UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERU

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA

CATEDRA:

ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO ORGANICO

CATEDRATICO:

Dr. ANDRES CORCINO ROJAS QUINTO

ALUMNOS:

 ROJAS MOYA, Estephany Mayruth (I.Q.G.N.E)

 SOLIER ESTEBAN, Sabrina (I.Q.A.)

HUANCAYO-PERU

2017
 RESUMEN

El agua es la fuente de toda la vida en la Tierra. Su distribución es muy variable: en algunas

regiones es muy abundante, mientras que en otras escasea tiene muchas propiedades que hacen
que se le llama disolvente universal y es fuente de vida el Ministerio de Salud y La Protección
Social, establece que el agua potable es aquella que por cumplir las características físicas,
químicas y microbiológicas, en las condiciones señaladas en decreto y demás normas que la
reglamenten, es apta para consumo humano, por ello la necesidad de analizar en qué condiciones
está el agua que se va utilizar esto hace que el tratamiento de las aguas residuales sea
complicado. Por esta razón, al querer adentrarse en el amplio mundo del conocimiento de las
aguas residuales industriales o no se tiene que conocer los componentes que hay en ella por
ejemplo Varios organismos patógenos de transmisión fecal-oral pueden estar presentes en el agua
cruda, entre ellos bacterias como la Salmonella, coliformes fecales y totales, las cuales han sido
encontradas en abastecimientos de agua potable. La verificación de la calidad microbiológica del
agua de consumo incluye el análisis de la presencia de Escherichia coli, un indicador de
contaminación fecal. No debe haber presencia en el agua de consumo

Para el caso de estudio se trabajó con método Colilert, esta prueba se encuentra patentada por
IDEXX, se utiliza para la detección de coliformes totales y Escherichia Coli en un periodo de 24
horas, Colilert Quanti-Tray es una prueba diseñada específicamente para el recuento NMP
(Numero Más Probable) de E. coli y bacterias coliformes a partir de muestras de agua potable u
otras aguas de características similares. Se alcanzaron los resultados siguientes:

Se llegó a conocer el análisis microbiológico de agua de riego por el método colilert

Se llegó a conocer y entender el funcionamiento de los equipos como también el procedimiento

para hacer el análisis microbiológico del agua de riego.

Se verifico y contabilizo los resultados de coliformes totales y escherichia coli del agua de riego.
 INDICE Formatted: Centered

RESUMEN ...................................................................................................................................... 2 Formatted: Font: Arial Narrow, Bold, Font color: Text 1

I. INTRODUCCION ................................................................................................................... 43
II. OBJETIVOS .......................................................................................................................... 54
III. MARCO TEORICO................................................................................................................. 65
3.1. EL AGUA ...................................................................................................................... 65
3.1.1. PROPIEDADES FISICOQUIMICAS ......................................................................... 86
3.1.2. TIPOS DE AGUA ................................................................................................... 98
3.2. MICROORGANISMOS INDICADORES DE LA CALIDAD EN EL AGUA: ....................... 1312
3.2.1. COLIFORMES TOTALES: .................................................................................. 1412
3.2.2. COLIFORMES FECALES: .................................................................................. 1513
3.3. METODOS: ............................................................................................................... 1614
3.3.1. MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE: ....................................................... 1614
3.3.2. MÉTODO ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON ASPIRACIÓN
DIRECTA 1715
3.3.3. TÉCNICA DE NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)................................................ 1816
3.3.4. METODO COLILERT: ........................................................................................ 1917
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL............................................................................... 2220
4.1. MATERIALES ........................................................................................................... 2220
4.2. EQUIPOS .................................................................................................................. 2220
4.3. REACTIVOS .............................................................................................................. 2220
4.4. PROCEDIMIENTO ..................................................................................................... 2220
V. RESULTADOS .................................................................................................................. 2422
5.1. CONTEO DEL NUMERO DE POCILLOS POSITIVOS: ................................................. 2422
5.2. DETERMINACION DEL NMP PARA CADA MICROORGANISMO:................................ 2523
VI. DISCUSION DE RESULTADOS ...................................................................................... 2624
VII. CONCLUSIONES .......................................................................................................... 2725
VIII. BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................. 2826
IX. ANEXOS ....................................................................................................................... 2927
 I. INTRODUCCION
El agua es una necesidad universal y es el principal factor limitante para la existencia de la vida
humana, a través de la historia el hombre ha necesitado de un suministro adecuado de agua para
su alimentación, seguridad y bienestar a través de la tecnología conocida como captación
“cosecha o almacenamiento “del agua se puede asegurar el abastecimiento del agua para el uso
de toda la persona, la captación consiste en recolectar y almacenar agua proveniente de diversas
fuentes para su uso benéfico. el agua captada de la cuenca y conducida a estanques reservorios
puede aumentar su suministro
Toda agua natural contiene cantidades variables de otras sustancias en concentraciones que
varían de unos pocos mg/litro en el agua de lluvia a cerca de 35 mg/litro en el agua de mar. A esto
hay que añadir, en las aguas residuales, las impurezas procedentes del proceso productor de
desechos, que son los propiamente llamados vertidos. Las fuentes de agua que son utilizados en
diversos procesos que el hombre realiza tienen microorganismos presentes de diversos grupos o
familias. Una de las razones más importantes para tratar las aguas residuales o servidas es la
eliminación de todos los agentes patógenos de origen humano presentes en las excretas con el
propósito de evitar una contaminación biológica al cortar el ciclo epidemiológico de transmisión.
Estos son: Coliformes totales, Coliformes fecales Salmonella, Escherichia Coli.
Para ello, para su utilización es necesario conocer que tan contaminado esta y de ello muchos
métodos de determinación de microorganismos (Escherichia Coli y coliformes) y uno de los
métodos con valores altos de acierto es el método Colilert aprobada por la EPA de los Estados
Unidos; análisis en 24 horas para aguas potable y sin tratar. Las aprobaciones internacionales
incluyen las de la AOAC, IBWA y EBWA. Millones de análisis realizados en todo el mundo cada
año. Y eso nos da confiabilidad en los resultados.
 I.II. OBJETIVOS Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
 Conocer el análisis microbiológico del agua por el método colifert. Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

