Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Tujuan: Makalah ini menjelaskan beberapa prosedur kromatografi lapis tipis yang memungkinkan
pemisahan dan identifikasi penisilin dan sefalosporin sederhana dan cepat dari campuran kompleks.
Metode: Menggunakan silicagel GF254 sebagai fase diam dan memilih fase gerak yang berbeda, kita
berhasil dalam pemisahan beta-lactamins yang dipelajari. Tujuan kami bukan hanya untuk
mengembangkan metode sederhana, cepat dan efisien untuk pemisahan mereka, tetapi juga
optimalisasi kondisi analitis. Hasil: Tidak ada sistem yang akan memisahkan semua beta-laktam,
namun dapat diidentifikasi saat informasi pelengkap digunakan dari reaksi warna dan / atau dengan
menggunakan sistem kromatografi tambahan. Kesimpulan: Kombinasi yang tepat antara sistem
pelarut dan metode deteksi memungkinkan identifikasi penisilin dan sefalosporin yang diteliti dan
dapat berhasil digunakan dalam analisis awal antibiotik beta-laktam. pengantar
Di antara semua antibiotik, kelompok beta-laktam menempati urutan pertama mengenai jumlah
senyawa di pasaran dan juga dalam hal penggunaannya dalam pengobatan penyakit menular. Beta-
lactams yang paling sering digunakan adalah kelompok penisilin dan sefalosporin
Metode analisis yang paling populer untuk penentuan beta-laktam adalah kromatografi, termasuk
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dan kromatografi lapis tipis (KLT). HPLC menawarkan
sensitivitas dan efisiensi pemisahan yang tinggi, menjadikan dirinya sebagai metode pilihan pertama
untuk analisis beta-lactam; Namun itu mahal dan membutuhkan peralatan canggih. TLC adalah
prosedur kromatografi yang lebih murah dan tidak rumit, yang dapat berhasil digunakan, dalam
penyaringan awal zat farmasi. Dalam analisis modern, KLT biasanya digunakan sebagai metode
pemisahan, yang menetapkan adanya atau tidak adanya antibiotik beta-laktam di atas tingkat
konsentrasi yang ditetapkan.2,3
KLT digunakan dalam edisi ke-7 dari European Pharmacopoeia (Ph.Eur 7) untuk pemisahan antibiotik
beta-laktam tertentu dari kotorannya yang spesifik, namun metode yang dijelaskan hanya mengacu
pada satu antibiotik dan pengotornya yang berkaitan dengan struktur dan kurang cocok untuk
tujuan identifikasi dari campuran kompleks
Sejumlah publikasi mengenai identifikasi dan pemisahan beta-lactam oleh TLC telah muncul dalam
literatur, namun hanya sedikit dari mereka yang membahas pemisahan simultan dari campuran
kompleks turunan struktural. 5-8
Secara struktural, penisilin didasarkan pada kerangka heterosiklik, penam, dibentuk oleh kondensasi
cincin beta-laktam dengan yang thiazolidine. Dalam penelitian ini kami menganalisis empat turunan
penisilin yang paling sering digunakan dengan karakteristik struktural yang berbeda: benzilpenisilin
(PEN) - penisilin alami pertama yang diperkenalkan dalam terapi; ampisilin (AMP) dan amoksisilin
(AMO) - dua aminopenicillin semisintetik; oxacillin (OXA) - izoxazolilpenicillin semisintetik. Penisilin
berbeda satu sama lain dalam substituen R yang menempel pada residu asam 6-aminopenisillanat.
Struktur kimia penisilin yang diteliti disajikan pada Gambar 1.
Kerangka sefalosporin termasuk dalam heterocycle, cefem, dibentuk oleh kondensasi cincin beta-
laktam dengan satu dihydrothiazine. Dalam penelitian ini kami menganalisis enam turunan
sefalosporin yang sering digunakan: cefalexin (CEL), cefadroxil (CFD), sefaclor (CFC) - sefalosporin
oral generasi pertama, sefuroksim (CFR) - sefalosporin parenteral generasi kedua, ceftazidim (CZI),
ceftriaxon (RKPT) - Sefalosporin parenteral generasi ketiga. Pergantian berbagai kelompok R dan R
menghasilkan sefalosporin dengan sifat farmakologis dan farmakokinetik yang berbeda. Struktur
kimia dari sefalosporin yang dipelajari disajikan pada Gambar 2.
Sampel
PEN dan OXA, digunakan sebagai garam natrium, oleh karena itu sampel disiapkan dalam
air dengan konsentrasi 0,2%. AMP dan AMO, yang digunakan sebagai trihidrat,
menunjukkan kelarutan yang buruk pada air; akibatnya sampel 0,2% disiapkan dengan
larutan natrium bikarbonat 2%. Sampel Cephalosporin disiapkan dengan melarutkan zat
dalam metanol dan kemudian diencerkan dengan air (1: 1). Jumlah 0,5 l diaplikasikan pada
kromatopilin menggunakan semprit Hamilton.
metode
Ruang kromatografi jenuh dengan fase gerak selama 30 menit. Pelat tersebut dikembangkan di atas
jarak 15 cm di ruang kromatografi berlapis kertas filter, dikeringkan dalam aliran udara panas, dan
diperiksa di bawah radiasi UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Bintik-bintik itu kemudian
divisualisasikan dengan menempatkan piring di ruang kromatografi yang jenuh dengan uap yodium.
