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Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222 DOI

10.1007 / s00401-017-1670-5

REVISIÓN

enfermedad priónica: modelos experimentales y la realidad

Sebastián Brandner 1 · Zane Jaunmuktane 1

Recibido: 30 Noviembre 2016 / Revisado: 4 Enero 2017 / Aceptado: 5 Enero 2017 / Publicado en línea: 13 Enero 2017 © El Autor (s) de 2017. En este
artículo se publica con acceso abierto al Springerlink.com

Abstracto La comprensión de la patogénesis y los mecanismos de las enfermedades visión general de la utilización de modelos de enfermedad priónica, cómo han
requiere un enfoque multidisciplinario, que implica la observación clínica, la evolucionado junto con las cuestiones científicas, y cómo los avances en las
correlación con los procesos patológicos, y el modelado de mecanismos de la tecnologías han empujado los límites de nuestra comprensión de la biología de
enfermedad. Es un desafío inherente, y podría decirse imposible generar sistemas priones.
modelo que pueden recapitular fielmente todos los aspectos de la enfermedad
humana. Es, por lo tanto, importante ser consciente de los potenciales y también las
Glosario
limitaciones de los sistemas modelo específico. sistemas de modelos se diseñan
generalmente para recapitular los aspectos solamente específicos de la enfermedad,
proteína priónica celular (PrP DO): Nativo, codificada por el hospedador,
tales como un fenotipo patológico, un mecanismo patológico, o para probar una
detergente glicoproteína soluble, sensible a la proteasa atado a la membrana
hipótesis. A continuación, se evalúa y se discuten los sistemas modelo que se
celular por un anclaje de glicosilfosfatidilinositol (GPI). PrP do está codificada
generaron para entender los aspectos clínicos, patológicos, genéticos, bioquímicos y
por el PRNP génica en seres humanos y el prnp gen en ratones. Tiene
epidemiológicos de las enfermedades priónicas. Mientras que la investigación clínica y
predominantemente α- estructura helicoidal, y se expresa en altos niveles en el
estudios sobre los tejidos humanos son un componente esencial de la investigación
cerebro.
de priones, gran parte de la comprensión de los mecanismos que gobiernan la
transmisión, la replicación, y la toxicidad proviene de in vitro e in vivo. Al igual que con
proteína priónica relacionada con la enfermedad (PrP Carolina del Sur): Mal plegadas,
otras enfermedades neurodegenerativas causadas por el mal plegamiento de
postraduccionalmente modificado isoforma (anormal) de PrP DO, con una sustancial β-
proteínas, la patogénesis de la enfermedad priónica es complejo, lleno de acertijos y
contenido de hoja. Es insoluble en agentes no desnaturalizantes y muestra
contradicciones. Daremos aquí un histórico
resistencia a la proteasa parcial.

Los priones: término operacional a denotan el agente transmisible de la


enfermedad priónica. Según la hipótesis de sólo proteína, un constituyente
esencial de los priones es PrP Carolina del Sur.
cepas de priones: autopropagante conformaciones de proteína prión o
material complementario electrónico La versión en línea de este artículo (doi: 10.1007 /
estados de montaje. Se caracterizan por perfiles neuropatológicos y
s00401-017-1670-5 ) Contiene material suplementario, que está disponible para los
usuarios autorizados.
bioquímicas distintas que pueden mantenerse incluso después de paso a
través de una especie de mamífero intermedio con una secuencia de
* Sebastián Brandner aminoácidos de PrP diferente.
s.brandner@ucl.ac.uk Zane

Jaunmuktane Especies barrera barrera / transmisión: barrera que limita la infección cruzada
z.jaunmuktane@ucl.ac.uk
entre especies, lo que resulta en una reducción de la eficiencia de transmisión con

1 Departamento de Enfermedades Neurodegenerativas, UCL Instituto tasas de ataque más bajas y periodos de incubación prolongados.

de Neurología y División de Neuropatología, El Hospital Nacional de


Neurología y Neurocirugía, University College London Hospitals NHS enfermedad priónica: trastorno neurodegenerativo fatal, también conocido
Foundation Trust, Queen Square, Londres WC1N 3BG, Reino Unido
como la encefalopatía espongiforme transmisible,

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que afectan a seres humanos y animales, que se caracteriza por la acumulación de Gerstmann-Sträussler- Scheinker enfermedad (GSS):
PrP Carolina del Sur en el cerebro. enfermedades priónicas humanas se desarrollan de enfermedad priónica hereditario caracterizado clínicamente por ataxia de
forma esporádica se pueden heredar, debido a mutaciones germinales en el PRNP gen inicio adulto, las anomalías posturales, y el deterioro cognitivo. Se nombra
y puede ser adquirida a través de la infección con priones humanos o animales a después de tres clínicos, que informaron primero el trastorno en 1936.
través de varias rutas. Una sustitución-prolina-a leucina en el codón 102 (P102L) de PrP humana
es la mutación más común asociado con el fenotipo GSS y fue reportada
Creutzfeldt-Jakob (CJD): enfermedad priónica humana se presenta primero en 1989.
habitualmente como un trastorno neurológico rápidamente progresiva con las
características distintivas de la demencia, ataxia, y mioclonía. Fatal insomnio familiar (FFI): enfermedad priónica hereditario
caracterizado clínicamente por la ruptura de los patrones de sueño
ECJ esporádica (sCJD): El tipo más común de las enfermedades fisiológico y se asocia con una degeneración talámica. Es causada por
priónicas humanas de etiología desconocida, que se producen en todo el una PRNP mutación D178N en el alelo que alberga metionina en el
mundo con una incidencia anual de 1-2 casos por millón. La heterogeneidad codón polimórfico 129. FFI fue descrito por primera vez en 1986 y se
fenotípica y neuropatológico observado en sCJD se cree que está transmitió con éxito a ratones en 1995.
relacionado con diferentes cepas de priones y los factores genéticos, en
particular, el polimorfismo en el codón 129 de la PRNP gene. La encefalopatía espongiforme bovina (EEB): enfermedad de priones en el

ganado. EEB era epidémica en el Reino Unido con una incidencia máxima en

Sporadic insomnio fatal (SFI): Síndrome clínico y neuropatología 1992. Más de 180.000 bovinos fueron infectados. La transmisión de los priones de

similar a FFI encuentra en pacientes con EEB a través de la exposición alimentaria causada vCJD en humanos.

PRNP 129mm genotipo, pero con ausencia de un D178N o cualquier otra


mutación en el PRNP gene. Descrita por primera vez en 1999. Tembladera: la enfermedad de priones en el ganado ovino, conocido desde hace

más de dos siglos. Scrapie fue el primer priones y cepas de transmisión de

Variablemente proteinasa-Sensible Prionopathy (VPSPr): enfermedad enfermedades de priones y la tembladera derivados de los mismos tienen desde sido

priónica esporádica de etiología desconocida informó por primera vez en 2008 ampliamente utilizado en estudios experimentales.

con propiedades bioquímicas distintivas de PrP Carolina del Sur. En comparación


con sCJD, PrP Carolina del Sur en VPSPr es menos resistente a la digestión de la
proteasa. Neuropatología de VPSPr incluye microplacas en el tálamo y el Introducción
cerebelo.

Las enfermedades priónicas son enfermedades transmisibles raras, causadas por una
ECJ iatrogénica (iCJD): enfermedad priónica adquirida causada por la forma modificada de la traducción posterior mal plegadas de la forma nativa, codificada
transmisión de priones a través de procedimientos médicos y tratamientos con por el hospedador de la proteína prión, designado PrP C [ 2 ,
hormona de cadáver humano contaminados con priones de crecimiento 12 ]. Se propone que la conversión de PrP do en una isoforma anormal, comúnmente
derivado de, duramadre o córnea, o instrumentos neuroquirúrgicos. denominado PrP Carolina del Sur, está causalmente relacionada con neurotoxicidad, que se
cree que es un resultado de una combinación de productos intermedios tóxicos [ 157 ],
Kuru: la enfermedad de priones adquiridas a través de la exposición alimentaria Sobrecarga de vías de aclaramiento de proteínas [ 106 ], Y la formación de agregados
a los priones a través de canibalismo ritual practicado principalmente por la gente de proteínas [ 39 ].
del grupo lingüístico Fore, una población de las montañas del este de Papúa Nueva

Guinea. Clínicamente, se caracteriza por ataxia cerebelosa progresiva y menos El hallazgo de que el agente de la tembladera es infecciosa, transmisible, y
prominente, demencia. Kuru alcanzó su punto máximo en la década de 1950 antes resistente a proteinasas, el calor y los métodos de descontaminación que
de que el canibalismo cesó. modifican ácidos nucleicos y normalmente matar cualquier microorganismo
convencionales activar Stanley Prusiner a formular la hipótesis de sólo proteína
Variante de la ECJ (vECJ): Adquirido enfermedad priónica debido a la [ 146 ], Previamente propuesto por Griffith [ 61 ] Y para introducir el término “prion”,
exposición alimentaria a los priones de EEB reconoce por primera vez en 1996. una pequeña partícula infecciosa proteinácea desprovisto de ácido nucleico.
Se caracteriza por la participación del tejido linforreticular y por un cuadro Posteriormente, el PRNP gen y su producto, PrP DO, fueron identificados [ 12 , 36 , 131
neuropatológico distinta a menudo se presenta en personas jóvenes, por lo ]. Ahora es ampliamente aceptado que la PrP Carolina del Sur, las enfermedades
general con un fenotipo clínico característico. asociadas a la isoforma, agregados y depósitos en el cerebro, donde causa la
neurodegeneración. Una propiedad enigmático de priones es la existencia de
Las enfermedades hereditarias causadas por priones (IPD): Son causadas cepas que están asociados con los patrones de enfermedad neuropatológico
por mutaciones de la línea germinal en el PRNP gen y se heredan de forma distintos y propiedades bioquímicas y se mantiene a través de pasajes en
autosómica dominante con una alta penetrancia. Ellos presentan síndromes diferentes especies,
clínicos como distintos (GSS, FFI, y ECJ) en función de la mutación.

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aunque a menudo a una eficiencia reducida, que ha sido denominado especie encefalopatía (Fig. 1 ). Incluso décadas después, a pesar de la creciente
(o transmisión) de barrera [ 79 ]. Las mutaciones en el marco de lectura abierto importancia de los modelos de ratones modificados genéticamente, que
de la PRNP gen causan una conversión espontánea de PrP do en la isoforma proporcionó una mayor versatilidad y mejor lectura, primates sigue teniendo un
anormal y, a menudo como resultado síndromes neurodegenerativos, pero no papel en los estudios de transmisión: transmisión de extractos de cerebro de
siempre son transmisibles. ganado con la encefalopatía espongiforme bovina (EEB) en macacos estableció la
primera enlace patogenético entre la EEB y la variante de CJD (vCJD) [ 101 ],
Esta revisión dará una visión general del desarrollo histórico de los modelos de Mediante la producción de un fenotipo patológico que era casi idéntica a la vECJ.
enfermedad priónica, que se ha generado para hacer frente a los múltiples aspectos de la En estudios más recientes, modelos de primates se utilizan en estudios
enfermedad priónica. Vamos a poner los modelos en el contexto de la tecnología correlativos mirando propiedades de transmisión de diferentes cepas de priones [ 135
disponible y las cuestiones científicas en el momento. El uso de sistemas modelo para una ], Para establecer el potencial zoonótica de las encefalopatías espongiformes
enfermedad humana generalmente tiene como objetivo abordar cuestiones biológicas transmisibles (EET) distintas de la EEB, tales como la tembladera natural de [ 46 ],
específicas, en lugar de ser integral o ser una réplica fiel de la enfermedad humana. Para evaluar la seguridad de transfusión a través de la aplicación de filtros de
Vamos a describir aquí por qué aspectos de estos modelos son útiles y donde fallan en eliminación de priones diseñados específicamente [ 104 ], O para estimar el riesgo
dar una respuesta. Muchos modelos se han generado para hacer frente a una hipótesis de infección oral con el agente de la EEB [ 100 ]. macaco macaco ( Macaca
específica en lugar de replicar una enfermedad existente, y algunos plantear más fascicularis) ha seguido siendo una opción relativamente popular para la
preguntas que respuestas. Mientras que algunos aspectos pueden ser abordadas por investigación de priones en los primates, debido a su longevidad, filogenético
cultivo celular o en sistemas libres de células in vitro, modelos animales siguen siendo un proximidad a los seres humanos, la fisiología digestiva similar y su similitud
pilar en la investigación de enfermedades de priones, ya que sólo éstas permiten estudiar genética con los humanos, incluida la homocigosis para metionina en PRNP codón
los fenotipos clínicos, las características neuropatológicas, las barreras de transmisión, y 129. Las principales limitaciones de los estudios experimentales más en primates
el papel de las mutaciones patógenas. En esta revisión, vamos a presentar primero en los son su mantenimiento costoso, duración de los experimentos, y las
modelos animales más importantes que se han utilizado para el estudio de las preocupaciones éticas.
enfermedades priónicas. los ratones genéticamente modificados han dado respuestas a

muchas preguntas biológicas esenciales en las enfermedades priónicas y serán, por lo

tanto, forman una parte importante de esta revisión. A continuación, vamos a discutir

brevemente ex vivo e in vitro. Algunas de las cuestiones biológicas solamente pueden ser

abordados por una combinación de modelos animales y metodologías y éstos se discuten

en la segunda parte de la revisión. Las ilustraciones de esta revisión a continuación, se Los roedores (hámsters, ratones, y campañoles bancarios): transmisión de

combinan e integran la revisión sistemática de los sistemas de modelos con la cuestión modelado, mecanismos de la enfermedad, y la función de PrP

biológica. ya que sólo éstas permiten estudiar los fenotipos clínicos, las características

neuropatológicas, las barreras de transmisión, y el papel de las mutaciones patógenas. En Hamsters solían ser popular para muchos tipos de estudios de priones desde la
esta revisión, vamos a presentar primero en los modelos animales más importantes que se década de 1970, pero fueron reemplazados gradualmente por modelos de ratones,
han utilizado para el estudio de las enfermedades priónicas. los ratones genéticamente debido a la amplia disponibilidad de ratones genéticamente modificados en la
modificados han dado respuestas a muchas preguntas biológicas esenciales en las década de 1990, inicialmente por la transgénesis, seguido por la combinación con el
enfermedades priónicas y serán, por lo tanto, forman una parte importante de esta gen ronda modelo y, más recientemente, la expresión inducible y la supresión de la prnp
gene.
revisión. A continuación, vamos a discutir brevemente ex vivo e in vitro. Algunas de las cuestiones Un modelo
biológicas de nicho,
solamente la rata
pueden de banco también
ser abordados se discutirá de
por una combinación brevemente aquí y metodologías y
modelos animales

