“Año de la consolidación del Mar de Grau”

ESTUDIANTE :

FACULTAD : MEDICINA HUMANA

ESCUELA : CIENCIAS DE LA SALUD

SEMESTRE ACADÉMICO :

CÓDIGO :

DOCENTE :

CURSO : BIOQUIMICA Y NUTRICION

Perú
 PRACTICA Nº 9
PERFIL LIPIDICO: COLESTEROL TOTAL Y
FRACCIONADO

OBJETIVOS:

 Determinar lo valores de Colesterol Total, HDL y LDL con fines

diagnóstico.

 Interpretar los resultados de un perfil lipídico.

 Determinar los rangos y valores más recomendados en el

balance de colesterol por las lipoproteínas.

MARCO TEORICO:

Por medio de un análisis denominado "perfil lipídico", el médico

podrá ver los diferentes tipos de grasas presentes en la sangre. El
perfil lipídico mide lo siguiente: El colesterol total, que es la suma de
los diferentes tipos de colesterol.

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen

recibir el nombre de colesterol "bueno". Las lipoproteínas pueden
considerarse el sistema de transporte de la sangre de su hijo. Las
lipoproteínas de alta densidad transportan colesterol al hígado para
su eliminación. Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) colesterol,
generalmente conocidas como colesterol "malo". Las lipoproteínas
LDL que se acumulan en el torrente sanguíneo pueden tapar los
vasos sanguíneos e incrementar el riesgo de afecciones cardíacas.
Los triglicéridos, que almacenan energía hasta que el organismo la
necesita. Si el cuerpo acumula demasiados triglicéridos, los vasos
sanguíneos se pueden tapar y provocar problemas de salud. Un
perfil lipídico más extenso puede también incluir:

* Colesterol VLDL
* Colesterol no-HDL
A veces, el informe incluye algunos cálculos adicionales como el
cociente entre colesterol total y colesterol HDL, o un índice de
riesgo establecido a partir de los resultados del perfil lipídico, la
edad, el sexo y otros factores de riesgo. El médico le informará
acerca de lo que pueden significar
estos resultados. -El perfil lipídico permite verificar los niveles de
lípidos en la sangre, que pueden indicar el riesgo de una persona
de padecer enfermedades cardíacas o arterosclerosis (el
endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las arterias). Algunos
expertos consideran que el colesterol elevado en niños es un gran
problema de salud pública que en muchos casos pasa
desapercibido. Por lo tanto, es importante estar atento a los niveles
de colesterol de su hijo, en especial si alguno de los padres sufre de
colesterol elevado.
El nivel sérico de colesterol ha sido objeto en los últimos años de
numerosas investigaciones tanto en individuos sanos como
enfermos.
Desde un punto de vista médico la determinación de colesterol en
forma aislada tiene utilidad diagnóstica limitada. Sin embargo, su
concentración varía de manera más o menos predecible en un gran
número de condiciones clínicas. Se ha visto que el colesterol es uno
de los factores contribuyentes a la formación de ateromas dado que
las complicaciones arterioescleróticas prevalecen en individuos
hipercolesterolemicos.

Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar además,

que el riesgo de contraer enfermedad cardíaca coronaria (ECC)
para los individuos (varones de más de 40 años) con colesterolemia
menor ò igual a 200 mg% es 3 veces menor que entre individuos
con más de 230 mg% y 6 veces menor que entre individuos con
más de 260mg%.
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer
además la distribución de las lipoproteínas encargadas del
transporte: HDL (lipoproteínas de alta densidad), considerada como
el “factor protector” y LDL (lipoproteínas de baja densidad),
consideradas como el verdadero “factor de riesgo”. Las funciones
biológicas inherentes a los distintos grupos de lipoproteínas, las
variaciones en su composición y los resultados de los diversos
estudios epidemiológicos, indican que los valores aislados de
colesterol HDL y colesterol LDL no pueden tomarse como índices
predicativos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil
Lipídico con los valores de colesterol total, colesterol LDL y
colesterol HDL.