Beberapa reaksi warna in situ spesifik digunakan untuk meningkatkan spesifisitas metode ini. Semua
percobaan dilakukan pada suhu kamar. Foto-foto dari chromatoplates diambil dengan kamera Nikon
D-3100, dilengkapi dengan filter UV.
Prosedur pendeteksian kromatografi
Tiga prosedur deteksi digunakan; pertama dengan uap iodin dan kemudian menggunakan reaksi
warna plat situ dengan yodium dan ninhidrin, setelah hidrolisis alkali.
Beberapa kristal yodium ditempatkan di dasar ruang kromatografi rapat rapat, disimpan dalam
lemari es. Setelah beberapa jam selama yodium ungu menguapkan dan mendistribusikan dirinya
secara homogen ke seluruh bagian dalam ruangan, piring kromatografi diperkenalkan di dalam
ruangan. Setelah 30 menit piring disemprotkan dengan larutan pati 1%.
Kromatogram disemprotkan terlebih dahulu dengan larutan natrium hidroksida 1N, untuk
menghidrolisis cincin beta-laktam, dan setelah 15 menit dengan larutan yang mengandung 0,2 g
kalium yodium, 0,4 g iodium dilarutkan dalam 20 ml etanol dan 5 ml asam klorida 10%.
Kromatopat pertama kali disemprotkan dengan larutan natrium hidroksida 1N, untuk menghidrolisis
cincin beta-laktam, dan setelah 15 menit dengan larutan ninhidrin 0,1% dalam etanol, dan
dipanaskan dalam oven pada suhu 120 ° C selama 10 menit.
Hasil dan Diskusi
Tujuan metode (pemisahan simultan dari campuran multikomponen), dan informasi tentang sampel
(struktur, polaritas, kelarutan, stabilitas) penting sebagai petunjuk awal untuk pemilihan sistem
kromatografi, dengan menggunakan aturan segitiga Stahl. 2,10,11
Fase diam yang paling banyak digunakan untuk analisis beta-laktam adalah silicagel, namun jika kita
berkonsultasi dengan literatur, fase terbalik atau pelat selulosa juga telah digunakan. Permukaan
silicagel beruang gugus Si-OH yang mampu mengikat hidrogen dengan zat polar. Fase mobile untuk
pemisahan kedua penisilin dan sefalosporin bersifat polar, biasanya mengandung sejumlah kuantitas
air.5-7,12
Asam (asam asetat) ditambahkan ke fase gerak untuk menghindari dekomposisi cincin beta-laktam
pada silicagel.
Sekitar dua puluh pelarut diuji dan enam fase gerak dipilih (Tabel 1).
Gambar 3. Kromatogram yang diperoleh pada pemisahan penisilin menggunakan fasa gerak III (etil
asetat - asam asetat 60:20:20), deteksi pada sinar UV pada 254 nm (A) dan 366 nm (B - AMP, 2 -
AMO, 3 - PEN, 4 - OXA)
Gambar 4. Kromatogram yang diperoleh pada pemisahan sefalosporin dengan menggunakan fase
gerak III (etil asetat - asam asetat 60:20:20), deteksi pada sinar UV pada 254 nm (A) dan 366 nm (1 -
CFD, 2 - CEL, 3 - CFC, 4 - CFR, 5 - CZI, 6 - RKPT)
Nilai Rf, warna dan fluoresensi bintik-bintik disebutkan pada Tabel 2 dan 3 masing-masing.
Kesulitan muncul pada pemisahan dua aminopeniskia (AMP, AMO) dan dari tiga generasi pertama
sefalosporin oral (CEL, CFD, CFC); zat dengan karakteristik struktural dan fisiko-kimia yang serupa.
Hal ini sering menguntungkan dalam TLC untuk dapat memperoleh kesan awal pemisahan zat
dengan mengekspos piring ke reaksi universal dengan harga ekonomis yang dicapai dengan cepat
sebelum beralih ke karakterisasi akhir menggunakan reaksi spesifik kelompok tertentu.23,12 Deteksi
oleh yodium biasanya didasarkan pada konsentrasi fisik molekul yodium di zona kromatogram
lipofilik, tanpa terjadinya reaksi kimia apapun. Yodium lebih kuat diperkaya di zona zat daripada di
lapisan silicagel bebas kutub bebas. Hasilnya adalah munculnya zona kromatogram coklat dengan
latar belakang kuning. Zona kromatogram dapat distabilkan dengan menyemprotnya dengan larutan
pati 1%; ketika klatrat biru yang terkenal terbentuk (senyawa inklusi pati-iodin), yang tetap stabil
selama berbulan-bulan. Kehadiran beta-lactam berbeda ditunjukkan oleh munculnya bintik-bintik
pucat dengan latar belakang biru-ungu.