En esta revisión, vamos a dar al lector una visión general y una selección (Fig. 2 ).
de referencias a proporcionar una guía para la lectura adicional. No es nuestro
objetivo y no es posible dar una lista exhaustiva de referencias en su totalidad, De tipo salvaje sirio hámsters dorados se han utilizado en la investigación de
y que, por lo tanto, tuvo que recurrir a citar los modelos o enfoques más priones durante más de cuatro décadas con los primeros experimentos de
utilizados. Cuando sea necesario, hemos dado referencias a los exámenes a transmisión en la década de 1970. Los hámsters han sido de gran valor para la
fondo sobre temas específicos. comprensión de las vías anatómicas y funcionales del prión extendido desde la
periferia y dentro del SNC [ 75 , 80 , 81 ]. A través de estos modelos, se han
identificado propiedades distintas de diferentes cepas de priones y ayudado a
entender las barreras de las especies [ 78 ]. Aunque los hámsters están todavía en
Los modelos animales de enfermedad de priones: desde monos a las ocasiones utilizan en la investigación de priones, por ejemplo, para investigar la
moscas distribución y propagación de priones después de la estimulación periférica [ 35 ], La
amplia disponibilidad y versatilidad de modelos de ratones transgénicos han hecho
La transmisión de enfermedades priónicas humanas en primates modelos de hámster en gran parte obsoleto.

La inoculación de las cepas de kuru y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) en


primates [ 54 , 55 , 57 ] Demostrado la transmisión de enfermedades priónicas topillos rojos, pequeños roedores, se han añadido relativamente poco a
humanas y proporcionado un modelo para la reproducción de fenotipos los modelos de investigación prión [ 29 , 128 ]. Su susceptibilidad a los priones
histológicos de espongiforme procedente de múltiples diferente

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Primer informe de la Los inóculos


Año Recipiente Ruta Referencia
enfermedad tembladera Kuru sCJD IPD iCJD EEB vECJ VPSPr

2016 IPD_j topillos rojos de tipo salvaje IC Pirisinu, 2016


2015 tembladera Macaco (Cynomolgus) IC Comoy, 2015
2015 EEB vECJ Macaco (Cynomolgus) Sangre Lescoutra-Etchegaray, 2015
2014 VPSPr Tg (/ MM / MV HuPrP129VV) ratones IC Notari, 2014; Diack, 2014
2014 tembladera sCJD EEB vECJ Tg (banco vole PrP) ratones IC Wa? S de 2014

2011 tembladera ratones de tipo salvaje Aerosol Haybaeck de 2011

2011 tembladera Tg (Tg20a) ratones Aerosol Haybaeck de 2011

VPSPr (Gambe 2009 IPD_i Tg (HuPrP-mut) ratones * IC Asante, 2009


?, 2008) 2008 kuru Tg (HuPrP129VV) ratones IC Wadsworth, 2008
2006 IPD_h Tg (HuPrP129VV) ratones IC Mead, 2006
2006 vECJ Tg (/ MM / MV HuPrP129VV) ratones IC Bishop, 2006
2006 vECJ Tg (/ MV HuPrP129MM) ratones IC Asano, 2006
2006 vECJ Tg (HuPrP129MV) ratones IC Asante, 2006
2006 sCJD IPD_g topillos rojos de tipo salvaje IC Nonno, 2006
2005 EEB Macaco (Cynomolgus) Oral Lasmezas 2005
2002 sCJD EEB vECJ Tg (HuPrP129MM) ratones IC Asante, 2002
2000 EEB Oveja Sangre Houston, 2000
1997 sCJD iCJD EEB vECJ Tg (HuPrP129VV) ratones IC Hill, 1997
1997 sCJD iCJD EEB vECJ ratones de tipo salvaje IC Hill, 1997
1997 sCJD vECJ ratones de tipo salvaje IC Bruce 1997
1996 EEB Macaco (Cynomolgus) IC Lasmezas, 1996
1996 EEB Oveja IC Foster, 1996
vECJ (Will, 1996)
1996 IPD_f Tg (MHu2M) ratones IC Diciendo, 1996

1995 sCJD EEB Tg (HuPrP129VV) ratones IC Collinge, 1995


1995 IPD_e Tg (MHu2M) ratones IC Diciendo, 1995

1995 IPD_d Tg (HuPrP129VV) ratones IC Collinge, 1995


1995 IPD_c tipo salvaje NZWmice IC Tateishi, 1995
(Lugaresi, 1986) 1994 kuru sCJD IPD_b iCJD primates IC Brown, 1994
1993 tembladera EEB Los titíes IC y IP Baker, 1993
1990 tembladera Ca? Le IC Gibbs, 1990
1989 sCJD ratones de tipo salvaje IC Kitamoto, 1989
BSE (Wells, 1987) 1988 EEB ratones de tipo salvaje IC Fraser, 1988
IPD (FFI) 1980 tembladera Kuru sCJD Monkey (ardilla) Oral Gibbs, 1980
1975 sCJD conejillo de indias IC y IP Manuelidis, 1975
iCJD (y Du ff, 1974) 1973 IPD_a Los chimpancés IC Roos, 1973
1972 tembladera Mono (Cynomolgus) IC Gibbs, 1972
1968 sCJD Los chimpancés IC Gibbs, 1968
1968 kuru Mono (araña) IC Gajdusek, 1968
1966 kuru Los chimpancés IC Gajdusek, 1966; Beck, 1966
1961 tembladera ratones de tipo salvaje IC Chandler, 1961
1961 tembladera Cabra IC Pa? Hijo, 1961
Kuru (Gajdusek, 1957)
1939 tembladera Oveja IC CUILLE y Chelle, 1936-1939

IPD (GSS) (Gerstmann, 1936


Straussler, Scheinker, (1928
1936) 1913)

ECJ (enfermedad de Creutzfeldt de 1920 y


1920
Jakob, 1921)

Tembladera (~ 1750) ~ 1750

Figura 1 Historia de la utilización de modelos animales de enfermedad priónica. los columna siguiente clave: un ECJ en pacientes con antecedentes familiares (mutación específica no se
izquierda indica cuando se informó por primera vez las enfermedades, a partir de la conoce); segundo E200K, D178N 129V, P102L, 5-OPRI, 7-OPRI, y 8-OPRI; do 129M D178N y 24
tembladera en el siglo 18 y la ECJ en 1920. La línea de tiempo ( segunda columna) no es pares de bases mutación de supresión en el mismo PRNP alelo; re 129M D178N; mi E200K; F 129M
estrictamente cronológico, pero está alineada con la generación de modelos animales D178N;
relevantes. Las columnas subsiguientes, titulado “ inóculos ”, Indican las diferentes formas de gramo E200K, V210I; h 6-OPRI; yo P102L, A117V, y E200K; j P102L, A117V, y F198S; tg
priones que se transmitieron. La columna " recipiente ”Indica la especie y, en su caso, sus ( HuPrP-mut) receptores de ratones: * HuPrP-P102L, HuPrP-A117V, y HuPrP-E200K;
genotipos. Al derecho, la ruta de transmisión y el de referencia. Los inóculos en la columna IPD abreviaturas de las vías de transmisión: IC intracerebral, IP intraperitoneal
son complejos y están de acuerdo con la

especies se cree que está codificada en el PrP campañol banco en el codón transmisión de la enfermedad priónica heredado (IPD) (V210I, E220K, A117V;
109 [metionina o isoleucina (Ile)], que ha sido confirmado elegantemente en P102L, y F198S) en ratones de campo de banco no es diferente a la de los
modelos de ratón que expresan PrP campañol banco (BVPrP) [ 188 ]. BVPrP ratones transgénicos humanizado [ 128 ,
con Ile en el codón 109 causa una enfermedad neurodegenerativa 141 ]. Es importante destacar que, en campañoles bancarias, las propiedades de
espontánea en ratones, posiblemente debido a una propensión inherente a deformación neuropatológicos y bioquímicos están bien conservados [ 128 ]. Sin
misfold [ 189 ]. Además, la eficiencia de la transmisión principal de los embargo, aunque estos modelos muestran deposición de abundante proteína
priones sCJD (MM1, MV1, y MM2, pero no MV2 y VV2 (Parchi clasificación priónica anormal en el cerebro [ 187 ], Los fenotipos neuropatológicos y las
[ 136 ], Véase también la Fig. 3 para homologisation con la clasificación de características bioquímicas de la modelada IPD no corresponden bien a las
Londres) y la patologías humanas.

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2016 KO TgBVDel TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgBVSub TgIntCross TgIntCross

2015 TgHu TgHu TgHu TgHu TgHu TgHu TgHu TgHu TgMoSub TgMoSub TgMoSub TgMoSub TgMoSub TgHuSub (4x)

2014 TgHu TgHu TgHu TgHu TgHu TgMHDel TgMHDel

2013 TgHu TgMoSub TgHuSub

2012 TgMHu2M (17x) TgBV (7x)

2011 TgHu TgMoDel TgMHuSub

2010 TgMHu2M TgMoDel TgMoDel TgMoDel Tg-Prom TgIntCross

2009 TgHu TgHu Kihu Kihu Kihu Kihu Kihu TgMoSub TgMoSub TgHuSub TgHuSub TgHuSub TgHuSub

2008 KO TgHu TgMoSub

2007 KiHuIns TgKIHu TgKIHu TgKIHu

2006 TgHu TgHu TgHu Kihu Kihu Kihu Kihu Kihu Kihu TgKIHu TgKIHu

2005 TgHu TgHu TgMoDel TgMoDel Tg-Prom TgMoSub

2004 Tg-Prom TgMoDel

2003 TgMHu2M PrPFc2 PrPFc2 PrPFc2

2002 TgHu TgHu KIChM TgMoO TgMo Conko Conko TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt

2001 KO KO

2000
1999 TgMoSub TgMoSub

1998 TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgMoIns

1997 TgHaSub TgHaSub TgHaSub TgHaSub TgMHuSub TgMHuSub

1996 Kihu TgMoO TgMoO TgMoSub TgMoSub TgMoSub TgMoSub TgMoAlt TgMoAlt TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgMoDel TgHaSub TgHaSub

1995 KO KO TgHu TgMoSub TgMoSub TgMoAlt TgMoAlt TgMoAlt TgMHuSub TgHa TgHa

1994 KO TgHu TgHu TgMHu2M TgMoO TgMoO TgMoSub TgMoSub

1993 TgMHM2 TgMHM2 TgMHM2 TgMHM2

1992 KO

1991
1990 TgMoO TgMoO TgMoSub TgHa

1989 TgHa TgHa TgHa

mil novecientos
En primer
ochentamodelo
y dos de ratón transgénico (no relacionados con la enfermedad priónica)

Tg ratón con subs solo aminoácido? Tu? En en PrP de ratón


H gun
T Tg ratón de hámster que expresan PrP S o M gbuT g TVB Tg ratón que expresa bankvole ratón PrP Tg con subs solo
(para modelar IPD) Tg ratón con inser? Complementos en ratón
aminoácido? Tu? En en PrP bankvole (para modelar IPD) Tg ratón
MHM g2T Tg ratón / hámster quimera I o M gsn
T PrP Tg ratón con el ratón PrP varios otros altera? Ons ratón Tg TgBvSub con dele? En en bankvole PrP (para modelar IPD)

que expresan PrP bajo promotores


DHM gle
T Tg Mouse / Hamster quimera con dele? Ons en ratón PrP Tg con TMg Aotl DVB gle
T

subs solo aminoácido? Tu? En en hámster PrP (para modelar


S un Hbu
T g gT
- P mor
IPD)
Tg ratón con PrP de ratón fusionada a Fc de IgG1 humana γ
KO ratón knockout PrPFc2
cola

ratón Tg con alteraciones de la PrP de ratón entrecruzado con


Conko Tg condi? Onal ratón knockout PRNP TgIntCross
modelos de ratón di ff Erent

u HM gMT 2 Tg / ratón quimera humana PRNP H guT Tg ratón que expresa PrP humana de Knock en ratón humana

que expresa PrP Tg y llamo en ratón que expresa ratón PrP Tg


C i KM h HIKu
humano con sub único amino ácido? Tu? En (para modelar IPD)
TgMHuSub TgKIHu
de Knock en ratón expressin PrP humano con inser? En

TgMo Tg Mose expresando ratón PrP TgHuSub


modelar IPD)

TgMoO Tgquimera
tg ratón que sobreexpresa
humano ratónhumana
/ ratón quimera PrP con PrP altera? En (a KIHuIns

TgMoDel Tg ratón con dele? Complementos de PrP de ratón knock in Mouse /

Figura 2 Descripción detallada de los modelos modificados genéticamente en la investigación de grafico. campos múltiples indican la generación de múltiples líneas de ratón, a veces
priones. 1982 denota el año del primer informe de la generación de un ratón transgénico. El primer publicada en un solo artículo (ver tabla también complementario para más detalles)
uso de ratones transgénicos en la investigación de priones fue en 1989. La leyenda explica la
abreviatura utilizada en el principal