 Conocer y entender el funcionamiento de los equipos de análisis microbiológico del agua.

 Verificar y contabilizar los resultados de coliformes totales y escherichia coli del agua de
riego.
 II.III. MARCO TEORICO Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
3.1. EL AGUA Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
2.1. Formatted: Font: Arial Narrow, 12 pt, Bold, Font color:
Text 1
Según la Real Academia Española, el agua (del latín aqua) es la “sustancia formada por la
Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
combinación de un volumen de oxígeno y dos de hidrógeno, líquida, inodora, insípida, en pequeña Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
cantidad incolora y verdosa o azulada en grandes masas. Es el componente más abundante en la + Indent at: 0.5"
superficie terrestre y más o menos puro, forma la lluvia, las fuentes, los ríos y los mares; es parte
constituyente de todos los organismos vivos y aparece en compuestos naturales, y como agua de
cristalización en muchos cristales”. Pero cabe señalar que desde el punto de vista científico, esta
definición no tiene en cuenta los isótopos de hidrógeno y oxígeno, existiendo de esta forma, junto
a la forma esencial del agua, H2O, el agua pesada, D2O, el agua hiperpesada, T2O y el agua
semipesado HDO. A esto hay que añadir también la existencia de tres isótopos del oxígeno, O 16,
O17 y O18, y tres isótopos del hidrógeno, H1, H2 o D (Deuterio) y H3 o T (Tritio) con lo que el
líquido que comúnmente llamamos agua se trata de una mezcla de 18 cuerpos posibles, aunque
en la práctica sea una mezcla de agua ligera (H2O) y de muy pequeñas cantidades de agua
pesada y agua hiperpesada. El agua es considerada como uno de los recursos naturales más
fundamentales para el desarrollo de la vida, y junto con el aire, la tierra y la energía, constituye los
cuatro recursos básicos en que se apoya el desarrollo. Como hemos comentado, es el compuesto
más abundante, cubriendo las tres cuartas partes de la superficie terrestre. Sin embargo, diversos
factores limitan la disponibilidad de agua para uso humano, dejando de lado en este trabajo los
factores económicos, sociales y políticos. Se sabe que más del 97 % del agua total del planeta se
encuentra en los océanos y otras masas salinas y que podemos considerarla como inservible, ya
que apenas están disponibles para ningún propósito. Del 3 % restante, un 2,38 %
aproximadamente, se encuentra en estado sólido, resultando prácticamente inaccesible. El resto,
un 0,62 %, se encuentra en ríos, lagos y aguas subterráneas. Como apreciamos, la cantidad
disponible de agua es verdaderamente escasa, aunque mayor es el problema de la distribución
irregular en el planeta.
Diagrama de fases del agua

Diagrama de fases del agua Formatted: Font: 14 pt

FUENTE: Wikipedia

FUENTE: Wikipedia
Criterios ecológicos de la calidad del agua Formatted: Font: 14 pt
Criterios ecológicos de la calidad del agua

