskah

dari APP tikus dibandingkan dengan tipe liar, menunjukkan bahwa APP berperan dalam
modulasi penghabisan besi dari neuron tikus. Mereka digambarkan APP sebagai yang
ferroxidase-aktif dan ditugaskan kegiatan ini ke urutan asam amino 21 (bernama fd1 untuk
ferroxidase domain 1) dalam domain E2 protein [159]. Proposisi bahwa APP ferroxidase
aktif telah membantah [160-162], namun kesimpulan yang ditarik oleh DuceetAl. tentang
kemampuan APP untuk memodulasi penghabisan besi dari neuron tetap sehat. Baru-baru ini,
kelompok kami telah menunjukkan bahwa fd1 (sekarang dikenal sebagai FTP, benar berasal
59
fungsinya sebagai ferroportin Penargetan Peptide) dapat merangsang hBMVEC Fe
penghabisan; Sapp dipamerkan kegiatan setara [162]. Stimulasi ini bukan karena oksidasi
besi dengan FTP (atau Sapp); sebaliknya, stimulasi hBMVEC besi penghabisan oleh FTP
peptida (dan Sapp) terjadi melalui mekanisme dua bagian. Pertama, FTP mengikat dan
menstabilkan FPN di membran plasma hBMVEC. Hasil peningkatan FPN di membran
meningkatkan substrat untuk selanjutnya exocytoplasmic ferroxidase tergantung
penghabisan besi [162]. Kedua BMVEC dan astrosit mengekspresikan APP, menunjukkan
bahwa protein ini mungkin memiliki peran dalam regulasi transportasi besi di seluruh

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 12

BBB. Tentu saja, fakta bahwa ekspresi APP tampaknya translationally diatur oleh status
zat besi melalui besi kanonik peraturan protein1 jalur [163, 164] menunjukkan
kemungkinan bahwa itu memainkan peran seperti itu.
NIH-PA Penulis Naskah

Model perkembangan astrosit-termodulasi BMVEC besi penghabisan

di otak mamalia
Besi digunakan oleh otak untuk mielinisasi, sintesis neurotransmitter, dan pembangkit
energi. Masing-masing proses sangat penting untuk pengembangan yang tepat dari otak
mamalia. Di sini, kita membahas transportasi besi melintasi BBB di tiga titik dalam
perkembangan otak: 1) hari postnatal 0, 2) hari setelah melahirkan 0-14, dan 3) hari
postnatal 14 dan seterusnya. Secara khusus, kami fokus pada ekspor besi dari permukaan
basal dari BMVEC pada setiap titik dalam pengembangan otak tikus dengan penekanan
pada mekanisme (s) peraturan astrosit-dimediasi ekspor yang (Gbr. 2).

Postnatal hari 0
Selama akhir embriogenesis BMVEC telah dibentuk menjadi pembuluh darah tetapi astrosit
tetap terbelakang; sehingga lingkungan mikro lokal sekitarnya BMVEC adalah tanpa proses
NIH-PA Penulis Naskah

astrocytic akhir (endfeet) [10]. Pada tahap ini dalam pembangunan ada akumulasi zat besi di
BMVEC dipasangkan dengan kurangnya transportasi ke dalam parenkim otak (Gambar. 2A)
[31, 165]. Dalam lingkungan mikro tanpa astrosit dan serum, hBMVEC besi penghabisan
minimal (Gbr. 2A) [14]. memanfaatkanin vitrorekonstruksi paradigma perkembangan ini,
fluks besi dari hBMVEC dapat dimanipulasi untuk mendukung ruang (apikal atau basal)
mengandung serum [14]. Data ini menunjukkan bahwa selama embriogenesis, paling besi
dikumpulkan oleh BMVEC dapat diarahkan apikal kembali ke dalam serum (darah) dari
mana ia datang. Kurangnya BMVEC basolateral penghabisan besi di tahap-tahap awal
pembangunan mungkin menguntungkan bagi otak sebagai astrosit, dianggap sebagai
pembantu rumah tangga dari otak, yang sangat terbelakang dan secara fungsional tidak
memadai dalam menangani sejumlah besar zat besi [10]. akumulasi zat besi yang tinggi oleh
otak akan pergi dicentang, memungkinkan untuk kerusakan oksidatif neuron.

hari postnatal 0-14

Saat lahir, astrosit mulai memperluas endfeet mereka ke lingkungan mikro lokal sekitarnya
NIH-PA Penulis Naskah