FUNDAMENTO:
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o β-lipoproteínas) se
separan del suero precipitándolas selectivamente mediante el
agregado de polímeros de alto peso molecular. Luego de
centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas
(HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina
empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa
con colorimetría según Trinder (Fenol/4-AF).

Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el

sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL

Metabolismo del colesterol

Biosíntesis del colesterol
La biosíntesis del colesterol tiene lugar en el retículo
endoplasmático liso de prácticamente todas las células de los
animales vertebrados. Mediante estudios de marcaje isotópico,
Rittenberg y Bloch demostraron que todos los átomos de carbono
del colesterol proceden, en última instancia, del acetato, en forma
de acetil coenzima A. Se requirieron aproximadamente otros 30
años de investigación para describir las líneas generales de la
biosíntesis del colesterol, desconociéndose.

Degradación del colesterol

El ser humano no puede metabolizar la estructura del colesterol hasta CO 2 y

H2O. El núcleo intacto de esterol se elimina del cuerpo convirtiéndose en ácidos
y sales biliares las cuales son secretadas en la bilis hacia el intestino para
desecharse por heces fecales. Parte de colesterol intacto es secretado en la
bilis hacia el intestino el cual es convertido por las bacterias en esteroides
neutros como coprostanol y colestanol

Funciones del colesterol

El colesterol es imprescindible para la vida animal
por sus numerosas funciones:
  Estructural: el colesterol es un componente muy importante
de las membranas plasmáticas de las células animales (en
vegetales esa función es análoga a la del Fitoesterol). Aunque
el colesterol se encuentra en pequeña cantidad en las
membranas celulares, en la membrana citoplasmática lo
hallamos en una proporción molar 1:1 con relación a los
fosfolípidos, regulando sus propiedades físico-químicas, en
particular la fluidez. Sin embargo, el colesterol se encuentra
en muy baja proporción o está prácticamente ausente en las
membranas subcelulares.

 Precursor de la vitamina D: esencial en el

metabolismo del calcio.
 Precursor de las hormonas sexuales:
progesterona, estrógenos y testosterona.
 Precursor de las hormonas corticoesteroidales:
cortisol y aldosterona.

 Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorción de algunos

nutrientes lipídicos y vía principal para la excreción de colesterol
corporal.

 Precursor de las balsas de lípidos.

MATERIALES USADOS EN LA PRÁCTICA:

 Muestra de sangre

 Tubos de ensayo

 Reactivos
  Micropipetas

 Centrífuga

 Espectrofotómetro

 Reloj

 Pipetas

 Pera de goma

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Experimento A: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN

SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa

(CHOD), previa hidrólisis enzimática de los esteres mediante una
lipasa de origen fungal. El agua oxigenada generada en la
oxidación, produce la copulación oxidativa del fenol con la
4aminofenazona (4-AF) mediante una reacción catalizada por la
peroxidasa.
El producto es una quinonaimina roja con absorbancia máxima a
505 nm.
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
URIBE LOAYZA NICANOR

REACTIVOS:

Standard: solución de colesterol 200 mg%

Enzimas: suspensión conteniendo lipasa fungal (300 U/ml),
colesterol oxidasa (3 U/ml) y peroxidasa (20 U/l).
Reactivo 4-AF: solución de 4-aminofenazona (25 mmol/l).
Reactivo Fenol : solución de fenol (55 mmol/l).
Reactivo de trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo colocar en
una probeta 50 partes de agua destilada, 5 partes de reactivo 4-AF,
5 partes de reactivo fenol y llevar a 100 partes con agua destilada.
Agregar 2 partes de enzimas previamente homogenizadas. Mezclar
por inversión, sin agitar.

PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.

CALCULO DE RESULTADOS:

Calcular la concentración de colesterol total en

suero, aplicando el método del factor de
calibración.
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URIBE LOAYZA NICANOR

Recordar que la concentración del standard de colesterol es de

200 mg%
VALORES DE REFERENCIA:
Los valores de colesterol en sangre fluctúan según edad, sexo y
hábitos de dieta y de ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer
referencia a valores “normales”, pues la norma promedio de una
población no necesariamente refleja ausencia de riesgo patológico
en el caso de colesterol.