Los modelos de ratón: una historia de hitos en la investigación de priones en 1982 [ 134 ] Transgenes de hámster -expresado y eran un hito importante
hacia el entendimiento de las barreras de transmisión y cepas [ 163 ], Ya que
El uso inicial de modelos de ratón fue, como con otros animales, para los estudios por primera vez permite eludir la barrera de especies y demostraron la
de transmisión y adaptación por propagación en serie de ovejas tembladera a relevancia de la secuencia de amino-ácido de la prnp gen para la
ratones de tipo salvaje (Fig. 1 ; Mesa 1 ), Para entender la biología de la barrera de susceptibilidad a cepas priones. La expresión del equivalente murino de la
especies y de cepas de priones. Mientras que inicialmente hecho en ratones mutación P102L humano fue el primer intento significativo para modelar IPD
endogámicos, esto ha cambiado significativamente con la disponibilidad de modelos asociado con el síndrome de Gerstmann-Sträussler-Scheinker (GSS).
transgénicos (Fig. 2 ; Tabla Suplementaria 1). La primera ratones transgénicos en la Ratones mostraron neurodegeneración, pero sin producirse acumulación
investigación de priones, publicado en 1989-varios años después de la creación de proteína priónica distintivo como se ve en los seres humanos con GSS. GSS
la primera animal transgénico cerebro

13
202 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

un
Humano
129VV2
parchi
1999

más grave

menos severa

segundo MM1 MM2


Parchi MV1 MV2 MM2B
VV1 VV2

Tipo 2 tipo 3
Tipo 1 MM MM Tipo 4
Londres MM MV VV MV MM
VV

diglicosilado 36
kDa
monoglycosylated 30

no glicosilada 21 19

do

Tg152 ratón Tg ratón Mono


129VV 129VV ardilla
Wadsworth Bishop parchi
2008 2010 2010

re más grave

menos severa

De tamaño mediano -
tamaño vacuola Presente Presente
rela vamente grande?

uso di ff en el tálamo, el Punteada y el uso di ff. Synap? C y pequeños


hipotálamo y el tronco En la corteza cerebral depósitos focales de tipo
cerebral de vez en más densa tinción en placa. En la corteza
Anormal proteína priónica IHC cuando. Di ff uso y placas las capas profundas. cerebral más densa tinción
de vez en cuando en el en las capas profundas.
cuerpo calloso.

tálamo

mi parchi VV2
"SEGUNDO"
Londres tipo 3

13
Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222 203

◂ Fig. 3 Comparación de la neuropatología y deformación molecular tipos entre un paciente en [ 168 ], Y una caracterización experimental detallado se da en [ 97 ]). Asimismo,
sCJD con PRNP codón 129 de genotipo y animales modelos vv. un Representación
muchas de estas cepas de ratón endogámicas también se utilizaron, aunque con
esquemática de la gravedad de la patología prion y el patrón inmunohistoquímico
mucho menos éxito, para transmitir y propagar priones humanos de diversas
característico de depósitos de proteína prión anormales sinápticas y de placa como en el
cerebro de paciente con sCJD PRNP genotipo codón 129VV. segundo Correspondiente cepa etiologías, es decir, esporádicos, heredada, y adquirió formas, incluyendo vCJD [ 26
molecular es VV2 (clasificación Parchi) o de tipo 3 (clasificación Londres). do Tres modelos , 64 , 83 , 172 ]. La barrera de especies entre humanos y ratones (también descrito
animales humanizados, dos líneas de ratones con el genotipo 129V, y un mono ardilla. re Representación
como barrera de transmisión) se traduce en bajas tasas de ataque y períodos de
esquemática de la distribución anatómica de patología de la enfermedad de priones, tamaño
incubación marcadamente prolongados. Al mismo tiempo, el reconocimiento de
vacuolar en el neuropilo, y el patrón inmunohistoquímico de depósitos de proteínas priónicas
anormales siguiente desarrollo de la enfermedad después de la inoculación intracerebral con la existencia de una barrera de especie fue un hito importante, ya que finalmente
el homogeneizado de cerebro del paciente sCJD con 129VV genotipo. mi Correspondiente llevó a la generación de ratones transgénicos “humanizados” y también para el
tipos de cepas moleculares en los modelos animales
mapeo transgénica de las regiones de la proteína priónica relevante para las
barreras de transmisión.

extractos podrían ser propagadas dentro de la misma cepa de ratones [ 69 ], PrP ratones knock-out (ratón PrP nulo, prnp 0/0): un gran avance en la

Pero no en de tipo salvaje ratones CD1 endogámicas [ 70 ]. Este modelo investigación de priones para comprender el papel de la PrP do

humano expresado prnp transgenes sobre un fondo de murino prnp secuencias,


y esto provocó una interferencia significativa de la proteína priónica
transgénico con su homólogo endógeno (Tabla 1 ). Un hito en la investigación Desde la publicación de la primera prnp knock-out o prnp
de priones seguido en 1992 con la generación de la prnp nulo ( prnp 0/0) ratón en 1992 [ 27 , 28 , 155 ], Siete adicional
prnp 0/0 modelos han sido reportados como de 2016 (Fig. 2 ; Tabla Suplementaria
knockear ( prnp 0/0) ratón [ 28 ] (Higo. 2 ), Que no sólo demostró el requisito de la 1). Todos estos modelos carecen de regiones significativas de la prnp marco de

proteína priónica normal del huésped para propagar priones [ 155 ], Sino también lectura abierto y que tienen en común que no expresan PrP DO. Los primeros dos

establecer las bases para un número casi ilimitadas de los modelos que expresan modelos publicados se generaron en Zürich (de ahí denominan ZH o Zrch I prnp 0/0)

una multitud de transgenes sin la interferencia de la proteína endógena.


Weissmann, el creador del ratón ha expresado befittingly que “un ratón para y en Edimburgo (Edbg prnp 0/0 [ 109 ]) Y tenía fenotipos de poca importancia [ 179 ] [Higo. 4
recordar” [ 190 ]. Económico de mantenimiento de los animales y los continuos (9)], mientras que un modelo de Nagasaki, Japón (Ngsk prnp 0/0) ataxia desarrollada,
avances en las técnicas de edición génica y la manipulación han hecho ratones causada por una pérdida progresiva de las células de Purkinje del cerebelo [ 156 ]. Se
un sistema modelo ampliamente aceptado y preferente, no sólo en la encontró más tarde que esta fue causada por la eliminación de un aceptor de empalme
investigación de priones, pero casi universalmente en ciencias de la vida. Nuevos en el intrón 2 de la prnp gen, lo que provoca un evento de empalme intergénica y la
modelos de ratón se generan continuamente para hacer frente a la biología de las sobreproducción de la transcripción de un gen llamado
cepas, la función de PrP, barrera de transmisión, y con el intento de recapitular la
enfermedad humana. Los siguientes párrafos delinear el papel de la de tipo Doble o DPL [ 124 ]. Expresado en circunstancias normales a niveles muy bajos, DPL es
salvaje cepas endogámicas de ratones, el papel de la ronda, transgénica y el gen upregulated masivamente en el cerebro de Ngsk prnp 0/0 ratones debido a la alta
de ratones dirigido en el modelado de la enfermedad priónica humana, y la actividad de la prnp promotor y da como resultado la expresión de la proteína Doppel
función de PrP. en el SNC. Un número de estudios han mostrado a continuación, el papel de la
proteína Doppel en la neurodegeneración experimental (por ejemplo, véase [ 154 ]), Y
los enlaces funcionalmente intrigantes con truncada PrP DO, lo que provoca un fenotipo
cerebelosa similares, se han hecho (véase más adelante), pero nunca se ha podido
establecer una relación directa con enfermedades neurológicas humanas [ 117 ]. Otros
cepas endogámicas de ratones de tipo salvaje factores de confusión fueron las células madre embrionarias y los esquemas de
selección utilizados para la generación de prnp 0/0 ratones. Las líneas de células madre
Las cepas puras más comunes utilizados en la investigación de priones son C57BL embrionarias más populares se derivan de la cepa 129Ola ratón, mientras que las
/ 6L, C57BL / 6N, C57BL / 10, FVB, y 129 / Ola, y hoy en día, las cepas menos líneas de ratón se mantienen en no-129 fondos. Usando edición gen de / 6J
comúnmente utilizados son RIII, VM, NZW, y CD1. Inicialmente, se utilizaron fertilizado ovocitos C57BL [ 130 ], Un nuevo prnp 0/0 ratón (denominado prnp ZH3 / ZH3) ha
ratones de tipo salvaje para transmitir la tembladera de ovejas y para generar y sido recientemente generado, que ha eliminado todos los fenotipos se informó
adaptar cepas de tembladera para la propagación adicional (Fig. 1 ). Por ejemplo, la anteriormente, excepto desmielinización crónica de los nervios periféricos. Por lo
cepa ME7 fue el resultado de la transmisión de la tembladera natural de ovejas tanto, los autores concluyen que la neuropatía desmielinizante es de hecho el (único)
Suffolk directamente en ratones. En contraste, otras cepas utilizadas comúnmente efecto de la prnp pérdida de la función [Fig. 4 (8, 9)].
22L, RML, y 79A, todos distintos de ME7, comparten un origen común en que
estaban todos derivados de ovejas piscina scrapie cerebro del Instituto Moredun
(revisado

13
tabla 1 modelos de ratón más comúnmente utilizados en la investigación de priones
204

13
Número de líneas Ventajas, el uso principal desventajas
(aproximado)

ratones endogámicos de tipo salvaje 9 Consistentes, controlados controles de la litera compañero fondo La resistencia a la infección con priones humanos (barrera de las especies)
genético para ratones transgénicos modelo Scrapie para ensayos de
compuestos anti-priones

prnp 0/0 ratones + condicional post-natal prnp 8+2 Estudio de la función fisiológica de la PrP do y su papel en la PrP Carolina del Sur formación y la Diferentes estrategias de focalización han dado lugar a ligeramente diferentes fenotipos
ronda ratones enfermedad; la investigación de posibles dianas terapéuticas Prácticamente todos los animales y uno de los principales fenotipo (ratones Ngsk)
transgénicos se crían en prnp 0/0 fondo

Humanizada / humana prnp secuencias expresan como 45 Recapitula características neuropatológicas y bioquímicos de la enfermedad priónica humana. Las diferencias en los antecedentes genéticos; diferencias tecnológicos en
transgén en el fondo de prnp 0/0
Importante para el estudio de las propiedades de transmisión, la susceptibilidad genética, vectores construidos; transgénico frente knock-in; diferentes niveles de expresión
ratón tipos de cepas, incluyendo la identificación de nuevos tipos cepa atípica y fenotipos de PrP Estas diferencias hacen que sea difícil comparar entre los diferentes
inesperados, investigación de potencial zoonótico de, por ejemplo, bovino, alces, ovejas modelos
EET, compuestos terapéuticos

sobreexpresión de PrP de ratón en el fondo 8 La investigación de papel fisiológico de la PrP DO, estructura de PrP do y PrP Carolina del Sur, toxicidad Las diferencias en los antecedentes genéticos; diferencias tecnológicos en vectores
de prnp 0/0 ratón prión, objetivos terapéuticos potenciales Cribado de compuestos de fármacos anti-priones construidos; transgénico frente knock-in; diferentes niveles de expresión de PrP a
menudo no se recapitulan la neuropatología y la bioquímica de la enfermedad
priónica humana

Quimera: Ratón / PrP humana en el fondo 22 propagación más eficiente de los priones humanos (en comparación con PrP de ratón); períodos Para un grado variable de recapitular los aspectos neuropatológicos y bioquímicos
de prnp 0/0 ratón de incubación más cortos, lo que permite estudiar la infectividad (bioensayos) y cepas de de la enfermedad priónica humana
inconvenientes de los modelos de modelo de ratón priones de forma relativamente rápida; uso potencial para el cribado compuesto de fármaco
anti-priones

ratón transgénico con prnp secuencias de diferentes especies Numeroso; El número de líneas propagación más eficiente y rápida de ciertas cepas priones (por ejemplo, vCJD propaga de No recapitular, precisamente, la neuropatología y la bioquímica de la
(hámster sirio, bovino, ovino, porcino, conejillo de indias, para cada especie está más allá manera más eficiente en ratones transgénicos que expresan bovino o conejillo de indias prnp secuencias)
enfermedad priónica humana
alces, campañol banco), incluyendo quimeras (ratón / otras del alcance de esta revisión
especies)

Ratón PrP expresa bajo el control de promotores 3 Permite la expresión selectiva de PrP funcional o mutante y permite la detección Puede ser un sistema artificial que puede no reflejar la realidad de la biología de
específicos de tejido de la función de PrP en la propagación en el contexto de compartimentos de priones
tejido

Ratón PrP con mutaciones (deleciones, sustituciones, 45 Muchos desarrollan enfermedad espontánea; muchos desarrollan neuropatología distinta. No recapitular cualquier neuropatología patología conocida o bioquímica de la
inserciones) Servido la comprensión de los dominios de función de PrP, y llevado al descubrimiento de enfermedad priónica humana; puede conducir a la generación de conclusiones que
la neurodegeneración espontánea causada por truncada PrP son irrelevantes para la enfermedad priónica humana heredado

Quimera con mutaciones 2 Desarrollar la enfermedad espontánea; desarrollar neuropatología distinta No recapitular particularmente bien la neuropatología y la bioquímica de la
enfermedad priónica humana

ratones humanizado con mutaciones (deleciones, 10 Desarrollar neuropatología que es más similar a la enfermedad humana no desarrollan la enfermedad espontánea
sustituciones, inserciones)