BMVEC. Proses ini terjadi sampai hari postnatal 14 (P14) di mana titik astrocytic kontak
endfeet make dengan BMVEC [10]. Periode antara P0 dan P14 ditandai dengan pelepasan
toko besi BMVEC serta peningkatan akumulasi besi otak relatif (Gambar. 2B) [30, 31,
165]. Astrosit yang telah berkembang menjadi lingkungan mikro lokal sekitarnya hBMVEC
berisi transkrip pengkodean ferroxidase diffusible SCP [14, 141]. Banyaknya pesan SCP
dalam astrosit meningkat 4-5 kali lipat jika astrosit diunggulkan spasial berdekatan dengan
hBMVEC [14]. Astrosit mengeluarkan SCP protein ke dalam media sekitarnya yang
merangsang penghabisan besi dari hBMVECin vitro[14, 15]. Dengan tidak adanya
hBMVEC Hp, SCP menstabilkan hBMVEC FPN dan meningkatkan hBMVEC besi
penghabisan menunjukkan bahwa SCP mengkatalisis hBMVEC besi penghabisan melalui
FPN [36]. Secara bersama-sama, data menunjukkan bahwa komunikasi antara BMVEC dan
astrosit sangat penting untuk transportasi besi di seluruh BBB selama titik perkembangan
ini.

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 13

Juga ditemukan di secretome astrosit adalah ferroxidase feritin [15]. Namun, tidak mungkin
bahwa feritin memainkan peran penting dalam hBMVEC besi penghabisan dalam kondisi
non-patogenik sebagai penipisan SCP dari secretome astrosit benar-benar menghapuskan
NIH-PA Penulis Naskah

aktivitas ferroxidase dari bahwa media mengakibatkan penurunan kemampuan untuk

merangsang hBMVEC besi penghabisan [14].Di vivo, Kedekatan distal dari astrosit endfeet
untuk BMVEC dari P0 melalui P14 mungkin menguntungkan selama ontogenesis postnatal.
Pelepasan besi BMVEC dapat dikatalisis dan diasingkan oleh astrosit, yang kemudian dapat
mentransfer besi yang ke oligodendrocytes untuk mielinisasi atau neuron untuk sintesis
neurotransmitter. Selain itu, kurangnya kontak BMVEC-astrosit pada titik perkembangan ini
memungkinkan untuk difusi zat besi sekitar astrosit ke oligodendrocytes terdekat atau
neuron.

hari postnatal 14 dan seterusnya

Astrosit sepenuhnya amplop dan menghubungi permukaan basolateral dari BMVEC oleh
P14, setelah kehilangan BMVEC FPN telah dibuktikan di iris otak tikus (Gambar 2C.) [10,
33]; menipisnya BMVEC Hp juga telah diamati pada tahap ini dalam pengembangan [33].
memanfaatkanin vitromodel sistem BBB kami mampu rekapitulasi hilangnya hBMVEC
FPN dengan menumbuhkan hBMVEC dan astrosit dalam kontak dengan satu sama lain [14].
NIH-PA Penulis Naskah

Analisis lebih lanjut mengungkapkan bahwa hilangnya hBMVEC FPN diinduksi oleh
hormon peptida hepcidin astrosit-disekresikan
-/-
[14]. SSP tikus hepcidin knockout (Hepc ) Mengandung BMVEC yang
mengekspresikan tingkat yang lebih tinggi dari FPN dari jenis tikus liar [166]. Selain itu,
suntikan hepcidin ke dalam CNS murine diinduksi omset otak FPN [167]. Data ini
menunjukkan bahwa hepcidin aktif mengurangi ekspresi FPN sehingga kemungkinan
bahwa astrosit-disekresikan hepcidin dapat menginduksi omset BMVEC FPNin vivo.

Dalam hal fungsi, puncak penyerapan zat besi otak dicapai pada P14 setelah penurunan
59
tajam diamati [30]. Setelah kontak antara astrosit dan hBMVEC, hBMVEC Fe
penghabisan secara signifikan berkurang [14]. Pengobatan sistem BBB model kita dengan
fursultiamine hepcidin antagonis mengakibatkan pemulihan kedua hBMVEC FPN protein
dan zat besi penghabisan dari hBMVEC. Kami telah menunjukkan bahwa hBMVEC besi
penghabisan membutuhkan tindakan dari ferroxidase exocytoplasmic dan FPN [36]. Dengan
demikian, kita atribut penurunan dramatis dalam penyerapan zat besi otak setelah P14 untuk
NIH-PA Penulis Naskah

penipisan astrosit yang diinduksi BMVEC FPN. Jumlah minimal tapi stabil dari penyerapan
zat besi otak melalui BMVEC yang terjadi saat dewasa dapat dikatalisasi oleh salah astrosit
GPI-Cp atau ferroxidases disekresikan lainnya (Gbr. 2C).