Menos de 200 mg% valor deseable

200 a 239 mg% valor frontera
Mayor de 240 mg% valor alto

RESULTADO:
Abs. Estándar (S) = 0,533
Abs. Muestra (D) = 0,477

F = 200 F = 200 = 361.663

S 0.553
D*F =?

D*F = 0.477*0.477 = 172.51

Experimento B: DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL HDL EN SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando

selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL
y VLDL) mediante el agregado de Sulfato de Dextrán de PM
500,000 en presencia de iones Mg++.
En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y
se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas,
empleando el sistema más conveniente.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solución de Sulfato de
Dextrán y de Cl2 Mg.H2O
PROCEDIMIENTO:

En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50 ul) de

Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos. Dejar 30-
40 minutos en refrigeración (4-10°C). No colocar en el congelador.

Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos Usar

el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.

CALCULOS:

De acuerdo al método del factor de calibración, considerando

que la concentración del standard es de 45.7 mg%.

VALORES NORMALES:

40 – 65 mg%
LDL = Colesterol total = (D*F), D = 2.414 y S = 0,748

F = 0,624 0.624 = 0.834

S 0.748
LDL = 2.414 * 0.834 = 1.478

Experimento C: DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL LDL EN SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se separan del suero

precipitándolas selectivamente mediante el agregado de polímeros
de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante
quedan las demás lipoproteínas (HDL y VLDL), el colesterol ligado a
las mismas se determina empleando el sistema más conveniente.

Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el

sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL.
REACTIVOS:

REACTIVO PRECIPITANTE.- Solución de sulfato de polivinilo

disuelto en
polietilenglicol (PM 600).

PROCEDIMIENTO:

En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y añadir 0.1

ml (100 ul) de Reactivo Precipitante. Homogenizar agitando (sin
invertir) durante 20 segundos. Dejar 15 minutos en un baño de agua
a 20-25°C. Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos. Usar el
sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en baño de agua a 37ºC.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.

CALCULOS:

LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de

calibración) La concentración del standard es de 62.4 mg%.

VALORES NORMALES:

Riesgo bajo o nulo: Menor de 140 mg%

Riesgo moderado: 140 a 190 mg%
Riesgo elevado : Mayor de 190 mg%

Abs. Estándar (S) = 0.780

Abs. Muestra (D) = 0.576

Factor de calibración (F) = 0.624

S
F = 0.624 = 0.8
0.780

D*F = 0.780 * 0.8 = 0.624 mg% / L

CUESTIONARIO:

1.- Qué es RIESGO CORONARIO y como se calcula?

Es un grupo de exámenes de sangre utilizados para medir los

niveles de colesterol y triglicéridos. El perfil puede ayudar a
determinar su riesgo de cardiopatía. Algunos tipos
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de colesterol se consideran "buenos" y algunos son considerados

"malos". Se necesitan exámenes de sangre diferentes para medir
cada tipo de colesterol.
Se calcula dividiendo el colesterol total y el colesterol HDL.

2.- Explique qué diferencias hay entre la arterioesclerosis y la

ateroesclerosis?
La arterioesclerosis, es el endurecimiento, la pérdida de elasticidad
de las arterias y la ateroesclerosis es el acúmulo de ateromas en las
paredes de las arterias. La formación de la placa de ateroma se da
por gran cantidad de grasa circundando en el torrente sanguíneo y
va achicando cada vez más la luz arterial.

La arteriosclerosis es una enfermedad que se caracteriza por

modificaciones estructurales que consisten en engrosamiento de la
capa íntima, duplicación de la lámina elástica interna y cambio de
colágeno en lugar de células musculares lisas y fibras elásticas en
la túnica media.