PrP topillo rojo con mutaciones (deleciones, sustituciones, 3 Desarrollar la enfermedad espontánea; desarrollar neuropatología distinta No recapitular particularmente bien la neuropatología y la bioquímica de la
inserciones) enfermedad priónica humana; puede conducir a la generación de conclusiones que
son irrelevantes para la enfermedad priónica humana heredado
Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

Columna de la izquierda indica el tipo de modelo, la columna central de la izquierda indica el número aproximado de líneas de ratón publicados, columna izquierda centro derecha las ventajas y el uso principal de estos modelos, y la columna derecha las desventajas o
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Humano PRNP transgénesis en el fondo de prnp 0/0 ratones: un salto hacia enfermedad de priones con un tiempo de incubación media de aproximadamente 280 días

adelante para comprender la enfermedad priónica humana [ 33 ]. Por lo tanto, con el propósito de modelado de la enfermedad, por ejemplo, para

evaluar los efectos del fármaco sobre el tiempo de incubación, los modelos de

sobreexpresión de PrP tienen una clara ventaja. Esto también es relevante por razones

La generación de prnp 0/0 ratones era una herramienta esencial para crear ratones económicas y prácticas, tales como costo de mantenimiento de los animales y la duración

transgénicos que carecen de la endógeno PrP murina DO. de los proyectos de investigación típicos (por ejemplo, el ciclo de vida de una subvención o

Transmisión de priones humanos en ratones de tipo salvaje estaba llena de la duración de un doctorado). Desde un aspecto práctico, la duplicación de los niveles de

barreras de transmisión significativas, y largos tiempos de incubación [ 174 ], Y expresión a menudo puede ser relativamente fácil de lograr por la cría de los ratones en

este obstáculo se eliminó eficazmente mediante cruzamiento ratones estado homocigótico. Por otro lado, un sistema modelo que produce estrictamente

transgénicos que expresan PrP humana de longitud completa o quimérico fisiológicas los niveles de expresión de PrP, tales como el modelo knock-in, tiene un papel

murino-humano PrP (que contiene componentes del humano y el genoma para el estudio de la función de la PrP, pero la vida limitada de un ratón puede impedir el

murino) con desarrollo de un fenotipo durante toda la vida.

prnp 0/0 ratones (Fig. 1 ). Estos modelos tenían períodos de incubación relativamente
cortos con una alta tasa de ataque, desarrollaron fenotipos clínicos, y eran
adecuados para el estudio de las barreras de transmisión de otras especies y de
prión humano distinto aísla, que a menudo se replican fielmente neuropathologically Quiméricos modelos humana / ratón en el fondo de
y bioquímicamente. Como consecuencia, estos modelos tienen un potencial prnp 0/0 ratón
significativo para probar compuestos terapéuticos desarrollados in silico y in vitro.
De hecho, estas características hacen que estos modelos superiores a los de Desde que se informó de la generación de la primera línea de ratón transgénico
muchas enfermedades neurodegenerativas principales, tales como la enfermedad que expresa ratón quimérico y PrP humano en 1994 [ 174 MHu2M], más de 20
de Alzheimer o enfermedad de Parkinson, donde correlación clínico-patológica entre diferentes líneas de ratón-humano quiméricos, designada (25% murino, 50%
el modelo animal y la enfermedad humana a menudo hasta el momento siguen humanos, y la secuencia murina 25%) han sido creados. Estas líneas difieren en la
siendo menos convincente. secuencia de aminoácidos de los residuos humanos de PrP en la secuencia
quimérica, su nivel de expresión de PrP, y períodos de incubación después de la
inoculación con priones CJD [ 58 ]. Estos ratones quiméricos se propagan priones
En la actualidad, al menos 45 líneas de ratones humanizados se han humanos más “efectiva”, y por lo tanto, las nuevas líneas transgénicas quimérico se
generado con transgénicos y de genes combinado enfoques de orientación en la generan para reducir aún más los tiempos de incubación. Esto se logra mediante la
base de prnp 0/0 mutantes (Figs. 2 , 3 ). El transgénico no sólo constructos llevan las alteración de la similitud de secuencia de PrP quimérico, mediante la reducción de
mutaciones patógenas deseados, pero importante, los genotipos polimórficos en humano, y por el aumento de secuencias murinas. El tiempo de incubación más
el codón 129 (y más recientemente codón 219 y el codón 127 G> V modificación [ 9 corto de modelos MHu2M hace particularmente adecuado para los bioensayos de
]) del PRNP gene. Con los años, la importancia de un fondo genético bien propiedades de infectividad priónica y cepa humana, pero la principal limitación es
controlada ha sido cada vez más reconocida. Los primeros estudios a menudo se que mal recapitulan otros aspectos de la enfermedad priónica humana.
utilizan fondos mixtos (por ejemplo, la línea de 129V (Tg152) o la línea 129M
(Tg35) fueron inicialmente mantenerse en un FVB / N, C57BL, y 129Sv de fondo [ 6
]), Mientras que más tarde, estas líneas se mantuvieron en un fondo
estrictamente FVB-congenic [ 9 ]. La comparabilidad entre las diferentes líneas de
ratón es entonces confundido adicionalmente por los diferentes niveles de Condicional knock-out / knock-in modelos: el sistema CrellxP
expresión de PrP. Por ejemplo, los ratones Tg650 (HuM129, la expresión de PrP
seis veces) [ dieciséis ] Inoculados con priones vCJD desarrollar enfermedad
neurológica con una tasa de ataque 100%, pero los ratones Tg35 (HuM129, la El uso de la Cre / loxP sistema de recombinación permite la inducción
expresión de PrP de dos veces) [ 6 ] Y ratones knock-in (en sustitución de murino “condicional” o inactivación del gen de interés en un punto el tiempo de desarrollo
con una sola copia PrP humana) [ 18 ] Mostrar poca frecuencia síntomas definido, en una célula o tejido específico, o ambos. los Cre-loxP- knock-in técnica
neurológicos, mientras que el examen histológico y bioquímico sugiere de reemplazo de genes mediada fue utilizado por primera vez en 1996 para
claramente la enfermedad subclínica. Del mismo modo, la transmisión de sCJD, generar ratones PrP humanizados [ 82 ] (Higo. 2 ; Tabla Suplementaria 1) y desde
en los modelos “knock-in” MM, MV, y VV [ 19 ], No da lugar a la enfermedad clínica entonces ha sido ampliamente utilizado. Además de la generación de condicional
cuando se inocularon con cepas sCJD mm2 (Parchi clasificación [ 136 ], Véase knock-out [ 154 ] O ronda en modelos de ratón [ 18 ], el Cre-lox sistema ha sido
también la Fig. 3 para homologisation con la clasificación de Londres). En utilizado en otras modificaciones, por ejemplo, para generar ratones con PrP
contraste, los ratones Tg650 con niveles mucho más elevados de PrP desarrollan dimérica soluble expresado condicionalmente para estudiar la PrP do -PrP Carolina del
signos clínicos de Sur proceso de conversión [ 121 ] [Higo. 4 (11)]. Un modelo particularmente exitoso
es el ratón transgénico que expresa múltiples copias de floxed ( “ Florida flanqueado
por Salmón ahumado PAG

13
206 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

Protec? Ve función de la microglia en la PrP DO- PrP Carolina del Sur conversión, la estructura, la neurotoxicidad, oligómeros; PrP Carolina del Sur- inducida transla global? onal represión de
enfermedad priónica papel de GPI ancla en prión difusión; cepas de priones; las barreras de endoplasmático re? Culum
Condi? Microglial onal transmisión Condi? Onal prnp ratones knockout
CX3CR1 ratones knockout Los ratones transgénicos que sobreexpresan PrP do o la expresión alterada de

las especies PrP Erent di ff

1
10

PrP Carolina del Sur- deterioro inducido de 8 7 11 Func? En de PrP do


Ubiqui? n Sistema Proteasa Transgénico, nocaut y condi? Onal prnp ratones
modelo transgénico UPS ratón knockout
9

3
6

2
5
modelos transgénicos y de genes dirigidos:

4 1. PRNP ratones knockout y condi? onal prnp


ratones knockout
2. PRNP ratones knockout que sobreexpresan PrP do o
expresando alterada PrP do en el fondo de murino, humano,
quimérico humano / ratón, hámster, bovino o ratón de banco
Papel de los astrocitos y oligodendrocitos secuencias de PrP
PrP do en la patogénesis de la enfermedad 3. Los ratones que expresan PrP do bajo el control de? dici ó n

priónica promotores especí fi co

Los ratones transgénicos que expresan Papel de PrP neuronal do en el mantenimiento de la mielina 4. modelos de ratón de otras vías o sistemas celulares (por ejemplo
PrP de ratón truncada, Hamster PrP Los ratones transgénicos que expresan PrP do bajo el control de promotores de Ubiqui? N Sistema de proteasa, microglia)

células especí fi cos (por ejemplo, NSE, MBP o PLP)

Fig. 4 Representación esquemática de los compartimentos celulares y subcelulares y la forma sistema de la proteasa (UPS), 7 núcleo neuronal, 8 cromosomas, 9 Complejo de Golgi, 10 retículo
PrP mecanismos de funcionamiento y las enfermedades son investigados con modelos endoplásmico (ER), 11 glóbulos azules representar nativa de PrP proteína priónica celular DO, glóbulos

animales. Llave: 1 microglia, 2 astrocitos, 3 oligodendrocitos, 4 axón con mielina, 5 citoplasma rojos representar mal plegada PrP proteína priónica Carolina del Sur

neuronal, 6 ubiquitina

Sitios”) prnp ( Tg37 y Tg46) [ 107 , 108 ], Donde al Cremediated recombinación, la demostrado la restitución de la propagación de la enfermedad priónica. Los
PrP expresado transgénicamente se escinde a la edad de 8-12 semanas. Esto ratones que expresan de longitud completa PrP fueron designados tga20 (las
se consigue mediante cruzamiento líneas Tg37 o Tg46 con ratones que letras “a” a “d” en la publicación original indican cada vez más reducida prnp marcos
expresan la recombinasa Cre bajo el control del promotor de cadena pesada de de lectura abiertos). La inoculación de ratones tga20 con priones RML resultó en
neurofilamento (HNF-Cre / Tg37 y HNF-Cre / Tg46). El inicio bastante precisa muy corto (aproximadamente 60 días) los tiempos de incubación y una duración de
de la expresión de Cre hizo que fuera un modelo muy exitoso para el estudio del la enfermedad muy corto (de sólo uno o dos días, en comparación con un curso
papel de la PrP do para entender el papel de la PrP Carolina del Sur toxicidad [ 107 , 195 ] más prolongado de la enfermedad en ratones de tipo salvaje que expresa dos
Y para evaluar los potenciales compuestos terapéuticos [ 125 , 126 , 195 ]. copias de Prnp). En contraste, los ratones heterocigotos expresar un solo alelo de PRNP
(PRNP + / 0) [ 53 ] Tenido tiempos de incubación prolongados significativamente y un
curso clínico relativamente suave. tga20 ratones demostraron muy popular para
los experimentos de transmisión debido al tiempo de incubación muy corto para los
Modelado de las funciones fisiológicas y fisiopatológicas de PrP: estudios sobre la neurotoxicidad y priones propagación en la cerebrales o
expresión de longitud completa, parcialmente eliminado o específico de medulares vías en el cerebro [ 22 , 23 ] Y para los estudios de la cinética de la
tejido PrP infectividad y la proteína priónica acumulación [ 157 , 158 ]. Otros modelos que
sobreexpresan PrP vez mostró la neurodegeneración y el deterioro neuromuscular
Después de la generación de la prnp 0/0 ratón [ 28 ], Un experimento de lógica y [ 193 ].
científicamente importante fue la reintroducción de la expresión de PrP por
transgénesis [ 53 ] (Higo. 2 ). La reintroducción de longitud completa PrP en prnp
0/0 ratones

13
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Los mutantes de PrP: deleciones y mutaciones puntuales demostró que la expresión de la PrP en las células linfoides es prescindible para
propagar priones. La expresión ectópica de PrP en oligodendrocitos [ 144 ] [Higo. 4 (3)]
Además de la re-expresión de PrP de longitud completa, Fischer et al. [ 53 ] ​no ayudó propagación de infectividad, mientras que la expresión de formas truncadas
Generado múltiples mutantes de deleción amino-terminal de la prnp marco de PrP (o de la proteína Doppel) selectivamente en oligodendrocitos mostraron
de lectura abierto para comprender la función de la PrP y determinar el myelinotoxicity [ 151 ], No es un hallazgo sorprendente, dado que esta proteína
requisito mínimo para la replicación de priones. Estas deleciones en marco también causa la muerte de células de Purkinje [ 154 ]. La expresión selectiva de larga
eran de longitud progresiva ( Δ 32 a 93, Δ 32-106, Δ 32 a 121, y duración PrP en el axón fue demostrado ser necesarios para la estabilidad de la
mielina en el sistema nervioso periférico [ 24 ] [Higo. 4 (4)].
Δ 32-134). Esto condujo a resultados bastante inesperados, con una
notable fenotipo de la degeneración cerebelosa progresiva en el Δ 32-121 y
Δ 32-134 líneas [ 165 ] [Higo. 4 (9,
11)]. Se especuló que este fenotipo podría haber sido causado por la Los ratones transgénicos que expresan secuencias de PrP de

formación de hetero-dímeros con de longitud completa PrP [ 15 ] Y de la especies no humanas