Model calon regulasi besi di seluruh unit neurovaskular mamalia dewasa

model non-patogenik
Ada presentasi yang selalu berubah dari mikronutrien untuk sel-sel pinggiran
dimungkinkan oleh sistem peredaran darah. Di otak, organ yang terputus dari sistem
peredaran darah, harus ada adaptasi akut dalam sistem ini untuk memungkinkan fluks gizi
saat itu. Kami mengusulkan bahwa unit neurovaskular (terdiri dari BMVEC, astrosit
spasial yang berdekatan, dan neuron) erat mengkoordinasikan aliran besi ionik (tidak Tf-
besi) dari satu sel ke sel lainmelaluibentuk komunikasi sel ke sel langsung. Ada diragukan
lagi terlokalisasi komunikasi antara BMVEC dan mereka spasial berdekatan

Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
 McCarthy dan Kosman halaman 14

astrosit [8, 14], dan astrosit dalam kontak langsung dengan kedua BMVEC dan neuron secara
unik diposisikan untuk mempengaruhi metabolisme neuronal energi [168] dan fungsi sinaptik
[169]. Selain itu, bukti terbaru menunjukkan bahwa astrosit bertindak sebagai penyangga
NIH-PA Penulis Naskah

dari kelebihan zat besi, mencegah lebih akumulasi oleh neuron tetangga [170]. Kami
memperkenalkan model berikut mengenai regulasi besi di seluruh unit neurovaskular dari
mamalia dewasa.

Dalam periode homeostasis besi, persyaratan besi metabolisme setiap sel dari unit
neurovaskular terpenuhi (Gambar. 3A). Sekarang, asumsikan situasi di mana neuron
dirampas besi, astrosit berisi toko besi, dan BMVEC mengandung kadar homeostatis besi
(Gambar. 3B). Untuk mengembalikan kadar zat besi homeostatis ke neuron, astrosit
mengeluarkan besi melalui FPNmelaluioksidasi oleh GPI-Cp. besi ini kemudian tersedia
untuk dimasukkan ke dalam neuron melalui DMT1 (atau logam bervalensi dua ion
transporter lain,misalnya.Zip8, Zip14) setelah reduksi oleh reduktase neuronal terdefinisi
atau askorbat yang disekresi oleh neuron dan / atau neighboting sel glial (Gambar. 3B).
Hipotesis ini didukung melalui investigasi dari kadar zat besi selular dalam model tikus
Belgrade. Dalam tikus Belgrade, yang fenotip telah berkurang kemampuan akuisisi besi
karena mutasi missens dalam gen pengkodean DMT1, akumulasi besi neuron berkurang
NIH-PA Penulis Naskah

[67].

Setelah perdagangan besi dari astrosit ke neuron, tingkat zat besi sitosol dalam astrosit akan
turun (Gambar. 3C). Astrosit FPN akan menjadi posting-transcriptionally down-diatur
dalam kadar zat besi sitosol rendahmelalui pengikatan IRP ke Fpn1IRE (. Gambar 3C)
[93]; sel glial mengekspresikan IRP yang menghambat terjemahan FPN di bawah kondisi
besi yang rendah [34, 105]. Interaksi antara astrosit GPI-Cp dan FPN telah ditunjukkan [47].
Setelah menipisnya astrosit FPN karena kadar zat besi sitosol rendah, GPI-Cp kehilangan
interaksi dengan astrosit FPN dan sekarang tersedia untuk berinteraksi dengan BMVEC
FPN; BMVEC Hp habis dalam mamalia otak dikembangkan [33]. Melalui interaksi ini sel-
sel protein, besi diasingkan dari BMVEC FPN langsung oleh astrosit GPI-Cp (Gambar 3D.);
alternatif, astrosit SCP dapat berkontribusi aktivitas ferroxidase untuk BMVEC FPN dalam
skenario ini. Sementara interaksi antara BMVEC FPN dan astrosit GPI-Cp adalah
mekanisme langsung untuk membawa besi ke dalam otak, salah satu tidak bisa
mengabaikan kontribusi tidak langsung mungkin dengan neuron yang mungkin memainkan
peran yang rumit dalam penyerapan zat besi otak seperti yang disarankan oleh model ini.
NIH-PA Penulis Naskah

Kesimpulan ini disarankan oleh fakta bahwa neuron melepaskan glutamat, sehingga
menghasilkan gelombang kalsium dalam astrosit yang melakukan perjalanan ke endfeet
mereka BMVEC terkait, yang mengarah ke peningkatan diameter mikrovaskuler dari irisan
otak [171]. Peningkatan hasil diameter mikrovaskuler di suplementasi nutrisi meningkat ke
otak (yaitu neuron).