3.- Describa como se produce la biosíntesis de colesterol

dentro del organismo.
BIOSÍNTESIS DEL COLESTEROL

Un poco menos de la mitad del colesterol en el cuerpo se deriva de

la biosíntesis de novo. Cada día aproximadamente el 10% de la
biosíntesis del colesterol se hace en el hígado, y aproximadamente
el 15 % en el intestino. La síntesis del colesterol se hace en el
citoplasma y los microsomas a partir del grupo acetato de dos
carbonos la Acetil-CoA.

La Acetil-CoA que se utiliza para la biosíntesis del colesterol se

deriva de una reacción de oxidación en las mitocondrias y es
transportada al citoplasma la oxidación del etanol, que
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se inicia por el alcohol deshidrogenasa citoplasmática (ADH3).

Todas las reacciones de la reducción de la biosíntesis del colesterol
utilizan NADPH como cofactor. Los intermediarios isoprenoides de
la biosíntesis del colesterol pueden ser dirigidos a otras reacciones
de síntesis, tal como para el dolicol o la cadena lateral heme-α.
Además éstos intermediarios se utilizan en la modificación con
lípidos de algunas proteínas.

El proceso tiene 5 pasos importantes:

 Las Acetil-CoAs se convierten en 3 hidroxi-3-metilglutaril-CoA

(HMG-CoA)
 Las HMG-CoA se convierten en mevalonato.

 El mevalonato se convierte en l molécula isopreno, el

isopentenil pirofosfato (IPP), con la pérdida concomitante de
CO2.
 El IPP se convierte en escualeeno.

 El escualeno se convierte en colesterol.

4.- Explique que es el colesterol VLDL y como

se calcula.
VLDL es la sigla en inglés que corresponde a lipoproteína de muy
baja densidad (LMBD en español). No hay ninguna manera sencilla
para medir directamente el VLDL. Por lo general se infiere de los
demás números de colesterol sérico. Aunque los resultados de
laboratorio no suelen dar un número de VLDL, puedes fácilmente
calcularlo tomando la cantidad total de colesterol y restar tanto el
LDL y HDL. Este cálculo es una buena estimación, pero no es
exacto. Esto se debe a las VLDL puede transformarse en algunos
otros tipos menos conocidos de colesterol. Estos incluyen el IDL
(lipoproteínas de densidad intermedia), los residuos de VLDL
nacientes y VLDL, que a veces se incluyen en el número de LDL. La
primera fórmula básica para crear una estimación VLDL es como
sigue: El colesterol total - HDL - LDL = VLDL.

5.- Que rol cumplen los triglicéridos y como se realiza su

metabolismo.
Constituyen la principal reserva energética del organismo animal
(como grasas) y en los vegetales (aceites). El exceso de lípidos se
almacena en grandes depósitos en los animales, en tejidos
adiposos.
Son buenos aislantes térmicos que se almacenan en los tejidos
adiposos subcutáneos de los animales de climas fríos como, por
ejemplo, las ballenas, el oso polar, etc.
Son productores de calor metabólico, durante su degradación. Un
gramo de grasa produce 9,4 kilocalorías. En las reacciones
metabólicas de oxidación, los prótidos y glúcidos producen 4.1 Kcal.

Dan protección mecánica, como los constituyentes de los tejidos

adiposos que están situados en la planta del pie, en la palma de la
mano y rodeando el riñón (acolchándolo y evitando su
desprendimiento).
CONCLUSIONES:

 Se logró determinar los calores de Colesterol Total, LDL y HDL

con fines diagnóstico.
 Se identificó los valores del Colesterol Total.

 Se identificó los valores de HDL Colesterol.

Se identificó los valores de LDL Colesterol

BIBLIOGRAFIA:

 Mundo Bioanálisis (2010). LDL Colesterol Reactivo

Precipitante. Recuperado de:

http://www.mundobioanalisis.com/fabricante/wiener/el
ectrolitos/descarga/1220104.pdf

 http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/blood
_test_lipid_panel_esp.html
 http://www.uco.es/dptos/bioquimica-
biolmol/pdfs/25%20PERFIL%20LIP%C3%8DDICO.pdf