NMP=Numero más probable

NMP=Numero más probable

2.1.1.3.1.1. PROPIEDADES FISICOQUIMICAS Formatted: Font: Arial Narrow, Bold, Font color: Text 1
Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",
 Disolvente Outline numbered + Level: 3 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
El agua es un disolvente polar. Como tal, disuelve bien sustancias iónicas y polares; no + Indent at: 0.75"
disuelve apreciablemente sustancias fuertemente apolares, como el azufre en la mayoría Formatted: Font: Arial Narrow, Bold, Font color: Text 1

de sus formas, y es inmiscible con disolventes apolares, como el hexano. Esta propiedad
es de gran importancia para la vida.
 Densidad
La densidad del agua líquida es altamente estable y varía poco con los cambios de
temperatura y presión. A presión normal de 1 atmósfera, el agua líquida tiene una mínima
densidad a 100 ºC, cuyo valor aproximado es 0,958 Kg/l. Mientras baja la temperatura va
aumentando la densidad de manera constante hasta llegar a los 3,8 °C donde alcanza
una densidad de 1 Kg/l. Esta temperatura representa un punto de inflexión y es cuando
alcanza su máxima densidad a presión normal. A partir de este punto, al bajar la
temperatura, disminuye la densidad aunque muy lentamente hasta que a los 0 °C alcanza
0,9999 Kg/l. Cuando pasa al estado sólido ocurre una brusca disminución de la densidad,
pasando a 0,917 Kg/l.
 Polaridad
La molécula de agua es muy dipolar. Los núcleos de oxígeno son muchos más
electronegativos (atraen más los electrones) que los de hidrógeno, lo que dota a los dos
enlaces de una fuerte polaridad eléctrica, con un exceso de carga negativa del lado del
oxígeno, y de carga positiva del lado de los hidrógenos.
 Cohesión
La cohesión es la propiedad con la que las moléculas de agua se atraen a sí mismas, por
lo que se forman cuerpos de agua adherida a sí misma, las gotas. Los puentes de
hidrógeno mantienen las moléculas de agua unidas, formando una estructura compacta
que la convierte en un líquido casi incompresible. Estos puentes se pueden romper
fácilmente con la llegada de otra molécula con un polo negativo o positivo dependiendo
de la molécula, o con el calor.
 Adhesión
El agua, por su gran potencial de polaridad, cuenta con la propiedad de la adhesión, es
decir, el agua generalmente es atraída y se mantiene adherida a otras superficies, lo que
se conoce comúnmente como “mojar”. Esta fuerza está también en relación con los
 puentes de hidrógeno que se establecen entre las moléculas de agua y otras moléculas
polares y es responsable, junto con la cohesión, del llamado fenómeno de la capilaridad.
 Capilaridad
El agua cuenta con la propiedad de la capilaridad, que es la propiedad de ascenso, o
descenso, de un líquido dentro de un tubo capilar. Esto se debe a sus propiedades de
adhesión y cohesión. Cuando se introduce un capilar en un recipiente con agua, ésta
asciende por el capilar como si trepase “agarrándose” por las paredes, hasta alcanzar un
nivel superior al del recipiente, donde la presión que ejerce la columna de agua se equilibra
con la presión capilar.
 Tensión superficial
Por su misma propiedad de cohesión, el agua tiene una gran atracción entre las moléculas
de su superficie, creando tensión superficial. La superficie del líquido se comporta como
una película capaz de alargarse y al mismo tiempo ofrecer cierta resistencia al intentar
romperla; esta propiedad contribuye a que algunos objetos muy ligeros floten en la
superficie del agua.
 Calor específico
También esta propiedad está en relación con los puentes de hidrógeno que se crean entre
las moléculas de agua. El agua puede absorber grandes cantidades de calor que utiliza
para romper los puentes de hidrógeno, por lo que la temperatura se eleva muy lentamente.
El calor específico del agua es de 1 cal/°C g.
 Conductividad
La conductividad eléctrica de una muestra de agua es la expresión numérica de su
capacidad para transportar una corriente eléctrica. Esta capacidad depende de la
presencia de iones en el agua, de su concentración total, de su movilidad, de su carga y
de las concentraciones relativas, así como de la temperatura.

3.1.2. TIPOS DE AGUA Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1

2.1.2. Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",
Outline numbered + Level: 3 + Numbering Style: 1, 2,
3.1.2.1. AGUAS RESIDUALES URBANAS (ARU) 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
+ Indent at: 0.75"

2.1.2.1. Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: -0.01",

Outline numbered + Level: 4 + Numbering Style: 1, 2,
Son los vertidos que se generan en los núcleos de población urbana, como consecuencia 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
+ Indent at: 0.75"
de las actividades propias de estos. Los aportes que generan esta agua son:
  Aguas negras, fecales o aguas sanitarias son las aguas mezcladas con las
exoneraciones corporales. Es el agua que una vez ha sido utilizada por el hombre ha
quedado polucionada. Es una combinación de las aguas procedentes de los retretes de
las viviendas, de los centros comerciales, etc. Situación actual del estado de la depuración
biológica. Explicación de los métodos y sus fundamentos.
 Aguas de lavado doméstico, son las llamadas aguas grises, que según el
Diccionario Técnico del Agua son “las procedentes de los usos domésticos antes de
mezclarse con las aguas fecales. Proceden del lavado de ropa, limpieza de la casa,
desperdicios de comida, etc.” Contienen materia en suspensión formadas por tierra, arena
y diversas materias insolubles, materia orgánica, grasas, detergentes y sales diversas.
 Aguas de drenaje de calles. Estas aguas presentan, en general, un volumen muy
pequeño, y su contaminación depende de las condiciones locales.
 Agua de lluvia y lixiviados. Es el agua que cae de las nubes en forma líquida o sólida. Es
un agua que nunca es pura. Contiene disueltos distintos gases, además de determinados
iones que se encuentran en la atmósfera en forma de polvo y que son resultado o
consecuencia de diversos fenómenos que en ella se producen. Esto es, particularmente
notable, en las zonas industriales y en las grandes aglomeraciones urbanas, en la que la
atmósfera que los rodea está extraordinariamente polucionada.