Aceruloplasminemia
Aceruloplasminemia adalah gangguan resesif autosomal disebabkan oleh hilangnya-of-
fungsi mutasi pada gen Cp [4, 172, 173]. Sebuah cacat pada gen Cp kritis akan
mempengaruhi unit neurovaskular yang sangat bergantung pada astrosit Cp untuk fungsi
yang tepat (Gambar. 3). Dalam kasus aceruloplasminemia, astrosit dan neuron mengandung
kadar tinggi zat besi akhirnya menyebabkan hilangnya neuron [4, 12, 174]. akumulasi besi
saraf dan kematian kemungkinan hasil dari jumlah besar besi dilepaskan dari astrosit
tetangga yang telah mengalami nekrosis selular karena kelebihan zat besi. Dalam model
d astrosit Cp memainkan peran penting dalam memperoleh besi dari BMVEC untuk
e
w
a Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
s
a

p
e
r
d
a
g
a
n
g
a
n

b
e
s
i

m
e
l
a
l
u
i

u
n
i
t

n
e
u
r
o
v
a
s
k
u
l
a
r
,
 McCarthy dan Kosman halaman 15

astrosit (Gambar. 3D). Dengan tidak adanya suatu Cp berfungsi, adalah mungkin bahwa Hp
ini up-diatur dan mendukung pelepasan besi dari BMVEC FPN. SSP tampaknya telah
berevolusi mekanisme kompensasi untuk oksidasi besi dengan tidak adanya baik Hp atau Cp
NIH-PA Penulis Naskah

[120, 135]. Atau, ferroxidases di secretome astrosit bisa mempotensiasi mobilisasi zat besi
dari BMVEC FPN dalam skenario di mana Cp tidak aktif. Jelas, hipotesis ini tetap harus
eksperimen diuji secara rinci.

Larut APP dan perkembangan angiopati amiloid serebral

Penyakit Alzheimer dengan demensia ditandai dengan akumulasi Aβagregat peptida di
sekitar pembuluh darah (angiopati amiloid serebral) dan akhirnya neuron. agregat ini adalah
induser konstituen dan ampuh utama angiopati amiloid serebral [13, 175]. SEBUAHβ
terbentuk melaluidua berurutan APP peristiwa pembelahan (Gambar. 4). APP, glikoprotein
transmembran, awalnya dibelah olehβBACE1 -secretase untuk membentuk produk yang
larut APP (Sapp) [176-178]. Selanjutnya,βfragmen -carboxyl-terminal dari APP dibelah
oleh γ-secretase di wilayah transmembran dari protein [176, 178]. Puncak dari peristiwa
pembelahan berurutan menghasilkan Aβ peptida, intraseluler fragmen C-terminal dari APP,
dan Sapp (Gambar. 4).
NIH-PA Penulis Naskah

SEBUAHβagregasi sering terjadi di sekitar BMVEC sebelum timbulnya demensia dan

penyakit Alzheimer berikutnya [8, 13]. SEBUAHβpeptida mengkatalisis perkembangan
angiopati amiloid serebral dan agregasi mereka diinduksi oleh zat besi [175, 179]. antibodi
spesifik konformasi telah digunakan untuk membedakan berbagai fitur struktural
Aβkompleks -Metal [179, 180]. Analisis imunologi mengungkapkan bahwa Aβkompleks -
Fe membentuk oligomer fibrillary dan protofibrils annular, yang keduanya merupakan
spesies neurotoksik [179, 181]. Dalam konteks A iniβ dapat bertindak sebagai agen
AKU AKU AKU
mengurangi biologis, mengurangi Fe lebih yang aktif reduksi
II
Fe negara [182]. besi reaktif menengahi Aβ toksisitas neuronal in vitro, Efek yang dapat
dilemahkan dengan besi khelasi [183]. Selanjutnya, Aβ agregasi peptida dilemahkan
melalui administrasi intranasal dari deferoxamine besi chelator
[184]. Data ini menunjukkan bahwa besi memainkan peran yang rumit baik dalam
pembentukan dan toksisitas Aβ agregat.

