Adriana Enid Ochoa Gómez

TIROSINASA I

RESULTADOS

Tiempo 1 2 3 4
Absorbancia
0 0,136 0,115 0,173 0,134
0,5 0,138 0,116 0,176 0,18
1 0,14 0,117 0,176 0,183
1,5 0,141 0,128 0,184 0,18
2 0,144 0,125 0,19 0,196
2,5 0,147 0,129 0,198 0,208
3 0,149 0,141 0,21 0,233
3,5 0,152 0,148 0,222 0,258
4 0,154 0,154 0,248 0,28
4,5 0,16 0,162 0,266 0,299
5 0,162 0,168 0,284 0,318

Absorbancia vs tiempo (tubo 1)

0.18
0.16
0.14 y = 0.0052x + 0.1345
0.12 R² = 0.9792

0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5 6

Tubo 1:m1 x 10/1.0=A. E1 Tubo 1:0,0052 x 10/1.0=0,052

 Absorbancia vs tiempo (tubo 2)
0.18
0.16
0.14
y = 0.0112x + 0.1086
0.12
R² = 0.9517
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5 6

Tubo 2: m2 x 10/1.5=A. E2 Tubo 2: 0,0112 x 10/1.5=0,0747

Absorbancia vs tiempo (tubo 3)

0.3

0.25

0.2 y = 0.0223x + 0.1558

R² = 0.9079

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6

Tubo 3: m3 x 10/2.0=A. E3 Tubo 3: 0,0223 x 10/2.0= 0,1115

 Tubo 4: m4 x 10/2.5=A. E4 Tubo 4: 0,0342x 10/2.5=0,1368

Absorbancia vs tiempo (tubo 4)

0.35

0.3

0.25
y = 0.0342x + 0.139
0.2 R² = 0.9584

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6

ACTIVIDAD ENZIMATICA CON VARIACIÓN DE LA TEMPERATURA

Tiempo Absorbancia Absorbancia

(m) 4˚C 37˚C
0.5 0,095 0,133
1.0 0,102 0,169
1.5 0,094 0,174
2.0 0,095 0,175
2.5 0,097 0,186
3.0 0,098 0,142
3.5 0,102 0,146
4.0 0,105 0,158
4.5 0,115 0,168
5.0 0,126 0,176
 0.2 Actividad enzimática vs temperatura
0.18

0.16
y = 0.001x + 0.1571
0.14 Tubo 1: temperatura 4°C
R² = 0.0323
0.12 Tubo 2: temperatura 37°C

0.1 y = 0.0027x + 0.088

0.08 R² = 0.6381

0.06

0.04

0.02

0
0 2 4 6 8 10 12

Tubo 1: m1 x 10/2.0=A. E1 Tubo 1: 0,0027 x 10/2.0= 0,0135

Tubo 2: m2 x 10/2.0=A. E2 Tubo 2: 0,001 x 10/2.0= 0,005

ANÁLISIS DE RESULTADOS

En el análisis de gráficas se puede evidenciar que en efecto la tendencia en todos los casos fue una
linea recta y no hubieron puntos muy dispersos, por lo que el coeficiente de correlacion fue muy
cercano a 1, ademas se pudo determinar indirectamente de las pendientes de los gráficos los valores
de las velocidades iniciales de reacción en cada caso.

Tomando en cuenta que la absorbancia a traves del tiempo sirve para cuantificar la velocidad de la
reaccion en terminos de la cantidad de la L-metildopa que va reaccionando o de la cantidad de L-
metildopacromo que se va formando y basados en los resultados obtenidos, la mayor velocidad se
dio en el tubo 4 debido a que este contiene mas volumen del extracto enzimatico (2.5 mL) que los
demas tubos y la menor velocidad de reaccion se dió en el tubo 1 que era donde menor volumen
de extracto habia. Esto quiere decir que aunque en todos los tubos se encuentra la misma cantidad
de sustrato (1 mL) la reaccion se da más rápido o no de acuerdo a la cantidad de enzima presente
para acelerarla, por lo que se observó un incremento de la actividad enzimatica en cada tubo al
aumentar la concentracion de la enzima presente mientras se mantenia constante la concentración
de sustrato.
Asi entonces e la actividad enzimatica del tubo 1 fue 0,052, la del tubo 2 de 0,0747, la del tubo 3 de
0,1115 y la del tubo 4 de 0,1368 con 1 ml, 1.5 ml, 2.0 ml y 2.5 ml de extracto enzimatico
respectivamente. La mayor o menor velocidad de reaccion se debe entonces a la cantidad de enzima
presente, y no a la concentracion del sustrato, ya que al adicionar mas cantidad de enzima, se
encontro un aumento lineal en la velocidad de reaccion, lo que nos da una idea de la eficiencia de
la actividad de la enzima, por lo que la actividad enzimática es directamente proporcional al
aumento de absorbancia por minuto a la longitud de onda de 420 nm debido a que la tirosinasa
transforma el dopa incoloro al oxidarlo en dopacromo en ese valor de absorción (Del valle y
Quintero, 2010).