Principales microorganismos transmitidos por el agua

 FUENTE: Moro, 2011
3.1.2.2. AGUA POTABLE Formatted: Font: Bold, Not Italic, Font color: Text 1
2.1.2.2. Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: -0.01",
Outline numbered + Level: 4 + Numbering Style: 1, 2,
El decreto 1575 de 2007 emitido por el Ministerio de Salud Y La Protección Social, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
establece que el agua potable es aquella que, por cumplir las características físicas, + Indent at: 0.75"

químicas y microbiológicas, en las condiciones señaladas en el presente decreto y demás

normas que la reglamenten, es apta para consumo humano. Se utiliza en bebida directa,
en la preparación de alimentos o en la higiene personal. (Decreto 1575 de 2007). Puede
provenir de distintas fuentes como lo son manantiales, ríos, pozos, y demás esta agua es
captada y tratada para cumplir con la reglamentación vigente para el consumo humano.
El agua de consumo inocua (agua potable), no ocasiona riesgos significativos para la salud
cuando se consume durante toda una vida, teniendo en cuenta las diferentes
vulnerabilidades que pueden presentar las personas en las distintas etapas de su
desarrollo. Las personas que presentan mayor riesgo de contraer enfermedades
transmitidas por el agua son los lactantes y los niños de corta edad, las personas
debilitadas o que viven en condiciones antihigiénicas y los ancianos. El agua potable es
adecuada para todos los usos domésticos habituales, incluida la higiene personal. (Guías
 para la calidad del agua potable, OMS). El peligro más común relativo al agua potable es
el de su contaminación, la cual puede ser directa o indirecta, debido al efecto de aguas
residuales, de otros desechos o de las excretas del hombre o los animales. Si dicha
contaminación es reciente y entre los factores que contribuyen a ella se hallan agentes
portadores de enfermedades entéricas transmisibles, es posible que estén presentes los
organismos causantes de dichas enfermedades. Beber agua contaminada o emplearla en
la preparación de bebidas o alimentos puede producir mayor número de casos de
infección. (OPS, 1997).

Características físicas

FUENTE: resolución 2015 de 2007

Características químicas

FUENTE: resolución 2015 de 2007

3.1.2.3. AGUAS RESIDUALES INDUSTRIALES Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: -0.01",
2.1.2.3. Outline numbered + Level: 4 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
Son aquellas que proceden de cualquier actividad o negocio en cuyo proceso de + Indent at: 0.75"

producción, transformación o manipulación se utilice agua. Presentan características muy

distintas de las aguas residuales urbanas. Son enormemente variables en cuanto a caudal
y composición, difiriendo las características de los vertidos, no sólo de una industria a otra,
sino también dentro de un mismo tipo de industria. A veces, las industrias no emiten
vertidos de forma continua, sino únicamente en determinadas horas del día o incluso
 únicamente en determinadas épocas del año, dependiendo del tipo de producción y del
proceso industrial. También son habituales las variaciones de caudal y carga a lo largo del
día. Están más contaminadas que las aguas residuales urbanas, además, con una
contaminación mucho más difícil de eliminar. Su alta carga unida a la enorme variabilidad
que presentan, hace que el tratamiento de las aguas residuales sea complicado. Por esta
razón, al querer adentrarse en el amplio mundo del conocimiento de las aguas residuales
industriales, se corre el peligro de equivocarse al querer simplificar el problema, intentando
generalizar e incluso querer extrapolar, aplicando las técnicas que se aplican en las aguas
residuales urbanas. Por esta razón es necesario un estudio específico en cada caso.
De acuerdo con la posibilidad de biodegradación de la materia orgánica presente, se
pueden distinguir tres clases de aguas:

o Aguas residuales industriales que contienen materia orgánica

 Con aporte de nitrógeno y fósforo
 Sin aporte de nitrógeno y fósforo
o Aguas residuales industriales que sólo contienen sustancias minerales
 Con sustancias tóxicas
 Sin sustancias tóxicas
o Aguas residuales mixtas

3.1.2.4. AGUAS AGRÍCOLAS Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: -0.01",

2.1.2.4. Outline numbered + Level: 4 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
Actualmente, aproximadamente 3 600 km3 de agua dulce son extraídos para consumo + Indent at: 0.75"

humano, es decir, 580 m3 per cápita por año. El diagrama de barras adjunto muestra
queque, en todas las regiones, con excepción de Europa y América del Norte, la
agricultura es obviamente el sector que consume más agua, representando globalmente
alrededor del 69 por ciento de toda la extracción, el consumo doméstico alcanza
aproximadamente el 10 por ciento y la industria el 21 por ciento.