proteína Doppel interactuar con el truncado PrP. Sin embargo, ninguna


enfermedad humana que corresponde a este fenotipo intrigante ha sido Una gran cantidad de líneas de ratones transgénicos se ha creado expresar
identificado todavía. secuencias de PrP de especies distintas a la humana. El primer ratón transgénico
El objetivo de la introducción de mutaciones puntuales en el prnp que contiene sirio PrP del hámster de oro se informó en 1989 ([ 163 ]. Desde
marco de lectura abierto es generar modelos de IPD humano. Una 144 de entonces, los modelos de ratón que expresan bovino, ovino, porcino, conejillo de
inserción de pares de bases en el marco en el marco de lectura abierto de la PRNPindias, alces, y campañol banco secuencias de PrP se han hecho disponibles para
gen (repetición de inserción 6-octapéptido, OPRI) en ECJ familiar [ 132 ] Y el la investigación de las encefalopatías espongiformes transmisibles de los seres
enlace de la variante missense PrP, P102L, al síndrome GSS se informó ya en humanos y animales. Del mismo modo, un número creciente de líneas
1989 [ 67 ]. Una sustitución de aminoácido única en el ratón prnp gen (101L, entrecruzadas se han generado para investigar el papel de sistema y microglia
correspondiente a la mutación 102L humano) fue el primer modelo de una IPD inmune [Fig. 4 (1)] en prión patogénesis de la enfermedad [ 167 , 196 ]. líneas de
(Fig. 2 ). Estos ratones mostraron una enfermedad neurológica espontánea, y ratones transgénicos de otros sistemas modelo, en particular los relacionados con
los hallazgos neuropatológicos eran degeneración espongiforme y gliosis el sistema inmune [ 24 ] y procesos celulares [ 115 ], Han arrojado luz sobre aspectos
similar a la enfermedad humana [ 70 ], Pero crítica, no se formaron las placas importantes de la biología de priones, pero una revisión exhaustiva de estos
amiloides, en marcado contraste con el fenotipo neuropatológico característico modelos sería más allá del alcance de este artículo.
en los seres humanos. Desde entonces, los avances tecnológicos han hecho
posible crear sistemas de modelos cada vez más sofisticados, como, por
ejemplo, la introducción de doble gen de sustitución estrategia de focalización
para generar múltiples cepas de ratón con alteraciones PrP sutiles para
comprender mecanismos patógenos moleculares de las enfermedades por Nematodos y moscas
priones heredadas y la función de anchorless PrP [ 37 ].
A diferencia de en la investigación de otras enfermedades neurodegenerativas, modelos

de invertebrados, tales como el nematodo C. elegans y la mosca Drosophila

melanogaster, hasta ahora se han utilizado muy poco en la investigación de priones. Sin
embargo, estudios recientes sugieren que estos modelos tienen un potencial para

estudiar, entre otros aspectos, la neurotoxicidad prión [ 178 ], La infectividad [ 177 ], Y

La expresión ectópica y selectiva de tejido de PrP [Fig. 4 (2, prueba de compuestos anti-priones de esporádica y heredado la enfermedad priónica [ 56

3, 4)] ].

La mayoría de los modelos que expresan PrP ectópica se generaron a entender la


función de PrP en un contexto celular o tejido, es decir, para estudiar en la que
celular u órgano PrP sistema puede replicar y propagar la infectividad, y Alternativas a modelos animales
eventualmente causar enfermedad clínica o subclínica. Propagación de los priones
de hámster selectivamente en astrocitos, pero no en las neuronas era suficiente Ex vivo modelos: cultivos de cortes organotípicos

para hacer que los ratones susceptibles a la enfermedad priónica [ 152 ] [Higo. 4 (2)].
Los ratones transgénicos que expresan PrP en las células linfoides (en prnp 0/0 ratones) Experimentos ex vivo se llevan a cabo sobre el tejido sacado a partir de
dio lugar a la transmisión de la infectividad del bazo en el cerebro que lleva a organismos vivos, y se transfieren a un entorno artificial. cultivo de cortes
“centinela” injertos derivados de PrP-expresión de las células madre neuronales [ 20 ]. organotípicos es un popular modelo ex vivo y la primera de tales ensayos para el
Más experimentos de reconstitución complejos [ 85 ] en turno estudio de amplificación de priones y la titulación fue publicado en 2008 [ 51 , 52 ].
Desde entonces, este modelo de sistema, en particular, organotÃpico cerebelo
murino

13
208 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

rebanadas cultivadas, se ha utilizado para estudiar los procesos fisiológicos implicados coli. PrP recombinante de varias especies (humano, ratón, campañol de la
en la formación de priones, PrP do -PrP Carolina del Sur interacciones, la neurotoxicidad batería, y de hámster sirio) se ha generado, y muchos de estos ensayos
inducida por priones, y para poner a prueba la eficacia de nuevas terapias. cultivos de incluyen supresiones y truncamientos de PrP. PrP recombinante humana se ha
cortes organotípicos tienen potencial para cerrar la brecha entre menudo muy complejo generado el de longitud completa [residuos 23-231 (unglycolysated y que
in vivo y más simple en modelos in vitro. Sin embargo, la ventaja sobre los modelos de carecen de la ancla GPI)], y con varias modificaciones, tales como la expresión
ratón in vivo que proporcionan una imagen mucho más completa sobre la del dominio globular solamente (residuos 121-231 o 90-231), amino
neuropatología, bioquímica, y el comportamiento aún no se ha demostrado. A pesar de residuos-terminal flexibles cola (23-120) [ 98 ], Y Y145Stop (23-144) [ 99 ]. El
las iniciativas para promover “3R” (refinamiento, reducción y sustitución de la objetivo de la generación de PrP sintético es el estudio de la función fisiológica
investigación con animales) son de apoyo de este tipo de estudios, la complejidad de de PrP, su papel en la patogénesis de la enfermedad, y las propiedades
las condiciones de cultivo para mantener los cortes de tejido cerebral, falta de conformacionales. Mientras que la formación de priones de PrP recombinante
estandarización, y una lectura potencialmente difícil puede haber impedido una más en un sistema libre de células se ha demostrado por algunos grupos [ 102 ], Un
amplia adopción en la investigación de la neurodegeneración. enfoque robusto para generar de forma reproducible y sistemática priones
infecciosos de PrP recombinante in vitro todavía no se ha desarrollado [ 161 ].
Los estudios sistemáticos de las condiciones que conducen a la agregación in
vitro también han ayudado al desarrollo de ensayos libres de células para la
detección de priones. Está más allá del alcance de esta revisión para discutir
En ensayos in vitro: una alternativa versátil, escalable y reproducible a los esto en detalle. Tres tecnologías principales, revisado en otro lugar con gran
modelos animales detalle [ 10 , 162 , 192 ], Se discuten en lo siguiente.

en modelos in vitro basado en células en cambio se utiliza ampliamente en la


investigación en la biología celular de la propagación de priones, solo o en
combinación con los experimentos in vivo. Los mayores beneficios de modelos de
cultivo celular, en comparación con los estudios en animales y rodajas
organotípicos, son los bajos costos y simplicidad experimental, es decir, la modelado por ordenador y la bioinformática enfoques
reproducibilidad, la normalización de las condiciones de cultivo, y lectura
experimental. El éxito de la infección de la línea celular de neuroblastoma de ratón Los avances en los estudios estructurales sobre las moléculas y modelado
N2a con RML / Chandler inóculo se informó en 1987 [ 150 ], Y desde entonces, una computacional son la base para el desarrollo de métodos de simulación en
amplia gama de sub-clones se han desarrollado y caracterizado, de las cuales las acoplamiento molecular silico, que permiten el análisis de los modos de interacción
líneas de PK1 y R33 son, posiblemente, los más comúnmente utilizados. Al menos de unión y afinidad entre diferentes moléculas de unión. Así, en silico técnica de
15 otras líneas celulares diferentes derivados de animales neuronales y no simulación por ordenador se está convirtiendo en una herramienta poderosa para
neuronales, incluyendo sub-clones, se han desarrollado durante años, y cada uno la selección de nuevos productos terapéuticos, incluyendo los compuestos
de los cuales muestra una susceptibilidad distinta a cepas de priones, que por otro anti-priones [ 63 , 133 ]. Se predice que el uso de en silico plataformas de cribado
lado impide la comparación directa entre las líneas ( para su revisión, véase [ 105 , 180 virtual para la identificación de compuestos anti-priones aumentará continuamente.
]). Como siempre, la simplicidad y la versatilidad de estos ensayos tienen una
desventaja: mientras que estudios en cultivos celulares han contribuido
enormemente a la comprensión de los mecanismos que rigen la biología de
priones, muchos de estos hallazgos no son directamente relevantes para
enfermedades humanas. De hecho, es una decepción que muchos de los sistemas de modelos en el contexto de las cuestiones biológicas
compuestos anti-priones, que han sido eficaces in vitro, han fracasado en específicas
posteriores estudios in vivo.
En esta sección del artículo de revisión, la atención se centrará en los modelos
que no pudieron ser adecuadamente discutido anteriormente. Esto es
particularmente relevante para los temas transversales, e incluye modelos que
abordan cuestiones biológicas específicas o mecanismos.
ensayos libres de células, proteínas purificadas recombinantes priónicas, y

fragmentos de PrP sintéticos: desde el principio del plegamiento de proteínas

para el desarrollo de ensayos de Identificación de la naturaleza transmisible del agente causante de la

enfermedad de tembladera y priónicas humanas enfermedades de

Desde el primer informe de formación libre de células de la proteína prión diferentes etiologías (Fig. 1 )

proteaseresistant en 1994 [ 94 ], Múltiples herramientas y protocolos han sido


desarrollados para synthetise y purificar PrP recombinante de mamífero [ 102 ]. El La naturaleza transmisible de enfermedades priónicas humanas se
demostró primero en primates no humanos con la transmisión de kuru [ 54 ] Y
sistema más comúnmente utilizado para la síntesis de la proteína prión es Escherichia
sCJD en 1968 [ 57 ]. estos transmisión

13
Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222 209

Los estudios fueron alentados por los estudios anteriores de la tembladera ovina. en comparación con el host [ 137 ]. La especie (o transmisión) de barrera ha sido

Aunque el carácter transmisible e infeccioso de la tembladera fue sospechado ampliamente modelada en ratones humanizados transgénicos que expresan cualquiera

durante mucho tiempo, los estudios experimentales tuvieron éxito sólo en 1936, de los genes humanos y de ratón PrP quiméricos (Figs humano de longitud completa o. 1 , 2

cuando el cerebro y los extractos de médula espinal de ovejas enfermas fueron ). In vivo y en estudios in vitro han puesto de manifiesto que tanto el específico de la

transmitidas en ovejas o cabras y los receptores desarrollaron scrapie después de especie secuencia primaria de homología de PrP (es decir, diferencias en la secuencia de

un período de incubación de 2 años, lo que confirma su naturaleza transmisible [ 48 , aminoácidos entre el host PrP do y PrP del donante Carolina del Sur)

49 ]. Estos experimentos se reprodujeron con éxito unas pocas décadas después


por Pattison [ 138 ]. Después de la caracterización de la transmisión de kuru, se hizo y la cepa de priones conformación son los principales factores que determinan la
cada vez más evidente que el agente, que anteriormente se consideraban un virus barrera de las especies [ 41 ]. Para sortear la barrera de especies y de este modo
lento, albergado propiedades biológicas bastante inusuales. Estos estudios se facilitar la transmisión de la CJD, se han producido un número de diferentes líneas de
llevaron a cabo en primates [ 13 , 54 , 57 ] Y llevado a la proposición de la hipótesis ratones transgénicos. Los modelos de ratón que expresan transgenes quiméricos de
de sólo proteína [ 61 ] Con su verificación experimental subsiguiente en hámsteres y ratón-humano de la proteína prión han sido particularmente importante para
ratones [ 21 , demostrar la importancia de la secuencia primaria de PrP a la proteína prión eficacia
transversal siembra anormal de diferentes especies. La relevancia de la homología de
secuencia ha también posteriormente ha demostrado en ensayos de conversión in
146 , 147 ]. En comparación, la prueba de que la vECJ es causada por la EEB se vitro [ 17 , 95 ] Y en los experimentos con líneas celulares de neuroblastoma infectados
estableció significativamente más rápido, debido a la disponibilidad de ratones con scrapie [ 145 ]. La importancia de prión conformación de tensión para barrera de
transgénicos humanizado [ 26 , 64 ] Que también proporciona una visión adicional transmisión entre especies a diferencia de PrP homología de secuencia se pone de
significativo en la patogénesis de la vCJD [ 45 ]. Las propiedades de transmisión de relieve meramente en los estudios sobre priones de levadura [ 171 , 176 ], En el estudio
priones derivados de diversas enfermedades causadas por priones heredadas han con PrP recombinante de varias especies [ 76 ] Y más recientemente en estudios con
sido ampliamente estudiados en modelos animales, tales como primates, puras ratones de campo BANK [ 128 ]. La sustitución de un solo aminoácido en una región
cepas de ratón de tipo salvaje, ratones transgénicos, y ratones de campo de banco crítica puede ser suficiente para cambiar la especificidad de especie y por lo tanto
(Fig. 1 ) [ 4 , 25 , 44 , 110 , 118 , 128 , 140 , 141 , 172 , 173 , 175 ]. transmisión de priones
eliminar una barrera de especie como se muestra en los estudios con PrP23-144
en ratones humanizados knock-in que expresan PrP en varios niveles y que llevan purificada recombinante de ser humano, ratón, y el hámster sirio, donde los activos en
M129 o alelos V129 ha sido importante en el desciframiento de la base para dos la posición 138 y 139 son factores determinantes de la especificidad de la siembra
patrones neuropatológicos y bioquímicas distintas de dural iCJD relacionados dependiente de especie [ 181 ].
injerto. Estos estudios demuestran que las diferencias neuropatológicos observada
en estos pacientes se explican mejor por su infección con cepas de priones sCJD
distintas, y sugieren que las piscinas de injerto de la duramadre de cadáver
humanos pueden haber sido contaminados con priones de más de un donante [ 89 ].
Más recientemente, la transmisión de una forma recién identificado, prionopathy Los ratones transgénicos que sobreexpresan la PrP humana en el fondo de prnp 0/0 ratones