Dalam kasus amiloid serebral angiopati sumber zat besi untuk Aβagregasi dapat berasal dari
BMVEC FPN. Kedua Sapp dan peptida FTP sintetis mengandung diusulkan FPN situs
NIH-PA Penulis Naskah

mengikat; stabilisasi FPN yang dihasilkan dari pengikatan spesies baik APP yang
diturunkan menginduksi peningkatan yang signifikan dalam penghabisan besi dari
hBMVEC [162]. Kami berhipotesis bahwa Sapp, dibelah dari astrosit, menginduksi
akumulasi besi otak dari BMVEC FPN. Pada gilirannya, Aβ peptida mengais besi yang
masuk sehingga agregasi protein terkemuka pertama yang angiopati amiloid serebral diikuti
oleh toksisitas neuronal akhirnya (Gambar. 4).

Arah masa depan

Memahami mekanisme perdagangan besi ke dalam, dalam, dan keluar dari otak sangat
penting. Efek merusak potensi besi tidak dapat diabaikan sebagai bukti menunjukkan
mereka mungkin terlibat dalam perkembangan beberapa gangguan neurologis. eksperimen
masa depan akan mendapat manfaat dari pemeriksaan rinci dari model yang diusulkan
dalam ulasan ini. Kami percaya bahwa sangat penting untuk menilai profil mobilisasi besi
BMVEC,
Sel Mol Hidup Sci. Penulis naskah; tersedia di PMC 2016 Februari 1.
McCarthy dan Kosman halaman 16

astrosit, dan neuron dalam konteks unit neurovaskular ini secara keseluruhan. Dengan demikian, lab kami
adalah mengembangkan metode untuk secara kuantitatif membedah mekanisme transportasi besi di
seluruh
BBB dan melalui unit neurovaskular baik in vitro dan in vivo. Sebagai anggota baru dihargai dari
regulon besi [162] APP mungkin menjadi kunci untuk membuka mekanisme yang terlibat dalam
akumulasi besi otak yang berhubungan dengan Aβ pengumpulan.

Sebagai contoh, model ganda transgenik tikus penyakit Alzheimer (APP dan Presenilin 1, APP / PS1)
menampilkan peningkatan ekspresi protein prekursor amiloid serta pengolahan APP ke Aβagregat ketika diberi
makan diet besi yang tinggi [184]. Amyloid-βagregat serta defisit kognitif telah terbalik pada tikus ini melalui
injeksi intranasal dari deferoxamine agen besi pengkelat (DFO) [184]. Selanjutnya, DFO menghambat
fosforilasi tau di hippocampus dari APP / PS1 tikus [185]. Akumulasi besi otak dalam percobaan ini
kemungkinan dicegah atau ditekan dengan terapi khelasi DFO. ada potensi untuk turunan dari fursultiamine
untuk digunakan sebagai agen farmakologis untuk mencegah atau membalikkan akumulasi besi otak yang
berlebihan seperti DFO telah ditunjukkan untuk melakukan. Misalnya, FPN diungkapkan pada kedua permukaan
apikal dan basolateral dari hBMVEC, dan indiscriminant dalam kemampuannya untuk mengarahkan ekspor besi
di permukaan baik [14, 36]. Beredar fursultiamine memiliki potensi untuk menstabilkan BMVEC FPN pada
permukaan sel apikal, memungkinkan untuk penghabisan terus menerus besi dari BMVEC di sisi darah
fungsional mendukung penghabisan besi dari otak. Namun, bersama dengan menjadi lipofilik, fursultiamine
memiliki masalah pendekin vivoparuh kurang dari satu jam [122]. Oleh karena itu, sintesis dari fursultiamine
turunan polar dengan panjang farmakologis paruh dikombinasikan dengan diet zat besi yang rendah bisa
menstabilkan FPN pada permukaan apikal BMVEC dan memungkinkan untuk penghabisan terus menerus besi
dari otak. Sebagai fursultiamine degradasi ke tiamin, penggunaan senyawa ini, atau turunan dari senyawa ini,
mungkin cara yang aman dan efektif untuk mengobati penyakit Alzheimer. Atau, FTP bisa memenuhi peran ini
juga. FTP memiliki keuntungan yang diakui sebagai “diri” dan karenanya tidak akan diserang oleh sistem
kekebalan tubuh. Percobaan menggunakan FTP untuk meningkatkan apikal penghabisan besi dari hBMVEC
sedang berlangsung. Wawasan yang diperoleh dari ini dan yang sejenis studi harus menyediakan template baru
untuk mengidentifikasi target obat potensial yang bertujuan untuk memperlambat, mencegah,