2.2.3.2. MICROORGANISMOS INDICADORES DE LA CALIDAD EN EL AGUA: Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
Varios organismos patógenos de transmisión fecal-oral pueden estar presentes en el agua cruda,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
entre ellos bacterias como la Salmonella sp, Shighella sp, coliformes fecales y totales, las cuales + Indent at: 0.5"
han sido encontradas en abastecimientos de agua potable. (Ocasio y López, 2004). La verificación
de la calidad microbiológica del agua de consumo incluye el análisis de la presencia de Escherichia
coli, un indicador de contaminación fecal. No debe haber presencia en el agua de consumo de E.
coli, ya que constituye una prueba concluyente de contaminación fecal reciente. En la práctica, el
análisis de la presencia de bacterias coliformes termo tolerantes puede ser una alternativa
aceptable en muchos casos E. colie es un indicador útil, pero tiene limitaciones. Los virus y
protozoos entéricos son más resistentes a la desinfección; por tanto, la ausencia de E. coli no
implica necesariamente que no haya presencia de estos organismos. En ciertos casos, puede ser
deseable incluir en los análisis microorganismos más resistentes, como bacteriófagos o esporas
bacterianas, por ejemplo, cuando se sabe que el agua de origen que se usa está contaminada con
virus y parásitos entéricos, o si hay una incidencia alta de enfermedades virales y parasitarias en
la comunidad. (Guías para la calidad del agua potable, Vol.1, OMS).

3.2.1. COLIFORMES TOTALES: Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",

2.2.1. Hanging: 0.4", Outline numbered + Level: 3 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment:
Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen un grupo Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

de bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por
criterios taxonómicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su
capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y 14 gas, más o menos
rápidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubación comprendida
entre 30-37ºC.). Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no
esporulados. Del grupo coliforme forman parte varios géneros: Escherichia,
Enterobacter,Klebsiella, Citrobacter, etc. Se encuentran en el intestino del hombre y de los
animales, pero también en otros ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de huevo, etc.
Una elevada proporción de los coliformes que existen en los sistemas de distribución no se
debe a un fallo en el tratamiento en la planta, sino a un recrecimiento de las bacterias en las
conducciones. Dado que es difícil distinguir entre recrecimiento de coliformes y nuevas
contaminaciones, se admite que todas las apariciones de coliformes son nuevas
contaminaciones, mientras no se demuestre lo contrario. La prueba más relevante usada
para la identificación del grupo coliformes es el hidrolisis de la lactosa. El rompimiento de
este disacárido es catalizado por la enzima B-D-Galactosidasa. Ambos monosacáridos (la
lactosa después es transformada en glucosa por reacciones bioquímicas) posteriormente
son metabolizados a través del ciclo glicolitico y ciclo del citrato. Los productos metabólicos
 de estos ciclos son ácidos y/o CO2. Para la determinación de la B-Galactosidasa se utilizan
medios cromógenos tales como chromocult.

3.2.2. COLIFORMES FECALES: Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",

2.2.2. Hanging: 0.4", Outline numbered + Level: 3 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment:
Los coliformes fecales también denominados coliformes termo tolerante, llamado así porque Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

soportan temperaturas de hasta 45ºC, comprenden un grupo muy reducido de

microorganismos los cuales son indicadores de calidad, ya que son de origen fecal. En su
mayoría están representados por el microrganismo E. Coli, pero se pueden encontrar entre
otros menos frecuentes Citrobacterfreundii y Klebsiellapneumoniae, estos últimos hacen
parte de los coliformes termo tolerante, 15 pero su origen se asocia generalmente con la
vegetación, y solo ocasionalmente aparecen en el intestino. (Hayes, 1993). Los coliformes
fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se diferencian de los demás
microorganismos que hacen parte de este grupo, en que son indol positivo, su rango de
temperatura óptima de crecimiento es muy amplio (hasta 45ºC) y son mejores indicadores
de higiene en alimentos y en aguas, la presencia de estos indica presencia de
contaminación fecal de origen humano o animal, ya que las heces contienen dichos
microorganismos, presentes en la flora intestinal y de ellos entre un 90% y un 100% son E.
Coli mientras que en aguas residuales y muestras contaminadas este porcentaje disminuye
a un 59%. (Gómez, 1999).