variable sensible a la proteasa (VPSPr), también ha sido confirmado en modelos han sido ampliamente utilizados para modular y, cuando sea necesario, eliminar la barrera

de ratón [humanizados 50 , 129 ]. Los niveles de transmisión extremadamente bajos entre especies cuando se transmiten las enfermedades priónicas de animales comunes,

observados en uno de los estudios sugieren que VPSPr tiene propiedades de tales como la encefalopatía espongiforme bovina, la enfermedad debilitante crónica,

transmisión distinta de otras enfermedades priónicas, como sCJD y vCJD [ 50 ]. (CWD) y la tembladera. Mientras que el potencial zoonótico de BSE se ha confirmado

inequívocamente mediante la transmisión en ratones transgénicos que expresan la

especie bovina, secuencias quiméricas o humanas [ 6 , 64 ,

164 ], Un número de estudios que utilizan varios diferentes modelos de ratón


que sobreexpresan PrP humano en el fondo de
prnp 0/0 ratones han demostrado falta de tal potencial para scrapie y CWD [ 96 , 149 , 159
Modelos para entender barreras entre especies , 170 ]. Estudios más recientes, sin embargo, la utilización de EPCP en el mismo
modelo (Tg440, la sobreexpresión de PrP humana 129M) muestran que la PrP
cérvido Carolina del Sur
Primera evidencia de una barrera de la transmisión entre especies de los priones
y un enfoque experimental cómo superar se demostró en 1961 cuando los puede, de hecho, inducir la conversión de PrP humana do después de la PrP
ratones desarrolló la enfermedad priónica después de la inoculación con cérvido Carolina del Sur cepa ha sido adaptado por pasos sucesivos in vitro o in vivo [ 11
extractos de cerebro de cabras que habían sido inoculados con cepas de scrapie ]. Además, el potencial zoonótico de scrapie Recientemente se ha demostrado
enfermo Suffolk ovejas [ 32 ]. Después de la transmisión primaria, que mostró una en macacos cynomolgus después de un período de incubación de 10 años [ 46 ]
barrera de especie, pasajes posteriores fueron 100% eficaz, con la cepa de ratón Y en ratones que sobreexpresan PrP humano [Tg340 (M129) y Tg361 (V129)] [ 30
tiempos de incubación específico [ 31 ]. Una barrera de transmisión se define ]. Mientras que en los ratones, la eficiencia de la transmisión del pasaje
como una penetrancia incompleta de la enfermedad con periodos de incubación primario era baja, pases en serie posteriores de diferente scrapie aislamientos
prolongados resultaron en mayor

13
210 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

las tasas de ataque y la propagación de priones que son fenotípicamente de cepas de priones [ 93 ]. Además, basándose en las similitudes entre las
indistinguibles de las cepas de sCJD (MM1 y VV2, respectivamente; características neuropatológicas y bioquímicos de 129mm ratones
clasificación Parchi, ver también Fig. 3 infectados con la V2 PrP Carolina del Sur cepa y los observados en un tipo de
para homologisation con la clasificación de Londres) [ 30 ]. Este cambio de la iCJD injerto de la duramadre, se ha sugerido que la combinación de PRNP genotipo
deformación por la EEB / vECJ hacia un fenotipo humano (es decir, sCJD), 129mm, placas kuru, y una PrP específica Carolina del Sur patrón bioquímico
inevitablemente, tiene potenciales implicaciones para la salud pública [ 7 ], En que puede indicar una etiología adquirida de la CJD [ 91 - 93 ].
exógena (es decir, potencialmente zoonóticas) priones adaptarse hacia, y puede
llegar a ser indistinguibles de las cepas humanas, como se muestra también para
CWD [ 11 ] O scrapie [ 30 ].
La susceptibilidad genética: los modelos de PRNP polimorfismos

de genes y mutaciones

cepas de priones

El humano PRNP gen codifica metionina (M) o valina (V) en el residuo 129,
Una enorme ventaja de modelar enfermedades priónicas sobre cualquier otro que tiene un fuerte efecto en la susceptibilidad a las enfermedades priónicas
trastorno neurodegenerativo es la facilidad de inducir a través de la infección por humanas [ 119 , 123 ]. En el norte de Europa el 38% de la población son MM,
priones, más comúnmente por inoculación intracerebral. Los priones se 51% MV y el 11% son VV. ECJ esporádica se produce con mayor
diferencian en sus estados conformacionales, que forma la base del modelo frecuencia en individuos homocigotos MM y también es relevante en las
general de distintas cepas de priones [ 41 ]. Además de cepas bien caracterizados formas adquiridas de ECJ, más sorprendentemente en vCJD, donde la
de enfermedades esporádicas, adquiridas y heredadas humanos priones, los mayoría de los casos clínicos estudiados hasta ahora han sido homocigotos
derivados de los priones de hámster (Sc237 y 263K), priones de EEB adaptado a para metionina en el codón 129 de PRNP. Un polimorfismo en el codón 127
ratón (301C y 301V), priones de scrapie adaptado a ratón, (RML, ME7, 139A, y (G127V) de
79A), y priones Anchorless derivadas de ratones Tg44 (22L) se han utilizado
ampliamente para estudiar la enfermedad de prión humano. Una cepa de PRNP Recientemente se ha determinado como un factor de resistencia contra la
animales ampliamente utilizado en la investigación de ambas enfermedades epidemia de kuru y esta observación también desestimó las especulaciones de
priónicas humanas y animales es un aislado oveja scrapie adaptado a ratón. Se una posible mutación patogénica que podría haber desencadenado el brote
deriva de la cepa de priones RML, que fue descrita por primera vez en 1961 por kuru [ 120 ]. De hecho, se demuestra que los polimorfismos en el codón 127 y
Chandler, y por lo tanto, a veces se hace referencia también como Chandler 129 de PRNP son una respuesta genética de la población a una epidemia de la
cepa [ 32 ]. enfermedad de priones y puede ser considerado como un poderoso episodio de
la selección reciente en los seres humanos [ 120 ]. Otro polimorfismo, que se
produce en las poblaciones de Asia, con una frecuencia de alelos de 6%, es
E219K, que se ha informado que tienen un efecto protector para sCJD y que
cepas de priones humanos distintos, tales como sCJD, vCJD, kuru, influye en las características clínicas-patológicas de GSS con P102L mutación [ 66
iCJD, VPSPr y esporádica insomnio fatal, no sólo difieren en sus patrones ].
bioquímicos y neuropatológicos, sino que también tienen propiedades
características de transmisión y de propagación que han sido estudiados
ampliamente en transgénicos modelos humanizados de ratón [ 3 , 18 , La importancia de los polimorfismos como un modificador de la enfermedad
también se pone de relieve en el contexto de mutaciones patógenas del PRNP gen,
19 , 90 , 111 , 122 , 129 , 183 , 186 ]. El conocimiento obtenido a través de estosasociado con IPD. Más de 40 mutaciones diferentes se han descrito y comprenden
estudios es importante sobre todo desde el punto de vista de la salud cambios en el número de repeticiones de octapéptidos en el dominio N-terminal, las
pública, ya que esto puede ayudar a identificar y caracterizar los orígenes mutaciones de sentido erróneo de PrP que causan una variante de aminoácido en la
de las nuevas cepas atípicas. Por ejemplo, los estudios de ratones mayoría de los casos o rara vez un codón de parada prematuro [ 14 ]. Las mutaciones
transgénicos han demostrado que V2 PrP Carolina del Sur infección de un ratón más comunes son octapéptidos inserciones repetidas y las mutaciones puntuales
con 129mm genotipo (clasificación cepa según la clasificación Parchi [ 136 ], P102L, D178N, E200K, y V210I [ 14 ], Respectivamente. IPD comprende una serie de
Véase también la Fig. 3 para homologisation con la clasificación de Londres) presentaciones clínicas heterogéneas y patrones neuropatológicos y representan
genera una inusual PrP Carolina del Sur con propiedades alteradas aproximadamente el 15% de todas las enfermedades priónicas (para un resumen de
conformacionales, que conserva la “memoria” de V2 PrP Carolina del Sur y correlaciones genotipo-fenotipo, ver [ 116 ]).
re-emerge y se replica rápidamente cuando se transmiten a un ratón con un
genotipo 129VV. Se cree que este tipo de estudios llamados de rastreo de
ser un medio fiable para identificar el origen
Para entender la profunda influencia de los polimorfismos
comunes en el residuo 129 [ 6 , 7 , 183 ], hay

13
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polimorfismo en el residuo 127 [ 9 ] Y el residuo 219 [ 66 ] del PRNP gen de la modelos de PRNP mutaciones de genes (Fig. 5 ): Más promesas de lo

susceptibilidad a algunas enfermedades priónicas heredadas adquirida, que pueden ofrecer?

esporádica y y asociación de diferentes polimorfismos con ciertas cepas de


priones, transgénicos, y modelos knock-in de ratón humanizados han sido de La primera confirmación genética de la PRNP P102L mutación que causa GSS
particular importancia. Una lista completa de modelos de ratón de polimorfismos en 1989 en dos linajes [ 67 ] Se le solicite la generación de modelos de ratón
humanos se da en las Tablas de apoyo 1 y 2. Estudios en ratones que expresan para el estudio adicional del mecanismo de la enfermedad, la comprensión de la
diferentes combinaciones de 129M y 129V han sido fundamentales para variabilidad fenotípica, y propiedades de transmisión [ 68 , 70 ]. Desde entonces,
entender la contribución de este polimorfismo a la susceptibilidad de diferentes los modelos P102L se han refinado [ 4 , 185 ], Aunque no siempre han mantenido
cepas de priones humanos. Estos modelos sugieren que los individuos con PRNP la promesa de la plena comprensión de todos los aspectos de la enfermedad [ 5 ]
129MV pueden ser más susceptibles a la infección con priones vCJD que a Con algunos resultados que contradicen estudios anteriores [ 4 ]. Una serie de
ganado priones de EEB y puede presentar con un fenotipo neuropatológico mutaciones puntuales comunes (P102L [ 4 ], A117V [ 8 ], D178N, E200K [ 4 , 73 ],
distinta de vCJD [ 7 ]. transmisión de la EEB en ratones PrP 129VV causó Así como mutaciones de inserción octapéptido [ 74 ], y mutaciones asociadas con
enfermedad clínica sin PrP detectable Carolina del Sur, un fenotipo que también se la formación de anclas PrP [ 37 ]) Han sido modelados en ratones. Mientras que
observa en los ratones de tipo salvaje de la EEB-desafió clínicamente afectados. el enfoque más común ha sido la expresión de un transgén en una prnp 0/0 fondo,
Por lo tanto, la EEB y la infección por priones vCJD en ratones transgénicos se han utilizado también ratones que expresan murino, quimérico humano /
pueden dar lugar a la propagación de fenotipos moleculares y neuropatológicos ratón, humano, hámster sirio, bovino, y más recientemente campañol banco
distintos dependientes en el host PrP residuo 129 [ 7 ]. Estos datos predicen un secuencias de PrP. Una visión general de modelos disponibles que expresan
papel crítico para PRNP codón 129 en el gobierno de la permisibilidad mutaciones de PrP patógenos se da en la Fig. 5 . Con el desarrollo de diferentes
termodinámico de PrP humana Carolina del Sur conformación que puede ser modelos, se ha comprobado que la reproducción de los aspectos de IPD
interpretado dentro de un modelo de selección conformacional de las barreras de humano es mucho más difícil y poco satisfactorio que el modelado de
transmisión de priones [ 183 ]. enfermedades priónicas humanas esporádicas y adquiridas. Los modelos IPD
tienen una o más deficiencias: algunos ya sea no desarrollan la enfermedad
espontánea en todos, la enfermedad no es fatal, las tasas de ataque y las
propiedades de transmisión en más pasajes son variables, o las propiedades
neuropatología y deformación no corresponden a equivalente humano. Por
El modelo de ratón reciente de los efectos protectores del alelo V127 (que ejemplo, los ratones transgénicos publicados más recientemente, generados
se ve sólo en combinación con el M129 PRNP alelo) [ 9 ] Elegantemente confirma con un intento de reproducir la enfermedad priónica genética banco expresa PrP
que los ratones que expresan la variante de PrP V127 (en un alelo, por ejemplo, campañol humano que contiene correspondiente D178N, E200K, y las
V127M129; G127M129) no son capaces de propagar kuru y priones sCJD, pero mutaciones de PrP Anchorless [ 187 ]. Aunque estos ratones desarrollan
lo hacen propagar priones vCJD. En cambio, los ratones homocigotos para PrP enfermedad transmisible, altamente penetrante espontáneo con un fenotipo
V127 humana (es decir, V127M129; V127M129) muestran sorprendentemente neuropatológico (degeneración vacuolar y PrP depósitos anormales detectados
una resistencia completa a kuru, vCJD, sCJD, GH-iCJD, y DG-iCJD cepas. Es inmunohistoquímicamente) distinto para cada mutación, ni distribución
obvio que hay un potencial significativo para posteriores estudios estructurales anatómica ni hallazgos neuropatológicos y bioquímicos se correlaciona bien con
y, finalmente, para desarrollar fármacos eficaces interferir con la replicación de el fenotipo humano.
priones.