De otro lado, de haberse mantenido constante la cantidad de extracto enzimatico y haber variado
la concentracion del sustrato la relación no hubiese sido lineal sino hiperbolica entre la velocidad y
la concentracion del sustrato. (Bohinski, 1991)

Tomando en cuenta que las velocidades de varias reacciones enzimaticas se pueden usar para
comparar la eficiencia de las enzimas involucradas usando como factor de comparacion el volumen
de los extractos enzimaticos en condiciones similares, tenemos que la mayor eficiencia se dio em el
tubo 4 porque como ya lo hemos dicho es donde mayor cantidad de extracto enzimatico hay.

Respecto a la actividad enzimatica con cambio de la temperatura tenemos de acuerdo a lo

observado en el gráfico obtenido que el coeficiente de relación fue bajo por lo que hay muchos
puntos dispersos de la linea recta, sobre todo en el tubo 2, el cual fue sometido a una temperatura
de 37°C. Esto puede deberse a que hubo un momento en que la enzima se estaba desnaturalizando
por la accion del calor en los cinco minutos en que estuvo expuesta a esta temperatura,por lo que
bajo la eficiencia en su actividad enzimatica, lo que se reflejo en la absorbancia, debido al descenso
considerable que se dio a los 2 minutos de la medición, ya que hubo al principio tambien unos altos
y bajos.

Comparando los dos tubos, tenemos que en efecto el tubo 1 que fue sometido a una temperatura
de 4°C presenta un absorbancia menor que la del tubo 2, esto se debe a que la eficiencia de la
actividad enzimatica es mejor cuando se incrementa la temperatura, lo que indica que se esta
formando mucho mas rapido el dopacromo por accion de la tirosinasa. Sin embargo, el valor de la
actividad enzimatica es mayor en el tubo que fue sometido a una temperatura de 4°C, cuando no
deberia ser asi, ya que si la actividad de la enzima aumenta con la temperatura, esto significa un
aumento de la velocidad de reaccion, pero como ya dijimos, se pudo haber presentado un proceso
de desnaturalizacion de la enzima afectando su actividad en la reaccion. En el grafico de actividad
enzimatica vs temperatura se puede observar que la pendiente es mayor en el tubo 1 y el coeficiente
de correlacion es mucho mas alto que el del tubo 2, por lo que la linea recta toca muchos puntos,
lo que indica que no se evidenciaron altos y bajos grandes como en el caso del tubo 2 donde la linea
producto de la regresion lineal pasa alejada de muchos puntos. Estos resultados demuestran que
la actividad enzimatica es mas consistente en el tubo 1 que en el 2 aunque se este formando mas
rapido el dopacromo en el tubo 2, en el cual al parecer hay momentos en que la enzima se desactiva.

Por ultimo, comparando el valor obtenido de la actividad enzimatica del tubo 3 en la primera parte
con los valores obtenidos en esta segunda parte de la seccion experimental respecto a la
temperatura tenemos que la medida de la actividad enzimatica es mayor en el primer caso que en
el segundo, esto es porque las altas o bajas temperturas son factores que afectan la actividad de la
enzima en la reacción.

Referencias bibliográficas

 Bohinski, R. (1991). Bioquimica. México. Addison Wesley Iberoamericana, S. A.

 Del Valle, S y Quintero, C. (2010). Laboratorio de bioquimica. Universidad de Antioquia
 Manual prcaticas de bioquimica. Univeridad de Antioquia.