3.2.2.1. ESCHERICHIA COLI Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: -0.01",

2.2.2.1. Outline numbered + Level: 4 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
E. coli es una de las especies bacterianas más minuciosamente estudiadas, y no + Indent at: 0.75"

solamente por sus capacidades patogénicas, sino también como sustrato y modelo de
investigaciones metabólicas, genéticas, poblacionales y de diversa índole (Neidhardt,
1999). Forma parte de la familia Enterobacteriaceae (Ewing, 1985). Son coliformes
capaces de producir indol, a partir de triptófano, en 21 ±3 horas a 44 ±0.5ºC. También
poseen la enzima B-Galactosidasa, que reacciona positivamente en el ensayo del rojo de
metilo y puede descarboxilar el ácido L-Glutámico, pero no son capaces de usar citrato
como única fuente de carbono o de crecer en un caldo con cianuro de potasio (KCN).
2.3.3.3. METODOS: Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3.3.1. MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE: 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
2.3.1. + Indent at: 0.5"

Este método se fundamenta en determinar el número y tipo de microorganismos presentes Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",
en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de la misma a través de una Hanging: 0.4", Outline numbered + Level: 3 +
membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45 μm de diámetro), la consiguiente Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment:
Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
retención de los microorganismos sobre dicha membrana y el cultivo de los mismos en
diferentes agares de acuerdo al tipo de microorganismo-

MATERIALES
 Muestra de agua de proceso
 Agua peptonada al 0,1 %
 Placas estériles con medio ENDO
 Placas estériles con agar Sabouraud
 Placas estériles con agar Cetrimide
 Placas estériles con agar MacConkey
 Placas estériles con agar para
 Recuento en Placa (Agar Standard Methods)
 Equipo de filtración (Millipore)
 Membranas filtrantes estériles
 Bomba de vacío
 Pinzas estériles
 Estufa

PROCEDIMIENTO
a) Colocar una membrana filtrante estéril, bajo condiciones asépticas, sobre el centro del
portade la porta filtro, usando pinzas estériles, con la superficie cuadriculada hacia
arriba.
b) Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtración y asegurando con una pinza
c) Verter 100 mL de la muestra de agua, en el porta filtro y proceder a filtrar.
d) Lavar el embudo con aproximadamente 100 mL de agua peptonada al 0,1%.
e) Remover la parte superior de la porta filtro, y con una pinza estéril transferir la
membrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondiente al
 microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agarendo, bacterias aerobias
mesófilas en agar para recuento en placas, mohos y levaduras en agar Sabouraud y
Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide.
f) Al colocar la membrana, evitar la formación de burbujas entre ésta y el medio de cultivo.
g) Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesión de la membrana al
medio.
h) Con excepción de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en forma invertida,
a las diferentes temperaturas y tiempos, de acuerdo al microorganismo investigado.

2.3.2.3.3.2. MÉTODO ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
ASPIRACIÓN DIRECTA Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",
Hanging: 0.4", Outline numbered + Level: 3 +
Este método de ensayo establece la metodología para el análisis de magnesio total Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment:
Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
mediante espectrofotometría de absorción atómica.
Este método, es aplicable para la determinación del contenido de magnesio, según lo
establecido en la norma NCh 409/1- Of. 2005.

PRINCIPIOS
Una fracción de muestra previamente digerida es aspirada hacia una llama aire - acetileno
posicionado en el paso óptico de un espectrofotómetro de absorción atómica. La muestra en
estas condiciones es atomizada. 3.2 La población de átomos al estado elemental absorbe
radiación característica proveniente de una fuente de emisión de líneas atómicas de Mg, la
relación entre potencia incidente y potencia transmitida es una medida de la concentración
del elemento en la muestra.

REACTIVOS
 Agua grado reactivo para análisis, clase 1 o 2 según NCh 426/2, exenta de magnesio
 Ácido clorhídrico, HCl 37 % v/v.
 Ácido nítrico, HNO3, 65 % v/v.
 Estándar comercial de Mg, de 1000 mg/L, alternativamente varilla de magnesio.
 Cloruro de lantano 5.1.6 Aire
 Acetileno

Soluciones de calibración estándar.

 Preparar una serie de soluciones de calibración en el rango óptimo de trabajo, a partir de
diluciones apropiadas del estándar de 1000 mg/L, preparado anteriormente. Almacenar en
envases de polietileno de alta densidad debidamente etiquetados. La condición de acidez
final para estándares es 10 % v/v HCl.

Solución blanco término cero. La solución término cero debe ser preparada con agua para
análisis grado reactivo exenta de Mg y en un medio 10 % HCl v/v.

Equipos e instrumentos

 Balanza analítica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1 mg

 Campana, con sistema de extracción de gases.
 Espectrofotómetro de absorción atómica, dotado con quemador aire acetileno, y corrector
de deuterio.
 Fuente de emisión, de líneas atómicas de Mg.
 Plancha calefactora, con regulación de temperatura o digestor microondas (opcional).
 Material de uso habitual en laboratorio, vasos de precipitado, dispensadores, pipetas
graduadas y otros.

3.3.3. TÉCNICA DE NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: -0.01",
2.3.3. Hanging: 0.4", Outline numbered + Level: 3 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment:
Debido a que un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-oral utilizando Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

como vehículo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos que
funcione como indicador de contaminación fecal. Estos deben de ser constantes,
abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de
los patógenos intestinales y debe de ser capaces de desarrollarse extra intestinalmente.