El polimorfismo E219K, prevalente en poblaciones asiáticas y asociado con


una resistencia parcial a sCJD, se ha reproducido en un modelo de ratón
knock-in, lo que demuestra que la molécula de PrP 219K se convierte
fácilmente en PrP Carolina del Sur después del desafío con vCJD y que la Una gama de especies de PrP humanos mutantes (E220K, P102L, A117V,
conversión se produce incluso más eficazmente que en la molécula de 219E. OPRI, 129M D178N, D178N 129V, F198S, y Y163X) se ha transmitido en primates,
Sin embargo, los ratones 219E / K heterocigotos ( “desajuste”) mostraron la ratones de campo de banco, y los ratones transgénicos que expresan murino,
conversión menos eficaz, lo que indica la llamada “inhibición heterocigótica” [ 66 humano, o PrP campañol banco. Excepto la truncando mutación Y163X, todos los
]. Con la desproporción entre los alelos, las tasas de ataque fueron mucho más otros priones mutantes son transmisibles, pero el fenotipo patológico resultante no
bajas y periodos de incubación más largo. Basándose en estos hallazgos, la corresponden bien a la enfermedad humana. Esta discrepancia recientemente se
hipótesis de “selección conformacional” se ha propuesto, en los que se facilita ha informado y discutido en un modelo de ratón transgénico P102L. Contrariamente
la transmisión de priones infecciosos con períodos incubaciones más cortos si a conclusiones de los estudios anteriores, 102L priones mutantes son transmisibles
la proteína prión anfitrión puede adoptar fácilmente la conformación preferida a los ratones transgénicos que expresan PrP humana, llevando la misma mutación,
asociada con la cepa del prión infectada [ 40 , 41 , 182 ]. pero no infectan ratones de tipo salvaje o ratones que expresan de tipo salvaje
humano PrP en el fondo de prnp 0/0 [ 5 ].

13
212 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

TgSHaPrP (A117V) H (Hegde, 1999) SHaPrP DO( T183A)


hámster sirio TgSHaPrP (A117V) L (Hegde, 1999) (Dearmond, 1997)

Tg15464, Tg15465, Tg15965 Tg (BVPrP, I109, ΔGPI)


campañol de la batería
(BVPrP, I109, D178N) (Wa? S, 2016) (Wa? S, 2016)
(FFI) (Bouybayoune, 2015) Tg15972,
PG14 (Mo-3F4) Tg (A116V), 128V Tg (ECJ) 128V (Dossena, 2008)
humano (Chiesa, 1998) (Yang, 2009) ki-3F4-FFI (Jackson, 2009) Tg
Tg (GPI) (Chesebro, 2005)
Tg8015 (GPI) (Stohr, 2011)

MHu2MPrP (D178N)
(Dearmond, 1997)

Tg 18807, Tg8387, Tg8421, Tg8422


ratón HuPrP117V, 129V
(HuPrP, A224V), 129V
(Asante, 2013)
(Wa? S, 2015)

9-OPRI A117V D178N T183A A224V Disparates

P102L E200K

Tg27 y TG33 HuPrP102L, 129M (Asante, Tg23 y Tg49 HuPrP200K, 129M (Asante,
Humano
2009) 2009)

Tg69 (MHu2MPrP, P102L) (Telling,


Humano / ratón 1995)
quimera
quimera

Tg174 (MoPrP-101L) (Hsiao, 1990) Tg87 (MoPrP-101L) (Hsiao, 1994) (E200K) (Dearmond, 1997)
Tg196 (MoPrP-101L) (Hsiao, 1994) Tg2866, Tg2247, Tg2862 E199KPrP (Friedman-Levi, 2011) MHu2MPrP
ki-3F4-ECJ (Jackson, 2013) (TgMHu2M)
(MoPrP-101L) (Telling, 1996) Prnpa101L, Prnpa 101PL (Manson, Tg (MoPrP-E199K) 5182 (cuentos, 1996)
Ratón 1999) Prnp101L, SV40-101L (Moore, 1995) Tg (GSS) 22 (Nazor,
2005)

Tg14205, Tg14210, Tg7253, Tg4253, Tg7271 (BVPrP,


topillo rojo
I109, E200K) (? S Wa, 2016)

113LBoPrP-Tg037
Ca? Le
(Torres, 2013)

desarrollar la enfermedad espontánea


Dis? Cambios neuropatológicos NCT siguientes ya sea desarrollo de la enfermedad espontánea o un desarrollo de la enfermedad? Er inóculos? Con priones

Aspectos clínicos y neuropatológicos no evaluados en el estudio original humano / ratón

Fig. 5 modelos de ratón transgénico de la enfermedad de prión heredadas. El marco de lectura una enfermedad espontánea y la símbolo verde indica que hubo un fenotipo neuropatológico
abierto de la PRNP gen está representado en el centro, y se muestran las mutaciones que han sido distinta ya sea espontáneamente o después de la inoculación con priones. En un estudio, no
modeladas en animales transgénicos encima y abajo. Sobre el izquierda, la especie se muestra la se evaluaron los aspectos clínicos y neuropatológicos ( símbolos en blanco). Las líneas de
secuencia de PrP del transgén, es decir, hámster, rata de banco, las secuencias de ratón, y de la ratones con ningún símbolo no desarrollaron la enfermedad espontánea y no mostraron
especie bovina, así como construcciones quiméricas, tales como humano / ratón. los neuropatología distinta Azul o letras rojas son simplemente para la orientación, para alinearse
con el punto de mutación se muestra en la centrar
símbolos ámbar junto a la mutante indican que el modelo desarrollado

mutaciones puntuales PrP influyen directamente en la PrP Carolina del Sur el duración y no hay placas amiloides. Tal fuerte influencia de una única sustitución
montaje y la estructura primaria PrP influye significativamente en el fenotipo de de aminoácidos en el fenotipo también se ha confirmado in vitro e in vivo [ 139 ] E
la enfermedad priónica heredado. Por ejemplo, un Vástago con sustitución en el in vivo [ 73 ]. En consonancia, las variaciones fenotípicas mucho tiempo se han
residuo 211 (E211D) e individuos con una mutación E211Q, respectivamente, conocido en familias con mutaciones patógenas. Una explicación es el espectro
se informó de que los fenotipos notablemente distintas clínicos, neuropatología, de la participación de los de tipo salvaje PrP resistente a proteasa, como se
y alteraciones bioquímicas [ 139 ]. La mutación E211D fue asociada con un demuestra en P102L IPD [ 185 ]. Este estudio demostró que en pacientes con
fenotipo GSS clínica y patológicamente, mientras que la mutación E211Q tenía mutaciones P102L, una proporción sustancial de anormal PrP se deriva a partir
una enfermedad corto del alelo de tipo salvaje.

13
Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222 213

Modelos de la formación, propagación, toxicidad, diferentes cepas entre los cambios neuropatológicos y prión titre [ 157 ,
de la proteína priónica anormal, y las vías celulares 158 ]. En cambio, los estudios de transmisión clásicos por dilución en serie de un inóculo y

la posterior transmisión en grandes cohortes de animales, populares en los primeros

momentos de la investigación de priones, y el estándar de oro para determinar los títulos

Bioensayos: detección y medición de títulos de infectividad de cerebros o regiones del cerebro [ 22 ] Se están convirtiendo cada vez más obsoleta.

Un bioensayo robusto, sensible, y específico para detectar la infectividad priónica es Formación de PrP Carolina del Sur y oligómeros tóxicos en vivo

indudablemente muy deseable para los diagnósticos clínicos, estudios


epidemiológicos y ensayos experimentales de laboratorio. Para fines de diagnóstico La conversión de la PrP do en PrP Carolina del Sur es un proceso post-traduccional, que

clínico, un bioensayo tendría que ser sensible, específico, y debe ser alcanzable en ocurre cuando PrP do alcanza el dominio extracelular. PrP do y PrP Carolina del Sur tienen

un tiempo de respuesta relativamente corto. Por lo tanto, la transmisión en animales secuencias de amino-ácidos idénticas pero difieren en sus estructuras secundaria y

sensibles para la enfermedad priónica humana no es una opción debido a los largos terciaria. PrP Carolina del Sur formas β- agregados laminares rico, que van desde

tiempos de incubación, los costes comparativamente altos y razones éticas. Además, oligómeros pequeños, solubles para grandes estructuras fibrilares insolubles. La

los estudios clínicos requerirían de validación e idoneidad del ensayo para un formación de PrP Carolina del Sur y el desarrollo de los cambios neurodegenerativos

entorno acreditado. Por lo tanto, los ensayos libres de células tienen el mayor requiere PrP do como sustrato [ 22 ]. la propagación de priones en el cerebro implica dos
fases [ 157 ]. En la primera fase, los priones se propagan de manera exponencial
potencial para los propósitos clínicos. Los dos ensayos libres de células más
andare no velocidad limitada por la concentración de PrP DO. Ellos se levantan
ampliamente utilizados son las proteínas mal plegamiento cíclico de amplificación
rápidamente y alcanzan un título máximo. El título es independiente de la PrP do
(PMCA) [ 34 ] Y en Tiempo Real: conversión por-Temblor (RT-QuIC) [ 113 ]. EPCP
utiliza PrP do para la amplificación de PrP Carolina del Sur a través de serie repetida de la
incubación y sonificación. RT-QuIC utiliza temblor automatizado o agitación para la
amplificación de PrP Carolina del Sur de PrP recombinante DO. Ambos ensayos basados ​en concentración, es decir, no hay diferencia entre tga20,
células sin detectar PrP Carolina del Sur con muy alta sensibilidad. Las limitaciones de la Prnp + / + y Prnp + / 0 ratones. La fase de meseta que fluye determina la latencia de

PMCA son el riesgo de contaminación cruzada y la generación de de novo PrP Carolina aparición de la enfermedad clínica. La fase de meseta es inversamente proporcional a

del Sur por amplificación offtarget. RT-QuIC está limitada por la lectura y un producto la PrP do concentración. Estos estudios [ 157 , 158 ] Demostrar que la propagación y la

final no infecciosa, que lo hace inadecuado, por ejemplo, para estudiar la eficacia de neurotoxicidad puede ser desacoplado, argumentando que los priones en sí no son

la descontaminación de los compuestos anti-priones. Un ensayo basado en la directamente neurotóxico, apoyando las reivindicaciones de estudios previos en donde

sangre, desarrollado para la detección de vCJD en la sangre, y también de las priones generados por un injerto neural infectado no causaron la degeneración de las

primeras etapas de la enfermedad preclínica (ensayo de detección directa, DDA) [ 160 adyacente prnp 0/0 tejido huésped [ 22 ]. El desacoplamiento de PrP acumulado Carolina del

] Utiliza una matriz de unión para capturar y concentrar PrP de estado sólido Carolina del Sur y neurotoxicidad También se demostró en el modelo de inactivación condicional de

Sur, que luego se detecta inmunológicamente. Es adecuado para la selección de alto la expresión de PrP en las neuronas, invirtiendo la enfermedad clínica y cambios

rendimiento en la vigilancia de una población en situación de riesgo [ 72 ] Y para la espongiformes vacilantes y pérdida neuronal [ 107 ].

detección de confórmeros de PrP anormales en modelos animales (ratones CD1,


PrP do ratones que sobreexpresan (tga20), y hámsters sirios) [ 160 ]. Scrapie ensayos
cellbased (SSCA), basado en una línea celular derivada de células N2a que son
altamente susceptibles a los priones RML, han estado en desarrollo durante varias vías celulares como una respuesta a la toxicidad prión

décadas [ 88 ], Y con metodología estandarizada, que son adecuados para la


automatización y de alto rendimiento. Su refinamiento hace que sea posible para vías celulares implicadas en la respuesta de las proteínas mal plegadas en la
lograr el aislamiento de alto rendimiento de los priones incluso a niveles enfermedad de priones se pueden localizar en la superficie celular o pueden ser
excepcionalmente altos de pureza con retenida propiedades de deformación prión intracelular. PrP do Las moléculas con deleciones internas (por ejemplo, Δ 94-134 y Δ
biológicos y bioquímicos [ 192 ]. 105-125) causa la neurodegeneración [ 165 ]. La toxicidad es más probable
causada por la actividad anormal en la superficie neuronal, por ejemplo, la
interacción con los receptores de NMDA [ 77 ] En lugar de plegamiento anormal
(discutido en detalle en [ 38 ]). Más pertinente a la toxicidad de proteínas mal
plegadas son vías intracelulares, el sistema de proteasoma ubiquitina, y retículo
endoplasmático (ER). Early deterioro funcional del sistema de
ubiquitina-proteasoma para degradar los priones infecciosos se ha demostrado
en células basa en estudios in vitro [ 103 ], In vivo en las moscas [ 127 ], Y en
ensayos basados ​en células, en combinación con estudios en animales, han sido modelos de ratones transgénicos del sistema ubiquitina-proteasoma [Fig. 4 (6)] [ 115
instrumentales en la comprensión de la dinámica de valoraciones de prión y el ]. En el condicional del ratón knock-out Tg37
alojamiento de especies tóxicas en la progresión de la enfermedad priónica y para la
correlación se detalla

13
214 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

línea y en ratones de tipo salvaje, la acumulación de PrP Carolina del Sur causas in silico modelado computacional en combinación con sistemas de detección basados
sostenidas sobre-activación de la rama PERK / eIF2alfa de la defensa celular vía ​en células [ 71 ] Puede ser el enfoque experimental de primera línea para identificar

de desplegado respuesta de las proteínas (UPR) con la fosforilación de eIF2alfa potenciales agentes terapéuticos anti-priones. Esto se hace generalmente más validado

[Fig. 4 (10)]. Esto conduce a la represión sostenida de la síntesis de proteínas en modelos animales, donde los ratones infectados con priones se desafiaron con

mundial (la represión de traducción), con fracaso sináptica posterior y la pérdida fármacos prometedores candidatos [ 63 , 125 ].

