INSTITUTO POLITÉCNICO

NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE MÉTODOS DE
ANÁLISIS
GRUPO : 5QM2 SECCIÓN: 3

Práctica
VERIFICACION DEL FUNCIONAMIENTO
DE UN
ESPECTROFOTÓMETRO

17/04/18

OBJETIVOS

 Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotómetro

  Verificar la exactitud de la escala de la longitud de onda , la presencia de radiación dispersa,
el ancho de banda , la exactitud fotométrica , la proporcionalidad de respuesta y el
rendimiento global del instrumento.
RESULTADOS
Tabla 1 .Espectro de transmisión del filtro de didimio .

Longitud de onda (nm) %T

400 44

410 54

420 56

430 49

440 45

450 43
460 42
470 44
480 49
490 59
500 54
510 39
520 28
530 30
540 50
550 68
560 59
570 30
580 7
590 5
 80

70

60

50

40
%T

30

20

10

0
350 400 450 500 550 600 650
longitud de onda (nm)

Gráfica 1. Espectro de trasmisión del filtro de Didimio.

Tabla 2 . Espectro de transmisión de la solución de sulfato de
níquel(NiSO4.6H2O. al 20%)

Longitud de onda (nm) %T

5
380
4
390

400 4

410 3

420 6

430 17

440 30

450 42
460 52
470 66
480 78
490 87
500 91
510 89
 520 86
530 82
540 78
550 74
560 69
570 61
580 51
590 42
100

90

80

70

60

50
%T

40

30

20

10

0
350 400 450 500 550 600 650
Longitud de onda (nm)

Gráfica 2. Espectro de transmisión de la solución de sulfato de níquel al 20%.

TABLA 3.Proporcionalidad entre A y λ para el sulfato de níquel al 20 %.

Longitud Absorbanci %T
de onda a
(nm)
530 0.086 82
540 0.107 78
550 0.130 74
560 0.1611 69
570 0.214 61
 0.25

0.2
f(x) = 0x - 1.57
R² = 0.96
0.15
Absorbancia

0.1

0.05

0
520 530 540 550 560 570 580
longitud de onda (nm)

Gráfica 3.Proporcionalidad para el sulfato de níquel al 20 % .

Intervalo dinámico lineal de concentración

Tabla 4.Intervalo dinamico de concentración .
 Tubo Concentración de A400
NiSO4·6H2O (M)
a a' Serie a Serie b
1 1' 0 - -
2 2' 9.5x10-3 0.0506 0.0506
3 3' 0.0285 0.1191 0.1191
4 4' 0.0665 0.3187 0.3187
5 5' 0.1045 0.4685 0.4585
6 6' 0.1425 0.6197 0.6197
7 7' 0.152 0.6575 0.6575
8 8' 0.171 0.7212 0.7212
9 9' 0.1805 0.9208 0.9208
10 10' 0.19 0.7958 0.7958

0.9

0.8 f(x) = 4.43x + 0.01

R² = 0.97
0.7

0.6
Absorbancia

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2

concentracion sultafo de niquel (M)

 Gráfico 4.Intervalo dinámico lineal de concentración .

Tabla 5.Resumen de resultados de evalucion del funcionamiento del espectrofotómetro.

Parámetro estudiado Valores de referencia Valores experimentales
Exactitud de la escala de longitud de onda

Filtro de Didimio
420,490,550 420,490,550
Máximos (λ,nm )
Mínimo (λ,nm) 400,470,520,600 400,460,520,590

Solucion de NiSO4.6H2O al 20%

Máximos (λ,nm ) 500 500
Mínimo (λ,nm) 380,600 390,590

Proporcionalidad fotométrica

Datos de regresión de 530 a y=0.0032x-1.5779, R= 0.989 y=0.0031x-1.5659, R=0.9793

570 nm
Luz dispersa

% T a 400 nm(Solución de 2.0 % T 3.0% T

NiSO4.6H2O)
%T a 450 nm 1.0 % T 0

%T a 500 nm 1.0 % T 0
Ancho de banda
87.0 % T 86% T
% T A 520 nm
Exactitud fotométrica
Método del filtrado de vidrio neutro

84.0 % T 87%
% T a 530 nm

Método de la solución de NiSO4.6H20 al 20 %

 1.50 1.39
Absorbancia a 400nm
Absorbancia a 500 nm 0.06 0.04
Intervalo dinámico lineal de concentración

Datos de la regresión lineal y= 4.1339x+0.01 , r=0.999 y= 4.4274x+0.0051 R=0.9739

Intervalo de concentración 0.0095-0.19(disolución de 0.0095-0.19(disolución de

NiSO4.6H2O) NiSO4.6H2O)

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Obtuvimos los espectros de trasmisión característicos del filtro de Didimio y de una solución de
sulfato de níquel. En la gráfica 1, perteneciente a el espectro de absorción para el filtro de Didimio,
obtuvimos picos a 420,460,520,590 nm y valles a 400,460,520,590. En cuanto al los resultados
obtenidos con solución de NiSO4.6H2O al 20% obtuvimos máximos a longitud de onda de 500 nm y
mínimos a 390,590 nm , mismo valores que se encuentran dentro del intervalo de tolerancia
comparado con el valor de referencia .Esto demuestra que nuestro espectrofotómetro tiene una
escala exacta y que las determinaciones que se realicen en ese equipo van a ser confiables ya que
con esto nos aseguramos que al ajustarlo a la longitud de onda deseada, el equipo realmente
selecciona esa longitud de onda.

Dentro de los valor de luz dispersa en la solución de NiSO4.6H2O a a 400 nm un valor de 3 % de

T, por lo cual nos indica que se encuentra afectada porqué, no toda la luz que emite la fuente
luminosa llega al detector por lo cual genera lecturas de transmitancia mayores a las esperadas y
esto provoca desviaciones a la ley de Beer.

Del parámetro de ancho de banda se obtuvó un valor de 87 % este valor se encuentra dentro de la
tolerancia de +-3 % T.En la determinación de la exactitud fotométrica por el método de la solución de
NiSO4.6H20 al 20 % los valores que se obtuvieron a absorbancia a 400nm y 500nm fueron 1.39 y
0.04 respectivamente los cuales no entran dentro de los valores de tolerancia, provocado por que el
espectrofotómetro no nos indica exactamente las medidas de las absorbancias o del % de la
transmitancia por lo cual se ven afectadas los valores.

Otro parámetro que se evaluó fue la proporcionalidad fotométrica en el se obtuvó un coeficiente de

correlación de 0.9793 el cual indica que está por debajo del valor de referencia de 0.989, a pesar de
que se obtiene una gráfica línea, la R nos indica lo contrario, pues no hay una proporcionalidad a
pesar de que el valor se acerca mucho al esperado. Por lo que podemos decir que este parámetro
puede haberse afectado por que puede haber una falla en la fuente de radiación del monocromador ,
el detector o bien por que puede estar presente la luz parasita .
 CONCLUSIONES

 El espectrofotómetro no está en óptimas condiciones para tomar las lecturas de

absorbancia y trasmitancia de diferentes muestras.
 Se debe hacer una revisión para calibrar y ajustar el espectrofotómetro para corregir
los errores .

REFERENCIAS
 Skoog. Principios de Análisis Instrumental. Ed. Mac Graw Hill. 2002. Pp.182, 201.
 Torres Cartas Sagrario, Gómez Benito Carmen. “Técnicas instrumentales. Manual de
Laboratorio”. Editorial Universidad Politécnica de Valencia. pp. 60-61