Soluciones

 Frascos gotero con reactivo de Erlich o Kovace

 Frascos gotero con indicador rojo de metiloe.
 Frascos gotero con reactivo alfa naftol VP1e.
 Frascos gotero con solución de hidróxido de potasio al 40 % VP2e
 COLORANTES
3.3.4. METODO COLILERT: Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
2.3.4. Formatted: Heading 3, Indent: Left: -0.01", Hanging:
0.4", Outline numbered + Level: 3 + Numbering Style:
Esta prueba se encuentra patentada por IDEXX, se utiliza para la detección de coliformes 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.75"
totales y Escherichia Coli en un periodo de 24 horas, Colilert Quanti-Tray es una prueba
diseñada específicamente para el recuento NMP (Numero Más Probable) de E. coli y
bacterias coliformes a partir de muestras de agua potable u otras aguas de características
similares, ya sea tratada o sin tratar. Se basa en la Tecnología de Sustrato. Cuando las
bacterias coliformes metabolizan el nutriente indicador ONPG, el color de la muestra se
vuelve amarilla. Cuando E. Coli metaboliza un segundo nutriente indicador (MUG), la
muestra emite fluorescencia con luz UV. Colilert permite la detección simultánea de estas
bacterias en 24 horas, a una concentración de 1ufc/100 ml y en presencias de números tan
elevados de bacterias heterótrofas como 2x106/100 ml de muestra.

Además de ONPG Y MUG, sustratos que son usados como fuentes de carbono, el Colilert
contiene sulfato de amonio como fuente de nitrógeno, sales minerales y sulfito de sodio que
ayudan a reparar los coliformes dañados.

La norma UNE-EN ISO 9308-2, describe el método para la detección y/o recuento de E.
coli y bacterias coliformes en aguas según el método NMP (Número más Probable). La
detección de E. coli se basa en la expresión de la enzima ß-D-glucoronidasa. El producto
Colilert-18/Quanti-Tray, fabricado por la empresa Idexx, ha sido reconocido como método
de referencia en esta UNE-EN ISO 9308-2, incluida en la actual Directiva sobre Aguas de
Consumo Humano (CEE 2015/1787), la cual será traspuesta a la legislación española antes
del 27 de octubre de 2017.

Colilert-18 es un método muy sencillo, rápido y con confirmación directa. Para la

determinación de presencia/ausencia, únicamente es necesario añadir a 100 ml de la
muestra problema, el reactivo Colilert-18. Tras homogeneizar y disolver el reactivo, se
incuba la muestra durante 18 horas a 35 ºC. Transcurrido ese tiempo, la presencia de
coliformes vendría dada por una coloración amarilla de la muestra, mientras que la
presencia de E. coli estaría marcada por la fluorescencia en la muestra cuando ésta es
observada bajo una luz UV a 365 nm.

Cuando se requiere cuantificación, la muestra con el reactivo se vierte en un blíster de 51

pocillos el cual, una vez sellado, se incuba tal y como se ha descrito anteriormente. En este
caso, se contarán los pocillos que desarrollan coloración amarilla y fluorescencia, datos que
se llevarán a unas tablas de NMP para la cuantificación de coliformes y E. coli en la muestra
de agua.

VENTAJAS
Identifica E. coli específicamente, lo que elimina las notificaciones públicas innecesarias
debidas a resultados positivos falsos inducidos por Klebsiella pneumoniae.

 • Suprime hasta 2 millones de heterótrofos por cada 100 ml

 • Elimina la interpretación subjetiva de los métodos tradicionales
• Detecta un coliforme o E. coli viable individual por muestra


Esta celda se utiliza en el método cuando ya la muestra está preparada. Al igual que esta
hay otro similar que sirve para introducir al equipo para que lo selle.

Celda para la muestra

Celda para la muestra

FUENTE: Wikipedia
 FUENTE: Wikipedia

Tabla de NMP (número

Tabla demás
NMPprobable)
(número más probable)

FUENTE: Wikipedia

FUENTE: Wikipedia
 III.IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
4.1. MATERIALES Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
3.1. Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1
Formatted: Heading 2, Indent: Left: -0.05", Outline
 Probeta
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … +
 Fiola Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" +
Indent at: 0.5"
 Vaso de precipitado
 Tableta para análisis QUANTY TRAY
 Fresco esterilizado (2) uno para muestra y otro para análisis.

4.2. EQUIPOS Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1

3.2. Formatted: Heading 2, Indent: Left: -0.05", Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … +
 Selladora QUANTY TRAY modelo 200 INDEX Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" +
Indent at: 0.5"
 Incubadora QUANTY TRAY modelo 200 INDEX
 Equipo de rayos Uv para el análisis de E. Coli.