neuronal [ 126 ]. El descubrimiento de la implicación de estas vías en la


enfermedad priónica proporciona un fundamento científico para la mejora El uso de anticuerpos monoclonales ha sido prometedor en la prevención de
farmacológica del sistema ubiquitina-proteasoma y para apuntar a los ER prión propagación y en la atenuación y retrasar la enfermedad priónica clínica [ 194
desdobló vía de respuesta de las proteínas en la enfermedad priónica. ]. Estos estudios se llevaron a cabo en ratones de tipo salvaje de un fondo
genético definido. La seguridad del empleo de anticuerpos monoclonales, sin
embargo, ha sido un tema de debate considerable. Mientras que la toxicidad de
los anticuerpos monoclonales concentradas se informó por algunos
Modelos para entender el papel del sistema inmune en la propagación investigadores [ 153 , 166 ], Otros no pudieron reproducir estos resultados [ 87 ], En
de priones particular cuando se utilizan concentraciones fisiológicas. Un modelo transgénico
ampliamente utilizado para evaluar la eficacia terapéutica es la línea de ratón que
Mientras que las formas esporádicas de la enfermedad priónica tienen su origen en sobreexpresa tga20 de tipo salvaje PrP. Por ejemplo, en un estudio reciente [ 63 ],
el sistema nervioso central, las formas adquiridas pueden involucrar el sistema Se utilizó línea de ratones tga20 para identificar, a través de ciclos iterativos de
linforreticular. La transmisión de priones de EEB a través de la cadena alimentaria diseño químico y síntesis, politiofenos conjugados luminiscentes (moléculas con
causada vCJD en humanos. Una característica altamente distintivo y de alta afinidad por agregados de proteínas ordenados) compuestos antiprion como
potencialmente eficaces.
diagnóstico de esta cepa de priones fue la colonización del sistema linforreticular [ sesenta
y cinco ], Y esto ha generado un gran interés en el papel del sistema inmune en las
enfermedades priónicas. Antes del estallido de la vECJ, sin embargo, el papel del
bazo en la modulación de la neuro-invasión había sido estudiado en ratones
infectados con scrapie [ 81 ], Donde la extirpación del bazo reducción de la El condicional línea de ratón knock-out Tg37 [ 107 ] Se utilizó en un
estudio sobre el efecto de una reducción de PrP do
eficiencia de la infección por priones periférica, pero no tuvo efecto una vez que la
infección se había alcanzado el SNC. El amplio uso de ratones transgénicos, que expresión a través de knockdown terapéutico utilizando RNAi en ratones con
expresan ectópicamente la proteína priónica en el sistema linfoide o genéticamente enfermedad priónica establecido [ 195 ]). Este modelo también se utilizó para
ratones inmunosuprimidos modificados, ha identificado aún más el papel de los mostrar los efectos positivos de la inhibición UPR por knockdown PrP
componentes individuales del sistema linforreticular en prión propagación [ 84 , 85 ]. hipocampo localizada y a través de la inhibición farmacológica con el
Se cree que los priones invaden el sistema nervioso central de los órganos compuesto GSK2606414 de quinasa PERK, un mediador clave de la vía UPR
linfoides ascendiendo difusión a través de los nervios simpáticos y parasimpáticos [ 60 en el retículo endoplasmático [ 125 , 126 ]. Los compuestos dirigidos a la
, 112 ] Y que anclado PrP es un componente esencial para esta vía [ 86 ]. Para corriente abajo ejemplo celular vías-para, inhibidor de quinasa PERK
revisiones más detalladas sobre el sistema linfoide en prión difusión, véase [ 43 ] Y [ 1 GSK2606414 provoca toxicidad severa en ratones, por lo que es poco
]. La importancia del sistema inmunológico se ha demostrado con éxito en los probable que lo hará a un ensayo clínico en seres humanos.
estudios preclínicos con anticuerpos anti-PrP [ 194 ].

Dado que las estrategias genéticas innovadoras para detener o revertir la


progresión de las enfermedades neurodegenerativas están surgiendo, es posible
que la manipulación genética con el resultado final imitando de origen natural
sustituciones de aminoácidos individuales de priones resistentes a la protección /
Modelos para investigar los posibles enfoques terapéuticos puede ser un tratamiento de elección en las enfermedades priónicas, en particular
las de etiología heredada. Validación y aprobación de tales enfoques, sin duda,
El objetivo de la investigación biomédica es de entender, prevenir y tratar la enfermedad requerirá extensa detallada in vitro cellbased y en estudios con animales in vivo en
con el tiempo humano. Esto no es diferente para las enfermedades priónicas, y el sistemas de modelos existentes y recién generadas de la infección por priones.
desarrollo de tratamientos eficaces de enfermedades priónicas es una prioridad para

muchos equipos de investigación. Los ensayos clínicos tienen que estar basada en la

evidencia y en vitro y en modelos in vivo son esenciales para identificar y caracterizar las

vías que pueden ser objetivo terapéuticamente o se pueden utilizar para validar

“compuestos antiprion” en los estudios preclínicos. Sin embargo, los efectos beneficiosos Resumen
de los compuestos o reactivos aún no se han traducido en ensayos clínicos eficaces en

pacientes [ 42 , 62 ], Pero al menos han dado lugar a importantes datos clínicos El desarrollo y caracterización de modelos de enfermedad priónica han
cuantitativos. servido una amplia gama de propósitos, que han cambiado con el tiempo. Los
primeros modelos se utilizaron para

13
Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222 215

entender la naturaleza de los priones transmisibles, mucho antes de que nació Los sistemas basados ​en células y sin células potentes in vitro se han desarrollado [ 88
incluso el concepto de proteopathies transmisibles. Estos modelos se remontan a , 160 ] Y complementado los modelos animales. Como se ha señalado en el párrafo
la década de 1930. [ 47 , 48 ] Y culminó en la demostración de que el kuru y la CJD sobre enfoques terapéuticos, el objetivo final de los sistemas modelo es
son enfermedades neurodegenerativas transmisibles en la década de 1960 [ 13 , 54 , comprender, prevenir y tratar las enfermedades priónicas humanas. Por lo tanto, los
sistemas de modelo descritos en esta revisión son sólo el comienzo de la fase de
55 ], Que conduce a la hipótesis de que la tembladera está causada por un agente descubrimiento. Si bien estos sistemas modelo largo de las décadas se han vuelto
auto-replicante inusual [ 61 ]. Casi dos décadas después, usando una combinación cada vez validado (mediante el uso de varios laboratorios), que todavía tienen que
de estudios de transmisión y evidencia bioquímica, Prusiner formuló la hipótesis cumplir con las promesas de proporcionar una plataforma experimental sólida y
de sólo proteína [ 21 , 114 , 146 ]. La disponibilidad de ratones modificados válida que se pueden utilizar para el descubrimiento de fármacos que se traduce así
genéticamente en la década de 1980 abrió un área de investigación más amplio [ 68 en una clínica juicio.
, 148 ] En que los aspectos funcionales de PrP y mutaciones humanas fueron
modelados. El uso de ratones transgénicos en la investigación de priones llevó-off
después de la generación de un modelo de ratón carente de PrP DO, generada por
el equipo de Weissmann [ 22 , 27 , 28 , 155 ]. Este modelo permitió la generación de
ratones desprovistos de PrP endógeno y fue la base para el modelado Perspectiva (Fig. 6 )
sistemática aspectos estructurales y funcionales de la PrP [ 20 , 22 , 53 , 190 , 191 ].
Estos ratones fueron muy superiores a cualquier sistema de modelo anterior para Los estudios con modelos animales y cultivos celulares muy probablemente seguirá

entender cepas de priones [ 2 , 45 ], barreras de transmisión [ 184 ], Los efectos siendo el pilar fundamental en la investigación de enfermedades de priones para el futuro

específicos de tejido de PrP normal y anormal [ 59 , 143 , 144 ], El papel de previsible. El uso de modelos de ratas se ha propuesto debido a las ventajas relacionadas

deleciones, mutaciones puntuales y modificaciones [ 165 ] Estructura que afecta, y con el tamaño del cerebro y la fisiología, incluyendo las respuestas cognitivas y

glicosilación [ 37 , 86 , 142 ]. En paralelo, conductuales un poco más cerca de ser humano. Sin embargo, el mayor potencial reside

sin duda en modelos de ratón. Estos han demostrado ser muy valiosa en la investigación

de enfermedades de priones y es probable que una mayor

Genera? En de nuevos Genera? En de otros Desarrollo de células Otros avances en el


modelos de ratón sistemas modelo (por madre pluripotentes cultivo de células y
transgénico (por ejemplo, ejemplo, ratas, moscas) inducidas (IPSC) ensayos libres de células
líneas entrecruzadas)

func fisiológica? en de PrP do


Alta resolu? Sobre la estructura de la PrP do y PrP Carolina del Sur

PrP DO- PrP Carolina del Sur interac? en

vías celulares ac? vada / mal regulada por la PrP Carolina del Sur
neurotoxicidad
Therapeu? Objetivos C y E ff cinco ec? Y An? Compuestos -prion seguras

Fig. 6 perspectiva de futuro en la investigación de enfermedades por priones: izquierda creciente de los modelos de rata debido al tamaño del cerebro más grande. Centro derecha un potencial significativo de

sofisticación de los modelos transgénicos, y aumentar el acceso a las metodologías de edición gen es células madre pluripotentes inducidas se puede esperar, y derecho

probable que tenga un papel importante también en la investigación de priones. centro izquierda otras en ensayos basados ​en células y libres de células in vitro jugará un papel importante en el diagnóstico, la

especies, en particular aquellos que son fáciles de mantener y manipular, tales como moscas pueden epidemiología, y la seguridad de los productos sanguíneos y la detección de drogas

desempeñar un papel en los modelos, en particular, el objetivo de los roles funcionales de PrP; aumento del
uso

13
216 Acta Neuropathol (2017) 133: 197-222

modelos serán capaces de hacer frente a las cada vez más complejas cuestiones de la et al (2009) Ausencia de enfermedad espontánea y la susceptibilidad prión comparativo
de ratones transgénicos que expresan las proteínas priónicas humanas mutantes. J
biología de priones. El descubrimiento de una metodología comparativamente sencillo
Gen Virol 90: 546-558. doi: 10.1099 / vir.0.007930-0
para inducir las células madre pluripotentes (IPSC) a través de la reprogramación de

los fibroblastos (Takahashi y Yamanaka 2006 ) Abierto nuevas vías para el estudio de 5. Asante EA, Grimshaw A, Smidak M, Jakubcová T, Tomlinson
mecanismos patógenos celulares, el diagnóstico precoz de la enfermedad, y el cribado A, Jeelani A, Hamdan S, Powell C, Joiner S, Linehan JM et al (2015) propiedades
de transmisión de priones PrP 102L humanos desafían la relevancia de modelos
de compuestos terapéuticos en probablemente casi todas las enfermedades humanas.
de ratón de GSS. PLoS Pathog 11: e1004953. doi: 10.1371 / journal.ppat.1004953
trastornos neurodegenerativos asociados a la proteína mal plegadas, tales como la

enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer, son enfermedades, en las 6. Asante EA, Linehan JM, Desbruslais M, Joiner S, Gowland
iPSC derivados de fibroblastos de la piel o duramadre han sido ya utilizada I, madera AL, Welch J, Colina AF, Lloyd SE, Wadsworth JD et al (2002) priones de EEB
propago ya sea como cepas de priones variante de la ECJ-similares o ECJ
activamente en la investigación en la última década proporcionar nuevos
esporádica-como en ratones transgénicos que expresan la proteína prión humana. EMBO J
conocimientos sobre la biología molecular. La aplicación de las células reprogramadas
21: 6.358-6.366
en la investigación de priones, junto con los avances continuos en las técnicas de 7. Asante EA, Linehan JM, Gowland I, Joiner S, Fox K, Cooper
reprogramación de células somáticas, ofrece una herramienta prometedora para la S, Osiguwa O, Gorry M, Welch J, Houghton R et al (2006) La disociación de fenotipo
patológico y molecular de la variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en
profundización de la comprensión de la biología molecular de la infección por priones,
proteínas 129 ratones heterocigotos transgénicos priónicas humanas. Proc Natl Acad
tales como la susceptibilidad, modos y sitios (neuronas o glia o ambos) de la
Sci EE.UU. 103: 10759-
replicación de priones, la neurotoxicidad, efectos sobre la función celular, fenotipos de 10764. doi: 10.1073 / pnas.0604292103
la enfermedad y de cribado nuevo fármaco, o, de hecho, iPSC podrían servir como 8. Asante EA, Linehan JM, Smidak M, Tomlinson A, Grimshaw
A, Jeelani A, Jakubcová T, Hamdan S, Powell C, Brandner S et al (2013) hereda
agente terapéutico sí mismos. Por último, los recursos significativos se ponen en el
A117V enfermedad priónica no es simplemente una proteinopatía pero produce
avance de los aspectos tecnológicos y metodológicos del diseño de ensayos libres de
priones transmisibles a los ratones transgénicos que expresan la proteína del prión
células y de alto rendimiento en procedimientos de selección in silico. El poder de la homóloga. PLoS Pathog 9: e1003643. doi: 10.1371 / journal.ppat.1003643
bioinformática y la química computacional tiene promesas para el desarrollo de alto
9. Asante EA, Smidak M, Grimshaw A, Houghton R, Tomlinson A, Jeelani A,
rendimiento en procedimientos de selección in silico, sino que también son un
Jakubcová T, Hamdan S, Richard-Londt A, Linehan JM et al (2015) A variante
importante desarrollo para apoyar el compromiso de reemplazo, reducción y
natural de la proteína priónica humana impide totalmente prión enfermedad.
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Expresiones de gratitud La financiación fue proporcionada por el Instituto Nacional de Investigación en
12. Basler K, Oesch B, Scott M, Westaway D, Wälchli M, Groth DF, McKinley MP,
Salud (INDH) UCLH / UCL Centro de Investigación Biomédica y la Unidad de Investigación Biomédica
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Acceso abierto En este artículo se distribuye bajo los términos de la licencia Creative
13. Beck E, Daniel PM, Alpers M, Gajdusek DC, Gibbs CJ Jr (1966) Experimental
Commons Atribución 4.0 Licencia Internacional ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
“kuru” en los chimpancés. Un informe patológico. Lancet 2: 1056-1059
), Que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre
que se dé crédito apropiado al autor (s) original y la fuente, proporcionar un enlace a la
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