4.3. REACTIVOS Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1

3.3. Formatted: Heading 2, Indent: Left: -0.05", Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … +
 Muestra de riego (100 mL) Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" +
Indent at: 0.5"
 Pastilla colilert (comida de bacterias)

4.4. PROCEDIMIENTO Formatted: Font: Bold, Font color: Text 1

3.4. Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
 Se esteriliza el frasco donde se introducirá la muestra para evitar la proliferación de 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
+ Indent at: 0.5"
bacterias.
 Se realiza la toma de muestra respectiva en nuestro caso la muestra que se tomo es de
riego.
 Se esteriliza los siguientes materiales: probeta, vaso de precipitado para el uso
correspondiente.
 Se toma 100 ml de la muestra en una probeta o fiola.
 Se abre el frasco que viene con el kit, para ello se le quita el seguro que es la línea roja y
se vacía en ello.
 En seguida se debe verificar que la muestra este un poco por encima de la línea que está
en el frasco para asegurar que llene todos los cubitos decubitos de la tableta.
 Se agrega la pastilla al contenido del frasco (muestra) para ello se sigue las siguientes
indicaciones se chanca con los dedos a la envoltura de la pastilla para evitar desperdicio,
se fragmenta en dos partes y se vacía el contenido.
 Se agita el frasco durante minutosdurante minutos para que se disuelva por completo.
 En seguida se toma la tableta y se abre para vaciar la muestra, se vacía la muestra por
completo y se golpea con los dedos a los cubitos para evitar burbujas ya que estas contienen
oxígeno y para este tipo de análisis debemos evitar cualquier presencia de oxígeno en la
tableta y evitar que vivan las bacterias.
 Con mucho cuidado se lleva esta tableta a la selladora, se coloca en el molde y se introduce
suavemente con los dedos hasta que la maquina lo jale, se espera a la salida para obtener
la tableta.
En seguida se lleva a la incubadora modelo QUANTY-TRAY 2Y INDEX a una temperatura
constante de 35°C por 24 horas.

 IV.V. RESULTADOS Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

Figura 1: Coloración de Figura 12: Coloración de muestra

muestra patrón analizada después de la incubación (24h)

Figura 3: Coloración por

Exposición a rayos UV

5.1. CONTEO DEL NUMERO DE POCILLOS POSITIVOS: Formatted: Font color: Text 1, Check spelling and
grammar
Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
COLIFORMES TOTALES(Coloracion amarilla) Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
 Numero de pocillos grandes :49 + Indent at: 0.5"

 Numero de pocillos pequeños :48

ESCHERICHIA COLI(coloracion amarilla+coloracion fluorescente)

 Numero de pocillos grandes :49

 Numero de pocillos pequeños :48
5.2. DETERMINACION DEL NMP PARA CADA MICROORGANISMO:
Para la determinacion del NMP de los microorganismos analizados se emplea la tabla IDEXX
Quanti-Tray®/2000. La interseccion del # de pocillos grandes y el # de pocillos pequeños nos
dara este resultado.
Formatted: Font color: Text 1, Check spelling and
grammar
Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.05",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25"
+ Indent at: 0.5"

COLIFORMES TOTALES

NMP/100Ml(49x48) = >2419.6

ESCHERICHIA COLI

NMP/100Ml(49x48) = >2419.6
 V.VI. DISCUSION DE RESULTADOS Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
En la comparacion de la coloracion amarillo con la muestra patron ,se observa que cada uno de Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
los pocillos de la tableta grandes y pequeños han adquirido la coloracion amarilla(fig.2) igual e
incluso mas intensa.Ademas en la fig.3 para escherichia coli,de la misma forma todos los pocillos
toman coloracion fluorescente .El resultado obtenido por lectura de la tabla fue ,>2419.6, un agua
que supera el 1000/100ml máximo de coliformes para riego dado por la OMS. Por lo tanto el
agua usada para riego en esta zona no esno es apta para este uso; pues representa un riesgo
alto, para potenciales consumidores de los productos obtenidos, trabajadores y familiares.
 VI.VII. CONCLUSIONES Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
 Se llegó a conocer el análisis microbiológico de agua de riego por el método colifert. Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"

 Se llegó a conocer y entender el funcionamiento de los equipos como también el

procedimiento para hacer el análisis microbiológico del agua de riego.

 Se verifico y contabilizo los resultados de coliformes totales y escherichia coli del agua de
riego.
 VII.VIII. BIBLIOGRAFIA Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
 Alves NC, Odorizzi AC, Goulart FC.Análisis microbiológica de aguas de minerales y de
Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"
residuales.
 Agua potable de abastecimiento, Marília, SP. Revista Salud Pública, v. 36, n. 6, p. 749-
51.
 Feng P, and P. Hartman 1982. Fluorogenic assay for immediate confirmation of E. coli.
Appl. Environ. Microbiol. Vol 43: 1320-1329.
 Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Bienes y servicios. Determinación de
bacterias coliformes. Técnica del número más probable.
 Norma Oficial Mexicana NOM-201-SSA1-2002, Productos y servicios. Agua y hielo para
consumo humano, envasado y a granel. Especificaciones sanitarias.
VIII.IX. ANEXOS Formatted: Font: 16 pt, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Outline numbered +
Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 +
Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.75"